Abstract
Nyrecellekarsinom (RCC) er den mest dødelige av urologiske kreftformer . Metastatisk sykdom rammer en tredjedel av pasientene ved diagnose med en ytterligere tredje utvikle metastatisk sykdom etter extirpative kirurgi. Heterogenitet i den kliniske kurset sikrer forutsi metastaser er notorisk vanskelig, til tross for rutinemessig bruk av prognostiske klinisk-patologisk parametre i risikovurderingen. Med større forståelse av veier involvert i sykdom patogenesen, har en rekke biomarkører blitt vist å ha prognostisk betydning, herunder Ki67, p53, vaskulær endotelial vekstfaktor reseptor 1 (VEGFR1) og ligand D (VEGFD), brev og SLUG. Forrige pathway analyse har vært fra studiet av primærtumor, med lite hensyn til de metastatiske svulster som er fokus for målrettet molekylære terapi. Som sådan, i denne studien en vev microarray fra 177 pasienter med primær nyretumor, nedsatt blodåre svulst blodpropp og /eller RCC metastase har blitt opprettet og brukes med Automated Quantitative Analysis (AQUA) av immunfluorescens å studere den prognostiske betydningen av disse markørene i lokalt avansert og metastatisk sykdom. Videre har dette tillatt vurdering av differensial protein uttrykk mellom de primære svulster, nyrevene svulst tromber og metastaser. Resultatene viser at klinisk-patologisk parametre forblir de en signifikant prediktor for kreft spesifikk overlevelse; kan imidlertid høy VEGFR1 eller VEGFD forutsi dårlig kreft spesifikk overlevelse på univariat analyse for lokalavansert eller metastatisk sykdom. Det var signifikant større ekspresjon av Ki67, p53, VEGFR1, SLUG og brev i metastaser i forhold til primære tumorer og tumor nyrevenen tromber. Med unntak av p53, er disse forskjeller i protein uttrykk ikke blitt vist tidligere i RCC. Dette bekrefter viktigheten av spredning, angiogenese og epitelial til mesenchymale overgang i patogenesen og metastasering av RCC. Viktigere, fremhever dette arbeidet behovet for ytterligere pathway analyse av metastatiske svulster for å overvinne legemiddelresistens og utvikle nye behandlingsformer
Citation. Laird A, O’Mahony FC, Nanda J, Riddick ACP, O’Donnell M, Harrison DJ, et al. (2013) ulike uttrykk av prognostiske proteomikk Markører i Primær Tumor, venøs Tumor blodpropp og metastatisk nyrecellekreft Tissue og korrelasjon med pasientenes prognose. PLoS ONE 8 (4): e60483. doi: 10,1371 /journal.pone.0060483
Redaktør: Bin He, Baylor College of Medicine, USA
mottatt: Per 31. desember 2012; Godkjent: 26 februar 2013; Publisert: 05.04.2013
Copyright: © 2013 Laird et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Arbeidet av forfatteren AL er finansiert av The Royal College of Surgeons i Edinburgh Robertson Trust, The Melville Trust for omsorg og helbredelse av kreft og The Medical Research Council skotsk klinisk farmakologi og patologi Programme. Arbeidet med forfattere FCO, JN, ACPR, DJH og GDS nevnt ovenfor er finansiert av Chief Scientist kontoret, gi nummer ETM37, og støttes av Chief Scientist Finansiert Health Sciences Skottland og Cancer Research UK Experimental Cancer Medicine Centre. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
nyrecellekreft (RCC) utgjør 2,5% av alle voksne kreftformer, men det er den mest dødelige av alle urologiske maligniteter. En tredjedel av RCC pasienter til stede med metastatisk sykdom (mRCC). Mens extirpative kirurgi er ment å være kurativ i de med lokalisert sykdom, en ytterligere 30-40% utvikler seg til slutt fjernmetastaser [1], [2], [3]. I dag er vi i stand til å forutsi nøyaktig de pasienter som vil tilbakefall, på grunn av svært variabel naturhistorie av sykdommen.
