Abstract
Formål
Transforming growth factor (TGF) -β1 signalering er involvert i kreft-celle metastasering. Vi undersøkte om enkeltnukleotidpolymorfi (SNPs) i
TGFβ1
var assosiert med total overlevelse (OS) og fjernmetastaser overlevelse (DMFs) hos pasienter med ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) behandles med definitive strålebehandling , med eller uten kjemoterapi.
Metoder
Vi genotypede
TGFβ1
SNPs på rs1800469 (C-509T), rs1800471 (G915C), og rs1982073 (T + 29C) etter polymerase chain reaction-rflp i blodprøver fra 205 NSCLC pasienter som hadde hatt definitive strålebehandling ved en institusjon i november 1998-januar 2005. Vi har også testet om
TGF-β1
rs1982073 (T + 29C) SNP påvirket migrasjon og invasjon av A549 og PC9 lungekreft celler
Resultater
Median oppfølgingstid for alle pasienter var 17 måneder (variasjon, 1-97 måneder,. 39 måneder for pasienter i live ved tidspunktet for analyse). Multivariat analyse viste at
TGFβ1
rs1800469 CT /CC genotype ble assosiert med dårlig OS (hazard ratio [HR] = 1,463 [95% konfidensintervall {KI} = 1,012 til 2,114],
P
= 0,043) og kortere DMFS (HR = 1,601 [95% CI = 1,042 til 2,459],
P =
0.032) og at
TGFβ1
rs1982073 CT /CC genotype spådd dårlig DMFS ( HR = 1,589 [95% CI = 1,009 til 2,502],
P
= 0,046) og dårlig hjernen MFS (HR = 2,567 [95% CI = 1,155 til 5,702],
P
= 0,021 ) etter justering for alder, kjønn, rase, funksjonsnivå, røykestatus tumorhistologi og volum, scene, mottak av samtidige radiochemotherapy, antall kjemoterapi sykluser, og stråledose. Transfeksjon med
TGFβ1
+ 29C (vs. + 29T) stimulerte migrasjon og invasjon av A549 og PC9 celler, noe som tyder på at TGFβ1 + 29C kan være knyttet til økt metastatisk potensial.
Konklusjoner
TGFβ1
genotyper på rs1800469 og rs1982073 kan være nyttig for å forutsi DMFS blant pasienter med NSCLC som behandles med definitive strålebehandling. Disse funnene krever validering i større prospektive studier og grundige mekanistiske studier
Citation. Yuan X, Wei Q, Komaki R, Liu Z, Yang J, Tucker SL, et al. (2013)
TGFβ1
Polymorfisme Tippe fjernmetastaser overlevelse hos pasienter med inoperabel ikke-småcellet lungekreft etter Definitive strålebehandling. PLoS ONE 8 (6): e65659. doi: 10,1371 /journal.pone.0065659
Redaktør: Natasha Kyprianou, University of Kentucky College of Medicine, USA
mottatt: 8 november 2012; Akseptert: 25. april 2013, Publisert: 19 juni 2013
Copyright: © 2013 Yuan et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Støttet i del av Cancer Center Support (Core) Grant CA016672 til MD Anderson Cancer Center. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet. Ingen ekstra ekstern finansiering mottatt for denne studien
Konkurrerende interesser:. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Lungekreft er fortsatt den ledende årsak til kreft dødsfall. , med anslagsvis 160,340 dødsfall i USA i 2012 [1]. Den gjeldende standarden på omsorg for unresectable ikke-småcellet lungekreft (NSCLC), langt den vanligste presentasjon ved diagnose, er strålebehandling i kombinasjon med kjemoterapi. Men overlevelse etter slik behandling forblir fattige på grunn av høy forekomst av tilbakefall, både lokalt og fjernt. Vanlig brukte radio (chemo) terapiregimer er også assosiert med betydelig normalt vev toksisitet, inkludert stråling lungebetennelse, som kan være dødelig. Bedre behandlingsstrategier utformet i henhold til den enkelte pasientens egen følsomhet og risiko for toksisitet, er svulsten unike uttrykk for molekylære mål (e), og risikoen for lokoregionalt eller fjern tilbakefall av sykdommen et presserende behov.
