Abstract
Bakgrunn
Tumor-infiltrerende T-celler er assosiert med overlevelse i ovarialcancer (EOC), men funksjonell status er dårlig forstått, spesielt i forhold til de ulike risikokategorier og histologiske subtyper av EOC.
metodikk /hovedfunnene
microarray inneholdende høy grad av serøs, endometrioid, mucinkjertler og klare celle svulster ble analysert immunhistokjemisk for tilstedeværelse av lymfocytter, dendrittiske celler, nøytrofiler, makrofager, MHC klasse i og II, og ulike markører for aktivering og betennelse. I høy grad serøs svulster fra optimalt debulked pasienter, ble positive assosiasjoner sett mellom intraepitelial celler som uttrykker CD3, CD4, CD8, CD45RO, CD25, TIA-en, granzyme B, foxp3, CD20, og CD68, samt uttrykk for MHC klasse I og II av tumorceller. Sykdomsspesifikk overlevelse var positivt assosiert med markører CD8, CD3, foxp3, TIA-en, CD20, MHC klasse I og klasse II. Med andre histologiske subtyper, immun infiltrater var mindre utbredt, og de eneste markører assosiert med overlevelse var MHC klasse II (positiv forening i endometrioid tilfeller) og myeloperoxidase (negativ assosiasjon i klare celle tilfeller).
Konklusjon /Betydning
vertsimmunresponser mot EOC variere vidt i henhold til histologisk subtype og graden av restsykdom. TIA-en, foxp3 og CD20 fremstå som nye positive prognostiske faktorer i høyverdig serøs EOC fra optimalt debulked pasienter
Citation. Milne K, Kobel M, Kalloger SE, Barnes RO, Gao D, Gilks CB, et al. (2009) Systematisk analyse av immun Infiltrater i High-Grade Serous Eggstokkreft avslører CD20, foxp3 og TIA-en som positive prognostiske faktorer. PLoS ONE 4 (7): e6412. doi: 10,1371 /journal.pone.0006412
Redaktør: Derya Unutmaz, New York University School of Medicine, USA
mottatt: May 19, 2009; Godkjent: 26 juni 2009; Publisert: 29.07.2009
Copyright: © 2009 Milne et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Studien ble finansiert med tilskudd fra British Columbia Cancer Foundation, Vancouver General Hospital Foundation, og US Dept. of Defense (OC000018). Ingen av sponsorene hadde noen rolle i utformingen og gjennomføringen av studien, i innsamling, analyse og tolkning av data, eller i forberedelse, vurdering, eller godkjenning av manuskriptet
Konkurrerende interesser.: forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer.
Innledning
Eggstokkreft er den mest dødelige gynekologisk kreft, påvirker mer enn 190.000 kvinner verden over hvert år (International Agency for Research on Cancer). Forsinket diagnose og tilstedeværelsen av vidt utbredt sykdom konto for den høye dødelighet forbundet med sykdommen. I tillegg, mens en stor prosentandel av pasientene ved svarer godt til cytoreduktiv kirurgi og standard kjemoterapi, sykdommen gjentar seg vanligvis i løpet av 2-5 år som gjenværende tumorceller utvikle resistens mot kjemoterapi [1], [2]. Selv om prognose er ofte dårlig, har mange gunstige prognostiske indikatorer er beskrevet, inkludert tidlig stadium, lav karakter og optimal kirurgisk debulking [3], [4].