Etter kirurgi, en rekke prognostiske nomogrammer har blitt foreslått for å forutsi tilbakefall av sykdommen. Disse inkluderer vanligvis TNM staging og Fuhrman klasse samt ytelse status og serumblodmarkører (hemoglobin, kalsium, laktatdehydrogenase, blodplater, nøytrofile og C-reaktivt protein) i større eller mindre grad [4], [5], [6 ], [7]. Disse klinisk-patologisk variabler er mye brukt i klinisk praksis for stratifisering risiko for tilbakefall og planlegger oppfølging. Til tross for dette har ingen av disse modellene er 100% nøyaktige. I et forsøk på å forbedre pasientens risiko lagdeling, og bedre forutsi tilbakefall av sykdommen og tilhørende dødelighet, mange har undersøkt rollen til prognostiske biomarkører [8], [9]. EMT markører, SLUG og brev, har blitt rapportert å ha prediktiv og prognostisk betydning i RCC [10], [11]. Men mest spesielt Klatte
et al
gjennomført en elegant studie av viktige proteiner i RCC patogenesen med TMA teknikk for å vise Ki67, p53, vaskulær endotelial vekstfaktor reseptor 1 (VEGFR1) og vaskulær endotelial vekstfaktor ligand D (VEGFD) var assosiert med sykdomsfri overlevelse (DFS) i lokaliserte RCC [12]. Dette panelet markører kombinert, var i stand til å bedre forutsi DFS sammenlignet med standard variable. En prognostisk nomogram ble konstruert kombinere disse markørene med klinisk-patologisk variabler for første gang viser en forbedret prediktiv nøyaktighet. Til tross for dette, har rutinemessig bruk av disse markørene i klinikken ikke er vedtatt.
En bedre forståelse av det molekylære grunnlaget for RCC har ikke bare avansert biomarkører, men også avansert behandling av metastatisk RCC (mRCC) med utviklingen av molekylære målrettet terapi. Den viktigste oppdagelsen har vært identifiseringen av mutasjoner i von Hippel-Lindau (VHL) genet i arvelig klarcellet RCC (ccRCC) og opp til to tredjedeler av sporadiske tilfeller [13]. Dette fører til aktivering av hypoksi veien og den påfølgende oppregulering av hypoksi forbundet molekyler, dvs. vaskulær endotel-vekstfaktor (VEGF) og blodplateavledet vekstfaktorer. Disse funnene resulterte i klinisk bruk av VEGF monoklonalt antistoff (bevacizumab) og multi-målrettet tyrosinkinasehemmere (sunitinib og sorafenib) i mRCC. Videre har forståelse for rollen som mammalian target of rapamycin (mTOR) sti i RCC gitt opphav til klinisk bruk av mTOR-hemmere, temsirolimus og everolimus. Til tross for den betydelige forbedring i effektivitet sammenlignet med immunterapier, den tidligere gullstandarden for behandling av mRCC, motstand mot disse molekylære terapi fortsatt et betydelig problem [14], [15], [16].
Mye av kunnskapen av denne molekylære basis av RCC har blitt avdekket ved studium av den primære nyretumor, med lite analyse av forskjellene mellom den primære tumor og metastaser. Nylig Gerlinger
et al
rapportert at den genetiske signaturen til den primære svulsten ikke kan gjenspeile at av metastase [17], men det er liten studie av disse forskjellene på proteinnivå. Lee
m.fl.
har rapportert økt BCL-2 uttrykk [18] og Schultz
m.fl.
har vist større uttrykk for Pakt, PS6, 4EBP1 og cMYC og lavere uttrykk for PTEN i metastatisk RCC sammenlignet med primærsvulster [19]. Det er sannsynlig at nøkkelen til å forstå motstand og utvikle mer effektive behandlinger, er en grundig studie av metastatiske svulster, som er målet med behandlingen er å redusere metastatisk tumorbyrde. I tillegg har hoved RCC svulst en forkjærlighet for å involvere venesystemet (nyrevenen, vena cava inferior og høyre atrium), dette venous svulst blodpropp (VTT) er potensielt en middelvei mellom fenotype av den primære og metastatisk tumor.
