Abstract
Bakgrunn
Inntil 80% av pasientene dør av prostata kreft har utviklet benmetastaser som er uhelbredelig. Kastrering er vanligvis brukes til å behandle prostatakreft. Selv om sykdommen i utgangspunktet reagerer på androgen blokade strategier, blir det ofte kastrering-resistente (CRPC for Kastrering resistent prostatakreft). De fleste av de murine modeller av blandede lesjoner avledet fra prostata kreft celler er androgen sensitive. Derfor etablerte vi en ny modell av CRPC (androgen reseptor (AR) negativ) som forårsaker blandede lesjoner i bein.
Metoder
PC3 og dens avledede nye celle klone PC3c celler ble direkte injisert inn tibiae av SCID-hannmus. Tumorvekst ble analysert ved hjelp av røntgen og histologi. Direkte effekter av kondisjonert medium fra begge cellelinjer ble testet på osteoklaster, osteoblaster og osteocytter.
Resultater
Vi fant at PC3c celler indusert blandede lesjoner 10 uker etter intratibial injeksjon.
I
vitro
, PC3c kondisjonert medium var i stand til å stimulere tartrate motstandsdyktig syre fosfatase (TRAP) -positive osteoklaster. Osteoprotegerin (OPG) og endotelin-1 (ET1) ble sterkt uttrykt ved PC3c mens dikkopf-en (DKK1) uttrykket ble redusert. Endelig PC3c sterkt uttrykt bein assosiert markører osteopontin (OPN), Runx2, alkalisk fosfatase (ALP), bein sialoprotein (BSP) og produserte mineralisert matrise
i
vitro
i osteogene forhold.
Konklusjoner
Vi har etablert en ny CRPC cellelinje som et nyttig system for modellering menneske metastatisk prostatakreft som presenterer blandet fenotype av benmetastaser som vanligvis observert i prostatakreftpasienter med avansert sykdom. Denne modellen vil bidra til å forstå androgen-uavhengig mekanismene som er involvert i utviklingen av prostatakreft i bein og gir et preklinisk modell for å teste effekten av nye behandlingsmetoder for benmetastaser
Citation. Fradet A, Sorel H, Depalle B, Serre CM, Farlay D, Turtoi A, et al. (2013) En ny Murine modell av osteoblastisk /osteolytic lesjoner fra Menneskelig Androgen resistent prostatakreft. PLoS ONE 8 (9): e75092. doi: 10,1371 /journal.pone.0075092
Redaktør: Vladislav V. Glinskii, University of Missouri-Columbia, USA
mottatt: 6 juni 2013, Godkjent: 08.08.2013; Publisert: 19.09.2013
Copyright: © 2013 Fradet et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av CNRS (Edith Bonnelye), Inserm, Universitetet i Lyon, «Ligue Regionale contre le Cancer» (Isère) (EB) https://www.ligue-cancer.net/og «Association pour la Recherche sur les Tumeurs de la prostata (ARTP) «(Edith Bonnelye) https://www.artp.org/. Anais Fradet støttes av Ligue Nationale contre le Cancer, https://www.ligue-cancer.net/Baptiste Depalle av en bevilgning fra regionen Rhône Alpes «Cible» program og Akeila Bellahcene er senior stipendiat fra det nasjonale fondet for Scientific Research, Belgia. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser. Edith Bonnelye er på listen over Plos One Academic redaktører. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer.