En mulig molekylær biomarkør for å forutsi behandlingsresultat etter radiochemotherapy for NSCLC, både når det gjelder kreftsvulster og skade normalt vev, forandrer vekstfaktor β1 (TGFβ1). Medlemmer av TGFB cytokin super lokke fram et variert utvalg av cellulære responser, inkludert spredning, migrasjon, fibrose, apoptose, vev betennelse, sår reparasjon, og angiogenese [2] – [4]. Endringer i TGFp signalering har blitt rapportert i flere typer kreft hos mennesker, deriblant småcellet lungekreft [5], [6]. Selv om TGFp typisk fungerer som en tumor suppressor [7], [8], som tumorutvikling skrider frem, tumorceller erverve resistens mot TGFp-indusert veksthemming. Av de tre kjente isoformer TGFfi, synes TGFβ1 å være direkte involvert i mediering av den metastatisk aktivitet av kreftceller [9]. Prekliniske studier viser at inhibering av TGFβ1 signale nedregulerer migrering av tumorceller og undertrykker utvikling av metastase [10], [11]. Dermed kan TGFβ1 har en dobbel rolle i kreftutvikling, undertrykke tumorvekst i de innledende fasene av kreftutvikling, men fremme tumorprogresjon og metastase i mer avanserte stadier [12], [13]. Faktisk viser økende bevis for at TGFp signalering har en rolle i utvikling av lungekreft [14], [15]. TGFβ1 har også blitt vist å indusere den epiteliale-til-mesenchymale overgang, som har en avgjørende rolle i den invasjon og metastasering av enkelte typer av tumorceller [16]. TGFp har videre vært implisert i tumorcelle følsomhet for stråling og kjemoterapeutiske medikamenter [17] -. [19]
I tillegg til dets virkninger på tumorceller, er TGFβ1 også involvert i responsen av normale vev for stråling eller radiochemotherapy. To grupper har vist foreløpige bevis for at endringer i plasmanivået av TGFβ1 under strålebehandling kan forutsi risikoen for utvikling av stråling-indusert lungetoksisitet [20], [21]. Sterke foreninger har også blitt rapportert mellom enkeltnukleotidpolymorfi (SNPs) i
TGFβ1 Hotell og stråleindusert fibrose hos pasienter med brystkreft eller gynekologisk kreft [22], [23] og mellom SNPs og stråling lungebetennelse hos pasienter med lungekreft behandlet med strålebehandling eller radiochemotherapy [24]. Utforskningen av den prognostiske verdien av
TGFβ1
SNPs i en rekke krefttyper [25], [26] tyder på at noen
TGFβ1
genotyper spår mer aggressive kreft fenotyper og negativ prognose.
Vi har tidligere vurdert forholdet mellom tre ulike SNPs av
TGFβ1 product: [rs1800469 (C-509T), rs1800471 (G915C), og rs1982073 (T + 29C)] og utvikling av stråling lungebetennelse hos pasienter med NSCLC behandlet med radiochemotherapy og observert at CT /CC genotyper av
TGFβ1
rs1982073 (T + 29C) ble assosiert med signifikant lavere risiko for stråling lungebetennelse [24]. Videre rs1982073 (T + 29C) og rs1800469 (C-509T) har blitt koblet med økt serumnivå av TGFβ1 [26] og med forekomsten av invasiv brystkreft [27]; rs1800469 (C-509T) har også blitt koblet med avansert stadium prostata kreft [26] og tykktarmskreft [28]. På grunnlag av disse publiserte funn, undersøkte vi om disse funksjonelle genetiske varianter av
TGFβ1
også påvirke tumorrespons og utfall hos pasienter med inoperabel NSCLC som behandles med definitive stråling eller radiochemotherapy, vurdert i forhold til total overlevelse (OS) og fjernmetastaser overlevelse (DMFs).
Metoder
Tema for retrospektiv analyse ble valgt ut fra en stor database med 740 pasienter med NSCLC som hadde blitt behandlet ved The University of Texas MD Anderson Cancer Center fra november 1998 til 2009. totalt 261 pasienter ble identifisert som å ha hatt fullblodsprøver tilgjengelig for analyse; alle disse pasientene hadde blitt behandlet i november 1998 til januar 2005. Fra disse 261 pasienter, 56 ble ekskludert: 25 som døde av andre sykdommer eller som vital status var ukjent; 16 som hadde dødd av NSCLC uten informasjon om fjernmetastaser eller lokoregionalt sykdom, to som hadde hatt operasjon, en som hadde hatt småcellet lungekreft, og 12 som hadde hatt stadium IV sykdom, slik at totalt 205 pasienter med fullstendig informasjon for dagens analyse.
