Abstract
Leveren kreft eller leverkreft er en av de viktigste årsakene til kreft-relaterte dødsfall. Konvensjonelle kjemoterapier er begrenset av utviklingen av medikamentresistens og forskjellige bivirkninger. På grunn av sin ikke-toksisitet og potent biopharmacological aktivitet, har metabolitter som stammer fra sopp fått mer oppmerksomhet i kreftterapi. Våre tidligere studier har vist at kreft effekter av polysakkarid-protein komplekser avledet fra
Pleurotus
sopp. Målet med denne studien var å undersøke den underliggende molekylære mekanismen til anticanceraktiviteten til en varmtvannsekstrakt inneholdende et polysakkarid-proteinkompleks isolert fra
Pleurotus pulmonarius plakater (PP) i leverkreftceller. Våre resultater indikerer at eksponering av leveren kreftceller til PP ikke bare betydelig redusert
in vitro
kreftcelle spredning og invasjon, men også forbedret stoffet følsomhet til kjemoterapeutiske stoffet Cisplatin. Både oral administrering og intraperitoneal injeksjon av PP vesentlig hemmet tumorvekst i xenograft BALB /c nakne mus. PP utløste en markert undertrykkelse av PI3K /AKT signalveien i leveren kreft celler
in vitro Hotell og
in vivo
, og overekspresjon av konstitutivt aktive formen av AKT, Myr-AKT, opphevet dette effekt og den inhiberte proliferasjon og invasjon av PP. Både western blot og ELISA-resultatene viste at PP-behandlede leverkreftceller hadde redusert ekspresjon og sekresjon av vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF). Tilsetning av rekombinant human-VEGF dempes de inhiberende virkninger av PP for PI3K /AKT sti og kreft fenotyper. Våre resultater viser at PP trykt spredning, invasjon, og resistens av leverkreftceller
in vitro Hotell og
in vivo
, mediert av hemming av autokrint VEGF-indusert PI3K /AKT signale sti. Denne studien tyder på potensialet terapeutisk innblanding av PP i behandlingen av menneskelige leverkreft
Citation. Xu W, Huang JJ-h, Cheung PCK (2012) Utdrag av
Pleurotus pulmonarius
Undertrykker Liver kreft utvikling og progresjon gjennom Hemming av VEGF-indusert PI3K /AKT signalveien. PLoS ONE 7 (3): e34406. doi: 10,1371 /journal.pone.0034406
Redaktør: Joseph Alan Bauer, Bauer Research Foundation, United States of America
mottatt: 8 november 2011; Akseptert: 1 mars 2012; Publisert: 28 mars 2012
Copyright: © 2012 Xu et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Forfatterne har ingen støtte eller finansiering for å rapportere
konkurrerende interesser:.. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Leverkreft kreft~~POS=HEADCOMP er den femte vanligste kreftsykdommen og tredje største årsaken til alle kreftrelaterte dødsfall i verden [1] – [3]. Dessverre er den samlede svarprosent på leveren kreft til behandling utilfredsstillende, hovedsakelig på grunn av sen diagnose og dårlig effekt av behandling, spesielt motstanden mot cellegifter og metastasering til andre organer [4]. Vekslingene i flere cellesignalveier ble hyppig observert i et bredt spekter av menneskelige kreft, inkludert leverkreft, der PTEN /PI3K /AKT signalkaskade har blitt rapportert å spille en avgjørende rolle i reguleringen av de ondartede atferd inkludert spredning, overlevelse og invasjon [5], [6]. Vekst bevis viste at PI3K /AKT-reaksjonsveien kan reguleres på en autokrin måte ved hjelp av forskjellige vekstfaktorer, slik som insulin-lignende vekstfaktor (IGF) og vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF) [7], [8].
