Abstract
Bakgrunn
TNFAIP2
er et viktig gen som er involvert i apoptose. Enkeltnukleotidpolymorfi (SNPs) i sin miRNA bindingssteder kunne modulere funksjoner av miRNA-målet gener og dermed risikoen for kreft. I denne studien undersøkte vi assosiasjoner mellom potensielt funksjonelle SNPs i miRNA bindingssteder i 3’UTR av
TNFAIP2 Hotell og magekreft risiko i en amerikanske befolkningen.
Metoder
Vi har utført en case-control studie av 301 mage kreftpasienter og 313 kreftfrie kontroller frekvens-matchet etter alder, kjønn og etnisitet. Vi genotypede fire valgte
TNFAIP2
SNPs (rs8126 T C, rs710100 G A, rs1052912 G A og rs1052823 G T). Og brukt logistisk regresjonsanalyse for å vurdere sammenslutninger av disse SNPs med kreftrisiko
Resultater
rs8126 CC genotype var assosiert med en signifikant forhøyet risiko for magekreft (justert OR = 2,00, 95% CI = 1,09 til 3,64 og
P
= 0,024) sammenlignet med de samlede rs8126 TT + TC genotyper, spesielt i dagens drinkers. Men ingen av andre
TNFAIP2
SNPs var assosiert med risiko for magekreft.
Konklusjoner
Våre data antydet at
TNFAIP2
miRNA bindingssete rs8126 T C SNP kan være en markør for mottakelighet for magekreft, og dette funnet krever videre validering av større studier
Citation: Xu Y, Ma H, Yu H, Liu Z, Wang LE, Tan D,. et al. (2013) Mir-184 Binding-Site rs8126 T C polymorfisme i
TNFAIP2
er forbundet med risiko for magekreft. PLoS ONE 8 (5): e64973. doi: 10,1371 /journal.pone.0064973
Redaktør: Nathan A. Ellis, University of Illinois i Chicago, USA
mottatt: 23 juli 2012; Godkjent: 23 april 2013; Publisert: 28. mai 2013
Copyright: © 2013 Xu et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av National Institute of Health gir R01 CA131274 og R01 ES011740 (Q. Wei), og P30 CA016672 (The University of Texas MD Anderson Cancer Center). Innholdet er utelukkende ansvaret til forfatterne og ikke nødvendigvis representerer den offisielle visninger av National Institutes of Health. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. Prof Qingyi Wei fra M.D. Anderson Houston, Texas, er redaktør for PLoS ONE. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer.
Innledning
Magekreft er en av de viktigste årsakene til kreft-relaterte dødsfall i verden, selv om både forekomst og dødelighet har vært fallende i de siste tiår [1]. I 2010 var det om lag 21 000 nydiagnostiserte pasienter og 10,570 dødsfall av denne sykdommen i USA [2]. Epidemiologiske studier har antydet at miljøfaktorer, inkludert diett høy i saltet og nitrerte matvarer, bruk av tobakk, alkohol forbruk og spesielt
Helicobacter pylori product: (
H. Pylori
) infeksjon, er viktige faktorer for etiologien av magekreft [3]. Men bare en brøkdel av mennesker vedta lignende livsstil eller utsatt for de samme miljømessige risikofaktorer etter hvert utviklet magekreft, tyder på at verts eller genetiske faktorer kan også spille en rolle i etiologien av sykdommen [4].
Blant alle patofysiologiske endringer forårsaket av forskjellige etiologiske faktorer knyttet til magekreftformer, har induksjon av oksidativ DNA-skade på epitelcellene i mage blitt vist å være en sterk kobling til karsinogenese [5], [6]. For å forhindre en ukontrollert cellevekst som følge av denne form for DNA-skade, må enkelte cellesykluskontrollmekanismer settes i gang for å forhindre forekomsten av mutasjoner eller for å initiere apoptose av cellene med overveldende skade på DNA.