Flere nyere studier har analysert påvirkning av verten immunitet på sykdommen prognose. Tumor-infiltrerende CD3 + T-celler er sterkt forbundet med gunstig prognose, spesielt når CD3 + celler er lokalisert innenfor tumor epitelet [5] – [9]. Disse funnene har blitt utvidet til CD8 + T-celleundersett spesielt [10] – [17], som tyder på at cytotoksiske T-lymfocytter (CTL) spiller en viktig rolle i antitumorimmunrespons. Følgelig er andre faktorer assosiert med CTL-responser også positivt assosiert med overlevelse, inkludert interferon-γ (IFN-γ) [18], [19], den IFN γ reseptoren [20], interferon regulerende faktor (IRF) -1 [ ,,,0],21], IL-18 [22], TNF-α [23], MHC klasse i [24] – [26], og MHC klasse i-antigen maskiner til [17]
i motsetning til CD8 + T. cellene har flere studier har indikert at tumor-infiltrerende CD25 + foxp3 + T-celler (henvist til som regulatoriske T-celler eller Tregs) er assosiert med redusert overlevelse [10], [27] – [29]. Tregs har evnen til å undertrykke proliferasjon, cytokin produksjon, og cytolytisk aktivitet av CD4 + og CD8 + T-celler ved mekanismer som involverer celle-til-celle-kontakt og frigjøring av cytokiner, slik som TGF-β [30], [31]. Tregs kan også indusere en immundempende fenotype i andre celletyper, slik som makrofager [32]. Selv om Tregs har vært assosiert med dårlig prognose i mange kreftformer, har flere unntak nylig blitt rapportert. Leffers et. al. fant at foxp3 + infiltrerer i avansert stadium EOC var assosiert med økt overlevelse [14]. Lignende funn er rapportert i tykk- og endetarmskreft [33] og lymfom [34] – [36]. Videre er det i murine modeller kan foxp3 + celler spiller en positiv rolle i anti-tumor og anti-viral immunitet [37], [38]. Den nøyaktige rollen av regulatoriske T-celler i kreftutbytte garanterer videre behandling gitt at flere grupper forsøker å forbedre svulst immunitet ved å tappe foxp3 + Tregs fra kreftpasienter [39] – [44], inkludert EOC pasienter [45]
i tillegg til Tregs, andre celletyper velig spille en immundempende rolle i EOC. For eksempel plasmacytoid dendrittiske celler bidra til immunsuppresjon ved å fremme utvikling eller rekruttering av interleukin-10-produserende CD4 + og CD8 + regulatoriske T-celler [46], [47]. Myeloide dendrittiske celler (MDCs) nedsette T-celle-immunitet ved uttrykker B7-H1, en ligand for den inhiberende reseptor PD-1 finnes på T-celler [48]. Monocytter og makrofager i EOC mikromiljøet kan polariseres mot en såkalt M2 fenotype, som er et typisk eksempel på ekspresjonen av IL-10, TGF-b og scavenger-reseptorer og er antatt å fremme tumorprogresjon [49], [50], [51]. Under påvirkning av IL-6 og IL-10, kan makrofager i EOC også uttrykker B7-H4, som inhiberer T-celle proliferasjon [52]. Makrofager også produsere CCL22, som fremmer Treg rekrutteringen til tumormiljøet [32]. Til slutt, ekspresjon av den inflammatoriske mediator COX-2 i tumor epitel har vært assosiert med redusert lymfocyttinfiltrasjon og dårlig prognose i EOC [13], [53].
Med bruk av tumorvev microarray (TMA) teknologi , et stort antall retrospektive studier har undersøkt forholdet mellom tumor-infiltrerende immunceller og prognose i EOC og andre kreftformer. Men de fleste studier fokuserer på en eller noen få markører, slik at assosiasjoner mellom ulike immunologiske faktorer kan være savnet. I tillegg de fleste studier ikke klarer å møte de ulike histologiske subtyper av EOC, som nå anerkjent for å oppføre seg som forskjellige sykdommer [54]. Som et resultat, det er uoverensstemmelser og uløste spørsmål i litteraturen om den prognostiske betydningen av ulike immun celleinfiltrater. For å løse dette, analyserte vi flere store serier av EOC svulster, inkludert høyverdig serøs, endometrioid, klarcellet og mucinkjertler subtyper, for tilstedeværelse av ulike immunceller infiltrerer og inflammasjonsmarkører. Våre resultater viser at høyverdig serøs svulster har en distinkt immunologisk profil som er sterkt assosiert med pasientens overlevelse.