Natural fytokjemikalier og metabolitter fra planter får stadig større oppmerksomhet til deres farmakologiske virkning i behandling og forebygging av kreft på grunn av deres lave toksisitet og potensiell biologisk aktivitet [9]. Begge
in vitro Hotell og
in vivo
studier har vist at disse bioaktive naturlige produkter kan hemme initiering, markedsføring, og progresjon av kreftutvikling ved å forstyrre de signalveier i humane kreftceller og deres forbruk har være en lovende Kjemopreventivt og kjemoterapeutisk strategi mot kreft [10], [11]. Blant disse er spiselig sopp er kjent for å være en rik kilde av anticancermidler, med sine polysakkarider og polysakkarid-proteinkomplekser å være de mest effektive som [12], [13]. Mange rapporter har vist
in vitro Hotell og
in vivo
kreft aktiviteter polysakkarider isolert fra spiselige sopper som
Lentinula sopper
,
blazei Hotell og
Phellinus linteus
mot forskjellige humane kreftceller [14] – [18]. En fersk studie viste at rå ekstrakt av polysakkarid fra
Phellinus linteus
hemmet fosforylering av AKT i brystkreftceller [19]. Crude ekstrakt av polysakkarider som finnes i
Ganoderma lucidum
ble funnet å ha anti-metastatiske effekter gjennom modulering av PI3K /AKT vei [20].
Nylig er det mange
in vitro
studier som viser antioksidant og anti-proliferativ effekt av råolje ekstrakter av polysakkarider og polysakkarid-protein komplekser fra
Pleurotus
sopp slekten i forskjellige humane kreftceller [2] – [25]. Antioksidantaktiviteten av mange naturlige produkter har også vært foreslått å bidra til deres antikreft-effekt [26] – [28]. Basert på antioksidant studie av sopp arter samlingen i vårt laboratorium, en aktiv polysakkarid og protein kompleks isolert fra sopp
Pleurotus pulmonarius
, kodet som PP, ble vist ut for potensielle antikreftmiddel på grunn av sin betydelig antioksidant virkning ( upubliserte data) i denne studien. Disse spennende foreløpige funn har ført oss til å undersøke de underliggende molekylære mekanismer av anti-kreft der PP utøves på to humane lever kreftceller, Huh7 og Hep3B. Resultatene viste for første gang at hemming av VEGF /PI3K /AKT kaskade mediert
in vitro Hotell og
in vivo
undertrykkende effekter av PP på utvikling og progresjon av menneskelige leveren kreftceller. Den chemosensitization av leverkreftceller mot terapeutisk medikament cisplatin ble også forbedret med PP behandling. I denne studien ble det terapeutiske potensialet i PP i behandlingen av menneskelige leverkreft innblandet.
Resultater
In vitro
anti-proliferativ effekt av PP på leverkreft celler
for å bestemme den hemmende effekten av PP på leveren kreftceller, først evaluert vi vekst og levedyktigheten til fire leverkreft cellelinjer (Huh7, Hep3B, HepG2 og SMMC-7721) med behandling av PP ved hjelp av MTT analyse. Resultatene viste at PP som utøves en betydelig hemmende effekt på Huh7, Hep3B, HepG2 og SMMC-7721-celler i dose- og tidsavhengig måte (fig. 1A). Denne iakttakelse ble ytterligere bekreftet ved kolonidannelsesbestemmelsen (Fig. 1B). Strømningscytometri-analyse viste at behandlingen av leverkreftceller PP forårsaket en akkumulering av celler i G2 fasene (en økning fra 12,42 ± 0,25 til 19,66 ± 1,12 i Huh7 og fra 13,30 ± 1,04 til 20,38 ± 1,11 i Hep3B) (tabell 1) . I tillegg, i samsvar med noe øket sub-G1 populasjon i PP-behandlede celler (tabell 1), de viktige apoptose markører, spaltes caspase3 og spaltet Poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) ble oppregulert i PP-behandlede cellene , noe som tyder på proapoptotiske effekten av PP på leverkreftceller kan være caspase-mediert. Western blot indikerte en doseavhengig reduksjon i ekspresjonen av cyclin B1, en viktig G2 checkpoint-protein, i de to leverkreftceller, tyder på at PP-induserte G2-fase cellesyklus-stans kan bli mediert av nedregulert ekspresjon av cyklin B1 (fig. 1C). I mellomtiden, for å utelukke at den anti-kreft effekt av polysakkarid-protein kompleks isolert fra
Pleurotus pulmonarius
er uspesifikke, polysakkarid-protein kompleks isolert fra annen Pleurotus
sopp, Pleurotus knoll regium
(PTR) ble anvendt som kontroll, og dermed tyder den spesifikke effekten av PP (fig. S1).
