Abstract
Mål
En systematisk gjennomgang og en meta-analyse ble utført for å oppsummere dagens publiserte studier og evaluere LINE-en hypometylering i blod og annet vev som epigenetisk markør for kreftrisiko.
Metoder
En systematisk litteratursøk i Medline-databasen ved hjelp av PubMed, ble gjennomført for epidemiologiske studier, publisert før mars 2014. tilfeldig effekt-modell ble brukt til å anslå vektet gjennomsnittsforskjeller (MDS) med 95% konfidensintervall (cIS). Videre undergruppe-analyser ble utført med prøvetype (vev eller blodprøver), krefttyper, og ved analysene brukes til å måle globale DNA-metylering nivåer. The Cochrane programvarepakken omtale manager 5.2 ble brukt.
Resultater
Totalt 19 unike artikler på 6107 prøver (2554 fra kreftpasienter og 3553 kontrollprøver) ble inkludert i meta-analysen. LINE-1 metylering nivåene var signifikant lavere hos kreftpasienter enn hos kontrollene (MD: -6,40, 95% KI: -7.71, -5.09; p 0,001). Den betydelige forskjellen i metylering nivåer ble bekreftet i vevsprøver (MD -7,55; 95% KI: -9,14, -65,95; p 0,001), men ikke i blodprøver (MD: -0,26, 95% KI: -0,69, 0,17 ; p = 0,23). LINE-en metylering nivåene var signifikant lavere i tykk- og mage kreftpasienter enn hos kontrollene (MD: -8,33; 95% CI: -10,56, -6,10; p 0,001 og MD: -5,75; 95% KI: -7,75, – 3,74; p. 0,001), mens, ble ikke observert noen signifikant forskjell for leverkreft
Konklusjoner
den nåværende meta-analyse legger nye bevis til den voksende litteraturen om rollen til LINE-en hypometylering i human kreft og viser at LINE-en metylering nivåene var signifikant lavere hos kreftpasienter enn i kontrollprøver, særlig i visse krefttyper. Dette resultatet ble bekreftet i vevsprøver, både ferske /frosne eller FFPE-prøver, men ikke i blodet. Videre studier er nødvendig for å bedre avklare rollen til LINE-en metylering i bestemte undergrupper, med tanke på både kreft og prøvetype, og målemetoder
Citation:. Barchitta M, Quattrocchi A, Maugeri A, Vinciguerra M , Agodi A (2014) LINE-en Hypomety-lering in Blood og vevsprøver som en epigenetisk Marker for kreftrisiko: en systematisk oversikt og meta-analyse. PLoS ONE 9 (10): e109478. doi: 10,1371 /journal.pone.0109478
Redaktør: Masaru Katoh, National Cancer Center, Japan
mottatt: 23 juni 2014; Godkjent: 31 august 2014; Publisert: 02.10.2014
Copyright: © 2014 Barchitta et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. Den forfatterne bekrefter at alle data som underbygger funnene er fullt tilgjengelig uten restriksjoner. Alle relevante data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Forfatterne har ingen finansiering eller støtte til rapporten
Konkurrerende interesser:. Manlio Vinciguerra har fungert som en PLoS ONE Editorial Board medlem i tre år. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til PLoS ONE redaksjonelle retningslinjer og kriterier.
