Abstract
Bakgrunn
Humant papillomavirus (HPV) er en utløsende faktor for tonsill- plateepitelkarsinom (TSCC) og pasienter med HPV positive (HPV
+) TSCC har en bedre klinisk resultat enn de med HPV negative (HPV
-) TSCC. Men siden ikke alle pasienter med HPV
+ TSCC responderer på behandling, er flere biomarkører nødvendig sammen med HPV status å bedre forutsi respons på behandlingen og å individualisere behandlingen. For dette formålet, undersøkte vi om antall tumor infiltrerer cytotoksiske og regulatoriske T-celler i TSCC korrelert til HPV status og klinisk utfall.
Metoder
Formalin fast parafin innebygde TSCC, tidligere analysert for HPV DNA, avledet fra 83 pasienter, ble inndelt i fire grupper avhengig av HPV status av svulsten og klinisk resultat. Svulster ble farget av immunhistokjemi og evaluert for antall infiltrerende cytotoksiske (CD8
+) og forskrifter (foxp3
+) T-celler.
Resultater
En høy CD8
+ T-celleinfiltrasjon ble signifikant positivt korrelert til en god klinisk resultat i både pasienter med HPV
+ og HPV
– TSCC pasienter. Tilsvarende vil en høy CD8
+ /foxp3
+ TIL ratio var korrelert til en 3 års sykdomsfri overlevelse. Videre HPV
+ TSCC hadde i forhold til HPV
-TSCC, høyere antall infiltrerende CD8
+ og foxp3
+ T-celler.
Konklusjoner
som konklusjon, en positiv sammenheng mellom et høyt antall infiltrerende CD8
+ celler og klinisk resultat indikerer at CD8
+ celler kan bidra til en gunstig klinisk resultat i TSCC pasienter, og kan eventuelt tjene som en biomarkør. Likeledes CD8
+ /foxp3
+ celle forholdet kan potensielt brukes til samme formål
Citation. Näsman A, Romanitan M, Nordfors C, Grün N, Johansson H, Hammarstedt L , et al. (2012) Tumor infiltrerer CD8
+ og foxp3
+ lymfocytter Correlate til klinisk resultat og humant papillomavirus (HPV) Status i Tonsillar Cancer. PLoS ONE 7 (6): e38711. doi: 10,1371 /journal.pone.0038711
Redaktør: Joseph Califano, John Hopkins Medical School, USA
mottatt: 07.02.2012; Godkjent: 11 mai 2012; Publisert: 12 juni 2012
Copyright: © 2012 Näsman et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av den svenske Cancer Society (TD, 100258), det svenske Medical Research Council (TD, TR, K2011-56X-15282-07-6), Stockholm Kreftforeningen (TD, 101081), Henning og Ida Perssons Foundation (TD), Karolinska Institutet (TD, TR) og Stockholm City Council (TD, TR, EMU, 2010067). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser. Medforfatter Torbjörn Ramqvist er en PLoS ONE Editorial styremedlem. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer.
Innledning
Nyere studier fra Europa og USA har rapportert en økning i forekomsten av orofaryngeal plateepitel cell carcinoma (OSCC), spesielt for tonsill- plateepitelkarsinom (TSCC). Denne økningen er blitt tilskrevet en økt forekomst av humant papillomavirus (HPV) infeksjon [1], [2], [3], [4]. Følgelig en 7-dobling i HPV-positive (HPV
+) TSCC, parallelt med en nedgang i HPV-negative (HPV
-) TSCC er vist for pasienter i Stockholm, Sverige, de siste tre tiår [3] og en tilsvarende utvikling har blitt vist i USA [2]. Viktigere også, HPV har vist seg å være en gunstig prognostisk faktor for pasienter med OSCC inkludert TSCC [5], [6], [7], [8]. Men ikke alle pasienter med HPV
+ TSCC så bra og dermed, selv om HPV i seg selv er en viktig prognostisk markør, flere biomarkører er nødvendig i TSCC å bedre forutsi behandlingsrespons før individualisert behandling kan gjennomføres i praksis.