Resultater
intraepitelial T-celler og tilhørende funksjonelle markører i høyverdig serøs EOC
Vi først undersøkt sammenhengen mellom immun infiltrerer og overlevelse i en kohort av 199 høyverdig serøs EOC pasienter. Vi valgte å først fokusere på høyverdige serøs tilfeller, som de andre histologiske subtyper utviser tydelige biologiske og kliniske egenskaper som potensielt konfunderende [54], [55]. Denne første kullet var begrenset til pasienter som hadde gjennomgått optimal cytoreduksjon (dvs. uten tegn på makroskopiske restsykdom). Pasient egenskaper er vist i tabell 1.
Svulstene i denne første kohorten hadde tidligere blitt vurdert av immunhistokjemi (IHC) for en rekke lymfocytter markører, inkludert CD3, CD4, CD8, CD20 og granzyme B [12]. Intraepitelial lymfocytter (dvs. lymfocytter i løpet av den epiteliale komponenten av svulsten) ble bedømt som enten er tilstede (dvs. en eller flere av intraepitelial lymfocytter til stede i minst en av to 0,6 mm kjerner), eller fraværende. Vi re-analysert disse dataene som fokuserer utelukkende på høyverdig serøs tilfeller. Vi fant at 83,2% (163/196) av evaluerbare høyverdig serøs svulster var positive for intraepitelial CD3 + T-celler, mens CD4 + og CD8 + intraepitelial celler ble funnet i 53,4% (103/193) og 84,0% (163/194) av evaluerbare tumorer, henholdsvis (fig 1A 0,0001). Tabell 2 viser statistiske foreninger for disse og alle andre markører studert i denne første kullet.
(A) CD4, (B) CD8, (C) CD45RO, (D) OX40, (E) CD25, (F ) TIA-1, (G) granzyme B, og (H) foxp3. 40X objektiv.
Mens de ovennevnte markører indikere hvilke lymfocytt undergrupper er til stede i tumorer, har de ikke avsløre sin aktiveringsstatus. For å løse dette problemet, analyserte vi svulster for uttrykk for CD45RO, OX40 og CD25, som uttrykkes av aktiverte T-celler [56], [57]. Bruke samme scoring kriterier som ovenfor, 70,6% (132/187) av svulster var positive for intraepitelial CD45RO + celler, og 49,7% (96/193) var positive for intraepitelial CD25 + celler (fig 1C . E). I motsetning til bare 7,0% (11/158) av tumorer var positive for intraepitelial OX40 + celler (fig. 1D). I parvise sammenligninger ble CD45RO, CD25 og OX40 alt positivt assosiert (tabell 2). Videre CD45RO og CD25 var begge assosiert med tilstedeværelse av CD3 +, CD4 + og CD8 + celler. OX40 viste en lignende trend, men dette var ikke statistisk signifikans, trolig på grunn av det lave antall positive tilfeller.
For å undersøke differensiering tilstand av tumor-infiltrerende T-celler, vev ble analysert for intraepitelial celler som uttrykker TIA -1 og granzyme B, som er markører for CD8 + cytotoksiske T-celler og NK-celler [58] – [60]. Et flertall av svulster (66,5%, 127/191) var positive for intraepitelial TIA-1 + celler (fig. 1F), og omtrent halvparten av svulster (45,6%, 88/193) var positive for intraepitelial granzyme B + celler (fig. 1G). Det var en svært signifikant sammenheng mellom TIA-1 + og granzyme B + celler (p 0,0001). Videre, i parvise sammenligninger, TIA-1 + og granzyme B + celler ble hver forbundet med aktivering markører CD45RO, CD25 og OX40. Til slutt, TIA-1 + og granzyme B + celler ble hver assosiert med tilstedeværelse av CD3 +, CD4 + og CD8 + celler (tabell 2). For å undersøke hvorvidt TIA-1 og granzyme B ekspresjon kan være på grunn av tilstedeværelsen av NK-celler eller NKT, undersøkte vi tumorer for NK-cellemarkørene CD56 og CD57. For begge merkene, var det enten få eller ingen infiltrerer i det hele tatt i løpet av svulsten epitel (data ikke vist), noe som indikerer at TIA-1 + og granzyme B + infiltrater var mest sannsynlig T-celler.
