Abstract
Identifisering av potensielle tumor markører vil hjelpe stratify og identifisere en svulst er ondartet potensial og sin respons til spesifikke terapier. IL-6 er blitt rapportert å være en prediktor i ulike kreftformer. Derfor ble foreliggende undersøkelse utført for å fremheve den rolle av IL-6 i å forbedre behandlingen og bestemme prognose av blærekreft. De humane blærecancercellelinjer HT1376 og HT1197 ble selektert for celler og dyreeksperimenter, hvor biologiske endringer etter eksperimentell manipulasjon av IL-6 ble undersøkt, inkludert tumor oppførsel og tilhørende signalisering i blærekreft. I tillegg ble kliniske prøver fra 85 pasienter med muskel-invasiv og 50 med ikke-muskel-invasiv kreft i urinblæren valgt for immunhistokjemisk farging for å evaluere den prediktive kapasitet av IL-6 i forhold til klinisk resultat. Dataene viste at IL-6 ble overuttrykt i blærekreft prøvene sammenlignet med ikke-maligne vev både på mRNA og proteinnivå. Positiv farging av IL-6 ble signifikant korrelert med høyere klinisk stadium, høyere tilbakefall etter kurativ behandling, og redusert overlevelse. Tumorvekst og invasiv evne ble svekket når IL-6 ble blokkert. De underliggende endringer omfattet redusert celleproliferasjon, mindre epitelial-mesenchymale overgang (EMT), redusert DNA metyltransferase en uttrykk og svekket angiogenese. Som konklusjon, våre funn viste at IL-6 kan være en signifikant prediktor for klinisk stadium og prognose av blærekreft. Videre rettet mot IL-6 kan være en lovende strategi for behandling av blærekreft
Citation. Chen MF, Lin PY, Wu CF, Chen WC, Wu CT (2013) IL-6 Expression Regulerer tumorigenitet og korrelerer med prognose i blærekreft. PLoS ONE 8 (4): e61901. doi: 10,1371 /journal.pone.0061901
Redaktør: Peter Canoll, Columbia University, USA
mottatt: 06.12.2012; Godkjent: 14 mars 2013; Publisert: 30 april 2013
Copyright: © 2013 Chen et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Arbeidet ble støttet av Chang Gung Memorial Hospital, Taiwan, gi CMRPG690332-3. Den Funder hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
kreft i urinblæren representerer et spekter av svulster, inkludert ikke-muskel invasiv (NMIBC), muskel invasiv og metastatiske lesjoner. Transitional karsinom (TCC) av blæren er den vanligste formen for blærekreft og er manifestert i to forskjellige former med ulike kliniske og biologiske atferd. Omtrent 70% av pasientene stede med ikke-muskel invasive svulster, mens de resterende 30% til stede med muskel-invasiv svulster. Til tross for god prognose for pasienter med overfladisk sykdom, er gjentakelse felles og er forbundet med utvikling av muskel-invasiv sykdom [1]. Nesten halvparten av alle pasienter med muskel-invasiv sykdom eller de som allerede har kommet til denne tilstanden havn okkult fjernmetastaser og har dårlig 5-års overlevelse [2]. I motsetning til andre urologiske kreftformer, mangler blærekreft kliniske nyttige biomarkører for å forutsi sykdomsstadiet og klinisk utfall. Derfor er molekylære markører som kan brukes for å stratifisere og identifisere en svulst sanne maligne potensial og dens respons på spesifikke terapi som kreves
Kronisk inflammasjon forut ofte eller følger et betydelig antall cancere [3] – [5]. . En økning i inflammatoriske mediatorer har vist seg å føre til tumorvekst, invasjon, og angiogenese [6] – [7]. Selv om rollen av kronisk betennelse i etiologien av TCC av blæren ikke har blitt godt etablert, det er bevis på at proinflammatoriske cytokiner spiller avgjørende roller i patogenesen av blærekreft, slik som IL-6, IL-8 og TNF-a α [8]. I tillegg ble vedvarende STAT3 aktivering vist seg å opprettholde konstitutiv NF-kB aktivitet, og dermed gi bevis for forholdet mellom onkologi signalveier innenfor den inflammatoriske mikromiljøet [9]. IL-6 er en viktig aktivator av STAT3 signalveier, og hoved cytokin som påvirker den inflammatoriske respons hos mennesker [10], [11]. IL-6 signal har vært implisert i regulering av tumorvekst og metastatisk spredning, og dens nivå kan være korrelert med dårlig prognose i forskjellige krefttyper [11], [12]. Videre økte IL-6-serumnivåer ble rapportert å være assosiert med metastase og dårlig prognose av prostata, ovarie, og blærekreft [13] – [15]. Selv om det er tegn som tyder på at IL-6 kan være en kritisk faktor i forskjellige maligniteter, dens rolle i blærekreft er fortsatt uklar. Derfor, i denne studien, har vi fokusert på de underliggende mekanismene for IL-6 og dens mulige nytten for å møte behovet for aggressiv behandling for blærekreft.
