Abstract
Cytologi basert screening for invasiv livmorhalskreft (ICC) mangler sensitivitet og spesifisitet til å diskriminere mellom livmorhalsen (CIN) trolig vil vedvare eller fremdrift fra saker sannsynlig å løse. Genom-wide tilnærminger har blitt brukt til å identifisere DNA-metylering merkene forbundet med CIN utholdenhet eller progresjon. Men assosiasjoner mellom DNA-metylering merker og CIN eller ICC forbli svak og inkonsekvent. Mellom 2008-2009 gjennomførte vi en sykehusbasert, studere case-control blant 213 Tanzania kvinner med CIN 1/2/3 eller ICC. Vi samlet inn spørreskjemadata, biopsier, perifert blod, cervical skraper, Human papillomavirus (HPV) og HIV-1-infeksjon status. Vi vurderte
PEG3
metylering status ved bisulfit pyrosekvensering. Multinomisk logistisk regresjon ble brukt for å estimere odds ratio (OR) og konfidensintervall (KI 95%) for assosiasjoner mellom
PEG3
metylering status og CIN eller ICC. Etter justering for alder, graviditet, bruk av hormonell prevensjon og HPV-infeksjon, en 5% økning i
PEG3
DNA metylering var assosiert med økt risiko for ICC (OR = 1,6; 95% KI 1,2-2,1). HPV-infeksjon er assosiert med en høyere risiko for CIN1-3 (OR = 15,7; 95% CI 5,7 til 48,6) og ICC (OR = 29,5, 95% KI 6,3 til 38,4). Infeksjon med høy risiko HPV var korrelert med gjennomsnittlig
PEG3
ulikt denaturert regioner (DMRs) metylering (r = 0,34 p 0,0001), mens korrelasjonen med lav risiko HPV-infeksjon var svakere (r = 0,16 p = 0,047) . Selv små sample størrelse grenser slutning støtter disse dataene at
PEG3
metylering status har potensial som en molekylær mål for inkludering i CIN screening for å bedre prediksjon av progresjon.
Impact uttalelse
Vi presenterer den første bevis for at avvikende metylering av
PEG3
DMR er en viktig co-faktor i utviklingen av invasiv livmorhalskreft (ICC), særlig blant kvinner smittet med høy risiko HPV. Våre resultater viser at en fem prosent økning i DNA-metylering av
PEG3
er forbundet med en 1,6 ganger økning ICC risiko. Tyder
PEG3
metylering status kan være nyttig som en molekylær markør for CIN screening for å bedre prediksjon av tilfellene sannsynlig å fremgang
Citation. Nye MD, Hoyo C, Huang Z, Vidal AC, Wang F, Overcash F, et al. (2013) Sammenhenger mellom metylering av
faderlig Uttrykt Gene 3 plakater (
PEG3
), cervikal intraepitelial neoplasi og invasiv livmorhalskreft. PLoS ONE 8 (2): e56325. doi: 10,1371 /journal.pone.0056325
Redaktør: Lorenzo Chiariotti, Università di Napoli Federico II, Italia
mottatt: 05.09.2012; Godkjent: 08.01.2013; Publisert: 13. februar 2013
Copyright: © 2013 Nye et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet med tilskudd K01104517, Duke CFAR P30 AI 064518, R01CA142983, R01CA142983S1 og R25CA057726. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesse eksisterer
Innledning
Om lag en halv million kvinner over hele verden er diagnostisert med livmorhalskreft årlig, og litt over halvparten av disse kvinnene dør av sykdommen; 80% er diagnostisert i ressursfattige innstillinger [1]. Cytologi basert screening og aggressiv behandling av forstadier til kreft er de mest brukte strategier for å forebygge invasiv livmorhalskreft (ICC) over hele verden. Humant papillomavirus (HPV), den eneste kjente etiologiske enhet for ICC, er blitt brukt for ytterligere å stratifisere CIN tilfeller fra kvinner med normal cytologi, med høy sensitivitet [2], men lav spesifisitet. Totalt sett, ca 4-10% av kvinner med normal cytologi er HPV DNA positive, og dermed sensitivitet og spesifisitet for HPV DNA-testing er fortsatt suboptimal, noe som resulterer i en ikke-ubetydelig antall kvinner med falske positive resultater, som krever oppfølging til kostpris både helsevesenet og pasienten. Suboptimal sensitivitet og spesifisitet også har vist seg å redusere tilslutning til anbefalte oppfølgingsbesøk [3]. Bruken av kofaktorer tidligere forbundet med CIN eller ICC som alder, paritet, sigarettrøyking, Chlamydia trachomatis infeksjon, og langsiktig bruk av hormonell prevensjon har ikke gitt ytterligere innsikt for diskriminerende blant CIN1 tilfeller trolig vil vedvare eller fremgang fra dem man regress . Dermed identifisere spesifikke molekylære funksjoner som kan forbedre prediksjon av som CIN tilfeller er sannsynlig å utvikle seg til ICC er fortsatt et prioritert.