Det har vært antydet at HPV
+ og HPV
-TSCC er to forskjellige tumorsykdom enheter med forskjellig tumor og pasientens egenskaper. Mens HPV assosiert svulster, inkludert HPV
+ TSCC er drevet av virale onkogener, f.eks E6 og E7, og har færre mobilnettet mutasjoner, HPV
-TSCC utvikle ved akkumulering av genetiske forandringer i hovedsak forårsaket av miljøfaktorer som røyking [9]. Som fremmede antigener, kan E6 og E7 fungere som potensielle mål for en immunrespons mot HPV-induserte tumorer og
in vitro
studier har vist at T-celler isolert fra HPV
+ livmorhalskreft kan gjenkjenne og drepe E6 og E7-uttrykkende tumorceller [10]. Videre er tumorspesifikke T-celler påvises i de cervikale kreftpasienter, selv ved lave og utilstrekkelige nivåer [11], [12], og tilstedeværelsen av tumor-infiltrerende lymfocytter (Tīlss) har blitt koblet til en bedre prognose [13], [ ,,,0],14]. Det har også blitt observert i andre tumortyper med ingen kjent viral krets [15], [16]. Imidlertid kan Tīlss fungere som et tveegget sverd. Mens en uttalt infiltrasjon av CD8
+ lymfocytter har vært knyttet til en gunstig prognose i mange kreftformer, i rollen som infiltrerende T regulatoriske celler (tregs) (ofte definert som foxp3
+ lymfocytter) er ofte det motsatte [17] . Tregs kan fremme tumorprogresjon, og økte nivåer av tregs er observert hos pasienter med en rekke svulster og knyttet til en dårligere prognose [18], [19], selv om det finnes unntak hvor treg infiltrasjon har vært knyttet til en gunstig prognose [ ,,,0],20], [21]. Likevel rolle infiltrere CD8
+ og foxp3
+ lymfocytter har, så vidt vi vet, ikke blitt undersøkt i TSCC i korrelasjon til pasientenes prognose og HPV status.
Hensikten med denne studien var å undersøke tilstedeværelse av tumor infiltrerer CD8
+ og foxp3
+ T-celler i TSCC i forhold til kliniske utfall og tumor HPV status, og for å fastslå om disse Tīlss kan potensielt brukes i klinikken som biomarkører enten alene, eller sammen med HPV status av tumoren for å forutsi klinisk resultat.
TSCC med (A) lav og (B) høy CD8
+ infiltrasjon og (C) og lavt (D) høy foxp3
+ infiltrasjon.
Materialer og metoder
Etikk erklæringen
studiet ble godkjent av Etisk Komité ved Karolinska Institutet, Stockholm, Sverige, i henhold til de etiske tillatelsene 2005 /431-31 /4, 2005 /1330-1332 og 2009 /1278-1231 /4. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle deltakerne i studien.
A) antall CD8
+ Tīlss, B) antall foxp3
+ Tīlss og C) CD8
+ /foxp3
+ celle ratio. «Good» og «dårlig» betegner klinisk utfall. I tillegg til de fire TSCC gruppene som er definert i Methods delen, har forskjellige kombinasjoner av grupper også blitt sammenlignet. Dermed «HPV
+ god» tilsvarer gruppe A; «HPV
+ dårlig» til gruppe B; «HPV
– gode» til gruppe C; «HPV
– dårlig» til gruppe D; HPV
+ grupper A + B, HPV
– grupper C + D; «God» til grupper A + C; og «dårlig» til grupper B + D. For bedre å visualisere de detaljer i den nedre del av figur 1C den øvre delen av diagrammet, inkludert den øvre whisker (ved et forhold på 80) ble utelatt.
A) HPV
+ TSCC og B) HPV
-TSCC pasientene stratifisert med antall CD8
+ Tīlss. Høy og lav betegner CD8
+ TIL telle over og under medianverdiene av 33 for HPV
+ TSCC og 4,4 HPV
-TSCC. C) HPV
+ TSCC og D) HPV
-TSCC pasienter stratifisert ved forholdet mellom CD8
+ /foxp3
+ celle-forhold. Høy og lav betegner CD8
+ /foxp3
+ celle ratio over og under 1.