Genotyping
Genomisk DNA ble ekstrahert fra leukocytter fra fullblodprøver med DNA Blood Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA) i henhold til produsentens instruksjoner. DNA renhet og konsentrasjon ble bestemt ved spektrofotometrisk måling av absorbansen ved 260 og 280 nm. SNPs i TGFβ1 ble valgt som møtte minst to av følgende tre kriterier: (1) rapporterte assosiasjoner med lungene eller andre typer kreft; (2) en mindre allel frekvens på 5% i individer av kaukasisk nedstigning; og (3) sted i promotoren eller kodende region av genet. Vi genotypet tre slike SNP’er: rs1800469 (C-509T, i promoter-regionen), rs1800471 (G915C, i ekson 1), og rs1982073 (T + 29C, også i ekson 1) ved polymerase kjedereaksjon (PCR) -restriction fragment lengde polymorfisme som beskrevet andre steder [24].
In vitro Vurdering av rs1982073
TGFβ1 + 29C
eller
TGFβ1 + 29T
stabile transfektanter
Vi har også testet om
TGFβ1
rs1982073 (T + 29C) C variant genotyper påvirket metastatisk potensial av lungekreftceller in vitro som følger. For disse eksperimenter, A549 og PC9 celler, både som stammer fra human lunge adenokarsinom, ble dyrket i Hams F12 (A549) eller RPMI 1640 (PC9) inneholdende 10% føtalt bovint serum og antibiotika (100 enheter /ml penicillin og 100 enheter /ml streptomycin ) ved 37 ° C med 5% CO
2, ble andmedium oppdateres hver 2-3 dager. Når cellekulturene nådd omtrent 50% konfluens i friskt serumfritt medium, ble de transfektert med en kontrollvirus eller med en TGFβ1 (+ 29 ° C eller + 29T) -overexpressing lentivirus (konstruert som beskrevet nedenfor) ved en multiplisitet av infeksjon på 100 , inkubert i 48 timer, og dyrket videre i Hams F12 (A549) eller RPMI 1640 (PC9). Transfeksjonseffektiviteten, målt i cellulær ekspresjon av grønt fluorescerende protein ved fluorescens mikroskopi (Leica DMI4000B), ble funnet å være 99%. De transfekterte celler ble deretter testet for deres invasivitet og motilitet som beskrevet nedenfor.
TGFβ1 cDNA ble amplifisert ved hjelp av PCR, med et cDNA-bibliotek fra bronkiale glatte muskelceller ble anvendt som DNA-templat. Primerene ble 5′-CCAAGCTTATGCCGCCCTCCGGGCTG-3 «og 5′-CGGAATTCTCAGCTGCACTTGCAGGAG-3» (understrekede sekvensene angir Hindlll og EcoRI restriksjonsseter). Den TGFβ1 cDNA med + 29C og + 29T ble sendt til Genechem Company (Shanghai, Kina) å konstruere de relevante lentivirus systemer.
Etter transfeksjon, de A549 og PC9 celler ble hentet inn i kald lysisbuffer [50 mM Tris -HCI (pH 7,5), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM MgCl2, 0,5% Triton X-100, og protease-inhibitor blanding (1 mM PMSF, 2 ug /ml aprotinin, 1 pg /ml leupeptin, og 1 ug /mL pepstatin A)]. Cellelysatene ble deretter klaret ved sentrifugering ved 10.000 x
g
i 20 minutter, ble supernatantene innsamlet, og proteinkonsentrasjonen av hvert lysat ble bestemt ved en BCA Protein Assay Kit. Lik mengde av proteinene i lysatene ble separert på 12% natriumdodecylsulfat for polyakrylamidgelelektroforese og overført til polyvinylidendifluorid-membraner (Bio-Rad). TGFβ1 ble oppdaget av spesifikke antistoffer # 3709 fra Cell Signaling Technology.