epigenetiske mekanismer for genregulering, inkludert DNA metylering, har en viktig rolle i koordineringen av genuttrykk endringer i svar på virusinfeksjon [4]. Epigenetiske endringene er også foreslått som en pådriver i kreftfremkallende prosess som kan være involvert i banen av HPV-infeksjoner som utvikler seg fra CIN til ICC [5] [6], [7]. Imidlertid er identiteten til en slik spesifikk epigenetisk mål (e) fortsatt ukjent.
PEG3
er en faderlig uttrykt trykt gen på kromosom 19q13.43 som koder for et protein med svulst undertrykkende funksjon som spiller en rolle i å tilrettelegge p53 /c-
myc
formidlet apoptose.
PEG3
reguleres av allel-spesifikk DNA metylering der bare den maternelle allelet er normalt denaturert. Hypermethylation på
PEG3
regulatoriske forskjellig metylert region (DMR) fører til en nedgang i
PEG3
transkripsjon, som igjen antas å hemme pro-apoptotisk funksjon av dette genet [8], [9]. Aberrant metylering ved denne DMR har vært forbundet med lavere nivåer av
PEG3
ekspresjon av denne tumor suppressor som er blitt observert i andre gynekologiske kreftformer, inkludert for eksempel ovarier og livmorkreft [10] [11] [12]. I tillegg
PEG3
DMR hypermethylation og transkripsjons- Slå har også vist seg å forekomme i gliomas [13] [14]. Disse resultatene sammen antyder at PEG3 sink finger-protein kan fungere som et tumorsuppressorgen i kreft, og kan være særlig relevant for kreft som påvirker den kvinnelige reproduksjonskanalen. Vi søkte derfor å finne ut om og hvordan metylering endringer på forskrifts
PEG3
DMR er assosiert med HPV-infeksjon, CIN og ICC.
Metoder
deltagerne
Mellom november 2008 og mars 2009 ble kvalifisert deltagerne rekruttert fra Reproductive Health Clinic (RHC) på KCMC, et livmorhalskreft forebygging klinikk finansiert av Verdens helseorganisasjon. Metoder for deltaker identifikasjon og registrering har tidligere blitt beskrevet [15]. Kort, inklusjonskriteriene var kvinner i alderen 18 år eller eldre med ingen tidligere historie med en unormal Pap test. Noen av deltakerne var pasienter med mistenkelige ICC lesjoner nevnt KCMC for en åpen og colposcopic rettet biopsi. Av de 250 kvinnene som deltok, to nektet å delta som resulterer i en svarprosent 99%. Av de resterende 248 var det 14 der vi var i stand til å bestemme kreftdiagnoser og 21 uten HPV resultater. Den endelige studiepopulasjonen utgjorde 213 kvinner med spørreskjema, CIN /ICC, HIV-1-status, og HPV genotype data. Dermed tilfellene var kvinner med noen grad av CIN1 /2/3 eller ICC, og kontroller ble kvinner uten CIN eller ICC som vurderes under en cytologi basert screening besøk.
Etikk erklæringen
Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra hver studie deltaker før innmelding. Forskningsetiske Boards på Kilimanjaro Christian Medical Centre (KCMC), University North Carolina i Chapel Hill og Duke University godkjent denne studien.
Datainnsamling
Spørre.