Pasienter og Material
kohorten besto av alle pasienter diagnostisert 2000- 2006 med TSCC (ICD-10 C09.0-9), som ble behandlet med den hensikt å kurere ved Karolinska Universitetssjukhuset, Stockholm, Sverige, og hadde tilgjengelige før behandling parafin innebygd tumor biopsier. Behandling besto av akselerert strålebehandling (RT) (1,1 + 2,0 Gy /dag for 4,5 uker, totaldose: 68 Gy) eller konvensjonell RT (2,0 Gy /dag, for 6,5-7 uker, totaldose: 68 Gy) eller, i fire tilfeller, induksjon kjemoterapi etterfulgt av samtidig RT (CRT). Etter behandling ble pasientene fulgt opp ved klinisk undersøkelse hver 3. måned i løpet av de første 2 årene og hver 6. måned det tredje året.
Data om tilstedeværelsen av høyrisiko HPV-typer (tilstedeværelse av HPV DNA ved PCR) og p16
INK4a status (ved immunhistokjemi) ble hentet fra tidligere studier [3], [7], [22] og pasienter ble delt inn i 4 grupper (AD) i utgangspunktet (for ytterligere detaljer se tabell 1 og 2); (A) et tilfeldig utvalg (n = 31) av pasientene (n = 109) med HPV
+, p16
INK4a positive ( 75% p16
INK4a positive tumorceller) (p16
+) svulster med en god klinisk utfall (definert som ingen tilbakefall og levende 3 år etter diagnose); (B) alle pasienter (n = 21) med HPV
+, p16
+ svulster med dårlig klinisk utfall (definert som tilbakefall i sykdommen og /eller døde av sykdom innen 3 år etter diagnose); (C) alle pasienter (n = 11) med HPV
-, p16
INK4a negative (p16
-) svulster med en god klinisk utfall; (D) alle pasienter (n = 20) med HPV
-, P16
– svulster med dårlig klinisk resultat (tabell 1). En prøve av 31 av de 109 opprinnelige svulster i gruppe A ble valgt for å oppnå en mer lik antall pasienter fra hver gruppe for videre studier av Tīls, ettersom denne gruppen domineres med 68% av det totale antall tumorer. Pasienter med HPV
+, p16
– (n = 17) og HPV
-, P16
+ tumorer (n = 4) ble ekskludert fra videre analyse for å oppnå homogene grupper, og å inkludere kun HPV
+ TSCC uttrykke HPV E6 /E7, siden p16
INK4a uttrykk i HPV
+ svulster regnes som en indikasjon på E7 uttrykk [23]. Pasienter som dør av andre årsaker enn TSCC ble også ekskludert. All HPV
+ TSCC var HPV16
+ med unntak av en svulst med HPV33 og ett med HPV56.
Immunohistochemistry
En standard streptavidin-biotin peroksidase metoden ble ansatt på 4 mikrometer formalinfiksert, parafininnebygd, deler ved hjelp av mus monoklonale antistoffer anti-CD8 (fortynning 1:40; klone 4B11, Novocastra Laboratories) og anti-foxp3 (fortynning 1:100, klone 236A /E7; eBioscience). Alle delene ble deretter inkubert med biotinylert sekundært anti-mus-antistoff (1:200, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA), etterfulgt av inkubering med avidin-biotin-kompleks-PO hjelp av VECTASTATIN® Elite® ABC-kit (Vector Laboratories) og utviklet i DAB.
CD8
+ og foxp3
+ svulst lymfocytt infiltrasjon ble evaluert av to forskere, blindet for klinisk utfall, som hver teller cellene i 10 tilfeldig utvalgte høy effekt felt ( 40 ×) per prøve. Den midlere verdi ble rapportert for hver tumor. Forholdet mellom tumor infiltrerende CD8
+ og foxp3
+ celler ble beregnet for hver enkelt tumor, ble gjennomsnittet av disse forhold så beregnet pr undergruppe.