Immunohistochemistry (IHC) er et sentralt verktøy i molekylær patologi brukes til å hjelpe diagnose og prognose i RCC. Imidlertid er IHC subjektive og bare semi-kvantitativt. Utviklingen av Automated Kvantitativ analyse (AQUA) av immunfluorescens gjør det mulig nøyaktig og følsom in situ protein lokalisering og kvantifisering, som vi har utviklet for bruk i RCC [11]. I korthet innebærer dette immunofluorescerende farging for målproteinet, og for å skape en epitelial tumor maske, som tillater differensiering av tumoren fra stroma, og sub-lokalisering av cytoplasma og kjerner. Det er etterfølgende digital fotografering, og automatisk analyse av bildene for å gi kontinuerlige score for målet uttrykk. Denne teknikken tillater større objektivitet og nøyaktighet av protein kvantifisering og prognostication tilbys av Klatte og kolleger. I denne studien ønsker vi å bruke AQUA immunoflurescence å vurdere differensial protein uttrykk av rapporterte prognostiske markører i primærtumor, VTT og metastaser i RCC og bestemme deres prognostisk rolle i lokalavansert og /eller metastatisk primære nyrecellekreft.
Pasienter og metoder
Studiepopulasjon
Pasienter som hadde primær nyrecellekarsinom og /eller nedsatt blodåre eller inferior vena cava trombe og /eller fjern RCC metastaser på operasjonstidspunktet eller på et senere dato ble identifisert fra et prospektivt samlet database. Formalinfiksert parafin innebygd (FFPE) tumorprøver ble identifisert fra 177 av disse pasientene som gjennomgikk radikal nefrektomi mellom 1983 og 2010, ved Institutt for Urologi, Edinburgh. Der det er mulig, ble skriftlig informert samtykke oppnådd for bruk av vev overskudd til diagnostisk krav og knyttet anonymiserte pasientdata. Etisk godkjenning til å bruke disse arkiverte vev ble gitt av Lothian Regional etisk komité (08 /S1101 /41 og 10 /S1402 /33). Etisk godkjenning 08 /S1101 /41 tillatelser fordelingen av FFPE-prøver og tilhørende knyttet anonymiserte data fra patologi arkivet for forskning uten samtykke som de ble samlet inn for diagnostiske formål før september 2006. Den diagnostiske vei for disse vevsprøver er nå fullført og de arkiverte prøvene er overskudd til denne prosessen. Tilleggs vev fra etter 2006 ble samlet og utgitt for bruk under etisk godkjenning 10 /S1402 /33, som er Forsknings Tissue Bank etisk godkjenning holdt av SAHSC Bioresource på vegne av NHS Lothian. Godkjenningen gjelder prinsippene om «posisjon uttalelse om diagnostiske arkiver slippe vev for forskning «felles uttalelse fra Human Tissue Authority (HTA) og Den nasjonale forskningsetiske Tilbud (NES) i juli 2009 til bruken av disse prøvene. All patologisk iscenesettelse ble rapportert ved bruk av TNM 2002 klassifiseringen [20]. Hvis dødsårsaker ikke var tilgjengelige i kliniske notater disse ble hentet fra General Register Office of Scotland.
Tissue microarray (TMA) Bygging
Disse vevsprøver ble brukt til å konstruere en TMA [21 ]. Minst tre representative replikere kjerner, 0,6 mm i diameter, fra hver enkelt pasients primærtumor, ble VTT og metastaser tatt etter gjennomgang og merking av hematoxylin og eosin farget lysbilder og blokker av en konsulent patolog. Tilstrekkelig vev var ikke tilgjengelig fra alle primære svulster og metastaser. I alt ble 1980 kjerner tatt og distribuert over 12 lysbilder fra de 177 pasientene som representerer 163 primære svulster, 103 VTTs og 69 metastaser. Dette inkluderte 29 pasienter med bare primære svulster; 79 med matchet primære og VTTs; 24 med matchet primære svulster, VTTs og metastaser; 31 med matchet primære svulster og metastaser og 14 pasienter med uovertruffen metastaser bare.