Innledning
Bone er den hyppigste stedet av prostata karsinom metastaser med benmetastaser i opp til 80% av avansert sykdom [1]. Kirurgiske og hormonelle behandlinger har vist gunstige effekter bare for tidlig stadium hormon-responsive sykdom. Faktisk, hvis sykdommen i de fleste tilfeller i utgangspunktet svarer, den utvikler seg ofte og blir androgen uavhengig. På dette stadiet, pasienter med avansert sykdom ofte vise osteoblastisk eller blandede lesjoner i bein [2,3]. Mekanismer som prostatakreft er indusert til å metastasere til ben stole på et komplekst samspill mellom prostatakreftceller og bein mikromiljøet [4]. Vekst av prostata kreft celler endrer benremodelleringen (dannelse og resorpsjon) ved å skille faktorer som vil direkte påvirke osteoblaster (beindannende celler) og osteoklaster (bein resorbering celler). RANKL (Receptor aktivator av NF-kB ligand) stimulerer osteoklaster differensiering og handling mens osteoprotegerin (OPG) fungerer som en lokkedue reseptor for RANK (RANKL reseptor). Derfor balansen mellom RANKL og OPG, som kan begge produsert av prostatakreftceller, er kritisk i å kontrollere osteoclast-aktivitet og osteolyse i beinmetastase [4-6]. På den andre siden, kan pro-osteoblastiske molekyler også fremstilles ved prostatakreftceller. Faktisk, de første kliniske studiene spesifikt mot osteoblasts hos pasienter med metastatisk prostatakreft var basert på endotelin-1 (ET1), en mitogen faktor for osteoblaster som kan fremme vekst av osteoblaster ved metastaser [7,8]. I tillegg er transformerende vekstfaktor β (TGFfi), vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF) rikelig uttrykt ved prostatakreftceller og har en direkte virkning på osteoblastfunksjon [9,10]. Den vingeløse (WNT) sti som er innblandet i osteoblastogenesis er også innblandet i utviklingen av osteoblastisk metastaser i prostata kreft [11]. Oppregulering av Wnt-familien ligand WNT1 i prostatakreftceller og en reduksjon i serum av WNT antagonist dikkopf-en (DKK1) uttrykk har blitt rapportert hos pasienter med avansert metastatisk prostata kreft og er assosiert med osteoblastiske lesjoner [12] . Endelig prostata kreft celler som induserer bein metastase også uttrykke stor mengde bein forbundet faktorer som osteopontin (OPN), vil osteocalcin (OCN) eller bein sialoprotein (BSP) utskilles i beinmassen og som bidrar til å fremme sine osteomimicry egenskaper [13].
de fleste blandede benmetastaser avledet fra prostatakreft musemodeller er androgen sensitiv og for den saks skyld egentlig ikke etterligne den kliniske situasjonen. Vi beskrev karakterisering av en ny cellelinje (nemlig PC3c) som induserer blandede skjelett lesjoner i dyr som er avledet fra den humane androgen uavhengig AR-negative cellelinjen PC3, som er kjent for å indusere rene osteolytiske benmetastaser.
Materials og metoder
Etikk uttalelse
musene som brukes i vår studie ble håndtert i henhold til reglene i Décret N ° 87-848 du 19/10/1987, Paris. Den eksperimentelle protokollen er gjennomgått og godkjent av Rhône-Alpes Regional komité for Ethic av dyreforsøk (Lyon, Frankrike) (Register Number: 0121). Dyreforsøk ble rutinemessig inspisert av behandlende veterinær for å sikre fortsatt samsvar med de foreslåtte protokollene. SCID-mus, 6 uker gamle, ble holdt under sperre forhold i LAF isolerte hetter. Dyr som bærer tumorxenotransplantater ble nøye overvåket for etablerte tegn på stress og ubehag og ble humant avlivet.