Til slutt, svulster var analysert for tilstedeværelse av celler som uttrykker intraepitelial foxp3, som hos mennesker er en markør av regulatoriske T-celler og aktiverte T-celler [61], [62]. Omtrent halvparten av svulster (52,9%, 100/189) var positive for intraepitelial foxp3 + celler (fig. 1 H). Det var en sterk sammenheng mellom foxp3 + og CD25 + celler (p 0,0001), og foxp3 + og CD25 + celler ble hver sterkt assosiert med CD4 + celler (p 0,0001 for begge merkene). Således, i samsvar med tidligere rapporter [10], [14], [27], [28], en betydelig andel av tumorer inneholdt intraepitelial infiltrater med markører karakteristisk for Tregs (CD4 +, CD25 +, og foxp3 +).
MHC klasse i og II i høyverdig serøs EOC
Vi analyserte kreftceller for ekspresjon av MHC klasse i og II ved hjelp av en firepunktsskala (negativ, fokus [ 10%], usammenhengende [10- 50%] eller diffus [ 50%]). Alle evaluerbare svulster (185/185) uttrykte MHC klasse I til en viss grad (dvs. fokus, usammenhengende eller diffuse), som indikerer at de kunne teoretisk tilstede antigen til CD8 + T-celler. For statistiske analyser, bare den høyeste kategorien (diffuse, 50%) ble betraktet som positive (figur 2A . B). Ved hjelp av denne grensen, 85,4% (158/185) av svulster var positive for MHC klasse I. MHC klasse ble jeg positivt assosiert med alle tre T-celle undergrupper (CD3, CD4, og CD8), aktiverings markører CD45RO og CD25, og differensiering markører TIA-en, granzyme B foxp3 (tabell 2).
40X objektiv.
Et stort flertall av svulster (86,5%, 166/192) uttrykte MHC klasse II til en viss grad (dvs. fokal, spredt eller diffus), som indikerer at de kan teoretisk foreliggende antigen til CD4 + T-celler. Som med MHC klasse I, bare den høyeste kategorien (diffus, 50%) ble ansett som positivt for statistiske analyser (fig 2 C . D). Ved hjelp av denne grensen, 41,1% (79/192) av svulster var positive for MHC klasse II. MHC klasse II var sterkt assosiert med MHC klasse I (p 0,0001). Følgelig, MHC klasse II var positivt assosiert med alle tre T-celle-undergrupper (CD3, CD4, CD8 og), aktiveringsmarkører CD45RO og CD25, og differensieringsmarkører TIA-1, granzyme B og foxp3 (tabell 2). I likhet med resultatene for MHC klasse I, ble ekspresjon av MHC klasse II i tumor epitel positivt assosiert med forskjellige T-celle markører, inkludert CD3, CD4, CD8, CD45RO, TIA-1, granzyme B, CD25 og foxp3 (tabell 2) .
intraepitelial B-celler i høyverdig serøs EOC
Vev ble farget med et antistoff til CD20, som uttrykkes ved B-celler fra naive til minne stadier av differensiering [63]. Intraepitelial CD20 + celler ble funnet i 41,9% (83/198) av evaluerbare tumorer (Fig. 3A). CD20 + infiltrater sterkt assosiert med alle tre T-celle undergrupper (CD3, CD4, og CD8); aktivering markører CD45RO og CD25; differensiering markører TIA-en, granzyme B og foxp3; og både MHC klasse I og II (tabell 2).
40X objektiv.
intraepitelial dendrittiske celler, granulocytter og makrofager i høyverdig serøs EOC
Svulster ble analysert for tilstedeværelse av umodne og modne dendrittiske celler ved farging for CD1a og CD208, respektivt. Et mindretall av svulster (13,4%, 23/172) inneholdt intraepitelial CD1a + celler (fig. 3B). Ingen signifikant sammenheng med noen av de intraepitelial lymfocytt-markører (CD3, CD8 eller CD20), aktiveringsmarkører (CD45RO eller CD25), differensieringsmarkører (TIA-1, granzyme B eller foxp3) eller MHC klasse I eller II (tabell 2) ble sett , potensielt på grunn av lavt antall CD1a + celler. I motsetning til CD1a, ingen av de tumorer som scoret positivt for intraepitelial CD208 + -celler. Parallell analyse av mandel vev avslørte tilstedeværelsen av mange CD208 + -celler, for derved å validere IHC prosedyren.