Materialer og metoder
Pasient egenskaper
Institutional Review Board of Chang Gung Memorial Hospital godkjent denne studien (Permit Number: 99-0207B). De skriftlige samtykke ble signert av pasientene for sin prøven og informasjon som skal lagres på sykehuset og brukes til forskning. Totalt 85 pasienter med muskel-invasiv blære TCC (39 med stadium T2 og 46 med etapper T3-T4) som fullførte et kurs i sikker kjemoradioterapi (CCRT) behandling ble inkludert i studien. Ved fullføring av CCRT, pasienter gjennomgikk en gjentakelse computertomografi skanner (CT) og cystoskopi undersøkelse for å fastslå behandlingsrespons. Pasientene ble observert ved 3-måneders intervaller for de første 2 årene og hver 6. måned etterpå. Oppfølging av pasienter fortsettes inntil sin død, og endepunktene var total overlevelse (OS), progresjonsfri overlevelse, svikt mønster og svar på definitiv CCRT. Sykdomsprogresjon ble definert som dokumentert lokalt tilbakefall eller fjernmetastaser. Analysene ble utført ved hjelp av SPSS versjon 17.0.
Immunhistokjemisk (IHC) farging
I tillegg til vevsprøver innsamlet fra de 85 pasienter med muskel-invasiv blærekreft, ble blære vevsprøver samlet for immunhistokjemisk ( IHC) flekker fra 17 pasienter som lider av blære carcinoma med fjernmetastaser, 50 NMIBC pasienter, og 40 ikke-malignitet pasienter. Formalinfikserte, parafininnstøpte vev oppnådd ved transurethral reseksjon i diagnostisering ble kuttet i 5 mikrometer seksjoner, og montert på lysbilder for IHC farging. For histologisk evaluering av IL-6 flekker, ble fargingen scoret uavhengig av to observatører som var blind for klinisk utfall av pasientene; uharmoniske skår ble anmeldt, og en enighet ble nådd. I den foreliggende undersøkelse, ble et kriterium på mer enn 10% positiv farging av tumorceller betraktes som positiv på IHC anledninger, som var definert av mottageren opererer karakteristikk (ROC) kurve analyse.
Cellekultur og reagenser
HT137 og HT1197, humane blærecancercellelinjer, ble erholdt fra American Type Culture Collection (ATCC). IL-6-nøytraliserende antistoff ble hentet fra R to eksemplarer i hvert kjørefelt). Primersekvensene var som følger: (forover og bakover, henholdsvis) 5′-GTTCTTCCTCCTGGAGAATGTCA-3 «og 5′-GGGCCACGCCGTACTG-3′ for DNMT-1; 5»-TACATCCTCGACGGCATCTC-3 «og 5′-GCTACATTTGCCGAAGA- -GCC-3» for IL-6. En β-actin primersett ble anvendt som en kontroll lasting. Den optimaliserte PCR ble utført på en iCycler iQ flerfarget real-time PCR deteksjon system. Betydelige fluorescerende PCR-signaler fra karsinom vev ble normalisert i forhold til den midlere verdi av signalene oppnådd fra ikke-maligne vev.