Cell kultur
PC3 cellelinjen ble oppnådd fra American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA , USA). De PC3c-celler, en cellelinje subkultur av PC3 ble isolert i vårt laboratorium
in vitro
etter en enkelt cellepopulasjon kultur. Følgelig til spontan avledning av cellene, til slutt fikk vi en subkultur cellelinje kalt PC3c som ble valgt på grunnlag av sin epitelial fenotype (figur S1) [14,15]. De hormonavhengige menneskelige prostata kreft Vcap celler var en generøs gave Pr M Cecchini (Department of Clinical Research, University of Bern, Bern, Sveits) og ble innhentet fra American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA). VCAP ble dyrket i RPMI-medium. PC3 og PC3c celler ble rutinemessig dyrket i F12K næringsblanding og DMEM medium (Life-teknologi, Carlsbad, CA, USA) henholdsvis supplert med 10% (v /v) føtalt bovint serum (FBS, Perbio /Thermo Scientific, Rockford, IL, USA ) og 1% (volum /volum) penicillin /streptomycin (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) ved 37 ° C i en 5% CO2-inkubator. PC3 og PC3c ble også dyrket ved osteogene forhold for tre uker i osteoblast medium supplert med 50 ug /ml askorbinsyre (Sigma-Aldrich, Buchs, Sveits). Ti mM natrium β-glycerofosfat (Sigma-Aldrich, Buchs, Sveits) ble tilsatt i løpet av en uke ved slutten av kulturen. PC3 og PC3c ble kontinuerlig (dag 1 til dag 21) som utsettes for osteogene forhold. For visualisering av mineralisering, ble brønner fiksert og farget med von Kossa og for ALP [16].
Dyrestudier
For intra-ossøs svulst xenograft eksperimenter (Charles River Laboratories, Wilmington, MA , USA), et lite hull ble boret med en 26-gauge steril nål gjennom den høyre tibia med kneet bøyes i bedøvede 6- til 8 uker gamle SCID-mus. Ved hjelp av en ny steril nål montert på en 50-mL sterilt Hamilton sprøyte (Hamilton Co .; Bonaduz, GR, Sveits), et enkelt-cellesuspensjon (6×10
5 i 15 ul PBS) av PC3 eller PC3c celler ble forsiktig injisert i benmargen hulrom. Fra uke 2 etter svulst celle inokulasjon, ble røntgenbildene av bedøvede mus ukentlig tatt med bruk av MIN-R2000 filmer (Kodak, Rochester, NY, USA) i en MX-20 kabinett røntgensystem (Faxitron X-ray Corp, Tucson , AZ, USA). Dyrene ble avlivet etter 6 og 10 uker for mus injisert med PC3 og PC3c celler henholdsvis. Microcomputed tomografi analyser ble utført ved hjelp av en mikro-CT-skanner Skyscan 1174 (Skyscan, Kontich, Belgia). Røntgenrøret ble satt til en spenning på 50 kV og en strøm på 800 uA. En 0,5 mm aluminiums filter ble brukt for å redusere stråleherding gjenstander. Prøvene ble undersøkt i 70% etanol med en voxel størrelse på 20 um. For hver prøve, ble 265 seksjons bilder rekonstruert med NRecon programvare (versjon 1.6.1.8, Skyscan). Tredimensjonal modellering og analyse av BV (Bone Volume) /TV (Total Volume) forhold (prosentandel av benvev) ble oppnådd med CTAn (versjon 1.9, Skyscan) og CTVol (versjon 2.0, Skyscan) programvare. De dissekerte Benene ble deretter bearbeidet for histologisk og histomorphometric analyse.
Subkutane injeksjoner av PC3c celler (10
6 i 100 ul PBS) ble også utført i 6- til 8 uker gamle SCID-mus. Dyrene ble avlivet etter 12 uker og svulster ble fikset og i parafin.
benhistomorfometri og histologi
Tibia fra dyr ble fikset, decalcified med 15% EDTA /0,4% PFA og innebygd i parafin. Fem mikrometer snitt ble farget med Goldner er Trichrome og fortsatte for histomorphometric analyser for å beregne TB (tumorbelastning) /STV (Soft Tissue Volume) forhold (prosentandel av svulstvev).
in situ
påvisning av osteoklaster ble utført på metastatisk bein seksjoner vev ved hjelp av tartrat-resistent sur fosfatase (TRAP) aktivitet kit assay (Sigma-Aldrich, Buchs, Sveits).