Statistical Analysis
Tester for sammenligninger av kontinuerlige data ble utført ved hjelp av lineære regresjonsmodeller. Resultatene ble presentert som gjennomsnittsforskjeller eller odds-ratio sammen med 95% konfidensintervall. Sammenlikninger av pasienten og tumoregenskaper mellom de forskjellige gruppene i tabellene 1 og 2 ble utført ved anvendelse av Fishers eksakte test (to-halet). Det ble utført alle disse analysene i STATA11 (StataCorp). En p-value≤0.05 ble ansett som signifikant.
Sykdomsfri overlevelse (DFS) ble definert som tiden fra dato for diagnose til datoen for den siste kjente anledning at pasienten var sykdomsfri eller dato for tilbakefall av sykdom (lokalt, regionalt eller fjernmetastaser). Død uten dokumentert tilbakefall ble sensurert på tidspunktet for dødsfallet. Kaplan-Meier-kurver ble brukt til å presentere overlevelsesdata og log-rank test ble brukt for å sammenligne overlevelseskurver. I den multivariate analyser, ble en Cox modellen som brukes for å justere for kovariatene. Tosidige p-verdier ble rapportert. Disse analysene ble utført i SPSS (IBM SPSS Statistics, v20).
Resultater
Kliniske og patologisk Parametere av Pasienter og Svulster
Detaljer om alle pasienter og deres svulster vises i tabellene 1 og 2. Som beskrevet ovenfor, ble pasientene delt inn i 4 studiegrupper avhengig av tumor HPV status og klinisk utfall i løpet av 3 år. Den eneste signifikante forskjellen mellom de ulike studiegrupper var at pasienter med HPV
-tumors og god klinisk utfall hadde en lavere klinisk stadium enn pasienter med dårlig klinisk utfall (p = 0,005).
Det var ingen forskjeller med hensyn til noen av de studerte kliniske parametre mellom prøven av 31 pasienter, og den totale befolkning på 109 pasienter med HPV
+ TSCC og god klinisk resultat (tabell 2).
The Number of CD8
+ Tīlss korrelater til HPV Status og klinisk resultat for pasienter med TSCC
TSCC pasienter med et godt klinisk resultat hadde signifikant høyere antall CD8
+ Tīlss i sine tumorer (figur 1), enn de med dårlig klinisk utfall, uavhengig av tumor HPV status (gjennomsnitt 50,4 og 12,8 resp, p. 0,001), (tabell 3 og figur 2A). Videre, når stratifisering for HPV-status, HPV
+ TSCC, fra pasienter med en god klinisk resultat, hadde flere CD8
+ Tīlss enn de fra pasienter med dårlig klinisk utfall (betyr 61,4 og 21,0 resp., P = 0,002 ) (tabell 3). Gjennomsnittlig antall CD8
+ Tīlss var også signifikant høyere i HPV
-TSCC fra pasienter med god klinisk resultat, sammenlignet med HPV
-TSCC fra pasienter med dårlig klinisk utfall (gjennomsnitt 19,4 og 4,7 resp. , p = 0,001).
Videre HPV
+ TSCC hadde en signifikant høyere gjennomsnittlig antall tumor infiltrerer CD8
+ lymfocytter sammenlignet med HPV
-TSCC (gjennomsnitt 45,6 og 9,9 resp. , p 0,001) (figur 2A). Denne forskjellen var fortsatt betydelig når det justeres for prognosen (p = 0,001).
For å studere sammenhengen mellom CD8
+ Tīlss og DFS i HPV
+ TSCC pasienter, en Kaplan-Meier analyse ble utført . HPV
+ og HPV
-TSCC pasienter ble dikotomisert basert på medianverdien (33 og 4,4 henholdsvis) av CD8
+ Tīlss. Som vist i Figur 3A pasienter med HPV
+ tumorer og et høyt antall CD8
+ TIL hadde en kumulativ overlevelse på 84% i forhold til 55% hos pasienter med lavt antall CD8
+ (p = 0.02 ). Lignende kumulative overlevelse trender (64% og 36%, respecitvely) ble også observert for HPV
– pasienter, men disse forskjellene var ikke statistisk signifikant (figur 3B). Spesielt for pasienter med HPV
+ TSCC Kaplan-Meier-kurver ble beregnet på prøve av TSSC tilhører gruppe A og alle TSCC fra gruppe B (figur 3A).