Innledning
epigenetiske forandringer, arvelige modifikasjoner DNA som ikke involverer endringer i DNA-sekvensen, er knyttet til endringer i genekspresjon og er viktig for å opprettholde stabilitet genomisk [1]. Blant epigenetiske mekanismer, er DNA-metylering den mest studerte og involvert i forskjellige biologiske prosesser inkludert kreft [2] – [5]. Global hypometylering, en samlet genom-wide reduksjon av DNA-metylering innhold, er assosiert med genomisk ustabilitet og et øket antall mutasjonshendelser [6]. Genomisk DNA hypometylering sannsynligvis vil resultere fra demetylering i repeterende elementer, som utgjør om lag 55% av det menneskelige genom og bestemme genregulering og genomstabilitet [7], [8]. Long ispedd Nukleotid Element 1 (LINE-1) og Alu repeterende elementer er viktige bestanddeler av utblandet DNA gjentas. På grunn av deres høye forekomst hele genomet, har metylering i repetitive elementer vist seg å korrelere med global genomisk DNA-metylering innhold og demetylering har vært forbundet med genom ustabilitet og kromosomale avvik. Således LINE-1 og Alu har vært brukt som globale surrogatmarkører for å estimere det genomiske DNA-metylering nivå i kreftvev [6], [9] – [10] og i perifere blodleukocytter [11]. LINE-1 hypometylering ble observert i flere typer kreft [12] – [14] og var assosiert med en dårlig prognose [15]. I en meta-analyse [11], ble global DNA hypometylering i perifert blod leukocytter assosiert med økt kreftrisiko. En annen meta-analyse, undersøker genome-wide DNA metylering i perifert blod DNA og kreftrisiko, rapporterer en signifikant invers sammenheng mellom genomisk 5-metylcytosin nivåer og kreftrisiko, men ingen samlet risiko forening ved hjelp av surrogater for genomisk metylering, inkludert metylering ved LINE -1 og Alu repeterende elementer ble funnet [16]. Hensikten med denne studien var å gjennomføre en mer omfattende systematisk gjennomgang og en meta-analyse for å oppsummere dagens publiserte studier og evaluere LINE-en hypometylering i blod og annet vev som en epigenetisk markør for kreftrisiko.
Metoder
Søk strategi- og utvelgelseskriterier
En systematisk litteratursøk i Medline-databasen ved hjelp av PubMed, ble utført for epidemiologiske studier, publisert før mars 2014, som undersøker sammenhengen mellom LINE-en hypometylering og kreftrisiko. Søkene ble begrenset til studier skrevet på engelsk; sammendrag og upubliserte studier ble ikke inkludert. Litteratursøk ble utført uavhengig av to forfattere. Følgende kriterier ble brukt for å søke artikler og sammendrag: ( «kreft» eller «svulst» eller «carcinoma») OG ( «LINE-1» eller «Long ispedd Element-1» eller «global») OG ( «hypometylering» eller «metylering»). Videre ble referanselistene fra utvalgte artikler sjekket søke flere relevante studier. Ingen studier ble ekskludert a priori for svakhet av design eller datakvalitet. Artikler ble inkludert i den kvantitative analysen bare dersom de tilfredsstiller følgende kriterier: (1) design case-control eller kohort studie; og (2) studier som rapporterte gjennomsnittsverdier og standardavvik (SD) av DNA-metylering nivå i kreftpasienter og i kontrollgruppen. Videre eksklusjonskriteriene var som følger: (1) studien rapporterer bare resultater som medianen av metylering nivåer eller gjennom grafisk display, eller 95% konfidensintervall (CIS) med justerte odds ratio (OR) eller relativ risiko for kreftrisiko hos personer med det laveste nivået av global DNA metylering (tertile, kvartil eller desil) sammenlignet med gruppen med høyest nivå, (2) studien rapporterer eneste gen-spesifikk DNA metylering analyse, og (3) artikler.
Hvor det var manglende data eller ytterligere informasjon var nødvendig, forfatterne av studien ble kontaktet via e-post.
de foretrukne rapporterings elementer for systematiske oversikter og meta-analyse (PRISMA) retningslinjer for gjennomføring av meta-analyse ble fulgt [17] .
Datainnsamling og utvinning
To av forfatterne uavhengig anmeldt alle kvalifiserte studier og abstrahert følgende informasjon i et standardformat: første Forfatterens etternavn, årstall, land der studien ble utført, studiedesign, kreftformer og typer, prøvetype, eksperimentelle metoder for å måle globale DNA metylering nivåer, antall saker og kontroller, gjennomsnittsverdier og SD av globale DNA metylering nivåer for hver gruppe og hovedresultater.