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for IL-6 nivåer
in vitro
og
in vivo
Urinprøver prøver~~POS=HEADCOMP ble innhentet fra 60 pasienter med blærekreft (25 fra pasienter med NMIBC, 35 fra de med muskel-invasiv sykdom), og 20 prøver fra pasienter uten tegn på malignitet. Eksempel av 10 ml frisk urin ble oppsamlet fra hvert emne, og deretter sentrifugert ved 3000 rpm i 5 minutter. På tidspunktet for analyse urin aliquoter ble tint og urin-IL-6 ble målt i supernatantene. Kommersielt tilgjengelige ELISA assay (HS humant IL-6 immunoassay kit, R 0,05 tatt for å indikere betydning. Signifikans av forskjell mellom prøvene ble bestemt ved bruk av Students t-test. Data er presentert som gjennomsnitt ± standardavvik av gjennomsnittet (SEM). Tre gjentagelser ble foretatt for å vurdere hvert eksperiment, og gjenta hele sett av eksperimenter minst to ganger. En sannsynlighet nivå av p 0,05 ble vedtatt gjennom å bestemme statistisk signifikans med mindre annet er angitt
Resultater
IL-6 uttrykk hos pasienter med blærekreft
Nivået av IL. -6 i vevsprøver (seks sammenkoblede kreft og tilstøtende prøver ikke-ondartede vev) ble undersøkt ved hjelp av mRNA og protein analyser. Som vist i figur 1A, blærekreft prøvene uttrykte betydelig høyere nivå av IL-6 enn ikke-maligne vev. IHC analyse for blære TCC (fig. 1B og tabell 1) viste positiv farging for IL-6 i 51% av T2-T4 blærekreft vev [28% (11/39) i T2 vs. 70% (32/46) i T3-T4;
P
= 0,0001]. I tillegg er 65% (11/17) av de mer avanserte tumorer (pasienter med fjernmetastaser) viste positiv farging for IL-6, men bare 17,5% (7/40) av ikke-maligne blære vev og 26% (13 /50) av tidlig stadium tumorer (CIS eller T1) uttrykt IL-6. Som vist på figur 1C, positiv farging for IL-6 ble signifikant korrelert med kliniske trinn (T2-T4 T1 vs. og CIS;
P
= 0,005). I tillegg ble urin nivåer av IL-6 undersøkt ved hjelp av ELISA-analyse. De gjennomsnittlige IL-6-nivåer i urinprøver fra pasienter med NMIBC (81 ± 30,8 pg /ml) og T2 muskel-blærekreft (98 ± 24 pg /ml) var litt høyere enn de uten ondartet sykdom (25,14 ± 9,71 pg /ml), men forskjellene var ikke statistisk signifikant (fig. 1D). Urin IL-6 nivåer ble signifikant forhøyet hos pasienter med T3 T4 lokal-avansert blærekreft (250 ± 27 pg /ml) sammenlignet med de i pasienter med ≤T2 blærekreft eller ikke-ondartet sykdom (
P
= 0,01).
A. Nivåer av IL-6 ble undersøkt i seks prøver (sammenkoblet kreft (C) og tilstøtende ikke-ondartet vev (N), to eksemplarer i et kjørefelt) av RT-PCR og Western blotting-analyse. For sanntids RT-PCR-analyse, viser y-aksen forholdet av IL-6 i kreftvev dividert med at i de ikke-maligne prøven. Kolonner, mener tre separate forsøk; Barer, standardavvik (SD); *,
P
0,05. B. Immunohistokjemisk farging av humant blærekreft prøver med anti-IL-6 antistoff. Representative lysbilder vises. C. IHC data viste at IL-6 nivåer var signifikant korrelert med klinisk stadium. D. Urin IL-6 nivåer av pasienter ble undersøkt med ELISA analyse. Kolonner, mener tre separate forsøk; Barer, SD; *,
P
0,05. (NT, pasienter med ikke-maligne sykdommer).