The Number of foxp3
+ Tīlss korrelater til HPV Status i TSCC
En signifikant høyere antall foxp3
+ Tīlss (figur 1) ble observert i HPV
+ TSCC i forhold til at i HPV
-TSCC (gjennomsnitt 33,2 og 14,7, resp, p. 0,001) (figur 2B). Når du justerer for prognosen, denne forskjellen var fremdeles signifikant (p = 0,001). Men ingen forskjeller i nivåene av foxp3
+ Tīlss ble observert i svulster fra pasienter med en god eller dårlig klinisk utfall (gjennomsnitt 27,9 og 24,6, resp.) (Tabell 3).
En høy CD8
+ /foxp3
+ ratio er knyttet til en god klinisk utfall hos pasienter med TSCC
Som en måling av den relative antall cytotoksiske og regulatoriske T-celler i svulstene, forholdet mellom svulsten infiltrere CD8
+ og foxp3
+ celler ble beregnet for hver svulst. En høy CD8
+ /foxp3
+ celle forholdet er en indikasjon på at de regulatoriske T-cellene er i mindretall, og dermed mindre sannsynlighet for å overskygge funksjon av cytotoksiske T-celler. For pasienter med TSCC høy CD8
+ /foxp3
+ ratio var positivt korrelert til en god klinisk resultat justert for prognosen (p = 0,04) (Tabell 3). Men forskjellen er relatert til prognose i CD8
+ /foxp3
+ TIL forholdet var ikke signifikant når pasienter med HPV
+ TSCC eller HPV
-TSCC ble analysert separat, selv om tendensen var lik som ble observert for TSCC pasienter generelt.
for å studere sammenhengen mellom høy /lav CD8
+ /foxp3
+ tIL forhold og DFS for TSCC, ble en Kaplan-Meier analyse utført. HPV
– og HPV
+ TSCC pasienter ble dikotomisert basert på en CD8
+ /foxp3
+ TIL ratio over eller under 1. Som vist i figur 3D pasienter med HPV
-TSCC og en høy CD8
+ /foxp3
+ tIL forholdet hadde en kumulativ overlevelse på 73% sammenlignet med 28% for pasienter med lav CD8
+ /foxp3
+ tIL ratio (p = 0,03) . Tilsvarende HPV
+ TSCC pasienter med høy CD8
+ /foxp3
+ TIL forholdet hadde en høyere kumulativ overlevelse (82%) enn de med lav CD8
+ /foxp3
+ tIL ratio (54%, p = 0,04) (Figur 3C).
Sammenheng mellom kliniske parametre, CD8
+ og foxp3
+ celler og 3 års DFS hos pasienter med TSCC
Når CD8
+ og foxp3
+ Tīlss verdier for alle TSCC, stratifisert for HPV-status, ble analysert for alder, kjønn eller klinisk stadium, ingen korrelasjon ble funnet (data ikke vist).
Hazard ratio (HR) ble beregnet separat for HPV
+ og HPV
-TSCC, ved hjelp av både univariate og multivariate tester (Tabell 4). For HPV
+ TSCC hazard ratio for et høyt antall CD8
+ celler var 0,27 (p = 0,029), mens for HPV
-TSCC hazard ratio for en høy CD8
+ /foxp3
+ ratio var 0,27 (p = 0,048). For å avgjøre om CD8
+ celler og CD8
+ /foxp3
+ ratio var uavhengige prognostiske faktorer, ble en multivariat Cox analyse utført med klinisk stadium, alder og kjønn som kovariater (tabell 4). For HPV
+ TSCC, både antall CD8
+ celler og alder ble uavhengig signifikant korrelert til 3 års DFS (p = 0,034 og p = 0,009, resp.). For HPV
-TSCC både CD8
+ /foxp3
+ forhold og scenen var signifikant uavhengig korrelert til 3 års DFS (p = 0,023 og p = 0,039, resp.). Tilsvarende vil en høy CD8
+ /foxp3
+ ratio korrelert til en 3-års DFS både i univariate og multivariate analyser også for HPV
+ TSCC (HR 0,33, p = 0,048 og HR 0,23, p = 0,015 henholdsvis) (data ikke vist).
