Abstract
Bakgrunn
T-celle immunoglobulin mucin-3 (Tim-3) har blitt identifisert som en negativ regulator av anti -tumor immunitet. Nyere studier markere den viktige rollen som Tim-3 i CD8
+ T-celle utmattelse som foregår i både mennesker og dyr kreftmodeller. Imidlertid er arten av Tim-3-ekspresjon i tumorcellen, og den mekanismen som det inhiberer antitumorimmunitet er uklare. Denne studien tar sikte på å bestemme Tim-3 er uttrykt i livmorhalskreftceller og for å vurdere rollen til Tim-3 i livmorhalskreft progresjon.
Metodikk
En totalt 85 livmorhals vevsprøver inkludert 43 menneske livmorhalskreft, 22 livmorhalsen (CIN) og 20 kroniske cervisitt var involvert. Tim-3-ekspresjon i tumorceller ble funnet og ble funnet å korrelere med clinicopathological parametere. Samtidig ekspresjon av Tim-3 ble bestemt ved hjelp av RT-PCR, Western Blot og konfokal mikroskopi i livmorhalskreft cellelinjer, HeLa og Siha. Migrasjon og invasjon potensialet av Hela-celler ble evaluert etter inhibering Tim-3 ekspresjon ved ADV-antisense Tim-3.
Konklusjoner
Vi fant at Tim-3 ble uttrykt på et høyere nivå i de kliniske livmorhalskreftceller sammenlignet med CIN og kronisk cervicitis kontroller. Vi støttet dette funnet ved å bekrefte tilstedeværelse av Tim-3 mRNA og protein i livmorhalsen cellelinjer. Tim-3-ekspresjon i tumorceller korrelerte med clinicopathological parametere. Pasienter med høyt uttrykk for Tim-3 hadde en betydelig metastatisk potensial, avanserte kreft karakterer og kortere total overlevelse enn de med lavere uttrykk. Multivariat analyse viste at Tim-tre uttrykk var en faktor for å forutsi prognosen av livmorhalskreft. Betydelig, nedregulering av ekspresjon av Tim-3-proteinet inhiberte migrering og invasjon av HeLa-celler. Vår studie tyder på at uttrykket av Tim-3 i tumorceller kan være en uavhengig prognostisk faktor for pasienter med livmorhalskreft. Videre kan Tim-tre uttrykk fremme metastatisk potensial i livmorhalskreft
Citation. Cao Y, Zhou X, Huang X, Li Q, Gao L, Jiang L, et al. (2013) Tim-tre uttrykk på livmorhalskreft Fremmer tumormetastaser. PLoS ONE 8 (1): e53834. doi: 10,1371 /journal.pone.0053834
Redaktør: Pierre Busson, Institute of Cancerology Gustave Roussy, Frankrike
mottatt: 27 september 2012; Godkjent: 06.12.2012; Publisert: 15 januar 2013
Copyright: © 2013 Cao et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne artikkelen ble støttet av Science Foundation National of China (nr 81001049) og National Science Fund for Distinguished Unge Forskere i Kina (nr 81025011). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Aktuelle studier fortsetter å demonstrere en sterk sammenheng mellom Tim-tre uttrykk og tumor-assosiert immunsuppresjon [1] – [3]. Sakuishi et al [4] fant at Tim-3 ble uttrykt på CD8
+ tumor-infiltrerende lymfocytter (Tīlss) i mus med tumorer. All Tim-3
+ Tīlss coexpress PD-1, og denne type Tīls representerer den dominerende fraksjon av T-celler infiltrere tumorer. Tim-3
+ PD-1
+ Tīlss oppviser den mest alvorlige oppbrukt fenotype som definert ved unnlatelse av å spre seg og produserer IL-2, TNF og IFN-γ. Kombinert målretting av Tim-3 og PD-1 veier er mer effektivt for å gjenopprette anti-tumor immunitet enn målretting enten veien alene. Zhou et al [5] detekteres det samme fenomen i mus med disseminert akutt myelogen leukemi. Selv i melanomapasienter er oppregulering av Tim-3 og PD-1-ekspresjonen også funnet å være assosiert med tumor-antigen-spesifikke CD8
+ T-celle-dysfunksjon [6]. I vår tidligere studie har vi funnet at Tim-3 er fortrinnsvis uttrykt i lymfompasienter-avledet endotelceller og undertrykket aktivering av CD4
+ T-lymfocytter gjennom aktivering av interleukin-6-STAT3 pathway. Tim-3 også til rette for etablering av lymfom immuntoleranse [7]. Men om Tim-3 er også uttrykt på kreftceller i andre nonhematologic kreft forblir et åpent spørsmål.