Osteoclastogenesis analyse~~POS=TRUNC
Primærbenmargceller ble oppnådd etter tibia og femur benmarg spyling fra 6 uker gamle av1 hannmus. Celler ble deretter dyrket i 7 dager, i differensiering medium: a-MEM medium inneholdende 10% føtalt kalveserum (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA), 20 ng /ml av M-CSF (R 0,05
Resultater
Uttrykk for pro-osteoblastiske faktorer av PC3c celler
Fra menneske androgen resistent prostatakreft cellelinje PC3, vi innhentet etter én celle befolkningen kultur
in vitro
en ny subkultur cellelinje kalt PC3c celler som ble valgt på grunnlag av sin epitelial fenotype (figur S1). Som forventet, og på lignende måte som foreldre PC3-celler, kunne AR ikke bli detektert ved sanntids-PCR i PC3c mens den ble uttrykt i hormonavhengige cellelinje VCap anvendt som en positiv kontroll (figur 1A). På den annen side ble de prostata markørene P504S (alfa methylacyl-CoA-racemase (AMACR)) og prostata sur fosfatase (PAP) uttrykt i begge cellelinjene som bekrefter prostata opprinnelsen av cellene (figur 1B) [21].
Påvisning av real-time PCR av AR mRNA uttrykk i PC3, PC3c og Vcap kreftcellelinjer (A), AMACR, PAP (B) og DKK1, ET-1, FGF9, Noggin, OPN, OPG, Runx2 og TGFp-mRNA-ekspresjon (C og D) i PC3 og PC3c cancercellelinjer. Gener ekspresjon ble bedømt ved sanntids-PCR på triplikate prøver og normalisert mot den av ribosomalt protein-gen L32 * p 0,05; ** P 0001, *** p. 0,0001
Karakterisering av real-time PCR av PC3c celler indikerte at ET1 og OPG, to faktorer som har vært innblandet i patogenesen av osteosclerotic benmetastaser fra prostatakreft blir overuttrykt i forhold til den parentale cellelinjen PC3 (figur 1C-D), mens andre faktorer, slik som fibroblastvekstfaktor 9 (FGF9) og TGFp er likeledes uttrykkes i begge cellelinjer [8,22,23]. På den annen side, ekspresjonen av DKK1 og Noggin, to osteoblast-inhibitorer (henholdsvis Wnts og benmorfogenetisk protein (BMP) inhibitorer), er redusert i forhold til PC3c PC3 (figur 1 C-D) [24,25]. Videre PC3c samme måte PC3 cellene uttrykte faktorer som er kjent for å være innblandet i prostatakreft osteomimicry som OPN og Runx2. Alle sammen, disse resultatene tyder på at PC3c celler potensielt kan indusere osteoblastiske lesjoner sammenlignet med PC3 celler som er kjent for å overveiende stille osteolytiske lesjoner i bein.
PC3c celler induserer blandede osteoblastiske /osteolytiske lesjoner
for å teste tilhører PC3c å indusere benlesjoner, ble intra-tibial injeksjoner utføres i mannlige SCID mus. Ti uker etter tumorcelle inokulasjon, radiografisk analyse viste at dyr som bærer PC3c svulster hadde lesjoner i benvevet som inkluderte osteolytiske og osteoblastiske komponenter (Figur 2i) mens rene osteolytiske lesjoner ble observert i dyrebærende PC3 svulster etter 6 uker (figur 2E). Kapasiteten av PC3 og PC3c å indusere ren osteolytisk og blandet lesjoner, henholdsvis, ble bekreftet ved bruk av 3D-mikro-CT rekonstruksjon (figur 2F-G og JK) (benvolum, BV /TV, tabell 1), histologi (figur 2 H og L ) og histomorphometric analyser av skinneben (skjeletttumorbyrde, TB /STV, tabell 1). Som forventet ingen skjelettlesjoner ble observert etter PBS injeksjon (Sham dyr) (figur 2A-D, tabell 1). Ved immunhistokjemi, bekreftet vi,
in vivo
, at ET-1 og OPG ble sterkt uttrykt i PC3c tumorer (figur S1, B, D) sammenlignet med PC3 (fig S2, A, C).