Diskusjoner
i denne studien fant vi en signifikant sammenheng mellom et høyt CD8
+ T-celle infiltrasjon og klinisk utfall for både pasienter med HPV
+ og HPV
-TSCC, samt mellom en høy CD8
+ /foxp3
+ tIL forhold og sykdomsfri overlevelse for både pasienter med HPV
+ og HPV
-TSCC. I tillegg viste vi en sammenheng både mellom tumor infiltrerer CD8
+ og foxp3
+ T-celler til HPV-status i TSCC.
Det faktum at CD8
+ infiltrasjon var mer uttalt og påvirket prognosen positivt i denne studien for HPV
+ TSCC, kan være en viktig grunn til at de fleste HPV
+ TSCC har et godt klinisk resultat i forhold til HPV
-TSCC [6], [7 ]. Dette vil være i tråd med eksperimentelle studier som viser viktigheten av immunsystemet for å bekjempe HPV
+ hode og hals plateepitelkarsinom (HNSCC) [24]. Resultatet er også i samsvar med mange studier på svulster fra andre nettsteder, f.eks for kolon og livmorhalskreft [13], [14], [15], [18]. Spesielt, i livmorhalskreft, hvor det store flertallet av svulster er HPV
+, både et høyt antall CD8
+ TIL og en høy CD8
+ /regulatoriske T-celle-forhold ble korrelert til fravær av lymfeknutemetastase [14]. Et lignende resultat har også blitt publisert for HNSCC, hvor Ogino og kolleger viser en positiv sammenheng mellom et høyt CD8
+ T-celle infiltrasjon og forårsake spesifikk overlevelse [25]. I tillegg er tilstedeværelsen av HPV16-spesifikke T-celler i HPV
+ HNSCC ble nylig vist, selv om korrelasjon til prognose ikke ble undersøkt [26]. Den sterke positiv korrelasjon mellom CD8
+ Tīlss og god klinisk resultat for pasienter med TSCC indikerer at vurderingen av CD8
+ Tīlss kunne brukes som en ekstra prognostisk biomarkør i kombinasjon med svulst HPV status.
Vi viste også at en høy CD8
+ /foxp3
+ T-celle ratio signifikant korrelert til en sykdomsfri overlevelse i både pasienter med HPV
+ og HPV
-TSCC. Tidligere publikasjoner har knyttet foxp3
+ Tīlss til en dårligere prognose i f.eks eggstokkreft og brystkreft [16], [18]. Videre har en høy prosentandel av Tregs blitt korrelert til en dårlig 5 års overlevelse på livmorhalskreft [27]. Men det er også tilfeller hvor foxp3
+ Tīlss har vært knyttet til en gunstig prognose som f.eks i tykktarmskreft, Hodgkin lymfom og HNSCC [20], [21], [28]. Forbindelsen oppnådd i den foreliggende undersøkelse resultat indikerer at infiltrerende T-celler også er av betydning for klinisk resultat for pasienter med HPV
-TSCC, men muligens i mindre grad. Vurderingen av CD8
+ /foxp3
+ T-celle-forhold kan således også bli brukt som en klinisk prognostisk markør for pasienter med HPV
+ eller HPV
-TSCC.
viktigere, estimering CD8
+ og foxp3
+ Tīlss av IHC kan utføres ved patologi enheter i sykehus. HPV status for TSCC allerede vurderes rutinemessig i noen klinikker, f.eks ved Karolinska Universitetssjukhuset i Stockholm, og hvis det brukes sammen med evaluering av CD8
+ og foxp3
+ Tīlss i patologi enheter, kan man oppnå en bedre prediksjon av kliniske utfall. Imidlertid er størrelsen på feltet evaluert og cut-off-verdier må bli nøyaktig definert.