Omtrent halvparten av tumorer (54,7%, 87/159) inneholdt intraepitelial celler som uttrykker makrofag markør CD68 (Fig. 3D) . CD68 var positivt assosiert med flere lymfocytt-markører (CD3, CD8 og CD20), aktiveringsmarkører (CD45RO og CD25), differensieringsmarkører (TIA-1, granzyme B og foxp3) og MHC klasse I (tabell 2). For å vurdere tilstedeværelse av granulocytter, ble TMA farget for myeloperoksidase. Tjuefire prosent (37/154) av tumorer inneholdt myeloperoxydase-uttrykkende celler (Fig. 3C), men disse viste ingen signifikant sammenheng med andre markører, med unntak av CD4 (p = 0,034).
COX -2 enzymet er forbundet med dårligere overlevelsen i EOC når uttrykt i epiteliale komponenten av tumor [53]. Derfor svulster ble scoret for uttrykk av COX-2 i epiteliale-komponent med en fire-punkts skala (negativ, tvetydig [0-1%], usammenhengende [1-50%] eller diffuse [ 50%]) (Fig . 2E F). To tredjedeler av svulster (66,5%, 111/167) var positive for COX-2 (d.v.s. spredt eller diffus farging). I motsetning til rapporter i ovarie, cervix, og andre kreftformer, [13], [64], [65], ekspresjon av COX-2 ble ikke signifikant assosiert med noen av de immune infiltrater studert (tabell 2).
foreninger mellom immun infiltrerer og pasient overlevelse i høyverdig serøs EOC
Kaplan-Meier analyse ble utført for å vurdere sammenhengen mellom ulike immun infiltrerer og sykdomsspesifikk overlevelse (DSS). I overensstemmelse med tidligere rapporter [5] – [7], [10] – [17], intraepitelial CD3 + og CD8 + celler ble assosiert med øket DSS (p = 0,0009 og 0,0008 henholdsvis) (figur 4A . J). Svulster som inneholdt både CD8 + og TIA-1 + infiltrater er assosiert med øket DSS sammenlignet med CD8 + TIA-1-negative tumorer (p = 0,0025). Flere andre T cellemarkører, inkludert granzyme B, CD45RO og CD25, viste tendenser til økt DSS men nådde ikke statistisk signifikans (fig. 4H og data ikke vist). OX-40 viste ingen tydelig trend eller forening med DSS, muligens på grunn av lavt antall positive tilfeller (data ikke vist).
I åpenbar motsetning til rapporter som regulatoriske T-celler er assosiert med dårlig prognose, tilstedeværelse av intraepitelial foxp3 + -celler var assosiert med øket DSS (p = 0.010) (fig. 4D). Videre svulster som var triply positivt for intraepitelial CD4 +, foxp3 + og CD25 + celler viste en trend mot økt overlevelse, men dette falt kort av statistisk signifikans (p = 0,059). Likeledes svulster positive for begge intraepitelial CD8 + og foxp3 + celler viste en trend mot økt DSS forhold til svulster som var positive for CD8 + celler, men negativt for foxp3 + celler; Men denne trenden ikke statistisk signifikant (p = 0,052). Således, ved multiple analyser, tumor-infiltrerende foxp3 + celler viste en trend eller statistisk signifikant sammenheng med økt DSS.