microRNAs ( mirnas), en klasse av endogen og små ikke-kodende regulatoriske RNA, negativt regulerer genekspresjon på det post-transkripsjonelle nivå gjennom hybridisering til komplementære sekvenser i 3 «utranslatert region (3’UTR) av target messenger RNA (mRNA) [ ,,,0],7], [8], [9], [10]. Nyere studier har vist betydelige effekter av mirnas på forskjellige biologiske prosesser, inkludert celle-differensiering, proliferasjon, cellesyklusutvikling, så vel som apoptose. Endrede uttrykk for mirnas samt deres potensielle funksjoner av tumor suppressors og onkogener er påvist i flere typer kreft, inkludert magekreft [11], [12]. I mellomtiden, flere relativt vanlige genetiske varianter, for eksempel enkeltnukleotidpolymorfi (SNPs), har blitt identifisert som biomarkører for genetisk mottakelighet for kreft ved molekylære epidemiologiske studier. På grunn av deres potensielle virkninger på miRNA uttrykk og etterfølgende innvirkning på mRNA transkripsjon, miRNA SNP’er eller miRNA-relaterte SNP’er, slik som de som ligger i miRNA bindingssetene på det 3 «ikke-translatert region (UTR) av deres målgener, har vært implisert som viktige genetiske faktorer i mottakelighet for ulike kreftformer. Siden deres roller i kreft etiologi er fortsatt uklart, er det viktig å forstå funksjonelle og evolusjonær betydning av disse miRNA-relaterte SNPs gjennom sine effekter på kreftrisiko og deres samspill med miljørisikofaktorer i etiologien av magekreft [13].
hører til SEC6 familien, ble tumornekrosefaktor α-indusert protein 2 (TNFAIP2, også kjent som B94 eller EXOC3L3), som er en type av pro-apoptotiske protein, som opprinnelig ble identifisert som et gen hvis ekspresjon kan bli indusert ved tumornekrosefaktor alfa (TNF-alfa) i navlestrengvene endotelialceller [14].
TNFAIP2
er lokalisert på kromosom 14q32 og som koder for et protein på 654 aminosyre-rester med en tilsynelatende molekylvekt på 73 kDa. Består av 11 eksoner og 10 introner,
TNFAIP2
spenner over ca 13,45 kb av genomisk DNA [15]. I dbSNP database (https://egp.gs.washington.edu/), er dette genet rapportert å ha 180 SNPs, hvorav 15 SNPs i 3’UTR av
TNFAIP2
er plassert i den predikerte mirnas bindingsseter, men bare fire av disse miRNA-relaterte SNPs er vanlig [dvs. mindre allel frekvens (MAF) 0,05]. Disse fire SNPs er rs8126 T C (lokalisert innenfor bindingssetet for MIR-184), rs710100 G A (innen MIR-155), rs1052912 G A (innen MIR-105) og rs1052823 G T (innen speil 550) (https://compbio.uthsc.edu/miRSNP) [fig. 1A].
(A) De fire validerte SNPs og deres eksakte steder i
TNFAIP2
3′-UTR. (B) koblingsulikevekt (LD) kart for utvalgte SNPs av
TNFAIP2
genet. Den viste at rs1052912 og rs1052823 er i LD med en D «= 0,87.
Nyere studier har vist at disse SNPs i miRNA bindingssteder kan eventuelt være forbundet med kreftrisiko menneskelig [15], [ ,,,0],16]. Derfor hypotese vi at
TNFAIP2
SNPs er forbundet med mottakelighet for magekreft. For å teste denne hypotesen, gjennomførte vi en case-control studie for å vurdere sammenhengen mellom disse fire
TNFAIP2
SNPs i miRNA bindingssteder og risiko for magekreft i en amerikansk ikke-spanske hvite befolkningen.
Materialer og metoder
forsøkspersonene
forsøkspersonene var pasienter med nylig diagnostisert og histologisk bekreftet magekreft ved The University of Texas MD Anderson Cancer Center (Houston TX) mellom mars 2002 og februar 2011, som ble rekruttert for en pågående case-control studie av magekreft. Samtidig ble kreftfrie kontrollpersoner rekruttert ved hjelp av frekvenstilpasning av alder (± 5 år), kjønn og etnisitet (ikke-spanske hvite kontra andre) fra en pågående molekylær epidemiologi studie av hode og nakke kreft mellom 2002 og 2011 [17]. Disse kreftfrie kontrollpersoner var ikke pasienter på sykehus som søkte helsetjenester, eller genetisk relatert til sakene. Ytterligere informasjon om risikofaktorer, som røyking og alkoholbruk, ble samlet inn fra hver kvalifiserte gjenstand som hadde gitt informert samtykke. Studien protokollen ble godkjent av The University of Texas MD Anderson Cancer Center Institutional Review Board.