I tillegg observerte vi at HPV
+ TSCC hadde en signifikant høyere infiltrasjon av både CD8
+ og foxp3
+ celler enn HPV
-TSCC. Dette var ikke uventet gitt at HPV
+ TSCC uttrykker utenlandske virale antigener. Faktisk er de data indikerer at, selv om immunforsvaret har mislyktes i å hindre utvikling av HPV
+ TSCC, er det fortsatt et immunologisk forskjell mellom HPV
+ og HPV
-TSCC.
det er viktig å merke seg at nærværet av Tīlss i TSCC er ikke nok for tumor avvisning. Imidlertid har det blitt demonstrert i en musemodell som en intakt immunforsvar er viktig for en fullstendig svulst klaring ved strålebehandling [24]. Videre er det mulig at bestråling kan aktivere immunresponsen mot både gjenværende levedyktige celler i den opprinnelige tumor og mot lymfeknutemetastase.
Nylig har mange tumor biomarkører blitt undersøkt med hensyn til prognosen for pasienter med HNSCC [ ,,,0],29], [30], [31], [32]. Men i de fleste av disse studiene HPV status av svulstene ikke ble tatt hensyn til, og ofte svulster fra ulike HNSCC sekundære områder ble gruppert sammen når biomarkører ble korrelert til prognose. Resultatene av denne studien viser betydningen av skille tumorer, avhengig av HPV-status. I tillegg, i studier av denne typen, tumorene bør også være stratifisert avhengig av tumor sekundært område, ettersom f.eks den total overlevelse for pasienter med HNSCC varierer avhengig av både HPV status og tumor sekundært område.
Det er noen begrensninger i denne studien. For det første er det en retrospektiv studie med alle pasienter diagnostisert med TSCC i Stockholm i løpet av 2000-2006 og behandlet med hensikt å kurere. Det er imidlertid viktig å merke seg at behandlingen i løpet av denne perioden ble standardisert med konvensjonelle /akselerert RT. I tillegg tidligere publikasjoner, analysere det kliniske utfallet av pasientene i denne studien, har ikke klart å påvise forskjeller i klinisk resultat for pasienter med orofaryngeal kreft avhengig av behandling [33], [34].
For det andre , mest TSCC i dag er HPV
+ med en gunstig klinisk resultat for pasientene. Derfor ble denne gruppen redusert i denne studien ved randomisering. På den annen side, var vi ikke i stand til å påvise noen signifikante forskjeller mellom studieprøven og det totale materialet i denne gruppen. En annen begrensning er de få antall pasienter i HPV
– grupper, selv om alle pasienter ble inkludert med denne funksjonen. For bedre å studere HPV
-TSCC befolkningen, bør andre medisinske sentre bli inkludert.
Til slutt, vi har ikke vurdert om svulsten infiltrerer CD8
+ og foxp3
+ celler er målrettet mot spesifikke tumorassosierte antigener eller analysert for funksjonell CD8
+ med f.eks granzyme B. Videre, siden foxp3, selv ved lave nivåer, kan forbigående indusert i CD4
+ og CD8
+ T-celler ved stimulering, alt foxp3
+ Tīlss kanskje ikke tregs [35]. Imidlertid, for formålet med denne studien, dvs. for å finne klinisk relevante og lett identifiserbare markører, dette var ikke av betydning, selv om det ville være av interesse å løse disse spørsmålene i andre studier.
Som konklusjon, tumor-infiltrerende CD8
+ og foxp3
+ celler i TSCC vise forskjellige profiler avhengig av tumor HPV status og klinisk utfall. Således, ved å kombinere nærvær av CD8
+ T-celler og /eller CD8
+ /foxp3
+ celle-forhold med HPV-status, kan være av additiv prognostisk verdi, og for bedre individualizing pasientbehandling.