Statistisk analyse
Alle data ble analysert ved hjelp av GJENNOMGANG MANAGER 5.2 programvare levert av Cochrane Collaboration (https://ims.cochrane.org/revman).
den tilfeldig effekt modellen var brukes til å beregne vektet gjennomsnittsforskjeller (MDS) med 95% CI [18] og dermed ingen justering for miljøeffekter ble tatt hensyn til. Videre undergruppe-analyser ble utført med prøvetype (vev eller blodprøver), ved å sample kilde (friskt vev eller formalinfiksert, parafin-innleiret, FFPE vev), ved krefttyper (kolorektal, mage, hepatocellulær), og ved analysene som benyttes å måle globale DNA metylering nivåer. Skog tomter ble generert for å illustrere de studiespesifikke effektstørrelser sammen med en 95% CI. Heterogenitet på tvers av studier, ble målt ved hjelp av Q-test basert på χ2 statistikk, vurderer betydelig statistisk heterogenitet som p 0,1. Som Cochran test kun indikerer tilstedeværelse av heterogenitet og ikke dens omfang, også rapportert vi den jeg
2 statistikk, som anslår andelen av resultatet variasjonen som kan tilskrives heterogenitet på tvers av studier. En I
2 verdi på 0% angir ingen observert heterogenitet, mens 25% er «lav», er 50% «moderat» og 75% er «høy» heterogenitet [19]. Vi har også beregnet mellom-studien variansen bruker tau-squared (τ
2) statistikk [20].
For å bestemme tilstedeværelsen av publikasjonsskjevhet, symmetrien av trakten tomter som betyr forskjeller ble plottet mot deres tilhørende standardfeil ble vurdert.
Resultater
data~~POS=TRUNC utvinning
de detaljerte trinnene i systematisk oversikt og meta-analyse prosess er gitt som en PRISMA flytdiagram i Figur 1. En totalt 324 artikler ble hentet fra databasen, ble en artikkel lagt gjennom manuell søking med referanseliste og dermed 46 papers, utgitt mellom 2004 og 2014, ble inkludert i den systematiske gjennomgang og oppsummert i tabell 1 ved kreft nettstedet eller type .
data~~POS=TRUNC egenskaper og kvalitetsvurdering
i alt 18 studier var fra asiatiske land (40%), 13 fra europeiske land (28%), 13 fra USA (28%) og en fra Argentina og fra Egypt (2% hver).
tretti~~POS=TRUNC åtte~~POS=HEADCOMP retrospektive longitudinelle studier sammenlignet LINE-1 metylering nivåer mellom kreftpasienter og friske eller normale tilstøtende vev hos kreftpasienter. Åtte prospektive longitudinelle studier analysert LINE-en metylering nivåer i kohorter av kreftpasienter, i forhold til forventet levealder, utfallet av sykdommen eller malignitet av svulsten, identifisere rollen til LINE-en hypometylering som en biomarkør for dårlig prognose i kreftpasienter [15], [21] -. [27]
i 41 studier LINE-1 metylering nivåer ble evaluert både i svulsten og hos friske kontroller vev, og i de resterende 5 studiene bare hos kreftpasienter.
Totalt studiene oppdaget LINE-en metylering nivåer i 15332 prøver: 8103 fra kreftpasienter (prøver 4679 vev, 3276 blodprøver, 72 muntlige skyllinger og 76 benmarg plasmaceller) og 7136 kontrollprøver (6277 fra friske personer og 859 fra normale tilstøtende vev hos kreftpasienter).
Når det gjelder de eksperimentelle metoder for å måle LINE-1 metylering nivåer, «gullstandarden» metoden, som brukes i 63% av studiene, var det pyrosekvensering av bisulfitt konverterte DNA. Videre 9 studier brukes kombinert bisulfitt restriksjonsanalyse av LINE-1 (COBRA LINE-1) og 8 studier brukt andre metoder, dvs. sekvensering, real-time PCR, AQAMA PCR, SAMMENLIGN metylering analyse, MulticolorMethyLight analysen og MS-MLPA.
Den vanligste svulsttypen i studien var kolorektal kreft analysert i åtte studier [15], [21], [28] – [33], etterfulgt av syv studier som evaluerte metylering nivået i magekreft [23], [ ,,,0],27], [32], [34] – [37], fem i hepatocellulær karsinom [25], [38] – [41], fire i blærekreft [1], [14], [42], [43] og hode og hals-karsinom [10], [44] – [46], to i lungekreft [47], [48] og brystkreft [24], [49], og enkelt studier vurdert metylering nivåer i nyrecellecancer [ ,,,0],50], prostata kreft [51], nevroendokrine svulster [52], eggstokkreft [53], skjoldbruskkjertelkreft [54], spiserørskreft [26], livmorhals kreft [55], livmorkreft [32], hud melanom [22] , testikkelkreft [56], leukemi [57], multippelt myelom [58], paragangliom [59], fibrolamellar carcinoma [60] og mage [61]. Fire studier evaluert metylering nivå i flere kreftformer [13], [28], [29], [32]. Med hensyn til analysemetoden, ble pyrosekvensering brukes i 29 studier, etterfulgt av COBRA i 9 studier, Real-Time PCR og AQAMA-PCR i 2 studier. MulticolorMethyLight analyse, MS-MLP, sammenligne og QUBRA ble vedtatt i én studie hver.