immunfluorescens
TMA skred ble de-vokset i xylen og deretter rehydrert i sekvensielt fortynne etanol løsninger. Antigen gjenfinning ble utført ved oppvarming av lysbildene i en trykkoker i 5 minutter i Tris-EDTA pH9.0 eller natriumcitrat pH 6,0. Endogen peroksidaseaktivitet ble blokkert ved behandling av de glir i 3% hydrogenperoksid i 10 minutter og ikke-spesifikk binding redusert ved inkubasjon i serumfritt protein blokken (Dako, X0909) i 10 minutter. Glassene ble inkubert med det primære mål-antistoff, for proteinet av interesse, i 1 time ved romtemperatur. Primære antistoffer er beskrevet i tabell 1. Deretter ble objektglassene ble inkubert over natten ved 4 ° C med de egnede antistoffer for å definere tumoren masken. Disse var pan-cadherin (Cell Signal, 4068, 1:100) ved bruk av en kanin primært antistoff eller en kombinasjon av pan-cadherin (Sigma-Aldrich, C1821, 1:750) og CK5 /6/8/18 (Novocastro, 6003168, 1:100) når du bruker en mus primær antistoff [11]. Platene ble deretter inkubert i 1,5 timer med Alexa Fluor 555-konjugert antistoff (Invitrogen A21422 og A21428, 1:25) og pepperrotperoksidase-dekorerte dekstran-polymer-ryggraden antistoff (EnVision, Dako). Platene ble deretter inkubert i 10 minutter med Cy5-tyramide (HistoRx, AQUAntiplex rør F, 1:50), som aktiveres pepperrot peroksydase og tillot visualisering av det primære antistoff. DAPI (4 «, 6-diamidino-2-fenylindol, Invitrogen, P36931) counterstain ble anvendt for å visualisere kjerner. En representativ kjerne er vist i figur 1.
Representative TMA kjerne som viser grønn cytoplasmatisk farge med en kombinasjon av cytokeratin og pancadherin (A), blå nukleær farging med DAPI (B), røde målet farging (C, i denne Ved VEGFR1), og alle tre delene kombinert (D). Kvantitativ vurdering og rommet lokalisering av målet uttrykk måles gjennom å beregne summen av målet piksel intensitet delt på rommet området og normalisert for eksponeringstid.
Automated Kvantitativ analyse
monokromatiske bilder av hverandre TMA kjerne ble tatt ved 20 × objektiv du bruker en Olympus AX-51 epifluorescence mikroskop (Olympus, Pennsylvania, USA). Dersom epitelet utgjorde mindre enn 5% av det totale kjerneområdet, ble kjernen ekskludert fra analysen. Høyoppløselige digitale bilder ble analysert ved hjelp av den AQUAnalysis programvare (HistoRx, Conneticut, USA), for å bestemme mål-protein ekspresjon samlet og i de cytoplasmiske og kjernefysiske avdelinger ved å beregne summen av target pikselintensiteten dividert med kammeret område og normalisert for eksponeringstid .
Statistical Analysis
Passende kupé AQUA score ble normalisert ved median sentrering for hver TMA å tillate inter-TMA sammenligninger og deretter gjennomsnitts vev poengsum tatt fra replikere kjerner. X-flis ble anvendt for å bestemme avskåret for å definere høy og lav protein ekspresjon i den primære tumor, for Kaplan Meier analyse [22]. Kreft spesifikk overlevelse (CSS) ble bestemt ved Kaplan Meier analyse og sammenligninger gjort av log-rank test. Predictive betydningen av protein uttrykk og klinisk-patologiske faktorer for CSS ble bestemt ved hjelp av Cox univariat og multivariat regresjonsanalyse. Korrelasjon av protein uttrykk med standard patologiske faktorer ble vurdert med Pearson korrelasjonsanalyse. Differensial protein uttrykk mellom primærtumor, nedsatt blodåre svulst blodpropp og metastatisk vev ble vurdert ved hjelp av Mann-Whitney test. Statistisk analyse ble utført ved hjelp av PAWS versjon 18.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA), p 0,05 ble tatt for å indikere betydning
Resultater
De klinisk-patologisk funksjoner knyttet til. pasientenes primær RCC er vist i tabell 2. median pasientens alder var 64 år og mann til kvinne ratio var 1.5:1. Det var ingen signifikant forskjell i laterality av tumorer og den gjennomsnittlige tumorstørrelsen var 8,7 cm (område: 1,5 til 16 cm). Flertallet av tumorer (n = 138; 88%) var histologisk klart celle, mens 14 (9,8%) var papillær og resten var andre sjeldne undergrupper. De fleste tilfellene var patologisk stadium T3b (n = 107, 73,4%). 29 (15,8%) tilfeller var patologisk node positive ved nefrektomi og 13 (7,1%) pasienter hadde bekreftet metastaser ved førstegangsdiagnose.
Ki67 og p53 uttrykk ble ikke identifisert ovenfor bakgrunnsnivå i 35,8% (n = 59) og 1,2% (n = 2) av primær RCC respektivt. Ellers protein ekspresjon av andre markører ble identifisert i alle tumorer. Vurdering av forholdet mellom protein ekspresjon i den primære tumor og vanlige patologiske parametere avslørte øket SNAIL ekspresjon korrelerte med avansert patologisk tumorstadium (p = 0,001) og øket maksimal tumordiameter (p = 0,048). Høy VEGFR1 og VEGFD var assosiert med ikke-klar-celle-undertypen (henholdsvis p = 0,017 og p = 0,018).