Rollen til IL-6 i tumorvekst og invasjon
For å undersøke om IL-6 spiller en rolle i aggressiv oppførsel av blærekreft, HT1197 og HT1376-celler ble transfektert med IL-6-GFP tie vektor. Som vist i figur 2A, det IL-6 stanse vektor signifikant redusert IL-6-ekspresjon i begge cellelinjer. Som bestemmes av levedyktige celler over seks dager (Fig.2B), IL-6 stanse vektor dempet signifikant formeringshastigheten av HT1197 og HT1376-celler. Videre, ved hjelp xenografttumorer modell, inhibering av IL-6 resulterte i langsommere tumorvekst
in vivo plakater (fig. 2C). Dataene viser at IL-6 stanse vektor betydelig hemmet veksten av blæren kreftceller. I tillegg IL-6 stanse vektor betydelig svekket invasiv kapasitet på blæren kreftceller som demonstrert ved hjelp av migrasjon skrape analyser [16] og invasjon analysen
in vitro plakater (Fig. 3A, Fig. S1). En ortotopisk tumorimplantering teknikk som ble brukt for å undersøke effekten av IL-6 stanse vektoren på invasiv evne
in vivo plakater (fig. 3B). Seksten mus fikk intravesikulær instillasjon av hver blære kreft cellelinje. Etter 28 dager, 13 mus (81%) innpodet med HT1197 celler, fire (25%) innpodet med HT1197 celler pluss IL-6 stanse vektor, 11 (69%) med HT1376 celler, og to (13%) med HT1376 celler pluss IL-6 stanse vektor utviklet intravesikulær svulster. Dataene indikerte at IL-6 stanse vektor redusert invasiv evne
in vivo
.
A. Effekter av IL-6-GFP stanse vektoren på IL-6-nivå i HT1197 og HT1376-celler som demonstrert ved immunofluorescens-analyse. Representative mikrografer vises, med de respektive Immunofluorescent farger (DAPI, blå, GFP, grønn, IL-6, rød). IL-6-nivåer ble betydelig redusert av IL-6-GFP stanse vektor sammenlignet med kontroll-GFP vektor. B. Effekter av IL-6 stanse vektor på han spredningsrater HT1197 og HT1376 kreftceller. Det samme antall celler (10
4) ble sådd ut i hver plate på dag 0 og tillatt å vokse i sine respektive kulturer. Vi telles antallet av levende celler etter inkubasjon i 2, 4, og 6 dager. Y-aksen representerer den levedyktige celletall. Punkt, gjennomsnitt av tre separate forsøk. Barer, SD. *,
P
0,05. C. Effekter av IL-6-inhibering på xenograft tumorvekst. Hvert punkt representerer gjennomsnittet av tre separate forsøk; barer, SD; *,
P
0,05. Ekspresjon av IL-6 ble også evaluert ved immunokjemiske farging av xenotransplantater. Representative lysbilder vises ved x400 forstørrelse.
A. Den invasive kapasitet på blærekreftceller med eller uten IL-6 stanse vektoren ble evaluert ved migrasjon skrape analyser. Resultatene fra representative lysbilder vises. Kolonne, mener tre separate forsøk. Barer, SD. *,
P
0,05. B. invasive kapasitet på blærekreftceller med eller uten IL-6 stanse vektoren ble vurdert ved murin ortotopisk tumorimplantering. De representative lysbilder og kvantitative data er vist. Y-aksen representerer forholdet av mus som presenterer intravesikulær tumorer, normalisert til det mottatte ortotopisk tumorimplantering. IL-6 stanse vektor redusert hastigheten for tumorimplantasjon i blæren og var forbundet med en mindre tumorstørrelse. Kolonne, mener tre separate forsøk. Barer, SD. *,
P
0,05. (CV, celler transfektert med kontrollvektor, IL-6 SV, celler transfektert med IL-6 stanse vektor). C. Endring i E-cadherin i celler ble evaluert, og representative mikrografer vises, med de respektive Immunofluorescent farger (DAPI, blå, GFP, grønn, E-cadherin, rød). D. Endring i EMT-assosierte proteiner i transfektanter ble vurdert ved Western blotting-analyse (CV, celler transfektert med kontrollvektor, IL-6 SV, celler transfektert med IL-6 stanse vektor). E. Endring i EMT-assosierte proteiner i celler behandlet med JAK inhibitor- AG490.
Rollen til IL-6 i EMT endrer
EMT er en viktig hendelse i invasivitet [17] og vi undersøkt hvorvidt dette er mekanismen bak den aggressive oppførsel av IL-6-positive blærekreft. Som vist i figur 3C-D, IL-6 stanse vektor øket ekspresjon av E-cadherin assosiert med reduksjon i vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF) og matrise metallopeptidase 9 (MMP-9) uttrykk i tumorceller [18]. Det er blitt rapportert at IL-6 er en viktig aktivator av STAT3 signalering, og aktivering av STAT3 signalering spiller en rolle i induksjon av aggressiv adferd og tumor EMT endringer i kreft [19]. Når vi blokkert STAT3 aktivering med JAK inhibitor-AG490 ble EMT-relaterte proteiner redusert (Fig. 3E). Disse observasjoner antydet at den økte aggressiv adferd og tumor EMT endringer indusert av IL-6 kan bli mediert ved STAT3 aktivering, en del i det minste.