Genotyping
Genomisk DNA ble ekstrahert fra buffy coat brøkdel av hver blodprøve ved hjelp av en Blood Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA) i henhold til produsentens instruksjoner. DNA renhet og konsentrasjon ble bestemt ved spektrofotometrisk måling av absorbans ved 260 og 280 nm ved UV spektrofotometer.
Den valgte to
TNFAIP2
SNPs, rs710100 og rs1052912, ble genotypet ved hjelp av TaqMan metodikk i 384-brønners plater og leses med Sequence Detection programvaren på en ABI-Prism 7900 instrument, i henhold til produsentens anvisninger, Applied Biosystems (Foster City, CA), som også følger med primere og prober. Hver plate inkluderte fire negative kontroller, dupliseres positive kontroller og åtte gjentatte prøver. Betingelsene for amplifisering var som følger:. 50 ° C i 2 minutter, 95 ° C i 10 minutter etterfulgt av 40 sykluser på 95 ° C i 15 sek, og 60 ° C i 1 min
Fordi TaqMan analysen var ikke egnet for de to andre SNP’er, dvs. rs8126 og rs1052823, de ble genotypet ved hjelp av PCR-rflp metode, i hvilken primerne ble utformet for å skape nye restriksjonsseter, og anvendt for å amplifisere fragmenter som inneholder polymorfismer for de begge to SNP. [18] sekvensene til primerne anvendt for genotyping assays var 5′-GGGGCCGGCTCTCTTGGGCC-3 «og 5′-CACACGTACAAAGACCTTGGGCATCC-3′ for rs8126, og 5»-CCTTCGGACTCAGGCATGACTC-3 «og 5»-GTAAGGCAGTACCTGGGAAAAGGGTA -3 «for rs1052823. PCR-profil består av et første smeltetrinn på 95 ° C i 5 minutter, 35 sykluser av 95 ° C i 30 s, 60 ° C i 45 s og 72 ° C i 1 min og en endelig forlengelsestrinn på 72 ° C i 10 min. PCR-produkter for rs8126 C-allelet av 105 basepar (bp) ble fordøyd av
Apa
I enzym (New England Biolabs, Beverly, MA) til to fragmenter av 85 bp og 20 bp, mens de av rs1052823 G allel av 108 bp ble fordøyd av
Rsa
jeg (New England Biolabs) til tre fragmenter av 83 bp, 15 bp og 10 bp. Analysen suksessrate for alle genotyper var 99%, og de gjentatte analyser for 10% av prøvene var 100 samstemmige
Statistical Analysis
De χ
2 tester. ble utført for å sammenligne fordelingen av demografiske variabler og utvalgte risikofaktorer som røyking og alkoholforbruk, mellom saker og kontroller. Hardy-Weinberg likevekt ble testet av en godhet-of-fit χ
2 test for å sammenligne de observerte genotypefrekvensene med de forventede de i kreftfrie kontroller. De sammenslutninger av genotyper av
TNFAIP2
SNPs med risiko for magekreft ble estimert ved å beregne odds ratio (OR) med 95% konfidensintervall (CIS) fra begge univiariate og multivariate logistiske regresjonsmodeller i kasus-kontrollanalyser etterfulgt av stratifisering analyse av alder (≤59 g 59 år), kjønn, etnisitet (hvit vs ikke-hvite), røyking og drikking status. Alle disse analysene ble utført med eller uten justering for demografiske variabler og utvalgte risikofaktorer. Proc haplotype i SAS /genetikk programvaren med forventning-max-imization (EM) algoritme ble gjennomført for å generere maksimal likelihood estimatene for haplotype frekvenser. Haplotyper med frekvenser og mindre enn 5% ble slått sammen til en gruppe. Alle testene var tosidig, og en
P
0,05 ble ansett cutoff for statistisk signifikans. Alle statistiske analyser ble utført med Statistical Analysis System programvare (versjon 9.2, SAS Institute, Cary, NC).