Videre høy VEGFR1 i hele tumoren masken, men ikke i den lokaliserte cytoplasmisk rommet, ble korrelert med node positiv sykdom (p = 0,005). Det var ingen andre signifikante sammenhenger mellom lignings protein uttrykk og standard klinisk-patologisk variabler.
Vurdering av differensial protein uttrykk mellom primærtumor, VTT og metastaser viste ingen signifikant forskjell mellom den primære svulsten og VTT men betydelig økt ekspresjon i metastaser i forhold til primære og VTT for Ki67, p53, VEGFR1, SNAIL og SLUG (figurene 2, 3, 4, 5, 6). Nøyaktig overlevelse data var tilgjengelig for 132 pasienter. Gjennomsnittlig oppfølgingstid var 58 måneder. Histologisk gruppen var ikke signifikant innvirkning CSS på Kaplan Meier analyse; Men patologisk tumorstadium (PT scenen), Fuhrman klasse og lymfeknutepositiv sykdom ved diagnose gjorde forutsi CSS (tallene 7, 8, 9, 10). Overlevelsesanalyse av de proteomic markører viste høy VEGFR1 og VEGFD å være assosiert med vesentlig lavere CSS (figur 11 12). Det var ingen signifikant forskjell i CSS med Ki67, p53, brev og SLUG uttrykk nivå. Median, spådde fem og ti års overlevelse for de patologiske variabler og proteomikk markører er beskrevet i tabellene 3 og 4 henholdsvis.
Betydelig økt uttrykk av atom Ki67 vist i metastaser sammenlignet med VTT og primærtumor, men ingen forskjell i uttrykk mellom primærtumor og VTT.
Betydelig økt uttrykk av atom p53 vist i metastaser sammenlignet med VTT og primærtumor, men ingen forskjell i uttrykk mellom primærtumor og VTT.
Betydelig økt uttrykk av cytoplasma VEGFR1 vist i metastaser sammenlignet med VTT og primærtumor, men ingen forskjell i uttrykk mellom primærtumor og VTT.
Betydelig økt uttrykk av kjernefysisk SNAIL vist i metastaser sammenlignet med VTT og primærtumor, men ingen forskjell i uttrykk mellom primærtumor og VTT.
Betydelig økt uttrykk av atom SLUG vist i metastaser sammenlignet med VTT og primærtumor, men ingen forskjell i uttrykk mellom primærtumor og VTT.
Ingen signifikant forskjell i CSS er vist mellom klarcellet (n = 111) og papillær RCC (n = 11) svulster.
CSS var statistisk forskjellig basert på patologisk tumorstadium på Kaplan Meier analyse. 122 pasienter ble inkludert i denne analysen (7 pT trinn 1, 13 pT trinn 2, 99 pT stadium 3 og 3 pT stadium 4), andre var utelukket på grunn av ufullstendig oppfølging eller patologi data. Dette viser dårligere CSS med forverring patologisk stadium ved diagnose.
Dette viser statistisk forskjellig CSS basert på Fuhrman klasse. 89 pasienter ble inkludert i denne analysen (1 grad 1, 35 klasse 2, 38 grad 3 og 15 klasse 4), andre var utelukket på grunn av ufullstendig oppfølging eller patologi data. Det er dårligst CSS for klasse 1, med utvisket CSS for grad 3 og 4, og mest gunstige CSS for klasse 2.
Positiv node status ved diagnose har betydelig dårligere CSS enn node negativ sykdom.
Høy VEGFR1 uttrykk i den primære svulsten er knyttet til betydelig verre CSS enn lav VEGFR1 uttrykk.
Høy VEGFD uttrykk i den primære svulsten er knyttet til betydelig verre CSS enn lav VEGFD uttrykket.
Disse variablene som var signifikante i Kaplan Meier analyse ble vurdert med Cox multivariat regresjonsanalyse, og de kliniske variabler av Fuhrman klasse og node status forble signifikant, mens pT scenen , VEGFR1 og VEGFD var ikke uavhengig prognostisk (tabell 5).