En trenet sykepleier-intervjueren innhentet informert samtykke og administrert et standardisert 40-minutters spørreskjema in-person. Sosiodemografiske kjennetegn innsamlede inkludert alder, martial status, type ekteskap (polygami vs. monogami), stamme, utdanningsnivå, røyking, alkoholforbruk, reproduktiv historie (f.eks menarche, paritet og graviditet), seksuelle historie (f.eks levetid antall seksualpartnere, alder ved første samleie), og medisiner og supplement bruk.
prøver.
To cervical skraper ble innhentet fra hver deltaker. En ble utarbeidet på et objektglass for cytologisk evaluering for CIN og ICC diagnose, data også brukes som resultatet av denne studien. Den andre prøven ble samlet ved hjelp av en cytobrush og skylles inn Preserv-Cyt ™ media (Hologic, Inc Malborough, MA). En tredjedel av prøven var reservert for HPV-analyse og lagret ved 4 ° C, og de gjenværende to tredjedeler ble sentrifugert for å pelletere cellene, som ble lagret i alikvoter ved -80 ° C. DNA ble ekstrahert fra disse celler, ble senere anvendt for DNA-metylering analyse. Biopsiprøver ble samlet inn bare når det er klinisk indisert. Rutinemessig cervixscreening ved visuell inspeksjon med eddiksyre (VIA) ble utført. Hvis det var positive funn av VIA eller gjennom direkte undersøkelse, ble pasienten triaged og behandles deretter. Pasienter med negative funn ble gitt følge opp avtaler innen to uker for å gi resultater
Konstatering av studieutbytte:.. CIN og karsinom
Patologen på KCMC (BS) behandlet og lese Papanicolaou flekker og biopsiprøver ved hjelp av standard konvensjoner ifølge ASCCP retningslinjer som hensiktsmessig (https://www.asccp.org/). En gynekolog (BV) også anmeldt medisinsk diagrammer månedlig for HIV-1 test og CYTO-patologiske resultater å klassifisere tilfeller bruker Bethesda klassifiseringssystemet. Resultatene ble deretter kodet basert på patologi og medisinsk rekord funn. De ble kodet som 1) ikke noe bevis for cytologisk unormalt, 2) mild dysplasi inkludert LSIL og CIN1, 3) moderat dysplasi inkludert HSIL og CIN2-3, eller 4) kreft som først og fremst var plateepitelkarsinom med unntak av tre adeno-plateepitel karsinomer i livmorhalsen. Ingen av prøvene ble klassifisert som atypiske celler av usikker betydning (ASCUS). Resultatene var tilgjengelig via pasientens klinikk poster, og patolog skrevet dem inn i databasen. Posten ble deretter samlet og sikkert deles med Duke University.
HPV genotyping.
ThinPrep® prøver og homogenisbiopsiprøver ble sendt til University of Hawaii Cancer Center. DNA ble ekstrahert og PCR amplifisert ved målretting av et 450 bp region i HPV-L1-genet ved hjelp av PGMY09 /PGMY11 primere [16]. Det humane β-globin-genet ble anvendt som en intern kontroll for prøvenøyaktighet. Vi var i stand til å oppnå viral DNA-analyse for alle pasientprøver. HPV-positive prøvene ble genotypet ved hjelp av HPV Linear Array® (Roche Molecular Systems Inc., Branchburg, NJ, USA).
Konstatering av HIV-1-infeksjon status.
Plasma og buffycoat ble isolert via sentrifugering av perifere blod-prøver samlet i EDTA-inneholdende vakuumrør fra pasientene. To raske HIV-1 tester ble brukt til å analysere plasmaprøver for HIV-1-status (Capillus HIV-1 /HIV-2, Trinity Biotech PLC, Bray, Land Wicklow, Irland og Bestem HIV-1/2, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL). Standarden klinisk praksis av Western blot ble brukt for prøver som var reaktive (Genetic Systems HIV-1 Western blot kit, Bio-Rad, Hercules, CA)..
PEG3 metylering analyse
Genomisk DNA ble fremstilt fra celler isolert fra cervical skraper eller fra biopsiprøver ved hjelp PureGene protokoll reagenser (Qiagen, Valencia, CA) og behandlet med natriumbisulfitt bruker Zymo Easy-96 DNA metylering kit (Zymo Research, Irvine, CA). Bisulfite behandling modifiserer DNA ved å konvertere unmethylated cytosines til uraciler, og etterlater denaturert cytosines uendret. Pyrosekvensering ble utført ved hjelp av en Qiagen Pyromark Q96 MD Pyrosequencer.