A. MTT-analysen ble tatt for å evaluere leverkreftcellen (Huh7, Hep3B, HepG2 og SMMC-7721) levedyktighet etter behandling med forskjellige konsentrasjoner av PP (0, 25, 50, 100, 200 eller 400 ug /ml) i inntil 96 timer. Dataene er midler (barer, SD) av tre uavhengige forsøk. B. koloni-formasjon analysen viste en nedgang doseavhengig i leverkreft celleproliferasjon (Huh7, Hep3B, HepG2 og SMMC-7721) når eksponering for PP. C. Western blot ble utført og ble observert en doseavhengig reduksjon av cyclin B1 uttrykk. Actin var involvert som en lasting kontroll.
På den annen side ble PP undersøkt for cytotoksiske effekter mot normal leveren celle WRL-68 ved hjelp av MTT-analyse og kolonidannelse analysen. Resultatene viste at normal lever celle WRL-68 er mer motstandsdyktig mot PP enn leverkreftceller, noe som antyder den selektive cytotoksisitet av PP til kreftceller og dens potensial til å bli utviklet som anticancermidler (fig. S2). For ytterligere å undersøke potensialet innblanding av PP i behandling av kreft hos mennesker, vi utvidet våre studier i andre krefttyper. Resultatene viste en signifikant redusert formeringshastigheten på en doseavhengig måte ved PP behandling i humane kreftcellelinjer fra bryst (T47D), lunge (A549), mage (AGS) og prostata (DU145) (fig. S3).
Effekt av PP på hemming av VEGF-ekspresjon og inaktivering av PI3K /AKT sti
Western blot viste at behandling av PP særlig redusert protein uttrykk for fosfo-AKT (p-AKT), den aktiverte form av AKT, og nedstrøms mål inkludert fosfo-GSK3p (p-GSK3P), survivin, Bcl-xL på en doseavhengig måte, men ikke den av Bax og totale nivå av AKT og GSK3P i begge leverkreftceller (fig. 2A). I tillegg, i samsvar med noe øket sub-G1 populasjon i PP-behandlede celler (tabell 1), de viktige apoptose markører, spaltes caspase3 og spaltet Poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) ble oppregulert i PP-behandlede cellene , noe som tyder på proapoptotiske effekten av PP på leverkreftceller kan caspase mediert. I mellomtiden, N-cadherin og vimentin, noe som kan forklare reversering av epitelial-mesenchymale overgang (EMT), ble nedregulert i PP-behandlede celler (Fig. 2A). I motsetning til dette ble ekspresjonsnivå av fosfo-ERK (p-ERK), en annen viktig signalveien som er involvert i kreftcellen regulering, ikke vesentlig endret ved PP behandling, noe som tyder på spesifisitet i reguleringen av PI3K /AKT-reaksjonsveien med PP (fig. 2A ). Huh7-celler forbigående transfektert med AKT-plasmid gående viste en inhiberende effekt opphevet når eksponeringen for PP, som angitt ved MTT-analysen (fig. 2B) og western blot analyse (Fig. 2C). Disse funnene ytterligere bekreftet at PI3K /AKT signalveien kan bidra til kreft effekter av PP i leverkreftceller.
A. Huh7 og Hep3B celler ble behandlet med forskjellige konsentrasjoner av PP (0, 50 eller 100 ug /ml), og cellelyse høstet ved 48 timer for western blot-analyse. PP behandling som utøves en betydelig reduksjon i ekspresjonsnivåene av p-AKT og dets nedstrøms mål inkludert p-GSK-3β, Bcl-xL, og Survivin. Imidlertid PP påvirket ikke uttrykk for p-ERK og PTEN men VEGF-ekspresjon ble redusert i PP-behandlede celler. Forsøkene ble gjentatt 3 ganger. B. Huh7-celler ble transfektert med AKT-overuttrykkende vektor eller vektorkontroll, deretter behandlet med PP (50 ug /ml), og celle-levedyktighet målt ved MTT ved 72 timer. Resultatene viste en opphevet hemmende effekt i AKT-transfekterte celler når sammenlignet med kontrollgruppen. Data er gitt som prosent av ubehandlede celler som kontroll, som ble satt til 100%. Dataene er middelverdier ± SD fra tre uavhengige eksperimenter. C. Huh7-celler ble transfektert med AKT-overuttrykkende vektor eller vektorkontroll og deretter behandlet med PP. Cellelysat ble høstet og brukt til western blot. Betydelige forskjeller mellom PP-behandlede og ubehandlede celler ble statistisk analysert ved ANOVA (Tukey multiple sammenligningstest, *,
P
0,01; **,
P
0,001).