(A) PC3 og PC3c celler ble podet inn i mannlige SCID-mus; 10 uker etter inokulering, radiografi avslørte rene osteolytiske lesjoner i mus injisert med PC3-celler (n = 6) (E) og blandet lesjoner i mus injisert med PC3c-celler (n = 8) (I) sammenlignet med mus injisert med PBS (n = 10) (A) (se * (lysis) og hvite piler (formasjon)). (B, C F, G-J, K) Tredimensjonal mikro-CT rekonstruksjoner av skinneben og (D, H, L) histologi etter Goldner er Trichrome flekker bekreftet radiografi resultater. T: Tumor; NB:. New Bone
BV /TV (%)
TB /STV (%)
Sham (n = 10) 22,4 +/- 2,90PC3 (n = 6) 3,6 +/- 4,1 *** 72,6 +/- 6,6 *** PC3c (n = 8) 39,5 +/- 3,0 *
$ 36,6 + /- 4,5 ***
$ Tabell 1. Histomorphometric analyse av tibia med metastaser forårsaket av injeksjon av PC3 og PC3c celler
BV /TV: bein volum /totalt volum.. TB /STV: tumorbyrde /bløtvev volum. Sham ble utført som kontroll.
n
er antall ben med benmetastaser. * P 0,05; *** P 0001 sammenlignet med Sham;
$ P 0001 sammenlignet med PC3. CSV Last ned CSV
Bone ombygging stimulering av PC3c celler
Gitt disse dataene, vi neste spurt om PC3c kan endre benet resorbering celler, osteoklastene (OCS) og beindannende celler, osteoblaster (OBS) . Behandling av primær musebenmargceller med RANKL, makrofagkolonistimulerende faktor (M-CSF) og med det kondisjonerte medium av PC3c stimulert mer dannelsen av tartrat-resistent sur fosfatase (TRAP) -positive flerkjernede piller, sammenlignet med det som ble observert med det kondisjonerte mediet av PC3-celler og ubehandlede celler (Ct) (Figur 3A). På den andre siden, behandling av primær mus calvaria celler dyrket i osteogene betingelser med det kondisjonerte medium av PC3c hadde mindre hemmende effekt på OB differensiering enn kondisjonert medium av PC3-celler sammenlignet med ubehandlede celler (CT) (figur 3B). Faktisk ble et høyt antall OBS visualisert ved hjelp av OPN farging
in vivo plakater (Figur 4A a-b). Interessant, PC3 kondisjonert medium stimulert OPG og RANKL uttrykk ved primær ONS mens PC3c kondisjonert medium redusert OPG produksjonen fører til en sterkere økning av RANKL /OPG forholdet etter ONS behandlet med PC3c kondisjonert medium sammenlignet med den PC3 celler (Figur 3C). I samsvar med disse
in vitro
resultater, FELLE farging av tibial deler av metastatiske ben fra dyr som bærer PC3c viste høyt antall TRAP-positive multinukleerte p-piller sammenlignet med det som er observert i PC3 og Sham dyr (Figur S3). Til slutt, semi-kvantitativ PCR utføres på osteocyte cellelinje, MLO-Y4, tillatt oss å vise at sclerostin (SOST) og Dentin matrise surt phosphoprotein 1 (DMP1) uttrykk ble stimulert etter 24 timer med behandling med henholdsvis PC3 og PC3c kondisjonert medium mens OPG og RANKL ekspresjon ble ikke påvirket (figur 3D).