Meta-analyse
Av de 46 utvalgte avisene, 14 rapporterte midler og SD av DNA metylering nivåer. I tillegg ble midler og SDS uavhengig er beregnet ved bruk av data fra 2 rundt og blant Forfattere kontaktes for manglende data, 3 reagert på e-postforespørsler og dataene ble tilsatt i analysen [30], [50], [56]. Således, 19 unike artikler ble inkludert i den kvantitative analysen. Videre to artikler av Antelo et al. [28] og ved Pavicic et al. [32], rapporterte data fra forskjellige krefttyper, og således ble de separert i 4 og 8 sub-studier, henholdsvis (tabell 1)
I alt 6107 prøver ble tatt med i analysen. 2554 fra cancer pasienter (1127 vevsprøver og 1427 blodprøver) og 3553 kontrollprøver (2811 fra friske personer og 742 fra normal tilstøtende vev hos kreftpasienter).
LINE-en metylering nivåene var signifikant lavere hos kreftpasienter enn i kontroll prøver (MD: -6,40, 95% KI: -7,71, -5,09; p 0,001). Imidlertid heterogenitet mellom studiene var signifikant høy (I
2 = 99%) (Figur 2), for således, subgruppe analyse basert på prøvetype (vev eller blodprøver) ble utført. Den betydelige forskjellen i metylering nivåer ble bekreftet i vevsprøver (MD -7,55; 95% KI: -9,14, -65,95; p 0,001), men ikke i blodprøver (MD: -0,26, 95% KI: -0,69, 0,17 ; p = 0,23)
subgruppeanalyser basert på prøvetype
En subgruppeanalyse eksempelkilde ble gjennomført… LINE-en metylering nivåene var signifikant lavere hos kreftpasienter enn i kontrollprøver i frisk og /eller frossen vev (MD -8,19; 95% CI: -10,54, -5,84; p 0,001) og i FFPE vev (MD: -6,96 95% KI: -9,73, -4,20; p 0,001). Heterogenitet mellom studiene i de to undergruppene var signifikant høy (jeg
2 = 98% og 96% henholdsvis) (figur 3).
Undergrupper analyse basert på eksempelkilde.
Videre, en subgruppeanalyse av bestemte krefttyper, for tykktarms, hepatocellulær og magekreft, ble gjennomført. LINE-en metylering nivåene var signifikant lavere i tykk- og magekreftpasienter enn i kontrollprøver (MD: -8,33; 95% CI: -10,56, -6,10; p 0,001 og MD: -5,75; 95% KI: -7,75, -3,74; p 0,001). Det ble ikke observert forskjell fra LINE-1 metylering nivåer i blod leukocytter for leverkreft (MD: -5,76; 95% CI: -12,03, 0,51; p = 0,23). Heterogenitet mellom studiene, i tykk- og hepatocellulære undergruppene var signifikant høy (jeg
2 = 96%), og moderat høyt i mage undergrupper (I
2 = 66%) (figur 4).
Undergrupper analyse basert på krefttypen.
En subgruppeanalyse analyser som brukes til å måle metylering nivåer, og spesielt mellom de to brukte teknikker, pyrosekvensering og COBRA LINE-1, ble utført. MDS for
pyrosekvensering Hotell og
COBRA LINE-en
undergrupper var -7,33 (95% KI: -9,06, -5,59; p 0,001) og -5,75 (95% KI: -7,13 , -4,37, p = 0,03), respektivt. Heterogenitet mellom studiene og i
pyrosekvensering
gruppen var signifikant høy (jeg
2 = 100%), og moderat høy i
COBRA
undergruppe (I
2 = 63% ) (figur 5).
Undergrupper analyse basert på metoden.