Effekt av PP på inhibering av VEGF-sekresjon og inaktivering av PI3K /AKT sti
det er interessant å finne at PP redusert ekspresjon av VEGF, som er en viktig vekstfaktor involvert i spredning og invasjonen av kreft hos mennesker [29]. Det er godt dokumentert at PI3K /AKT-reaksjonsveien er aktivert som reaksjon på forskjellige vekstfaktorer [30]. Gitt at våre vestlige blot resultatene viste redusert proteinuttrykk av p-AKT og VEGF, men ikke fosfatase og tensin homolog (PTEN), en oppstrøms protein av AKT (Fig. 2A), er det svært sannsynlig at PP regulerer PI3K /AKT sti gjennom en VEGF-mediert autokrint måte. Interessant, ELISA-data viste en hemming av VEGF-sekresjon i en doseavhengig måte ved PP behandling i Huh7 og Hep3B-celler (fig. 3A). Viktigst, tilsetning av rekombinant human VEGF (rhVEGF) ved 0,6 ng /ml, konsentrasjonen redusert med PP i forhold til ubehandlet gruppe ved 72-timers tidspunktet, dempes den hemmende effekten av PP på celleproliferasjon (fig. 3B) og PI3K /AKT signalveien (fig. 3C). Disse data tyder på at inaktiveringen av PI3K /AKT bane av PP kan være mediert ved inhibering av VEGF på en autokrin måte.
A. Effekter av PP på utskillelsen av VEGF i Huh7 og Hep3B celler. Etter at cellene ble behandlet med PP med forskjellige konsentrasjoner av (0, 50 eller 100 ug /ml) i 48 timer ble det kondisjonerte mediet samlet og VEGF-nivå i det kondisjonerte mediet ble bestemt ved en human VEGF ELISA Kit. Resultatet viste en hemming av VEGF-sekresjon i en doseavhengig måte ved PP behandling. B. MTT-analysen ble utført for å evaluere proliferasjon når eksponeringen for PP (50 ug /ml) i nærvær eller fravær av rhVEGF (0,6 ng /ml) i 72 timer i Huh7-celler. C. Huh7-celler ble behandlet med PP (50 ug /ml) alene eller i kombinasjon med rhVEGF (0,6 ng /ml), og cellelysatet ble høstet og anvendt til Western blot. Data er uttrykt som gjennomsnitt ± SD. Betydelige forskjeller mellom PP-behandlede og ubehandlede celler ble statistisk analysert ved ANOVA (Tukey multiple sammenligningstest, *,
P
0,01; **,
P
0,001).
Effekt av PP på å styrke kjemosensitivitet av leverkreftceller til cisplatin
En stor mengde bevis har indikert at PI3K /AKT vei kritisk bidrar til resistens i kreft hos mennesker [31] og inaktivering av PI3K /AKT av PP kan føre til veksling av narkotika følsomhet i leveren kreftceller. Fra den kolonidannelse analysen, cisplatin (DDP) ved 5 uM eller 10 uM bare svakt redusert cellelevedyktighet, mens en signifikant synergistisk effekt på kolonidannelse i Huh7 og Hep3B-celler ble observert når DDP ble kombinert med en lav konsentrasjon av PP (25 ug /ml) (fig. 4A), noe som tyder på at PP kan være en sensibilisator for den kjemoterapeutisk middel. Transfeksjon av AKT plasmid (Fig. 4B) og tillegg av rhVEGF (0,6 ng /ml) (fig. 4C) resulterte i en avskaffet allergi, ytterligere støtte den viktige rollen som AKT sti og VEGF spilt i reguleringen av leveren kreftceller ved PP .