Cell migrasjon ble vurdert med en ripe analyse og celle invasivitet med en transwell analysen som følger. For scratch-analysen, ble A549 og PC9 celler sådd ut i 24-brønners kulturskåler ved 2 x 10
5-celler /brønn og inkubert i 24 timer, hvoretter monolaget ble skrapet med en steril 200-mL pipettespissen, at platene ble vasket to ganger med fosfat-bufret saltvann, og cellene ble inkubert med serumfritt Hams F12 (A549) eller serumfritt RPMI (PC9) i 24 timer, hvoretter bilder ble tatt av mikroskopi ved 100 x forstørrelse og «helbredende «områder ble målt med et fasekontrastmikroskop (Leica DMI4000B). For hver celletype, ble tre uavhengige eksperimenter transfeksjon utført, og alle forsøk ble utført i tre eksemplarer.
for transwell analyser, A549 og PC9 Cellene ble suspendert i serumfritt Hams F12 eller serumfritt RPMI 1640 ved en tetthet på 3 x 10
5 per ml, og 100 pl aliquoter ble satt til de øvre kamrene i en 24-brønners transwell kammer inneholdende polykarbonatfiltere med 8-um porer og belagt med 60 ul av Matrigel (1: 9 fortynning, Sigma Aldrich). Fem hundre mikroliter prøver av Hams F12 eller RPMI 1640 med 10% FBS ble tilsatt til de nedre kamre, og kamrene ble inkubert i 24 timer. På den tiden ble cellene i det øvre kammeret fjernes med en bomullsdott, renset med PBS og fiksert i 100% metanol. Celler som hadde invadert gjennom Matrigel til den nedre overflate var farget med 4 «, 6-diamidino-2-fenylindol og kvantifisert ved å telle antallet fluorescerende celler i 5 tilfeldige mikroskopiske felt per filter ved 400 x forstørrelse. Tre uavhengige eksperimenter ble utført.
Statistical Analysis
I de kliniske prøvekorrelasjonsstudier, ble OS tid beregnes fra den første dagen av strålebehandling inntil døden eller siste kjente oppfølging. DMFs ganger ble beregnet fra den første dagen av strålebehandling til den første observerte dag av fjernmetastaser eller den sist kjente oppfølging. Assosiasjoner mellom fordelingen av
TGFβ1
genotyper og kliniske egenskaper ble vurdert ved Fishers eksakte tester eller Pearsons χ
2 tester. Cox analyse ble brukt for å vurdere påvirkning av ulike
TGFβ1
genotyper på OS og DMFs, beregnet som hazard ratio (HRS) med tilhørende 95% konfidensintervall (CIS). Alle HRS ble justert for alder, kjønn, rase, Karnofsky funksjonstilstand, røykestatus tumorhistologi, brutto tumorvolumet, sykdom stadium, mottak av kjemoterapi eller samtidig radiochemotherapy, antall sykluser med kjemoterapi, og stråledose. Kaplan-Meier analyse ble brukt for å evaluere effekten av
TGFβ1
genotype på den kumulative sannsynligheten for DMFs. Alle rapporterte
P
verdiene var tosidig, og
P
0,05 ble ansett for å indikere statistisk signifikans. Statistiske analyser ble utført med SPSS 16.0 (SPSS Inc. Chicago, IL).
in vitro data ble uttrykt som betyr ± SD fra tre uavhengige eksperimenter (som hver hadde blitt utført i tre eksemplarer) og sammenlignet med student
t
tester.
P
verdier av. 0,05 ble ansett for å indikere statistisk signifikante forskjeller
Resultater
Klinisk Eksempel korrelasjonsstudier
De kliniske karakteristikker av 205 analyserte pasienter er oppsummert i tabell 1. pasient, sykdoms- og behandlingsrelaterte egenskaper i henhold til
TGFβ1
polymorfismer var godt balansert i forhold til alder, rase, kjønn, Karnofsky funksjonstilstand, bruk av tobakk, tumorhistologi, brutto tumorvolum, sykdom stadium, antall sykluser med kjemoterapi, mottak av kjemoterapi vs. stråling bare, og stråledose (ikke vist).
median oppfølgings ganger var 17 måneder for hele gruppen og 39 måneder for pasienter som var i live på tidspunktet for analyse (rekkevidde, 1-97 måneder). Median OS Tiden var 21 måneder. Totalt 103 pasienter (50%) utviklet DM på 134 sider; 27 pasienter hadde DM på mer enn ett område (23 på 2 steder og 4 på 3 steder). De områder av metastaser inkludert hjerne (n = 39), ben (n = 26), lunge (n = 26), binyrer (n = 13), lever (n = 14), og andre uspesifiserte steder (n = 16).