Resultater
demografiske kjennetegn og risikofaktorer for magekreft
Denne studien inkluderte 301 magekreftpasienter og 313 kreftfrie kontroller. Tabell 1 oppsummerer fordelingen av demografiske karakteristikker og utvalgte risikofaktorer for magekreft. På grunn av frekvenstilpasning brukes i vår studie design, var det ingen signifikant forskjell i distribusjoner av alder (median alder av 59 år), kjønn og etnisitet. Angivelig var det ingen forskjell i røyking og drikking status mellom saker og kontroller. Men disse variablene ble ytterligere justert for i videre multivariate logistiske regresjonsmodeller å kontrollere for eventuelle gjenværende forvirrende på den viktigste effekten av utvalgte SNPs.
TNFAIP2
genotyper og risikoen for magekreft
genotypen distribusjoner av de valgte fire
TNFAIP2
SNPs mellom sakene og kontroller er oppført i tabell 2. den observerte genotypefrekvensene av disse SNPs var alle i samsvar med de forventet av Hardy- Weinberg likevekt i fagene (
P
= 0,234 for rs1052823 G T,
P
= 0,698 for rs710100 G A og
P
= 0,125 for rs1052912 G A ), med unntak av rs8126 T C (
P
= 0,013) i tilfellene. Fordelingen av genotypene for
TNFAIP2
rs8126 T C var 56,48% for TT, 32,56% for CT og 10,96% for CC i tilfellene, vesentlig annerledes enn i kontrollene, som var 52,72% for TT , 41.53 for CT og 5,75 for CC. Denne forskjellen var statistisk signifikant (
P
= 0,019) under recessive modellen (rs8126 T C CC /TT + CT). (Tabell 2)
I tillegg har
TNFAIP2
SNP rs8126 T C, den eneste av de fire valgte
TNFAIP2
SNPs i miRNA bindingsseter, viste en statistisk signifikant sammenheng i ytterligere logistisk regresjonsanalyse. Nærmere bestemt, rs8126 homozygot CC genotype ble bare border forbundet med en økt risiko for magekreft (justert OR = 1,76, 95% CI = 0,96 til 3,27 og
P
= 0,072), sammenlignet med TT genotype, men denne risikoen øker (justert OR = 2,00, 95% CI = 1,09 til 3,64 og
P
= 0,024), sammenlignet med de samlede rs8126 T variant genotyper (tabell 2). Men i følge stratifisert analyse av alder, kjønn, etnisitet, røyking og drikking status, bare i undergruppen av pasienter som røyker, men ikke drinkers, gjorde den forhøyede risikoen fortsatt statistisk signifikant med en større variasjon i estimatene (justert OR = 4,04 , 95% CI = 1,08 til 15,08 og
P
= 0,038) (tabell 3), selv om undergruppen hadde begrenset observasjoner. Ingen annen signifikant sammenheng ble funnet i analysen for felles effekten av alle fire
TNFAIP2
SNPs i miRNA bindingssteder.
TNFAIP2
haplotyper og Fare for Gastric kreft
haplotyper ble også undersøkt for å finne ut om en bestemt haplotype kan være forbundet med magekreft risiko. Som vist på fig. 1B,
TNFAIP2
rs1052823 og rs1052912 er i høy koblingsulikevekt (LD) (r
2 = 0,87); følgelig rs1052912 ble ikke inkludert i haplotype analyse. Fire haplotyper ble vist å ha frekvenser 5% blant alle tilfellene, mens andre mindre vanlige haplotyper (frekvenser mindre enn 5%) ble slått sammen til en gruppe i analysen. De fire vanligste haplotyper (rs8126 /rs1052823 /rs710100: T-G-G, C-G-A, T-G-A- og C-T-A) stod for 90,53% og 94,72% av kromosomene av tilfellene og kontroller, henholdsvis. Men frekvensen fordelingen av haplotyper var ikke signifikant forskjellig mellom saker og kontroller, og deres foreninger med risiko for magekreft var ikke signifikant også. I videre analyse på de andre uvanlige haplotyper, de haplotype rs8126 /rs1052823 /rs710100: CGG viste en statistisk signifikant sammenheng med kreftrisiko (justert OR = 2,60, 95% CI = 1,39 til 4,85 og
P
= 0,003) sammenlignet med vanlig haplotype TGG. (Tabell 4)
Diskusjoner
I denne sykehusbasert case-control studie fant vi at
TNFAIP2
MIR-184 bindingssetet variant rs8126 CC genotype var signifikant assosiert med en forhøyet risiko for å utvikle magekreft i en recessiv genetisk modell. I lagdeling analyse, var en slik effekt mer tydelig i undergruppen av dagens drinkers, som kan være en sjanse funn. Men det var ingen statistisk bevis for en sammenheng med risikoen for sykdommen for variant genotyper av andre utvalgte SNPs, inkludert rs1052823 G T, rs710100 G A og rs1052912 G A, enten i overordnede analyser eller stratifiserte analyser etter alder, sex, etnisitet, røykestatus eller drikke status. Dessuten gjorde haplotype analysen ikke identifisere eventuelle ytterligere undergrupper med felles frekvens med høy risiko.