Livmorhalskreft er en svulst som besitter forskjellige tumorassosierte antigener (TAA). Humane papillomavirus (HPV) er blitt vist å forårsake progressive endringer i livmorhalsen epitelet, noe som fører til kreft i livmorhalsen. Mer enn 99% av livmorhalskreftformer havn HPV (hovedsakelig HPV-16 og HPV-18). E6 og E7 er de to proteinene uttrykt av det virus som er nødvendige for initiering og progresjon av kreft [8]. Flere studier [9], [10] viser at det finnes andre mulige roller som Fas-Fasl system og tap av HLA klasse I for immun flukt i livmorhalskreft. Fordi mange veier er potensielt involvert i livmorhalskreft, vi lurte på om Tim-3, et antigen som har vært innblandet i utviklingen av ulike kreftformer, kan også spille en rolle i utviklingen av livmorhalskreft. I tillegg er våre tidligere studie fant at Tim-3 ble overexpressed i epiteliale kreftformer. Disse grunnene kombinert gjorde oss interessert i å undersøke rollen som Tim-3 i livmorhalskreft.
To nyere studier [11], [12] har identifisert Tim-tre uttrykk på leukemiske stamceller (LSC) hos pasienter med akutt myelogen leukemi (AML). Tim-3
+ AML celler var i stand til å rekonstituere AML og anti-human Tim-3 antistoff blokkert AML engraftment i et xenotransplantat modell. Selv om anti-Tim-3 antistoffer synes å redusere den metastatisk potensial av kreftceller, er virkningsmekanismen ikke er godt forstått. I denne studien brukte vi ADV-anti Tim-tre til ned-regulere Tim-3 i livmorhalskreft Hela cellelinje og deretter vurderes muligheten av kreft celler til å migrere og invadere.
Våre resultater fra dette studien bekreftet mRNA og proteinnivå ekspresjon av Tim-3 i cervikale kreftcellelinjer og viste for første gang at Tim-3 er fortrinnsvis uttrykt i de kliniske primære cervikale kreftceller i forhold til CIN og kronisk cervicitt. I tillegg pasienter med høyt uttrykk for Tim-3 hadde en betydelig større metastatisk potensial og avanserte kreft karakterer og kortere total overlevelse enn de med lavere Tim-tre uttrykk. Derfor kan Tim-3 potensielt være en uavhengig prognostisk faktor for pasienter med kreft i livmorhalsen. Vi fant også at ADV-antisense Tim-3 kan hemme migrasjon og invasjon av Hela celler. Kombinert med vår tidligere studie, som vi har funnet at Tim-3 aktiverer IL-6-STAT3 vei for å undertrykke aktiveringen av CD4
+ T-lymfocytter, åpner muligheten for at Tim-3 kan fremme metastase gjennom aktivering vår studie av IL-6-STAT3 veien.
Materialer og metoder
pasienter
Prøver av 43 livmorhalskreft vev, 22 CIN vev og 20 kroniske cervicitis vev ble avledet fra pasienter som gikk primær kirurgi for livmorhalssykdommer ved Institutt for gynekologisk onkologi i Tongji Hospital (Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, Kina) fra 2004-2006. Alle de utvalgte livmorhalskreft vev møtte følgende inklusjonskriterier: ingen historie med en annen type ondartet svulst, uten neoadjuvant terapi før operasjonen. Alle pasienter ga informert skriftlig samtykke for analyse av deres vev for forskningsformål. Denne studien ble godkjent av etisk komité av Tongji Hospital for analyse av menneskelig vev. Pasientene var i alderen 27 til 67 år (median alder, 39 år). Histologisk undersøkelse av de utskårende cervikale vev ble utført etter hematoxylin eosin (H inkubert med Tim-3-antistoff (1:1000, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) for over natten ved 4 ° C; vasket; og inkubert med et pepperrot peroksidase-merket sekundært antistoff esel anti-geite-IgG (1:5000) i 1 time ved romtemperatur. Til slutt ble blotter utviklet ved hjelp av en forbedret chemiluminescence deteksjonssystem (Amersham Life Science). I innledende forsøk, fant vi NK-92 cellelinje hovedsakelig uttrykt Tim-3 protein, mens THP-1 cellelinjen ikke uttrykke Tim-3 protein. Totalt protein ekstrahert fra NK-92-cellelinjen ble brukt som positiv kontroll av Tim-3 protein, mens totalt protein ekstrahert fra THP-1-cellelinjen ble anvendt som negativ kontroll.