Figur 1 viser Kaplan-Meier analyse av effekten av
TGFβ1
genotype og kumulativ sannsynlighet for DMFs.
TGFβ1
rs1800469 (C-509T) CT + TT genotyper ble assosiert med signifikant kortere median DMFS (11 måneder kontra 31 måneder for CC genotype,
P
= 0,010, Fig. 1A ).
TGFβ1
rs1982073 (T + 29C) CT + CC genotyper ble også assosiert med betydelig kortere median DMFS (sammenlignet med TT genotype) (
P
= 0,013, Fig. 1C). Det ble imidlertid ikke assosiasjoner funnet mellom noen genotype (GG, CG, CC, eller CG + CC) av
TGFβ1
rs1800471 (G915C) SNP og DMFS (Fig. 1B).
p
verdier ble beregnet ved log-rank tester.
Funn fra multivariate analyser av
TGFβ1
polymorfismer og kliniske resultater justert for pasient, sykdoms- og behandlings -relaterte faktorer er vist i tabell 2.
TGFβ1
rs1800469 (C-509T) CT + TT genotyper var assosiert med økt timer for OS og DMFS sammenlignet med CC genotype (HR for OS = 1,463, 95% KI = 1,012 til 2,114,
P
= 0,043; HR for DMFS = 1,601, 95% KI = 1,042 til 2,459,
P
= 0,032).
TGFβ1
rs1982073 (T + 29C) CT + CC genotyper ble også assosiert med økt HR for DMFS sammenlignet med CC genotypen (HR = 1,589, 95% KI = 1,009 til 2,502,
P
= 0,046). Ingen sammenhenger ble funnet mellom noen genotyper (GG, CG, CC, eller CG + CC) av
TGFβ1
rs1800471 (G915C) SNP og OS eller DMFs.
Vi videre analysert foreningen av
TGFβ1
rs1800469 (C-509T), rs1800471 (G915C), og rs1982073 (T + 29C) genotyper med orgel nettsteder der metastaser utviklet ved hjelp av Cox proporsjonal fare modeller. CT eller TT genotyper av rs1800469 (vs. CC) og CT eller CC genotyper pf rs1982073 (vs TT), ble begge assosiert med en dobling i HRS til hjernen, bein, og lungemetastaser i univariate analyser. Men i multivariate analyser, den eneste signifikant sammenheng var mellom rs1982073 CT eller CC (vs TT) og hjernemetastaser (HR = 2,567 [KI = 1,155 til 5,702],
P
= 0,021) (tabell 3) .
In vitro funn
Transfeksjon effektivitet for både A549 og PC9 lunge kreft cellelinjer var ca. 99% (fig. 2A, B). Transfeksjon av A549 og PC9 celler med
TGF-β1
+ 29C + 29T eller indusert de forventede økninger i ekspresjon av både forløperen og aktive former av TGFβ1 (fig. 2C, D). Begge cellelinjer, etter transfeksjon med det TGFβ1 + 29C-konstruksjon, vist økte motilitet (fig. 3A, B, C, E) og økt invasjon (fig. 3d, F) i forhold til de + 29T transfektanter. Disse resultater antyder at den TGFβ1 + 29C genotype i begge disse lungecancercellelinjer induserte en fenotype med økt risiko for metastasering
(A, B) Fluorescens merking antydet transfeksjonseffektiviteten var . 99% for begge cellelinjer. (C, D) Western blot-analyse bekreftet at transfeksjon med enten + 27 C eller + 29T førte til overekspresjon av TGFβ1 i både forløper og aktive former. Con, kontrollere lentivirus konstruksjon; glyseraldehyd-3-fosfat dehydrogenase (GADPH) ble brukt som en lasting kontroll.
(A, B) Fluorescens fase kontrast mikroskopiske bilder viser at på 24 timer, flere av + 29C transfektanter migrert inn en «healing» området i en ripe analysen enn gjorde + 29T transfektanter. Disse funnene er vist kvantitativt som avstanden migrerte under bunnen analysen i panelene C og E. (D, F) De + 29C transfektantene viste større spredningsmåte, som angitt ved antall celler som trenger gjennom en membran i en transwell assay. Resultatene er angitt som gjennomsnitt fra 3 uavhengige eksperimenter; feilfelt representerer standardavvik.