A. Huh7 og Hep3B celle ble behandlet med DDP (opp til 10 pM), PP (25 ug /ml), eller kombinasjonen, og deretter kolonidannelsesbestemmelsen utføres. B. Huh7-celler ble transfektert med AKT-overuttrykkende vektor eller vektorkontroll, deretter behandlet med lav dose av PP (25 ug /ml), DPP (5 uM), eller en kombinasjon i 72 timer, og cellenes levedyktighet målt ved MTT-analyse . C. MTT-analysen ble utført for å evaluere proliferasjon ved eksponering for lav dose av PP (25 ug /ml), DDP (5 uM) alene eller i kombinasjon, i fravær eller nærvær av rhVEGF i 72 timer i Huh7-celler. Tilsetning av rhVEGF (0,6 ng /ml) førte til en avskaffet sensibilisering. Data er gitt som prosent av ubehandlede kontrolldyr som ble satt til 100%, med en gjennomsnittlig ± SD av minst tre uavhengige eksperimenter. Betydelige forskjeller mellom PP-behandlede og ubehandlede celler ble statistisk analysert ved ANOVA (Tukey multiple sammenligningstest, *,
P
0,01; **,
P
0,001).
PP reduserer invasiv potensialet av leverkreftceller
ved hjelp av kammeret invasjonen analysen, ble det funnet at PP på en lav dose (50 mikrogram /ml) som hadde ingen signifikant effekt på celle spredning på 24 timers tidspunkt markert redusert invasivitet av Huh7 og Hep3B celler (fig. 5A). Interessant nok ble den inhiberende effekt av PP på invasjonen av Huh7 dempes ved overekspresjon av konstitutivt aktivert AKT (fig. 5B) og tilsetning av rhVEGF (fig. 5C), noe som ytterligere demonstrerer involvering av VEGF /PI3K /AKT kaskade i reguleringen av leverkreftceller hos PP. I tillegg er det en doseavhengig redusert ekspresjonsnivåer av N-cadherin og vimentin, de viktige maskin for cellemigrasjon og invasjon, ble observert i Western blot-analyse er vist i fig. 2A, støtter den observerte hemmende effekt av PP på invasivitet av leverkreftceller.
A. Boyden kammer analyse ble anvendt for å bestemme invasivitet av Huh7 og Hep3B-celler etter behandling med kontroll eller PP (50 ug /ml) PP i 24 timer. PP undertrykte betydelig leverkreft celle invasjon. Høyre panel viser kvantifiseringen ved å senke kamrene i 1% SDS og måle absorbansen av oppløsningen ved 570 nm. Gjennomsnittet av tredoble analyser for hvert eksperiment tilstand ble beregnet, og verdiene normalisert til de ubehandlede celler. B. Huh7-celler transfektert med AKT-overuttrykkende vektor, eller vektoren kontroll ble behandlet med PP, og cellen invasivitet ble testet. Høyre panel viser kvantifisering. C. Huh7-celler ble behandlet med PP i fravær eller nærvær av 0,6 ng /ml rhVEGF, og den invasive potensial bestemmes. Høyre panel viser kvantifisering. Data er uttrykt som gjennomsnitt ± SD. Betydelige forskjeller mellom PP-behandlede og ubehandlede celler ble statistisk analysert ved ANOVA (Tukey multiple sammenligningstest, *,
P
0,01; **,
P
0,001).
PP undertrykker menneskelige leverkreft xenograft vekst i hårløse mus
med tanke på oven
in vitro
resultater som viser at PP redusert spredning av leveren kreftceller, vil det betydelig være avgjørende for å vurdere om PP kunne hemme tumordannelse i lever kreftceller
in vivo
. For det første ble hårløse mus med etablert s.c tumor xenograft fra Huh7 celler næringsdrivende og behandlet med enten oral administrasjon eller intraperitoneal (i.p.) injeksjon av PP. Både muntlig fôring og ip injeksjon av PP signifikant (p 0,001) svekket den tumorvekst (Fig 6A.) Selv om effekten av oral administrasjon (hemming ratio ~82%) var mindre uttalt sammenligne med ip injeksjon (hemming ratio ~99% ).