Sammenhengen mellom immun infiltrater og overlevelse er avhengig av graden av restsykdom
T celleinfiltrater er angivelig mer utbredt hos pasienter med optimal versus suboptimal cytoreduksjon [5], [66]. For å undersøke om dette var sant for andre lymfocytt markører, analyserte vi en ekstra kohort av 220 høyverdig serøse saker fra pasienter med kjent makroskopisk restsykdom Følgende primær cytoreduserende kirurgi. Vi har fokusert på CD8 + infiltrater, så vel som de tre nye prognostiske markører fra den foregående analyse (dvs. foxp3, TIA-1 og CD20). Sammenlignet med optimalt debulked pasient kohort, pasienter med makroskopisk restsykdom hadde signifikant lavere forekomst av CD8 + (58,5%), foxp3 + (20,2%), TIA-1 + (39,5%) og CD20 + (16,3%) infiltrerer (p 0,0001 for alle merkene). Ved Kaplan-Meier-analysen av disse fire markører, bare CD8 + infiltrater hadde en signifikant sammenheng med overlevelse (p = 0,0044) hos pasienter med makroskopisk restsykdom (data ikke vist).
Sammenhengen mellom immun infiltrater og overlevelse er avhengig av histologisk subtype
De foregående resultatene var basert utelukkende på høyverdige serøs EOC tilfeller. For å vurdere sammenhengen mellom immun infiltrater og DSS i andre histologiske subtyper av EOC, utførte vi de samme analysene ved hjelp av ytterligere 288 EOC svulster av følgende histologiske undergrupper: mucinous (n = 31), endometrioid (n = 125) og klarcellet ( n = 132). Disse ekstra vevsprøver var fra en tidligere beskrevet kohort av optimalt debulked pasienter [12].
Generelt immun infiltrater var mindre utbredt i de andre histologiske subtyper i forhold til de høyverdige serøse saker diskutert tidligere. Dette var sant for alle lymfocytt markører undersøkt (dvs. CD3, CD8, CD4, CD45RO, CD25, foxp3, TIA-1, granzyme B, og CD20) (fig. 5). Forskjellen var mest slående for markørene foxp3, CD25 og CD20. Etter høy grad serøs tilfeller ble den nest høyeste frekvensen av immun infiltrerer sett i endometrioid subtype (Fig. 5).
Barer indikerer hvor stor andel av svulster scoring positivt for intrapithelial celler som uttrykker CD3, CD8, CD4 , CD45RO, CD25, foxp3, TIA-en, granzyme B, CD20 og CD68. Ekspresjon av MHC klasse I og II av tumor epitel er også vist. Data ble hentet fra optimalt debulked pasienter
Vi undersøkte sammenhengen mellom immun infiltrater og DSS i endometrioid og klare celle subtyper.; antallet mucinkjertler tilfeller var for liten til å utføre robust statistisk analyse. For endometrioid tilfeller er den eneste signifikant sammenheng funnet var mellom MHC klasse II-ekspresjon og øket DSS (p = 0,039) (data ikke vist). For klare celle tilfeller er den eneste signifikant sammenheng funnet var mellom tilstedeværelsen av myeloperoxydase-positive infiltrerer og redusert DSS (p = 0,040, data ikke vist). Dermed skiller forholdet mellom immun infiltrerer og overlevelse sterkt mellom histologiske subtyper av EOC.
Diskusjoner
Vi systematisk undersøkt forholdet mellom immun infiltrerer og pasient overlevelse i tre store EOC serien. I samsvar med Clarke et al. [12], fant vi at høyverdig serøs svulster har en distinkt immunologisk profil i forhold til endometrioid, klarcellet og mucinkjertler subtyper. Videre fant vi at immun infiltrater var generelt mer utbredt i svulster fra pasienter med optimal cytoreduksjon. Foxp3, TIA-1 og CD20 dukket opp som nye immunologiske markører assosiert med økt pasientens overlevelse. Våre resultater markere betydningen av histologisk subtype i immunobiology av EOC, som kan ha viktige implikasjoner for immunterapi av denne familien av sykdommer.