Effekter av IL-6 på angiogenese
ELISA-dataene avslørte at IL-6 stanse vektor tydelig svekket IL-6-sekresjon i cellekultursupernatanter og serum fra mus etter 28 dager etter tumor-implantasjon (fig. 4A). CD31-mediert endoteliale celle-celle-reaksjoner som er involvert i angiogenese [20]. Figur 4B viser at IL-6 stanse vektor dempes angiogenese påvist ved farging av CD31 og VEGF. For å ytterligere undersøkt om sirkulerende IL-6 til rette for induksjon av angiogenese, en intraperitoneal injeksjon av IL-6 (60 eller 100 ng pr mus, 3 ganger per uke) ble startet en dag før tumor-implantasjon. Som vist på figur 4C, IL-6 utløst angiogenese og endotel-rør dannelse i tumoren ved farging av VEGF, MMP-9 og CD31 i mus med tumorer i 2 uker. Derfor kan induksjon av angiogenese være en av mekanismene som er ansvarlige for tumorvekst med IL-6.
A. Nivået av IL-6 i cellekultursupernatanter og serum fra mus som har svulster med eller uten IL-6 stanse vektoren ble undersøkt ved hjelp av ELISA
in vitro
og
in vivo
. Kolonne, mener tre separate forsøk. Barer, SD. *,
P
0,05. B. Endring i vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF) og matrise metallopeptidase 9 (MMP-9), og CD31 i tumorxenografter ble evaluert ved immunhistokjemisk farging. Resultatene fra representative lysbilder vises. C. Effekt av IL-6 på xenograft tumorvekst og induksjon av angiogenese ble evaluert i mus med tumorer i 2 uker. Tumorceller ble injisert subkutant i mus med eller uten IL-6-injeksjon som angitt i Materialer og Metoder, og tumorvekst undersøkt 2 uker senere. Immunhistokjemi ved hjelp av MMP-9, CD31, og VEGF stained- representative lysbilder ble demonstrert.
Forholdet mellom ekspresjon av IL-6 og DNMT1 i blærekreft
Som vi rapporterte tidligere [21 ], ble høyere DNMT1 nivåer forbundet med aggressiv svulst atferd og EMT endringer i blærekreft. Vi fant det var en signifikant sammenheng mellom positiv farging for IL-6 og DNMT1 på IHC farging av blærekreft prøver (Fig. 5A). Av mRNA og proteinanalyser, redusert IL-6 resulterte i inhibert DNMT1 assosiert med svekket STAT3 og Akt-aktivering (Fig. 5B-C). Vi undersøkte videre hvorvidt IL-6-inhibering redusert DNMT1 ekspresjon via hemming av AKT ved hjelp av et PI3K-inhibitor LY294002 [22], eller nedregulering av STAT3 med STAT3 kort interfererende RNA (siRNA). Som vist i figur 5D, inhibering av Akt fosforylering, men ikke redusert p-STAT3, betydelig svekket DNMT1 uttrykk. Derfor er det foreslått at aktiveringen av AKT kan være ansvarlig for den økte DNMT1 i IL-6-positive blærekreft.
A. IL-6 nivå var positivt korrelert med DNMT1 uttrykk i menneskelige blærekreft prøver (
P
0,0001). Representative lysbilder av en selekterte tumor prøven positiv farging for både IL-6 og DNMT1, og ytterligere tumor prøven negativ for både IL-6 og DNMT1 er vist ved 400 x forstørrelse. B. Effekt av IL-6 på nivå med DNMT1, p-AKT, og p-STAT3 ble undersøkt ved hjelp av Western-blotting (CV, celler transfektert med kontroll-vektoren, IL-6 SV, celler transfektert med IL-6 stanse vektor ). C. Effekt av IL-6 på nivå av DNMT1 og p-AKT ble evaluert ved immunhistokjemisk farging, og resultatene fra representative glass er vist. D. Effekt av IL-6 inhibering av IL-6-nøytraliserende antistoff, p-AKT inhibering av PI3K-inhibitor, og p-STAT3 inhibering av STAT3 siRNA på nivået av DNMT1 ble undersøkt ved Western blotting (W, vill-type; IL -6
-, celler behandlet med IL-6-nøytraliser Ab; STAT3
– celler behandlet med Stat3 siRNA;. PI3K-I, celler behandlet med PI3K hemmer
IL- 6 er knyttet til kliniske resultatet av blæren TCC
median progresjonsfri overlevelse tid i de 85 pasienter full klart CCRT behandling var 36.97 måneder. Ved univariat analyse, positiv farging for IL-6 var signifikant relatert til høyere klinisk stadium, høyere sykdom feilrate etter definitiv behandling og kortere overlevelsestid (tabell 1 og figur 6). resultatene sterkt underst bidraget av IL-6 til prognosen i blærekreft.