A. Vekstkurver og representative fotografier av nakne mus behandlet med i.p. (venstre panel) eller oral administrasjon (høyre panel) av PP med bilen kontroll (vann). Punkt representerer den gjennomsnittlige tumorstørrelsen med ligningen V = (lengde x bredde
2) /2. B. Svulstene høstes fra vann-behandlet eller PP-behandlede mus ble fikset, innebygd, seksjonert, og brukes på Ki-67 immunhistokjemisk farging og kvantifisering. Antallet positivt fargede kjerner i minimum seks tilfeldig utvalgte felt fra representative tumorsnitt dividert med det totale antall celler er presentert i panelet til høyre. C. tumorvev ble høstet for western blot. Data er uttrykt som gjennomsnitt ± SD. Betydelige forskjeller mellom PP-behandlede og ubehandlede celler ble statistisk analysert ved ANOVA (Tukey multiple sammenligningstest, *,
P
0,01; **,
P
0,001).
Tumor xenograftes høstet fra de fire grupper av mus ble utsatt for immunhistokjemi og western blot analyse. En signifikant lavere prosentdel av Ki-67-positive celler ble funnet i PP-behandlede gruppen sammenlignet med (fig. 6B) kontrollgruppe antydet at den hemmende effekten av PP kan skyldes redusert celleproliferasjon. Vekslingen av protein uttrykk i PP-behandlede xenograft dyr, inkludert en nedregulert uttrykk for p-AKT, P-GSK3p, BCL-XL, og en oppregulert uttrykk for spaltet caspase-3 i disse
in vivo
eksperimenter (fig. 6C) var i samsvar med de
in vitro
studier (fig. 2A).
Videre ble ingen åpenbare bivirkninger eller endringer observert ved å sammenligne histologiske trekk ved indre organer inkludert lever, lunge og nyre (fig. 7A), og kroppsvekt av dyrene (fig. 7B) i behandlings- og kontrollgrupper, noe som tyder på sikkerhet og klinisk innblanding av PP som et anticancermiddel.
A. Hematoxylin og eosin (H & Co. E) farging av lunge, lever, nyre fra de fire angitte grupper av mus. B. Kroppsvekt (gram) av mus behandlet med PP og kontroll.
Diskusjoner
I denne studien viste vi at PP, et varmt vann ekstrakt som inneholder et polysakkarid-proteinkompleks isolert fra
Pleurotus pulmonarius
hemmet utvikling og progresjon av leverkreftceller
in vitro Hotell og
in vivo
. Slike kreft effekter er ved inhibering av VEGF-mediert autokrin regulering av PI3K /AKT pathway. Betydningen av disse funnene er omtalt nedenfor.
Det første vi vist at behandling av PP redusert tumorigenitet av leverkreftceller i xenograft naken mus modell uten noen åpenbar bivirkning. Til tross for avansement i kjemoterapeutika de siste årene, er kjemoterapi fortsatt forbundet med alvorlige bivirkninger, slik som nefrotoksisitet, kvalme, hårtap, hudirritasjon, anemi, infertilitet [32], [33]. Derfor naturlig forekommende kreft forbindelser til stede i menneskelige dietter har viktig implikasjon av kjemoterapi og chemoprevention, spesielt for de med lav toksisitet og høy potens som resveratrol [34] og te polyfenoler [35]. Mer interessant,
Pleurotus pulmonarius
frukt kroppen ekstrakter har blitt rapportert å forsinke utviklingen av kjemisk indusert leverkreft i CBA mus [36]. I denne studien fant vi at både i.p. injeksjon og oral administrasjon av PP bemerkelsesverdig hemmet tumorvekst. Den forholdsvis mindre uttalt tumor-inhibering observert ved oral administrering av PP kan skyldes farmakokinetiske begrensninger og intestinal nedbrytning av forbindelsene [37]. Ingen signifikante forskjeller ble funnet ved å sammenlikne histologi av lunge, lever, nyre og kroppsvekt i PP-behandlede og kontrollmus, noe som tyder på at det var ingen observerbar helseskader på mus behandlet med PP. Den bemerkelsesverdige anticancer virkning og lav toksisitet til dyr gir støtte til gjennomførbarheten av PP for human leverkreft behandling.