DMR analysert ligger innenfor
PEG3
promoter regionen på kromosom 19q13.43. Den pyrosekvensering analysen for
PEG3
ble anvendt som tidligere beskrevet [12] med unntak av at en 63 ° C varmebehandlingstemperaturen ble anvendt for PCR-reaksjonen. Genomisk koordinater for regionen forsterket av PCR er chr19: 57,351,945-57,352,096 (UCSC Genome Browser, GRCh37 /hg19). Ytelsen til analysen ble vurdert ved hjelp av definerte blandinger av unmethylated og denaturert bisulfite endret genomisk DNA (dvs. 0%, 25%, 50%, 75% 100% denaturert; Epitect Bisulfite Controls, Qiagen).
Statistisk Analyser
de gjennomsnittlige DNA metylering fraksjoner ved de enkelte CGS ble analysert og sammenlignet blant kontrollene, kvinner uten CIN1 /2/3 eller ICC (n = 147) og tre case-grupper (CIN1 [n = 21], CIN2 /3 [n = 17], og ICC [n = 48]) ved hjelp av F-tester. Hovedkomponentene analyser (PCA) ble anvendt for å bestemme om en enkelt middelverdi representerer metylering fraksjon ved CG dinukleotider innenfor DMR-regionen. Metylering av CGS var tilstrekkelig korrelert således tillater en enkel måte til å bli brukt. F-tester ble brukt for å avgjøre om DNA metylering ved enkelte CGS innenfor
PEG3
DMR skilte seg vesentlig etter infeksjon med høy risiko (HR) versus lav risiko (LR) HPV og andre HPV-genotypene. Klassifisering av høy risiko og lav risiko genotyper var basert på FDA-godkjente HPV molekylære tester (CDC). HR HPV-genotypene inkludert HPV 16,18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59,59 og LR HPV inkludert HPV 6, 11, 26, 66, 68, 70, 73 og, 82 som tidligere beskrevet [15]. Kvinner som testet positivt for minst én HPV genotype basert på onkogen risiko ble kategorisert som HR-HPV, LR-HPV eller andre HPV.
For å beregne odds ratio (OR) og tilsvarende 95% konfidensintervall (CIS) for sammenhengen mellom CIN /ICC og endringer i DMR metylering, vi brukte multi-polynom logis regresjonsmodeller. Alle modeller inkludert metylering ved hjelp av trinn på 5% med justeringer gjort for HPV-smitte, graviditet historie, HIV-1-status, og bruk av hormonell antikonsepsjon. Avvikende metylering ble definert som 25
th eller 75
th kvartiler, siden begge hypermethylation og hypometylering av dette locus kan føre til deregulering av
PEG3
uttrykk og føre til tap av imprinting [ ,,,0],11] [12] [17]. Vi brukte chi-kvadrat analyse for å teste for potensielle confounders med CIN og kreft status. Alle statistiske analyser ble utført i SAS 9.1 (SAS Institute, Cary, NC).
Resultater
studiepopulasjonen Kjennetegn
Case-grupper og kontroller skilte seg vesentlig etter alder, HPV-infeksjon og graviditet (tabell 1). Gjennomsnittsalderen blant kontrollene var 40,3 år (SD = 9,9). Blant case grupper gjennomsnittsalderen økt med alvorlighetsgraden av lesjon (35,7 år, SD = 12.2 for CIN1, 44,7 år, SD = 9,8 for CIN2 /3 og 55,2 år, SD = 12.3 for ICC, p 0,001). Prevalensen av HPV-infeksjon økte også med økende alvorlighetsgrad av lesjon, som 67% av CIN1, 88% CIN2 /3 og 89% av ICC hadde påvisbare HPV-infeksjon (p-verdi 0,0001). Graviditet var høy, med 94% i kontrollgruppen og 86% av kvinner med CIN1 rapporterer at de noen gang hadde vært gravid i forhold til 100% av kvinnene med CIN2 /3 eller ICC. Langsiktig OC bruk var lik i CIN1 og kontrollerer 76% og 68%, henholdsvis, men var betydelig lavere blant høyere grader av CIN (59%) og ICC (40%).