A overlevelse forskjell ble demonstrert i samsvar med positiv farging av IL-6. De Kaplan-Meier generelle overlevelseskurver viste at pasienter med høyere nivåer av IL-6 uttrykk hatt kortere overlevelse perioder.
Diskusjoner
Vi demonstrerte at IL-6 ble uttrykt i høyere nivåer i blæren TCC enn i ikke-maligne vev. Videre positiv farging for IL-6 er fortrinnsvis forbundet med muskel-invasiv blære TCC i forhold til lavere stadium Ta-T1 sykdom. Urin nivåer av IL-6 ble også signifikant forhøyet hos pasienter med lokalt avansert blære TCC sammenlignet med pasienter med NMIBC. Derfor kan IL-6 uttrykk være relatert til en mer ondartet fenotype.
For å undersøke om IL-6 var ansvarlig for den aggressive oppførselen til blæren TCC, IL-6 ble undertrykt i blæren kreftceller ved stabil transfeksjon med en lyddemping vektor. Data viste at å hemme IL-6 resulterte i redusert blæretumorvekst
in vitro Hotell og
in vivo
. Videre, IL-6 stanse vektor vesentlig attenuert den invasive egenskaper oppdaget i cellulære analyser invasjon og musemodeller ortotopiske. IL-6 er en viktig aktivator av JAK /STAT3 signalering [10], [11], og aktivert STAT3 signalering har blitt rapportert å bidra til onkogenesen ved å fremme proliferasjon og EMT [18], [23]. Videre har STAT3 aktivering vist en rolle i disponerende uroteliale basal celler mot CIS progresjon vei inn invasiv blærekreft [24]. Våre data viser at inhibering av IL-6 svekkede STAT3 aktivering forbundet med økt E-cadherin og redusert VEGF og MMP-9 uttrykk. Økt uttrykk av VEGF og MMP-9 er rapportert å korrelere med EMT endring og dårlig prognose av blærekreft [25], [26]. Derfor er det sannsynlig at STAT3 aktivering spiller en rolle i IL-6 sendende til nedstrøms mål som regulerer EMT og invasivitet.
Vi viste at IL-6-nivåer i serum og urin ble forhøyet i en undergruppe av pasienter med muskel-invasiv blærekreft, i samsvar med annen forskning [13], [27]. Angiogenese er en av de mekanismer som fremmer tumorprogresjon, og ekspresjon av angiogene faktorer er foreslått å ha prediktiv verdi for behandlingsrespons og utfall hos pasienter med kreft [28]. Videre har IL-6 blitt rapportert å spille flere funksjoner i angiogenese og vaskulære modellering [29], og øke angiogenese ved transkripsjonen av VEGF og MMP-9 i STAT3 avhengig måte. STAT3 aktivering ble demonstrert til å modulere ekspresjonen av gener som medierer angiogenese;
e
.
g
., VEGF [30]. Følgelig koblingene mellom IL-6, angiogenese, og markedsføring av blærekreft i tumorbærende mus ble videre undersøkt i denne studien. Ved hjelp av en xenograft tumormodell, våre data har vist at IL-6-nivå positivt forbundet med angiogenese og STAT3 aktivering. Disse resultatene antydet at induksjon av angiogenese formidles av STAT3 aktivering kan være en av de mekanismer som ligger til grunn for aggressivitet av IL-6-positive blærekreft.