intraepitelial lymfocytter (dvs. celler uttrykker CD3, CD4, CD8, foxp3 eller CD20 ) var mer utbredt i høy grad serøs tilfeller, etterfulgt av endometrioid tilfeller. Videre intraepitelial lymfocytter var mer utbredt i svulster fra optimalt debulked pasienter sammenlignet med pasienter med makroskopisk restsykdom. En rekke biologiske funksjoner i tumorer synes å påvirke tettheten av lymfocyttiske infiltrater. (A) T-celle-infiltrater er positivt forbundet med ekspresjon av MHC klasse I og II av tumorceller (tabell 2), i tillegg til MHC klasse I-antigen maskiner til [15] – [17], [67], som tyder på at antigen presentasjon kan være en viktig bestemmende faktor for T-celle-infiltrasjon. (B) I samsvar med denne oppfatningen, tumorer med tap eller mutasjon av BRCA1 eller p53-gener har en økt tetthet av tumor-infiltrerende T-celler [12], [66]. Dette tyder på at mangelfull DNA-reparasjon og den påfølgende genomisk ustabilitet i tumorer kan føre til dannelse av neo-antigener som utløser verts T-celle responser. (C) signalmolekyler spiller også en rolle, som tettheten av tumor-infiltrerende T-celler er negativt forbundet med ekspresjon av VEGF, B7-H1 /PD-L1 og endotelin- B-reseptoren av tumorer [5], [11], [68 ] og positivt assosiert med ekspresjon av kjemokiner CXCL9, CCL21, CCL22, CCL2 og CCL5 [5], [28], [69]. (D) Til slutt, har to grupper rapportert genekspresjonsprofiler som korrelerer med tilstedeværelsen av tumor-infiltrerende T-celler i EOC [12], [70]. Disse sistnevnte studier bekrefter noen av de ovennevnte foreninger (f.eks MHC klasse I og II, beta 2 microglobulin, TAP1 og 2) og identifisere nye faktorer assosiert med T-celle infiltrater (f.eks, IL-15, IL-32 og tallrike interferon-induserte gener). Antagelig en eller flere av de ovennevnte faktorene står for den observerte anrikning av tumor-infiltrerende lymfocytter i høy grad serøs og optimalt cytoreduced tilfeller.
Selv om sammenhengen mellom intraepitelial CD8 + T-celler og økt overlevelse i EOC er en svært reproduserbar funn [10] – [17], forholdsvis lite er kjent om den funksjonelle fenotypen til disse CD8 + T-celler. Flere linjer av bevis tyder på en klassisk cytolytisk respons til grunn gunstige utfall. For eksempel, andre har rapportert positive assosiasjoner mellom overlevelse og intratumoral uttrykk for IFN-γ [18], [19], den IFN γ reseptoren [20], samt mange interferonresponsive gener som MHC klasse I [24] – [26], MHC klasse I antigen behandling maskineri [17], MHC klasse II [15], [16], og IRF-1 [21]. IL-18 [22] og TNF-α [23] også synes å være viktige komponenter i den T-cellerespons, som begge cytokiner er positivt forbundet med overlevelse. Vi undersøkte to komponentene i cytolytiske granulater, granzyme B og TIA-1, som begge viste en sammenheng med CD8 + T-celle-infiltrater. Av disse to markørene, bare TIA-en viste en statistisk signifikant sammenheng med overlevelse i høy grad serøs tilfeller (Fig. 4). TIA-1 + celler er også blitt beskrevet i medullær brystkreft [71], [72] og melanom [73], hvor de er forbundet med gunstige prognostiske egenskaper. I motsetning til dette blir tumor-infiltrerende TIA-1 + celler assosiert med redusert overlevelse i lymfom [74] – [78]. Interessant, TIA-1 er ikke bare en markør av cytolytiske granuler; Det er et RNA-bindende protein er involvert i post-transkripsjonell regulering mRNA [79]. Det gjenstår å fastslå hvorvidt sammenhengen mellom intraepitelial TIA-1 + celler og overlevelse i EOC er på grunn av rollen dette proteinet i cytolytisk granule funksjon eller mRNA regulering.