Immunofluorescent Påvisning av HeLa-cellelinje
HeLa-celler ble høstet med en kombinasjon av trypsin og etylendiamintetraeddiksyre (EDTA) og vasket i PBS, og dyrket på dekkglass. Cellene ble deretter fiksert i 95% ethnol og blokkert med 1% BSA i 1 time, og deretter inkubert med primært antistoff ved 4 ° C over natten. Det primære antistoff som ble brukt var geit-anti-Tim-3 (Santa Cruz Biotechnology, Inc.) ved en fortynning på 1:100. Prøvene ble deretter vasket i PBS i 5 minutter 3 ganger. Negative kontrollglass ble inkubert uten det primære antistoff. Esel anti-geit-IgG konjugert med FITC fortynnet med 2% BSA /PBS til en fortynning av 1:100 ble inkubert i 2 timer ved romtemperatur, ble cell nuclear farget av PI i en fortynning på 1:1000, kontrolleres av konfokal mikroskop.
adenovirus Mutanter
Adeasy system (MP Biomedicals) ble anvendt i denne studien er å konstruere en rekombinant replikasjonsdefekt adenovirus vektor heter ADV-antisense Tim-3, som inneholdt et fragment av omvendt Tim- 3 cDNA (bp 198-1312). Standard protokoller ble fulgt som tidligere beskrevet [14]. ADV-GFP inneholdende et GFP-genet under kontroll av en Rous sarcoma virus lang terminal gjentagelse promoter i området for det utskårede E1 adenovirus-gener ble anvendt som en kontroll i denne studien. HeLa-celler ble infisert med ADV-antisens Tim-3 eller ADV-GFP ved en passende MOI bestemt ved apoptose assay i 2 timer, deretter dyrket i ytterligere 24 timer og underkastet etterfølgende eksperimenter.
Apoptose Assay
Kort oppsummering, HeLa-celler infisert med forskjellige titere av adenovirus mutanter eller behandlet med PBS i 72 timer. Deretter ble cellene fiksert med 70% etanol i 1 time, vasket i PBS og ble behandlet med RNase i 15 minutter ved 37 ° C og deretter farget med 50 ug /ml propidiumjodid. Celler ble samlet opp og underkastet FACS-analyse av sub-populasjonen G1.
Wound Healing Assay
Cellene ble dyrket til konfluens i en 6-brønners kulturplate. En lineær sår ble gjort ved å skrape den monolayer med en steril 10-ul pipette. De sårede monolagene ble vasket 3 ganger med vanlig medium og inkubert i frisk serumfritt medium. Bildene ble tatt ved 0 timer, 24 timer og 48 timer etter såret av fasekontrastmikroskop.
Transwell Invasion analysen
Cell invasjonen ble analysert ved bruk av Transwell kamre (Costar, Cambridge, MA, USA) med 8-mikrometer pore polykarbonat filtre som ble belagt med Matrigel ™ (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ). Celler infisert med adenovirus-mutanter i 24 timer ble sådd inn i de øvre kamrene i serumfritt medium ved en tetthet på 2,0 x 10
4 per brønn, og 500 pl 10% fetalt bovint serum-inneholdende medium ble plassert i den nedre kammer som en cellegift-tiltrekkende. Etter 48 timer ved 37 ° C i 5% CO2, ble cellene fiksert med 4% para-formaldehyd og beiset med 0,1% krystallfiolett oppløsning. Celler på den øvre overflaten av filteret fjernet med bomullspinner. Invaderte celler på undersiden av filteret ble fotografert og telles ved fasekontrastmikroskopi (forstørrelse x 200). Forsøkene ble utført i tre eksemplarer.