Diskusjoner
metastaser er fortsatt en viktig årsak til behandlingssvikt hos pasienter med NSCLC som behandles med strålebehandling, med eller uten kjemoterapi [29], [30]. Faktorer som predikerer den biologiske atferd og metastatisk potensial av NSCLC har vært aktivt søkt de siste 3 tiår. Den mest betydningsfulle funn fra denne studien er sammenhengen mellom variant
TGFβ1
genotyper på rs1800469 og rs1982073 og verre DMFS blant pasienter med NSCLC gitt strålebehandling; Dette funnet antyder at SNPs i
TGFβ1
gener kan brukes som biomarkører for å foreskrive personlig radiochemotherapy henhold til forventede mønsteret for tilbakefall før oppstart av behandling. Vi ytterligere validert foreningen av
TGF-β1
SNP rs1982073 T + 29C med forbedret migrasjon og invasivitet av to lunge kreft cellelinjer, A549 og PC9, in vitro.
Videre analyser av vår resultatene viste en statistisk høyere risiko for hjernemetastaser hos pasienter med
TGFβ1
rs1982073 (T + 29C) C variant genotyper. Hjernemetastaser er en vanlig komplikasjon ved lokalt avansert NSCLC, med 21% til 54% av pasienter som utvikler hjernemetastaser i løpet av sykdommen [31], [32]. OS tid av pasienter med hjernemetastaser er vanligvis i området fra ca. 3 til 6 måneder [33] – [35], og 30% -50% av pasienter med hjernemetastaser dør av neurologiske årsaker [36], [37]. Profylaktisk cranial bestråling (PCI) har vært vist i to randomiserte studier for å redusere forekomsten eller forsinke utbruddet av hjernemetastaser hos pasienter med lokalavansert NSCLC etter primærbehandling, og bruk av PCI kan forlenge OS hos slike pasienter [38], [39 ]. Strålebehandling Oncology Group (RTOG), i et forsøk på å utvide disse resultatene, åpnet en stor studie (RTOG 0214) av PCI versus observasjon av pasienter med lokalavansert NSCLC. Hos pasienter med stadium III sykdom uten progresjon av sykdommen etter behandling, redusert PCI frekvensen av hjernemetastaser, men ble ikke bedre OS eller sykdomsfri overlevelse [40]. Ideelt sett ville en fore PCI kun for pasienter med høy risiko for å utvikle hjernemetastaser. Imidlertid så langt ingen pålitelig måte har vist seg å identifisere hvilke pasienter som vil utvikle hjernemetastaser og som ikke vil-derfor intens søken etter biomarkører. Derfor våre funn at
TGFβ1
rs1982073 (T + 29C) C variant genotyper ble assosiert med hjernemetastaser er av særlig betydning i forvaltningen av NSCLC, fordi dette SNP kan tjene som en biomarkør for å identifisere pasienter som ville ha nytte fra PCI.
muligheten for å bruke
TGFβ1
SNPs som prediktive biomarkører i andre typer kreft har vært studert av andre. I en slik studie,
TGFβ1
rs1800469 C-509T homozygot TT genotype ble funnet å være assosiert med en økt risiko for å ha en aggressiv form for prostatakreft, men rs1982073 T + 29C (T + 29C) C variant genotypene var ikke [26]. I motsetning til en annen gruppe viste at pasienter med brystkreft som bar T + 29C C-allelet hadde lavere 5-års sykdomsfrie overlevelse enn gjorde de med TT genotype [25]. Andre bevis fremstår som SNPs i enkelte andre gener kan forutsi utfallet i NSCLC. For eksempel har genetiske avvik i genene for matriks-metalloproteinase (MMP) -3 og MMP-9 eller røntgen reparasjon protein XRCC1 blitt rapportert å påvirke den kliniske oppførsel og risikoen for metastasering av lungekreft [41] – [43]. Disse biomarkører har ennå ikke allment oversatt til klinisk praksis. Våre funn er i tråd med disse rapportene: DM var en stor mønster av svikt i vår studie (DMFs rente, 50,2%), og variant genotyper på
TGFβ1
rs1800469 (C-509T) og
TGFβ1
rs1982073 (T + 29C) så ut til å være forbundet med kortere DMFs ganger. Hvis validert i større studier, kan våre funn tjene som grunnlag for å bruke disse genotypene som en prognostisk markør for klinisk utfall, spesielt predisposisjon for hjernemetastaser hos pasienter med NSCLC.