For det andre, de foreliggende resultatene indikerte at PP hemmet formeringshastigheten av leverkreftceller, og denne effekten kan bli gjennom G2 cellesyklus arrest. Interessant, i tillegg til G2 fasen, de samtidige ansamlinger i S-fasen ble observert, de mulige molekylære mekanismene berettige ytterligere undersøkelse. I tillegg viser våre data viste at PP betydelig økt medikamentsensitivitet av leverkreftceller til cisplatin (fig. 4). Til tross for den siste utvikling i utviklingen av kjemoterapi i de siste tiårene, de fleste pasientene til slutt tilbakefall etter behandling, noe som tyder på at svulster kjøpt mekanismer for legemiddelresistens, som avgjørende bidro til den høye dødeligheten av leverkreft [38]. For å overvinne chemoresistance har chemosensitization som er basert på kombinasjonen av et annet stoff ved å regulere en eller flere av resistensmekanismer blitt tatt som en attraktiv strategi, særlig involvering av naturlige eksisterende forbindelser [39]. Interessant er en stor mengde bevis som kommer til å indikere at flere signalveier er kritisk involvert i mediering av ervervet resistens overfor kjemoterapeutiske medikamenter i human kreft, inkludert PI3K /AKT, MEK /ERK, JNK og AMPK trasé [40], [41]. Inhiberingen av PI3K /AKT-reaksjonsveien med farmakologisk metode kan føre til gjenopprettelse av medikamentsensitivitet [42], [43]. I denne forbindelse, inaktivering av PI3K /AKT av PP (fig. 2 og 3) antydet at eksponering for PP kan øke resistens av leverkreftceller. Videre er det faktum at PP-indusert nedregulering av Bcl-xL og Surviven (fig. 2A), som begge er viktige produsenter av multimedikamentresistens, videre viste det lovende rolle PP som chemosensitizer.
et annet punktet bør tas opp er at PP-behandling resulterte i en redusert invasivitet av leverkreftceller (fig. 5A), som ble ytterligere støttet av den reduserte protein uttrykk for N-cadherin og vimentin i PP-behandlede celler (fig. 2A ). Det hadde blitt rapportert at N-cadherin er avgjørende for kreft-fartøy interaksjoner, bloduttredelser og metastatisk spredning [44], [45] og vimentin er mye brukt som en markør regnskap for epitelial til mesenchymale overgang (EMT) [46], [ ,,,0],47]. EMT er et trans-differensiering program som er nødvendig for vev morfogenese under embryonal utvikling. Men det kan ha negativ forårsake organ fibrose og fremme carcinoma progresjon gjennom en rekke mekanismer, anskaffe invasive og metastatiske egenskaper [48] – [50]. Etterforskningen av EMT inhibitor har åpnet ny dør for å kontrollere metastaser som avgjørende bidrar til den høye dødeligheten av leverkreft [51]. Derfor er de foreliggende funn i de inhiberende virkninger av PP på invasiv potensialet av leverkreftceller ha klinisk innblanding i behandling av leverkreft.
I tillegg til den funksjonelle undersøkelse, er avgjørende for forståelsen av PP klarlegging av mekanismene som potensiell kreft agent. Siden konstitutiv aktivering av PI3K /AKT signalkaskade er hyppig observert i humane kreft fenotyper og avgjørende beslektet med kreftcelle spredning, overlevelse, invasjon og angiogenese, har hemming av PI3K /AKT veien bli en attraktiv tilnærming for leverkreft behandling [52] , [53]. AKT-inhibitorer har blitt rapportert å undertrykke tumorvekst i leveren, noe som antyder den rasjonelle for målretting av PI3K /AKT-reaksjonsveien i denne sykdommen. Imidlertid er ansettelse av AKT hemmer assosiert med uventede bivirkninger [54].