Nylig, to genom-wide assosiasjonsstudier (GWASs) har rapportert betydelige sammenslutninger av flere genetiske varianter med magekreft risiko i kinesiske populasjoner samt japansk og koreansk populasjoner [19], [20]. SNPs av
TNFAIP2
genet ble ikke blant de rapporterte topp-hits, fordi bare allele assosiasjoner fremfor genetiske modeller, for eksempel recessive modellen, ble testet i disse GWAS studiene. I denne studien med en begrenset prøvestørrelse, den valgte SNP rs8126 T C SNP i
TNFAIP2
miRNA bindingssetet, en SNP som ikke var inkludert, og heller ikke i LD med de som er inkludert i GWAS chip, var assosiert med magekreft. Dette funnet, men trenger ytterligere validering av større studier.
Få studier har undersøkt rollen til SNPs i miRNA bindingssteder i etiologien av magekreft. En case-control forening studie i en japansk befolkning på 552 tilfeller og 697 kontroller viste at rs2910164 CC genotypen i pre-mirnas (MIR-146a) ble statistisk assosiert med økt risiko for magekreft [21]. En annen lignende ventrikkelkreftstudien i en kinesisk befolkning viste en signifikant økt risiko hos pasienter med varianten CC homozygote av MIR-196a-2 sammenlignet med villtype homozygot TT og heterozygote CT bærere. Dette SNP ble også vist å ha sterk sammenheng med lymfeknutemetastase [22]. Lignende effekter ble funnet for de kombinerte rs895819 AG + GG genotyper av timer-mir-27a i en kinesisk studie utført av Qingmin S
et al product: [23]. Ytterligere funksjonelle analyser indikerte at varianten C-allelet kan være ansvarlig for forhøyet ekspresjon av MIR-27a, ved å redusere mRNA ekspresjon av dens målgen,
ZBTB10 plakater (Sink finger og BTB domene inneholdende 10), en mulig mekanisme som
HSA-mir-27a
SNP spiller en rolle i magekreft mottakelighet [23]. Imidlertid har ingen publiserte studier undersøkt hvilken rolle SNPs bosatt i miRNA bindende sekvens i magekreft.
TNFAIP2 product: (
B94
) er et cytokin-drevet primær respons genet som opprinnelig ble klonet fra TNF-α-induserbar avskrift i humane stimulerte endotelceller [15]. Videre studier funnet at det kan bli aktivert av andre enn TNF faktorer, inkludert interleukin-1β eller lipopolysakkarid [24]. Uttrykket av
TNFAIP2
har blitt avslørt å være eksistert i embryonale lever og nyre, samt i de mannlige modne kjønnsceller og blodkreft og lymfevev [25]. Selv om funksjonen til
TNFAIP2
genet er fortsatt i stor grad ukjent, det har vært antydet at
TNFAIP2
kan spille flere roller i utviklingen av organer, inkludert vaskulogenese, blodcelledifferensiering, myelopoiesis og spermatogenesis . Videre ble det rapportert at genet ble undertrykt i marg celler fra akutt promyelocytic leukemi (APL) pasienter, og at dens mål mRNA kan være oppregulert ved all-tans-RA (retinsyre) [26].