(A) Primær musebenmargceller ble dyrket i nærvær av RANKL og M-CSF og behandlet eller ikke (Ct) med kondisjonert medium oppnådd fra PC3 og PC3c celler. Flere p-piller (hvit pil) ble dannet i kulturer behandlet med PC3c kondisjonert medium i forhold til kulturer behandlet med PC3 kondisjonert medium og Ct (ANOVA, p 0,0001). (B) Primær muse calvaria cellekulturer ble behandlet fra dag 1-21 med kondisjonert medium hentet fra PC3 og PC3c celle. Mineralisert bein knuter var til stede og visualisert ved von Kossa flekker på dag 21 (se mineralet i svart, hvite piler). Mineralisert ben nodul dannelse ble redusert ved primære celler ble behandlet med kondisjonert medium fra hvilken som helst av PC3 /PC3c-celler (sammenlignet med ikke-behandlede (CT) celler); nedgangen var mindre når PC3c celle kondisjonert medium ble benyttet (sammenlignet med PC3) (ANOVA, p 0,001 versus Ct og versus PC3). (C) PC3 kondisjonerte medium stimulert ekspresjon av OPG og RANKL i primær Obs sammenlignet med ikke-behandlede (Ct) mens PC3c kondisjonert medium bare inhiberer ekspresjon av OPG sammenlignet med Ct fører til en høyere RANKL /OPG-forholdet i PC3c forhold. (D) Påvisning av real-time PCR av SOST, DMP1, OPG og RANKL mRNA uttrykk i MLO-Y4 celler behandlet med PC3 og PC3c kondisjonert medium. Resultatene er plottet som det midlere antall OC ± SD og OB knuter ± SD fra tre brønner for kontroller og hver tilstand og er representative for to uavhengige eksperimenter. Gener ekspresjon ble bedømt ved sanntids-PCR på triplikate prøver og normalisert mot den av ribosomalt protein-gen L32 * p 0,05; ** P 0001, *** p. 0,0001
(A) immundeteksjon av OPN i OB i skjelettmetastaser forårsaket av PC3c celler (se obs a og b forstørrelser av en, se sorte piler) (A) og i tumorer celler (B a). Tilsvar til OPN er BSP uttrykk påvist i svulster celler
i
vivo plakater (B, b). (C) På analog måte til primærmuseceller calvaria, PC3 og PC3c ble dyrket i osteogene forhold for 21 dager. ALP (a, c) og von Kossa-farging (b, d) viser høy ekspresjon av ALP (c) og mineralisering (hvit pil) (d) i PC3c celler, mens ingen ALP uttrykket (a) og mineralisering ble påvist i PC3-celler ( b). (D) Påvisning av real-time PCR av OPN, ALP og OCN mRNA uttrykk i PC3c og PC3 celler dyrket i osteogene forhold for 21 dager. Genekspresjon ble vurdert av real-time PCR på triplikate prøver og normalisert mot den av ribosomalt protein genet L32 ** p 0001. Bar = 200 um T: Tumor; OB: osteoblaster; NB:. New Bone
PC3c celler induserer robuste osteoblastiske reaksjoner ved osteogene forhold
Fordi PC3c celler indusert ny beindannelse
in vivo
, vi neste testet om de kunne produsere obs markører. Etter farging av beinmetastatisk vevssnitt, OPN og BSP ble funnet uttrykt i PC3c celler
in situ plakater (figur 4B a og b). Videre etter 3 uker med kultur,
in vitro
, på osteogene forhold, inkludert askorbinsyre og β-glycerophosphate (fig 4C b og d), PC3c celler ble avslørt å være alkalisk fosfatase (ALP) -positivt (Fig 4Cc ) og var i stand til å danne en forkalket matrise positivt for von Kossa farging (fig 4C d), mens PC3 var ALP-negative og induserte ikke matrise mineralisering (figur 4C a og b). Uttrykk for ALP etter askorbinsyre behandling ble bekreftet i PC3c celler ved real-time PCR (figur 4D). Tilsvarende OPN ble sterkt uttrykt i PC3c forhold til PC3 celler mens OCN ble uttrykt av både cellelinjer under disse eksperimentelle forhold (figur 4D), noe som tyder på høy osteomimicry eiendom PC3c forhold til PC3 celler. Endelig Fourier