En subgruppeanalyse av prøvetype, spesielt vevsprøver, og analysemetode ble gjennomført. MDS i undergrupper av studier som påviste LINE-1 metylering nivåer i vevsprøver gjennom pyrosekvensering og COBRA LINE-1, ble -10,42 (95% CI: -12,93, -7,91; p 0,001) og -5,12 (95% KI : -6,33, -3,91, p = 0,10), henholdsvis. Heterogenitet mellom studiene og i
pyrosekvensering
gruppen var signifikant høy (jeg
2 = 97%), moderat høy i
COBRA LINE-en
undergruppe (I
2 = 56 %) (figur 6). Stratifisering blant studier som oppdaget LINE-en metylering i blodprøver ble ikke utført på grunn av mangelen på studier.
Undergrupper analyse basert på metoden.
Trakten tomter indikerer liten til moderat asymmetri, noe som tyder på at publikasjonsskjevhet kan ikke være helt utelukket som en faktor av innflytelse på dagens meta-analyse (figur 7-12).
Subgruppeanalyser basert på prøvetype.
subgruppe analyse basert på vev prøvetyper. SE, standard feil, MD, mener forskjellen.
Subgruppeanalyser basert på type kreft i blodprøver.
Subgruppeanalyser basert på krefttypen i vevsprøver.
Subgruppeanalyser basert på påvisningsmetoden i blodprøver.
Subgruppeanalyser basert på påvisningsmetoden i vevsprøver.
Diskusjoner
Det lave nivå av DNA-metylering i tumorer sammenlignet med DNA-metylering nivået i deres normale vev kolleger var en av de første epigenetiske forandringer som befinner seg i human kreft [62]. Tapet av metylering skyldes i hovedsak hypometylering av repeterende DNA-sekvenser og LINE-1 elementer er vanligvis tungt metylert i normalt vev, mens LINE-en hypometylering har blitt rapportert hos kreftvevet. Videre Liao et al. [50] rapporterte at line en metylering nivåer, målt i leukocytter DNA, var betydelig høyere hos nyrekreftpasienter enn hos friske personer.
To nyere meta-analyser ble utført for å beregne samlet kreftrisiko etter global DNA hypometylering i blodleukosytter. Meta-analyse av Woo og Kim [11] forteller at global DNA hypometylering av blodleukosytter var assosiert med økt kreftrisiko, selv om foreningen varieres ved de eksperimentelle metoder som brukes (% 5- metylcytosin metode, LINE-en med pyrosekvensering og metyl aksept analyse), regionen av DNA målrettet og krefttypen. En oppdatert metaanalyse utført av Brennan og Flanagan [16] indikerer en signifikant invers sammenheng mellom genomisk 5-metylcytosin nivåer og kreftrisiko (OR = 3.65, 1.20-6.09), men ingen samlet risiko foreningen for studier med surrogater for genomisk metylering, inkludert metylering på LINE-en repeterende element (OR = 1,24; 0,76 til 1,72). Spesielt de to foregående metaanalyser inkluderte studier som rapporterer forening analyse mellom blod metylering nivåer og kreftrisiko, men ikke vurdere studier rapporterer forskjeller i gjennomsnitts metylering i blodet og i andre vev. Den nåværende meta-analyse av de siste rapportene ble gjennomført blant annet studier rapporterer metylering i blodet og i andre vev. Denne meta-analyse bekymret 19 unike artikler, men siden to artikler utgjorde mer enn en studie utført på ulike pasientgrupper, til sammen var det 29 ikke-entydige studier inkludert. På totalt 2554 prøver fra kreftpasienter og 3553 kontrollprøver, denne meta-analyse rapporter som betyr metylering nivåer i kreftpasienter var signifikant 6,4% lavere enn i kontrollprøver.