Statistical Analysis
SPSS statistisk program ble brukt til å teste for sammenhenger mellom kvantitative variabler ved etablering av nonparametric lineær regresjon. Data er presentert som middelverdier ± SD av minst tre forsøk og ble analysert ved en-veis analyse av varians etterfulgt av Student-Newman-Keuls test. Kaplan-Meier-metoden ble brukt for å beregne den totale overlevelsesraten som en funksjon av tid. Overlevelses forskjeller ble analysert ved bruk av log-rank test. Den Cox proporsjonal risikomodell ble brukt i univariat og multivariat analyse av prognostiske faktorer. Alle p-verdier var tosidig, og
P
0,05 ble betraktet som signifikant. SPSS (versjon 11.5) ble brukt for alle statistiske prosedyrer.
Resultater
Tim-3 fortrinnsvis Uttrykt i Livmorhalskreft Tissue
Vi har analysert deler av svulstvev fra 43 pasienter som ble operert for kreft i livmorhalsen, fra 22 pasienter med CIN og fra 20 pasienter med kronisk cervicitt. Positiv farging for Tim-3-proteinet ble sett i bare 15,0% (3 av 20) av kronisk cervicitt, men 50,0% (11 av 22) av CIN og 65,1% (28 av 43) av livmorhalskreft farget positivt for Tim-3-protein (fig. 1A-D). Når uttrykket av Tim-3 protein ble ytterligere sammenlignet med semikvantitativ immunoreaktivitets H-scoring, livmorhalskreft og CIN vist en mye høyere Tim-tre poengsum enn kronisk cervicitt vev. (0,905 ± 0,584, 0,558 ± 0,123 vs 0,102 ± 0,075;
P
0,01). (Tabell 1)
(A) cervical squamous karsinom, (B) cervical adenokarsinom, (C ) cervikal intraepitelial neoplasi, og (D) kronisk cervicitt vev. Original forstørrelse × 200.
Tim-3 Expression korrelert med Clinicopathologic Parametere
Vi korrelert de Tim-3 uttrykk data til clinicopathologic kjennetegn som alder, histologisk type klinisk klasse, histologisk grad, metastaser og total overlevelse. Høy immunoreaktivitets av Tim-3 ble funnet å være signifikant korrelert med klinisk Karakter (
p
= 0,018), histologisk grad (
p
= 0,038) og metastasering (
p
= 0,004). Det var ingen signifikante sammenhenger med alder (
p
= 0,178) og histologisk type (
p
= 0,773) (tabell 2).
På slutten av vår oppfølgingsperioden, 15 pasienter døde i Tim-tre positive gruppe mens tre i Tim-tre negative gruppen, 5-års overlevelse var 80% henholdsvis (
P
vs
> = 0,006) (fig. 2).
En sammenligning av fem års kumulativ overlevelse kurven av livmorhalskreftpasienter mellom Tim-tre positive uttrykk (stiplet) og Tim-tre negative uttrykk (tykk linje) er vist.
Tim-3 er uttrykt i livmorhalskreft cellelinjer
RT-PCR og Western blot analyse ble brukt for å oppdage Tim-3 mRNA og proteinnivåer i to menneskers livmorhals kreft cellelinjer Hela og Siha. Som forventet, ble et 749 bp-produkt funnet å være tilstede i disse to cellelinjene, for derved å bekrefte at det foreligger Tim-3 mRNA-ekspresjon. p-aktin oligonukleotider ble brukt for å oppdaget et 180-bp bånd RNA og ble anvendt som en kontroll (Fig. 3A). En 33 kd bandet ble funnet bekrefter Tim-3 protein uttrykk (Fig. 3B). Konfokal mikroskopi ble anvendt for å teste subcellulære lokalisering av Tim-3. Tim-3 ble fordelt i hele cytoplasma (grønn fluorescens) av Hela-cellelinjen, med ingen fordeling i kjernen (rød) (Fig. 3C).