Treg infiltrerer har tidligere blitt assosiert med redusert overlevelse in ovarian EOC [10], [27], [28]. Imidlertid, i den foreliggende undersøkelse, og en annen nylig rapport [14], ble foxp3 + infiltrater forbundet med øket overlevelse. Disse tilsynelatende motstridende funnene kan skyldes flere faktorer. Første, ikke alle studiene ta hensyn til de histologiske subtyper av EOC, eller graden av restsykdom; i denne studien, ble foxp3 + celler bare assosiert med overlevelse i høy grad serøs svulster fra optimalt debulked pasienter. For det andre, en rekke antistoffer er blitt anvendt for å detektere foxp3, noe som kan føre til uoverensstemmende resultater [80]. Tredje, forskjellige scoring kriterier kan benyttes. For eksempel, den nøyaktige plassering av intratumoral Tregs er en viktig determinant for prognose i magekreft [81]. Fjerde, molekylære markører som brukes til å definere Tregs varierer mellom studier. Selv foxp3 er fortsatt betraktet som den mest pålitelige markør for Tregs i human kreft [82], [83], det kan også uttrykkes ved epiteliale kreftceller [84] – [86] og
in vitro
aktivert CD4 + og CD8 + -T-celler [87] – [95]. Av disse grunner noen studier omfatte CD25 som en andre markør for Tregs [10], [28]. Men som foxp3, CD25 er potensielt uttrykt av effektor T-celler, så det er ikke klart at dual farging for foxp3 og CD25 mer nøyaktig identifiserer Tregs [89], [96]. Andre kjennetegn ved Tregs inkluderer høy uttrykk for GITR og CTLA-4 og lavt uttrykk av CD127 og CD49d og [97], [98], men disse markørene er teknisk vanskelig å vurdere på parafin-embedded TMA.
Disse tekniske hensyn til tross, det er bevis på at tumor-infiltrerende foxp3 + celler er assosiert med en gunstig prognose i EOC, tykktarmskreft, hode- og halskreft, og lymfom [14,33, -36,99-102]. Hvordan kan foxp3 + T celler fremme gode resultater? I den foreliggende studien ble foxp3 + -celler sterkt assosiert med andre effektor-T-celler, og lignende resultater er rapportert i melanoma [103]. Således kan foxp3 + -celler simpelthen være en indikator for en sterk CD8 + T-cellerespons, som kan oppveie eventuelle immunsuppressive effekter av foxp3 + -celler. Alternativt undergrupper av humane foxp3 + T-celler har nylig blitt vist å ha en pro-inflammatorisk, IL-17-produserende fenotype [104] – [106]. Faktisk kan CD4 + T-celler være skjevt mot denne såkalte Th17 fenotype ved å utsettes for TGF-β i kombinasjon med IL-6, IL-1 eller IL-23 [107] – [109]. Disse faktorene er til stede i EOC tumormiljøet [8], og følgelig har Th17-celler er rapportert i EOC [110] – [112]. Dermed kunne sammenhengen mellom foxp3 + celler og økt overlevelse potensielt reflektere en underliggende Th17-lignende anti-tumor respons. Åpenbart er mer arbeid som er nødvendig for å fastslå i hvilken grad foxp3 + T-celler i EOC representerer Tregs versus Th17 eller andre effektor T-celler.
observasjon at intraepitelial CD20 + infiltrater er assosiert med økt DSS er et nytt funn i EOC . Dong et. al. rapportert at B-celler i ascites ble assosiert med kortere overlevelse i EOC [113], men deres Studien fokuserte på B-celler i peritoneal og plevravæske samles etter kjemoterapi, som per definisjon utgjør et dårlig resultat kohort. Faktisk, i denne studien, intraepitelial CD20 + B-celler viste ingen sammenheng med overlevelse hos pasienter med høy risiko, suboptimalt debulked sykdom. Tumor-infiltrerende CD20 + B-celler er et kjennetegn på medullær brystkreft og har blitt foreslått å formidle en gunstig prognose [114], [115]. Dessuten er tilstedeværelsen av en B-celle transcriptional signatur i knutepunkt negativ brystkreft assosiert med øket overlevelse [116]. B-celle infiltrerer i brystkreft representerer clonally utvidet populasjoner, uttrykke somatisk hypermutated IgG molekyler, og gjenkjenne målet antigener som gangliosid D3 og overflate translocated aktin [114], [115], [117] – [120]. Det er uklart hvor tumor-infiltrerende B-celler fremme gode resultater i kreft. al.