transform infrarød Microspectroscopy (FTIRM) studie på svulster som oppnås etter subkutan injeksjon av PC3c celler avslørte tilstedeværelsen av amider I (hovedsakelig C = O strekk) og II (hovedsakelig NH bøying) og III (hovedsakelig CN stretching og NH bøying) grupper av proteiner (figur S4, se i og II rød linje) som vanligvis svarer til den organiske matrise (90% type i kollagen) i benet (fig S4, se blå og svart linje). Ingen fosfat eller karbonat molekylære vibrasjoner ble funnet, noe som indikerer fravær av mineral innenfor PC3c tumor
in vivo
(figur S4). På den andre siden, ny benmatriks erholdt fra mus injisert med tibia PC3c celler viste tilstedeværelse av mineral (fig S4). Samtidig til disse resultat ble høy mengde av type I kollagen funnet å bli uttrykt ved PC3c sammenlignet med PC3 celler ved real-time PCR
in vitro plakater (figur 5A). I tillegg PC3c celler ble vist omgitt av typisk type I kollagen fibrene
in situ
bedømt ved elektronmikroskopi (figur 5B se piler og høyere forstørrelse). Til sammen antyder disse dataene høyere osteomimicry egenskaper for PC3c sammenlignet med PC3-celler, og derved forklarer i det minste delvis, til deres evne til å indusere blandede osteoblastiske /osteolytiske lesjoner.
(A) Påvisning av real-time PCR av type i kollagen mRNA uttrykk i PC3c og PC3 celler dyrket i normale forhold. Genekspresjon ble vurdert av real-time PCR på triplikate prøver og normalisert mot den av ribosomalt protein genet L32 * p 0,05. (B) Visualisering av type I kollagen i PC3c celler dyrket på dekkglass ved elektronmikroskopi (se svarte piler).
Diskusjoner
I denne studien har vi etablert og preget en ny androgen-uavhengig prostatakreft cellelinje (PC3c) som raskt gir blandede benskader hos hann SCID mus, 10 uker etter intra-tibial tumorceller injeksjon. Denne modellen kan være nyttig å studere cellulære og molekylære mekanismer som er forskjellige androgen-avhengige og androgen-uavhengig prostata-karsinomer når de metastasere til ben. I prostatakreft, er androgen blokade strategier vanligvis brukes til å behandle osteoblastiske benmetastaser. Men svarene på disse terapi er ofte kort på grunn av post-traductional endringer eller mutasjoner av AR som reduserer ligand binding og uunngåelig føre til CRPC [26,27]. Rollen til AR veien i osteoblastiske utviklingen av prostatakreft er dårlig forstått fordi tilgjengelige modeller av blandet og rene osteoblastiske lesjoner (C4-2B, PCa2B, Vcap) er hovedsakelig androgen responsive som [28,29]. Følgelig blir en aktiv AR sti antatt å være implisert i den osteoblastiske progresjon av prostatacancer. Men om vår PC3c modell, denne forutsetningen ikke oppstå som begge cellelinjer PC3 og PC3c cellelinjer ikke uttrykker AR. På den andre siden, AR negative modeller ofte brukt som PC3 og DU145 celler som stammer fra CRPC pasienter indusert ren osteolytiske lesjoner og ikke reproduserer det som er observert i klinikken [30,31]. Så, for å møte behovet for klinisk relevante modeller av prostata kreft-assosiert benlesjoner, nyere hormonuavhengige modeller har blitt utviklet som MDA PCa 118 og Ace-en som i likhet med PC3c modellen ikke gir uttrykk for AR og indusere blandet lesjoner [22,32]. Likevel, osteogenesis som ble indusert av FGF-9 i MDA PCa 118 modellen var ikke innblandet i osteoblastiske respons indusert av PC3c som FGF-9 uttrykk var ikke statistisk signifikant modulert mellom PC3 og PC3c celler.
Interessant, når sammenlignet med PC3, PC3c celler sterkt uttrykt eT-1, et mitogen faktor for OB [33,34].