(A) tim-3-transkripter ble påvist i Hela og Siha cellelinjer. De maler av forskjellige baner som følger: Lane 1, total RNA fra PBL; Lane 2, cDNA av PBL; spor 3, total RNA av Siha; lane 4, cDNA av Siha; lane 5, total RNA av Hela; kjørefelt 6, cDNA av Hela. (B) Tim-3-protein ble bestemt ved Western blotting i HeLa og Siha cellelinjer. (C) HeLa-celler farget med immunfluorescens med anti-Tim-3-antistoff og observert med et konfokalt laser scanning mikroskop. Tim-3 protein (grønn, pilspisser) er i cytoplasma av Hela. Cellekjerner (rød) ble visualisert ved farging med PI.
undertrykke Tim-3 Expression hemmet Migrasjon og invasjon av Hela celler
For ytterligere å forstå sammenhengen av Tim-3 og tumor metastase, infisert vi Hela celler med ADV-antisense Tim-3. Ved en multiplisitet av infeksjon (MOI) på 1, ADV-antisense Tim-3-infiserte HeLa-celler som viste signifikant redusert Tim-3 ekspresjon med et mindre celledød respons; således ble denne konsentrasjon anvendt i de følgende eksperimenter (fig. 4A-B). Siden kreftcelle migrering og invasjon er direkte relatert til metastasering, ble en sårheling assay og en celle invasjon analyse utføres for å bestemme hvorvidt undertrykkelse av Tim-3 ekspresjon inhiberer Hela cellemigrering og invasjon. Hela-celler infisert med enten ADV-antisense Tim-3 eller med ADV-GFP som en kontroll ble evaluert i 24 timer og 48 timer. Som vist i figur 5A-B, på henholdsvis 24 timer og 48 timer, ADV-antisense Tim-3-infiserte celler viste 40% og 70% lukking av sår, mens ADV-GFP infiserte celler viste 60% og 100%, noe som tyder på at inhibering av Tim-3 ekspresjon redusert vandring av HeLa-celler. Som vist i figur 5C-D, antallet HeLa-celler som passerte gjennom filteret i ADV-antisense Tim-3-gruppen (151 ± 33) var markert mindre enn det i den ADV-GFP gruppen (545 ± 48), hvilken viser at inhibering av Tim-3 ekspresjon trykkes Hela celle invasjon in vitro.
(A) Western blotting ble utført for å påvise Tim-3-ekspresjon i HeLa-celler infisert med ADV-GFP og ADV- antisense Tim-3 eller behandlet med PBS. (B) Typisk resultat av celle apoptose bestemt ved strømningscytometri i HeLa-celler infisert med ADV-antisens Tim-3 og ADV-GFP eller behandlet med PBS. Data blir representert som gjennomsnittet ± SD av triplikater.
(A) Cellemigrering evne ble bestemt med en sårtilheling assay. Bildene ble tatt umiddelbart (0 h), på 24 timer og 48 timer etter såret. (B) Kvantifisering for sårheling. Dataene presentere gjennomsnittlig avstand på celle migrasjon til sårområdet på 24 timer og 48 timer etter såret i tre uavhengige sår sider per gruppe. (C) Muligheten av cellene for å invadere Matrigel ble analysert ved transwell invasjon analysen gjennom en gelmatriks. Hela celler ble enten infisert med ADV-GFP eller med ADV-antisense Tim-3, Etter 10 timer levedyktige invasive cellene fiksert og telles. Verdier og feilfelt som er vist i denne grafen representerer gjennomsnitt og standardavvik henholdsvis av tre uavhengige forsøk. (D) Representative bilder av transwell invasjonen analysen.
Diskusjoner
I vårt tidligere arbeid, fant vi ut at Tim-3 ble fortrinnsvis uttrykt i Lymfekreft-avledet endotelceller (ECS) , og at nivået av Tim-3 i B-celle lymfom endotelet var sterkt korrelert til både spredning og dårlig prognose. Tim-3
+ ECS modulerte T-cellerespons for å lymfom surrogat-antigen ved å undertrykke aktivering av CD4
+ T-lymfocytter gjennom aktivering av interleukin-6-STAT3 vei, inhibering av Th1 polarisering, som gir beskyttende immunitet, og lette etablering av lymfom immuntoleranse. Selv om studier tyder på at Tim-3 er involvert i immunregulering av svulster, sin direkte uttrykk i svulsten cellen og dens funksjon i metastase var fortsatt ukjent.