MiR-184 er ett eksemplar gen og evolusjonært konservert ved nukleotid nivå fra fluer til mennesker. Selv om dens funksjon er fortsatt uklart, men noen studier tyder MIR-184 som en potensiell onkogen kandidat. En studie på karsinomer (SCC) av tungen viste at MIR-184 kan spille en rolle i del i anti-apoptose og proliferasjon av de tunge SCC-celler [27]. En annen studie først vist at MIR-184 betydelig redusert svulst utvikling og økt total overlevelse i en orthotopic murine modell av neuroblastom [28]. En senere studie fant at MIR-184 var involvert i en felles genetisk sti gjennom målretting serin /treonin kinase akt2 ved å handle med MYCN transkripsjonsfaktor til å hemme neuroblastom celle overlevelse [29]. Samlet utgjør disse studier antyder en mulig rolle MIR-184 i modulerkreftrisiko. Det er imidlertid ikke klart om SNPs i sine bindingsseter kan videre endre slik modulering.
I vår forrige undersøkelse i 1,077 pasienter med plateepitelkarsinom i hode og hals (SCCHN) og 1,073 kreftfrie kontroller i et ikke-spanske hvite befolkningen, som har evaluert assosiasjoner av SNPs av
TNFAIP 2
genet med SCCHN risiko [24], fant vi også at sammenlignet med rs8126 TT genotype, variant CT og CC genotyper var forbundet med økt risiko SCCHN i en allel-doserespons måte [18]. I genotype-fenotype korrelasjonsanalyse av 37 SCCHN cellelinjer og perifere blod-mononukleære celler (PBMC) fra 43 SCCHN pasienter, ble det rs8126CC genotype assosiert med redusert ekspresjon av
TNFAIP2
mRNA. Samlet utgjør disse funnene tyder på at Mir-184 bindingssetet SNP (rs8126T C) i 3’UTR av
TNFAIP2
er funksjonell, muligens ved å modulere
TNFAIP2
uttrykk og bidrar til SCCHN mottakelighet [18]. Våre funn i magekreft er i overensstemmelse med de i hode- og halskreft.
Selv om vår undersøkelse ikke avsløre noen viktigste effekten av andre SNPs i miRNA bindingsseter av
TNFAIP2
på samlet risiko av magekreft, fant vi at rs8126 CC variant homozygot genotype, sammenlignet med de to genotypene (TC + TT), var assosiert med signifikant økt kreftrisiko. Den statistiske bevis som kunne bare opprettholdes i en undergruppe av drinkers i lagdel analyser tyder på svært begrenset utvalgsstørrelsen med denne studien. Selv om tobakksbruk og alkoholforbruk har vært ansett som store risiko for magekreft, ble vår matchende design ment for å kontrollere for deres forvirrende på de viktigste effektene av de utvalgte SNPs, der overmatching kan skje på grunn av mulige sammenhenger mellom matchende variabler (alder og sex) og de kjente risikofaktorer (røyking og drikking) i denne studiepopulasjonen. I tillegg haplotype analyse, mens fire felles frekvens haplotyper klarte ikke å vise noen statistisk kreftrisiko forening, den mindreårige frekvens haplotype rs8126 /rs1052823 /rs710100: C-G-G viste seg å ha økt risiko sammenlignet med vanlige haplotype T-G-G. Analysen av lavfrekvente haplotyper foreslår en annen konklusjon, nemlig at det kan være en utypet lav frekvens SNP som er knyttet til magekreft. Ytterligere studier er nødvendig for å validere dette resultatet.
Men siden denne studien er, så vidt vi vet, den første studien på
TNFAIP2
SNPs og magekreft risiko, våre funn er best ansett foreløpige, og større studier er garantert å vurdere rollen til disse SNPs i etiologien av magekreft videre. En annen begrensning i denne studien var mangel på informasjon på
H. pylori
smittestatus av fagene. Siden
H. pylori
infeksjon i mage pasienter var relativt uvanlig i USA [30], sammenlignet med de i Sør-Amerika [31] og asiatiske land [32], pasienter rekruttert i vår studie ble ikke testet for smitte på deres besøk til sykehus. Derfor inkludering av
H. pylori
informasjon bør vurderes i fremtidige større studier.
Takk
Vi takker Margaret Lung og Jessica Fiske for deres hjelp i å rekruttere fagene og samle spørreskjemaet informasjon og Jianzhong He, Kejing Xu, og Min Zhao og for deres hjelp i blod behandling og DNA-ekstraksjon.