PEG3
pyrosekvensering analyse validering
Vi først validert resultatene av pyrosekvensering analyse i quintuplicate bruker fullt denaturert og unmethylated DNA i definerte proporsjoner. Ved hver økning i mengden av denaturert DNA inndata, var det også en økning i mengden av metyleringen måles (Pearson rho = 0. 953; p = 0,004). Den gjennomsnittlige standardavvik mellom disse replikere tiltakene var 1,59% (range, 0,34% til 3,47%). Disse resultatene indikerer at denne analysen har evnen til på reproduserbar måte å oppdage forskjeller i metylering verdier (figur 1).
definerte blandinger (x-akse) denaturert og unmethylated DNA ble fremstilt og analysert i quintuplicate ved pyrosekvensering (y- akser). Resultatene som er vist representerer gjennomsnittet; feilfelt indikerer standardavvik. Pearsons rho er 0,953 med en p-verdi på 0,004.
Association mellom HPV-infeksjon status og DNA metylering på
PEG3
DMRs
Vi undersøkte metylering fraksjoner av 10 CpG områder innenfor
PEG3
DMR i forhold til HPV genotype. Som vist i tabell 2, blant kvinner infisert med minst en HR-HPV genotype, fant vi en moderat sammenheng mellom metylering av alle 10 CpG områder innenfor
PEG3
DMR og HPV-infeksjon (r = 0,34, p- verdi 0,0001; range = 0,32 til 0,41). LR-HPV-genotypene hadde en sizably svakere sammenheng med
PEG3
metylering (r = 0,061, p-verdi = 0,552). Infeksjon med andre HPV-genotypene ble ikke korrelert med metylering fraksjoner innenfor
PEG3
DMR (gjennomsnittlig korrelasjonskoeffisient = 0,0163 p = 0,876).
PEG3
DMR metylering , CIN og ICC
Tabell 3 oppsummerer odds ratio (ORS) og 95% KI for sammenhengen mellom
PEG3
DMR metylering og CIN og ICC status, justert for alder, hormonelle prevensjonsbruk og en hvilken som helst HIV-1-infeksjon. Vi fant liten eller ingen sammenheng mellom gjennomsnittlig
PEG3
metylering status og CIN1 /2/3, (OR = 1,03; 95% CI (0,79 til 1,33), p-verdi = 0,80). Men en økning 5% i metylering nivåer på
PEG3
DMR var assosiert med en nesten dobling i risikoen for ICC (OR = 1,6; 95% CI 1,2-2,1, p-verdi = 0,0003 ). Som ventet ble infeksjon med noen HPV genotype også assosiert med en høyere risiko for CIN1-3 (OR = 15,7 95% KI (5,1 til 48,6)) og ICC (OR = 29,5, 95% KI (6,3 til 38,4)).
Diskusjoner
Våre viktigste funn i denne case-control studie av tanzanianske kvinner er at etter justering for HPV-infeksjon, alder, OC bruk, og HIV-1-status, en 5% økning i DNA metylering på
PEG3
DMR var assosiert med en 1,6 ganger økning i ICC risiko. Vi fant også at
PEG3
DMR hypermethylation var korrelert med HPV-infeksjon; en sammenheng som var sterkere for høy risiko i forhold til lav risiko HPV-infeksjon. Som forventet, ble HPV-infeksjon assosiert med øket risiko for CIN1 /2/3 og ICC. Vi presenterer den første bevis til støtte for hypotesen om at avvikende metylering av
PEG3
DMR er en viktig co-faktor i utviklingen av ICC, spesielt blant kvinner smittet med HR HPV.
data tyder på at økende grad av lesjon fra CIN til ICC korrelerer med HPV-infeksjon og
PEG3
DMR hypermethylation og er konsistent med DNA metylering-mediert undertrykkelse av
PEG3
som finnes i tidligere studier. Hypermethylation av ulike gener (dvs.