I denne studien fant vi at Tim-3 ble fortrinnsvis uttrykt i livmorhalskreft vev, og dens uttrykk var signifikant korrelert med avansert kreft karakterer (
p
= 0,018), histologiske karakterer (
p
= 0,038), metastase (
p
= 0,004) og kortere overlevelse (
p
= 0,006). Tilstedeværelsen av Tim-3 mRNA og protein i to cervikale kreftcellelinjer (HeLa og Siha) i tillegg til lokalisering av Tim-3 til cytoplasma i Hela celle bekreftet at Tim-3 ble faktisk uttrykt i den cervikale kreftcellen. For å klargjøre sammenhengen mellom Tim-3 og metastase, brukte vi ADV-anti Tim-3 for å gjøre en sårtilheling analysen og transwell invasjon analysen. Vi fant at ADV-antisense Tim-3-infiserte celler viste 40% og 70% lukking av sår ved 24 timer og 48 timer henholdsvis, sammenlignet med 60% og 100% sett i ADV-GFP infiserte celler. I tillegg er markert færre HeLa-celler passert gjennom filteret i den ADV-antisense Tim-3-gruppen (151 ± 33) enn i ADV-GFP gruppen (545 ± 48). Disse resultatene antyder sterkt at nedregulere uttrykket av Tim-3 reduserer migrasjon og invasjon av Hela celler betydelig.
I tråd med vår studie, Wiener et al [15] fant også at Tim-3 ble uttrykt ikke bare i mastceller rundt melanomer, men også i tumorceller i vevssnitt og humane melanomcellelinjer WM35 og HT168-M1. I mellomtiden, Kikushige og Jan [11], [12] identifisert Tim-tre uttrykk på leukemi stamceller (LSC) hos pasienter med akutt myelogen leukemi. For å avgjøre om Tim-3 er universelt uttrykt i tumorceller, er flere studier på andre kreftceller som kreves.
Til tross for framgangen i å forstå involvering av Tim-3 i tumor immunitet, koblingen mellom Tim-3 uttrykket og tumorcellen i seg selv er ennå ikke definert. En av våre mest slående funnene er at når vi brukte ADV-anti Tim-tre til ned-regulere uttrykk for Tim-3 i HeLa-celler, både migrasjon og invasjon av HeLa-celler ble hemmet betydelig. Faktisk høy score uttrykk for Tim-3 var signifikant korrelert med metastaser (
p
= 0,004) i livmorhalskreftpasienter. Neste skritt vil være å finne ut hvor Tim-tre uttrykk er korrelert med tumormetastaser og som trasé er involvert? I vårt tidligere arbeid, har vi bekreftet at Tim-3 kan aktivere IL-6-STAT3 veien. Tim-3 ekspresjon økte EC-avledet produksjon av IL-6 med nesten 10 ganger, og tilsetning av IL-6 betydelig øket nivå av fosforylert STAT3 (p-STAT3). I henhold til publiserte studier [16] – [19], spiller IL-6-STAT3 reaksjonsvei en viktig rolle ved tumor-metastase. STAT3 kan fremme premetastatic nisje dannelse og metastatiske celler kan unnslippe pro-apoptotiske effektene av TNF-α gjennom økt autokrint IL-6-STAT3 signalering. I tillegg inhibering av p-STAT3 øker IFN-α effekt mot metastatisk melanom i en murin modell. Basert på disse tidligere funn og våre resultater fra denne studien, hypoteser vi at Tim-3 kan legge til rette for metastase gjennom IL-6-STAT3 veien. Fordi fjernmetastaser er en viktig faktor i overlevelse av personer med livmorhalskreft, Tim-3 kan være en kritisk prognostisk markør for livmorhalskreft.
Til sammen antyder vår studie at Tim-3 regulerer anti ikke bare negativt -tumor immunitet, men også påvirker kreftutvikling direkte via sitt uttrykk i kreftceller. For første gang, har vi i forbindelse ekspresjonen av Tim-3 i tumorceller med dårligere klinisk patologiske parametre i livmorhalskreft. I tillegg har vi funnet at inhibering av Tim-3-protein ekspresjon kan forhindre tumormetastase. Således er det rasjonelt for fremtidige eksperimenter for å utforske Tim-3 som et mål for anticancerterapi, tumorimmunterapi, og i kontroll av metastatiske sykdommer.