Sammenhengen mellom kreftrisiko og global DNA metylering har vært mest undersøkt i blodprøver, fordi høsting tumorvev er invasiv og ikke kan rutinemessig utført. Imidlertid har flere studier har rapportert at metylering av repeterende elementene er vevsspesifikk, mest variable i tumorvevet, og er ikke korrelert mellom svulst og blod [63] – [65]. Konsekvent, avslører bevis for at genomisk hypometylering i tumor og normalt vev tilstøtende av blære og tykktarmskreft var ikke påvisbar i blod [43], [66], som tyder på at hypometylering er begrenset til sykdommen påvirket vev. Interessant, i den foreliggende meta-analyse av signifikant forskjell i gjennomsnittlig metylering nivåer ble bekreftet bare i vevsprøver, både ferske /frosset eller FFPE-prøver, men ikke i blodprøver. Videre meta-analyse gitt tilstrekkelig bevis for at LINE-en hypometylering, øker betydelig i tykk- og magekreft. I motsetning til dette ble ingen samlet krets funnet for leverkreft. Spesielt, alle studier som fokuserer på tykk- og mage svulster evaluert LINE-en metylering i vevsprøver, mens alle de inkluderte studiene på leverkreft undersøkes foreningen bare i blod leukocytter prøver. Global DNA-metylering kan måles ved direkte og indirekte analyser kvantifisering. Selv om måling av prosentandeler av 5- metylcytosin å anslå globale DNA-metylering innholdet er høyt kvantitativ og reproduserbar, krever de stor mengde av DNA, og er ikke egnet for store epidemiologiske studier. Pyrosekvensering med sulfitt-behandlet DNA, «gullstandarden» for DNA metylering analyse [67], [68], er en høy gjennomstrømming og nøyaktig metode for tiden tilgjengelig for å måle LINE-en metylering som surrogatmarkør for global DNA hypometylering. Imidlertid kan LINE-1 metylering nivåene varierer avhengig av mål CpG sekvensen oppdaget [69], som representerer en viktig faktor i foreningen studie med kreftrisiko. I den foreliggende meta-analyse, vurderer de to mest brukte deteksjonsmetoder (pyrosekvensering og COBRA LINE-1) begge undergrupper rapporterer betydelig lavere LINE-1 metylering nivåer i kreftpasienter enn i kontrollprøver, selv om heterogenitet mellom studiene var signifikant høyt i
pyrosekvensering
undergruppe og moderat høyt i
COBRA
gruppen.
de viktigste begrensningene i denne meta-analysen er det lite antall studier inkludert (n = 19) og høy heterogenitet på tvers av studier. Selv om en tilfeldig effekter modell ble utført, for å ta hensyn til høy heterogenitet, de samlede estimatene bør tolkes med forsiktighet. For å overvinne dette problemet, ble samlet anslag beregnet i mer homogene undergrupper av studier (undergrupper analyse). I tillegg ble den mulige eksistens av en publikasjon skjevhet i betraktning. Undersøkelse av trakt tomter viste liten til moderat asymmetri, noe som tyder på at publikasjonsskjevhet kan ikke helt utelukkes, og kan ha hatt minst en moderat innvirkning på den sanne estimater effekt størrelse. Faktisk ble noen data, for eksempel konferanse abstracts, ikke-engelskspråklig litteratur, upubliserte data og andre inkonsistente rapporter i henhold til våre kriterier ekskludert. Videre metylering risiko foreningen pleier bare å bli opplyst om dersom det viser statistisk signifikante resultater, og hvis forfatterne anser analyse riktig [16].
Dessuten, siden de fleste studier (83%) hadde en case-kontroll design store kohortstudier er nødvendig for å avklare om global hypometylering er en tidlig kreftfremkallende avvik eller en effekt av kreftutvikling [11].
i konklusjonen, legger dagens meta-analyse nye bevis til den voksende litteraturen om rollen til LINE-en hypometylering i human kreft og viser at LINE-en metylering nivåene var signifikant lavere hos kreftpasienter enn i kontrollene, spesielt for enkelte krefttyper. Dette resultatet ble bekreftet i vevsprøver, men ikke i blodet. Videre studier er nødvendig for å bedre avklare rollen til LINE-en metylering i bestemte undergrupper, med tanke på både kreft og prøvetype, og målemetoder.
Hjelpemiddel Informasjon
Sjekkliste S1.
PRISMA Sjekkliste
doi:. 10,1371 /journal.pone.0109478.s001 plakater (DOC)
Sjekkliste S2.
Meta-analyse på Genetic Association Studies Sjekkliste
doi:. 10,1371 /journal.pone.0109478.s002 plakater (DOC)
Takk
Forfatterne ønsker å takke Forfattere A. Goel og K. Hur og kolleger, LM Liao og LE Moore og kolleger og MH Greene og L. Mirabello og kolleger for å støtte mer data som ikke er rapportert i sine artikler.