Vi har tidligere rapportert [21] som DNMT1 kan være en signifikant klinisk prediktor av blærekreft. Studier har identifisert at DNMT1 ekspresjon kan bli direkte endres av pro-inflammatoriske cytokiner så som IL-6 i noen former for ondartede sykdommer [5], [31], [32]. En positiv korrelasjon mellom IL-6-positive prøvene og kjerne farging for DNMT1 ble funnet av IHC analyse i denne studien. Forholdet mellom IL-6 /STAT3 signalering og DNMT1 i blærekreft ble ytterligere undersøkt for å se om regulering av IL-6 /STAT3 signalering resulterer i forandringer av DNMT1 uttrykk. MRNA og protein-analyse viste at hemmet IL-6 signaltrykkes atom DNMT1 uttrykk assosiert med redusert p-AKT og p-STAT3. Men direkte hemme STAT3 av STAT3 siRNA hadde ingen åpenbar effekt på DNMT1 uttrykk. Fosforylering av Akt-kinase er blitt rapportert å være mekanismen som er ansvarlig for forbedret ekspresjon av DNMT1 stimulert av IL-6 [33], [34]. Når vi blokkert fosfoinositid 3-kinase /Akt signalering ved hjelp av den spesifikke inhibitor LY294002, ble dempningen av AKT aktivering assosiert med redusert DNMT1. Vi foreslår derfor at aktivert IL-6 signal forbedret aktivering av DNMT1 medieres ved aktivering av Akt i blæren TCC.
Identifisering av potensielle faktorer har stor betydning for utvikling og valg av molekylære mål i kreftbehandling. Våre eksperimentelle data indikerte at nivået av IL-6 er viktig for den aggressive oppførsel tumor sett i blærekreft. Derfor vi videre undersøkt prediktiv kraft av IL-6 om kliniske resultatet av blæren TCC etter klart CCRT. Våre data viser at ekspresjon av IL-6 var signifikant assosiert med en lavere hastighet fullstendig respons etter behandling, en høyere sykdom feilrate og en kortere overlevelsesperiode, viser en rolle av IL-6 i å forutsi prognose. Resultatene oppnådd fra denne studien data viste at økt IL-6-produksjon er kritisk i tumor aggressivitet og prognose av blærekreft. Vi skissert de viktigste signalveier som er tenkt å knytte IL-6 til blærekreft (Fig. 7).
I tillegg til IL-6, ble flere cytokiner rapportert å være viktig i studier av blæren kreft. TNF-α ble vist å stimulere blærecancerceller til å produsere MMP-9, som har vært implisert i tumor invaαsion og metastase [35]. Mian et. al. rapportert at IL-8 blokade inhiberte signifikant uttrykk for MMP-2 og MMP-9, noe som resulterer i avtagende invasjon [36]. Videre er økt ekspresjon av IL-8 korrelert med dårlig prognose av blærekreft [37]. Betennelse kan betraktes som muliggjør for sitt bidrag til anskaffelse av kjerne kjennetegn evner. De biologiske mekanismene som knytter tumor aggressivitet i IL-6, er IL-8 og TNF-α ikke klart forstått. Spørsmålet må vurderes nærmere i fremtiden.
Vår studie har noen begrensninger. Først i ettertid undersøkte vi den prediktive verdi av IL-6 i pasienter med blærekreft bare av den fraksjon av positiv farging. Dessuten er det en retrospektiv analyse av en befolkning med ulike kliniske faser fra en enkelt institusjon. Derfor er ytterligere undersøkelser av nivåene av IL-6 hos pasienter med ulike stadier i en prospektiv studie nødvendig.
Til sammen våre funn tyder på at IL-6 er avgjørende for aggressiv tumorvekst, og det kliniske utfallet av blærekreft etter definitiv strålebehandling. Dataene støtter den nye hypotesen om at IL-6 er en klinisk signifikant prognostisk prediktor og kan representere et passende mål for blærekreft behandling.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
IL-6 hemming svekket invasjonen kapasitet. Den invasive kapasitet i blærecancerceller med eller uten IL-6 stanse vektoren ble evaluert. Resultatene er vist ved representative lysbilder og kvantitative data. Kvantifisering av invasjon evnen til ble telling av antallet av invaderende celler for hver tilstand. Y-aksen representerer forholdet normalisert med verdien av den respektive cellelinje under kontroll tilstand. Kolonne, mener tre separate forsøk; Bar, SD.