Cordyceps
, en medisinsk sopp, ble rapportert å indusere cellesyklus og apoptose gjennom inaktivering av PI3K /AKT sti i brystkreft [55]. Også oral administrering av en polyfenoliske fraksjon isolert fra grønn te hemmer betydelig prostatakreft utvikling og metastasering gjennom PI3K /AKT veien i transgen adenokarsinom i mus modell [56]. Interessant, vår Resultatet viste at PP ned-regulert ekspresjon av p-AKT, den aktive formen av PI3K /AKT, på en doseavhengig måte, i samsvar med resultatet av funksjonelle studier. I tillegg er resultatene av parallelle eksperimenter ved transfeksjon av plasmid AKT gjennomgående illustrert en opphevet inhiberende virkning av PP, noe som ytterligere bekrefter involvering av PI3K /Akt signalkaskade (Fig. 2B og 2C) sikret deregulering av PI3K /AKT sti bidratt vesentlig til utviklingen av leverkreft [57]. Personlig tilnærminger basert på en videreutvikling av den molekylære klassifiseringen av HCC, har blitt tatt som potensielle strategier i den kliniske behandlingen av HCC [58]. I mellomtiden, identifisering av reagenser som påvirker signalveier som bidrar til HCC kan føre til utvikling av personlig terapier for pasientene, og derved maksimere effektiviteten og kostnaden nytte [59]. Denne studien gir en roman potensiell terapeutisk alternativ for de pasientene hadde konstituerende PI3K /AKT-aktivering. På den annen side, selv om ingen åpenbare vekslinger ble observert i ERK-reaksjonsveien ved eksponering for PP, PP effekten av den andre signalveier garanterer videre undersøkelser.
Interessant nok ble det funnet at VEGF ble nedregulert ved begge protein uttrykk og sekresjon nivåer ved PP behandling. I tillegg, stimulering av cellene med rhVEGF i kulturmediet dempes den hemmende effekten av PP på AKT spredningsveier og cancer fenotyper (fig. 3). Carcinogenesis er en flertrinns prosess mediert av mange vekstfaktorer inkludert placental vekstfaktor (PIGF), blodplateavledet vekstfaktor (PDGF), og vaskulær endotel vekstfaktor (VEGF) [60]. I svulsten mikromiljøet, de ulike vekstfaktorer kontrollerer ikke bare kreftcellene, men også den stromale i autokrint og parakrint måte [61], [62]. VEGF er en av de viktigste faktorene ansvarlig for angiogenese som styrer dannelsen av nye blodkar fra eksisterende blodkar, og spiller en viktig rolle i tumorvekst, invasjon og metastasering [63], [64]. Det er studier vist at ekstrakt av
Phellinus linteus
kunne gi en betydelig undertrykke angiogenese gjennom nedregulering av VEGF-sekresjon ved å målrette AKT i brystkreft eller gjennom Wnt /β-catenin signalveien i tykktarmskreft [65], [ ,,,0],66]. Anti-angiogen terapi basert på inhibering av VEGF /VEGF reseptoren antas å være kraftig klinisk strategi i behandlingen av cancer, spesielt for leverkreft, som er en meget vaskulær tumor [67], [68] sikret inhiberende virkning av PP på VEGF antyder den anti-angiogene aktivitet av PP og dens potensielle innblanding i anti-angiogen terapi. I denne studien nye funn relatert til hemming av VEGF /PI3K /AKT kaskade i lever kreftceller ved PP behandling gi innsikt i de molekylære mekanismer for å støtte sitt potensial klinisk anvendelse.
I konklusjonen, PP, en
Pleurotus
sopp polysakkarid-proteinkompleks, har både
in vitro Hotell og
in vivo
kreft aktiviteter mot leverkreftceller gjennom hemming av sekretorisk VEGF-mediert autokrint regulering av PI3K /AKT signalering. Videre studier på kreft effekten av
Pleurotus
sopp polysakkarid-protein kompleks på leveren kreft stamceller kreft vil bli gjennomført for å evaluere potensialet sitt program i kreft behandling og forebygging.
Materialer og metoder
Utarbeidelse og karakterisering av sopp varmt vann ekstrakt
mushroom (
Pleurotus pulmonarius
) ble kjøpt fra det lokale supermarkedet og arten ble positivt identifisert basert på morfologi. Tørkede pulver ble fremstilt fra maling av de frysetørkede sopp fruktlegemer i partikkelstørrelse mindre enn 0,5 mm, og deretter underkastet en varmtvannsekstraksjon ved 95-100 ° C i 3 timer med en prøve-til-oppløsningsmiddel-forhold på 01:25 ( w /v). Alle operasjoner ble utført under natrium pentobarbital anestesi, og alle anstrengelser ble gjort for å minimere lidelse.