MGMT
,
FHIT
,
GSTP1
, og
MHL1
) i ICC case control sudies har blitt rapportert [18] [19] [20]. Tidligere studier har rapportert DNA metylering endringer og HPV status i hode og nakke plateepitelkreft [21]. Disse resultatene støtter teorien om at nærværet av abnorme metylerte gener kan brukes som en forholdsvis følsom og spesifikk screening analyse for å påvise CIN og ICC. Disse tidligere studier ikke undersøke
PEG3
. Så vidt vi vet er dette den første studien gjort med en befolkning som undersøkte sammenhengen mellom
PEG3
DMR status og HPV-infeksjon og hvordan dette spiller en rolle i CIN og ICC. Selv om årsak og virkning ikke kan etableres i denne case-control studie, våre funn tyder på at
PEG3
DMR metylering er en potensiell mekanisme som mottakelighet for progresjon til ICC kan forekomme, og dermed kan være en nyttig markør for å identifisere CIN tilfeller sannsynlig å gå videre.
De mekanismer som
PEG3
DNA metylering øker risikoen for ICC er uklare. Men det er bevis som tyder på at
PEG3
spiller en viktig biologisk rolle i p53 /c-myc mediert apoptose, impliserer
PEG3
som et gen hvis funksjon kan være delvis for å hindre kreftutvikling [8 ] [9]. P53-mediert apoptose veien har to mulige utfall: induksjon av a) vekst arrest eller b) celledød; Peg3 har vist seg å spille en rolle nedstrøms av p53 aktive apoptose via sin interaksjon med Bax. Peg3 samhandler med Bax, noe som resulterer i apoptose [8]. Disse tidligere rapportene, sammen med våre funn støtter hypotesen om at
PEG3
fungerer som en viktig tumor suppressor i kreftutvikling.
Foreningen funnet her er i tråd med funn fra
in vitro
og
in vivo
studier som viser at
PEG3
promotor hypermethylated med påfølgende transcriptional undertrykkelse i eggstokkene og livmorkreft [12] [11]. I livmorhalsen, eggstokkene, og livmorkreft cellelinjer
PEG3
er forstummet tyder på at i løpet av kreftutvikling, kan hypermethylation velges etter for å hindre pro-apoptotisk funksjon av PEG3. Vårt tilfelle kontroll studie viser en sammenheng mellom hypermethylation av
PEG3 Hotell og ICC, men ikke CIN, noe som tyder på at disse metylering endringer skje i løpet av transformasjon i stedet for i forstadier til kreft. Alternativt kan dempningen i risikoen skyldes kombinere lav karakter CIN stor grad består av lesjonene sannsynlig å regress, med høyere grad av CIN tilfeller, de fleste som har potensial til å utvikle og bli ICC. Forbløffende korrelasjonen av HPV-infeksjon, en etiologisk agent for ICC, og
PEG3
hypermethylation er konsistent med en multi-stegs prosess som starter med epigenetiske mekanismer og HPV-infeksjon.
Den største begrensningen av denne studien er det lite utvalg for å undersøke
PEG3
DMR metylering i forhold til grad bestemt CIN, etter at regnskap for effekten av HPV-infeksjon. Det er mulig at vi ikke klarer å finne sammenhenger mellom
PEG3
metylering og CIN skyldtes kombinere CIN (i hvem majoriteten eller kvinner er sannsynlig å regress) og CIN2 og CIN3 (i hvem en mindre andel vedvarer eller fremgang ) [22]. Men vi hadde tilstrekkelig statistisk styrke til å evaluere
PEG3 Hotell og ICC risiko. En annen begrensning er case-kontroll design, noe som begrenser vår evne til å antyde
PEG3
metylering som en viktig faktor i utviklingen. Men identifisere metylering merkene forbundet med case-control forskjeller er et nødvendig skritt slik at for undersøkelse av denne markøren i longitudinelle studier pågår i flere grupper [23].
Til tross for disse begrensningene, fant vi hypermethylation av
PEG3
DMR økte risikoen for ICC, justert for kjente confoundere. Vi har også funnet en sterk sammenheng mellom HPV genotype og DNA metylering på
PEG3
DMR. Cytosine metylering er en stabil endring i menneskelige vevsprøver, og derfor
PEG3
DMR metylering status kan potensielt brukes som en markør for å identifisere CIN sannsynlig å utvikle seg til ICC. Større studier i et mer mangfoldig studiepopulasjonen er nødvendig for å gjenskape disse funnene.