mekanistisk grunnlag av funnene fra studien trenger videre etterforskning. Noen forskere har foreslått at TGβ1 proteinnivåer kan uavhengig forutsi overlevelsen hos pasienter med adenokarsinom av lungen [18], [44] – [46]. I disse studiene, TGFβ1 uttrykk i grunnskolen lungekreft vev var høyere blant pasienter med lungemetastaser enn blant pasienter uten slike metastaser. Tidligere rapporter antydet at polymorfismer i signalsekvensen på 915 [47], C-509T [48], og T + 29C (koding Leu10Pro) i
TGFβ1
genet var assosiert med økt TGFβ1 produksjon. Disse studiene kan kaste lys over vår å finne denne varianten genotyper på
TGFβ1
rs1800469 (C-509T) og
TGFβ1
rs1982073 (T + 29C) var assosiert med kortere DMFs ganger hos pasienter med NSCLC behandlet med definitive strålebehandling.
i vår studie har de
TGFβ1
rs1800469 (C-509T) CT eller TT genotyper virket i univariat analyse for å bli assosiert med kortere OS, og ingen assosiasjoner ble funnet mellom OS og
TGFβ1
rs1982073 (T + 29C) genotyper. Dette funnet er i strid med en rapport fra Mu et al. [49] viser at pasienter med tidlig stadium brystkreft og T /T genotype eller høye intratumorale TGFβ1 nivåer hadde kortere OS ganger enn gjorde de uten T /T eller med lave intratumorial TGFβ1 nivåer. Men denne foreningen var annerledes for pasienter med sent stadium sykdommen: for de pasientene, ha T /T genotype ble forbundet med lavere risiko for tilbakefall av sykdommen. Disse funnene tyder på at
TGFB1
har komplekse roller i brystkreft progresjon, som støtter funnene i andre studier som
TGFβ1
har motstridende effekter på tumorvekst og metastasering.
studien hadde flere begrensninger; sin single-institusjon og retrospektive natur krever at funnene valideres i større, gjerne flere institusjonelle prospektive studier. En annen begrensning var at vi ikke måle TGFβ1 proteinnivåer i plasma før, under eller etter strålebehandling, og slik at vi ikke kunne avgjøre om å ha den
TGFβ1
rs1982073 (T + 29C) CT genotype påvirket uttrykk for TGFβ1 protein nivåer i vivo, og heller ikke kan vi avgjøre om risikoen for DM korrelerer med endringer i denne variabelen før eller etter behandling. Dermed avklaring er fortsatt nødvendig om forholdet mellom polymorfismer i
TGFβ1 Hotell og TGFβ1 proteinnivåer i plasma og prognose hos pasienter med NSCLC. Til slutt ble vår forskning begrenset til pasienter som har mottatt definitiv strålebehandling. Hvorvidt
TGFβ1
rs1982073 variant genotyper også forutsi utfallet blant pasienter som gjennomgår kirurgi eller andre ikke-stråling-basert terapi er fortsatt uklart.
Vårt tidligere arbeid [24] viste at det å ha CT eller CC varianter i
TGFβ1
rs1982073 var assosiert med lavere risiko for alvorlig (grad ≥3) stråling lungebetennelse, en observasjon som tyder på at stråledosen intensive å øke lokoregionalt tumorkontroll hos pasienter med denne genotypen ville være mulig. Men resultatene vi rapporterer her viste at pasienter med disse genotyper hadde økt risiko for DM, spesielt hjernemetastaser, en observasjon som tyder på at systemisk behandling og PCI er indikert. Resultatene fra vår studie antyder, for første gang, at
TGFβ1
rs1982073 variant genotyper kan være nyttig som en genetisk biomarkør for å hjelpe leger skreddersy behandling i henhold til pasientens risiko for stråling lungebetennelse og DM. Som sådan, flere studier er nødvendig for å validere dette funnet, og for å undersøke mekanismer som
TGFβ1
polymorfismer påvirke løpet av lungekreft utvikling og progresjon. Slike studier vil bidra til å gi en bedre forståelse av kreft mikromiljøet og metastasering og kan være medvirkende i å skreddersy behandling for NSCLC.