Diskusjoner
Denne romanen studien har vist signifikant økt uttrykk av Ki67, p53, VEGFR1, SLUG og brev i RCC metastaser , i forhold til primærtumor og de venøse tromben tumor. Videre kan primær tumor ekspresjon av VEGFR1 og VEGFD brukes til å forutsi signifikante forskjeller i kreftspesifikke overlevelse i nyrecellekarsinom. Mens VEGFR1 og VEGFD var signifikante på univariat analyse, kunne ikke bli vist overlegen uavhengig prognostisk betydning av disse markørene i forhold til standard klinisk-patologisk parametre i multivariat analyse.
Så vidt vi vet, er dette den største rapporterte rekke primære og metastatisk RCC prøver brukt til å konstruere en TMA for sammenlignende analyse protein, og er den eneste studie for å vurdere VTT på et molekylært nivå. I tillegg er bruken av AQUA immunfluorescens muliggjør mer nøyaktig og objektiv protein kvantifisering, en forbedring i forhold til andre publiserte arbeider studere proteinekspresjon ved bruk av TMA teknikk. Samtidig erkjenner vi at dette unike og vanskelig å skaffe vev satt fortsatt representerer en liten kohort. Dette kan gi opphav til type II-feil som et resultat av en underpowered studien. Særlig kan dette ha forhindret signifikante forskjeller mellom primærtumor og VTT protein uttrykk blir oppdaget og potensielle undervurdering av den prognostiske betydningen av disse markørene og kjente patologiske prognostiske indikatorer, spesielt i multivariat analyse. Markørene valgte var basert på tidligere dokumentert prognostisk betydning, impliserer deres betydning i RCC patogenese, men det ville være viktig i fremtiden for å utføre en stor skala objektiv vurdering av proteiner for å vurdere omfanget av forskjell mellom primær og metastatisk RCC. Likevel har betydelige forskjeller i proteinuttrykk av viktige markører mellom primærtumor og metastaser påvist for første gang.
Forskjellen i Ki67 ekspresjon mellom primære og metastatiske lesjoner har vært studert i en rekke kreftformer, inkludert bryst , tykktarm, mage stromal (GIST) og blærekreft, med kontrast resultater. I brystkreft og tykktarmskreft, høyere Ki67 ekspresjon i primære svulster sammenlignet med nodal og levermetastaser henholdsvis, ble vist [23], [24], [25], [26]. Men i GIST og blæretumorer, så vel som andre studier av brystkreft og kolorektal karsinom, det motsatte eller ingen forskjell i ekspresjonen er blitt demonstrert [27], [28], [29], [30]. Resultatene av denne undersøkelsen har vist en betydelig økning i Ki67 ekspresjon i metastatisk RCC vev sammenlignet med primære og VTT RCC, noe som tyder på opp regulering av spredning, som ikke har vært rapportert tidligere. Andre derimot har undersøkt differensial p53 uttrykk i grunnskolen og metastatisk RCC [31], [32], [33]. På grunn av den forlengede halveringstid av mutant p53 sammenlignet med vill-type p53 er mutert i stedet for villtype p53 påvist med immuno [33]. Vårt arbeid har bekreftet økt uttrykk av mutant p53 i metastatisk RCC vist tidligere, impliserer inaktivering av p53 i sykdomsprogresjon.
Denne studien har også vist for første gang, økt uttrykk av VEGFR1 i metastatisk forhold til primær og VTT RCC vev. VEGF er en viktig signal protein som er involvert i angiogenese og lymphangiogenesis [34], viktige prosesser i kreftvekst og formidling; kjennetegnene til kreft [35]. Oppregulering av VEGF gjennom induksjonen av hypoksi vei med mutasjon av genet VHL er godt akseptert i patogenesen av ccRCC og har ført til en vellykket utvikling av molekylære terapier i behandling av RCC. Imidlertid, differensial VEGF og VEGFR-ekspresjon i primære og metastatisk RCC har ikke tidligere vært studert, til tross for de RCC-metastaser er målet for VEGF-inhibitorer. Økt VEGF (heller enn VEGFR) mRNA nivåer ble sett i levermetastaser i forhold til primære kolorektal tumorer [36], mens ingen forskjell på protein uttrykk for VEGF eller VEGFR1 i melanom og sammenkoblede metastaser har blitt rapportert [37]. Våre resultater har bekreftet økt uttrykk av VEGFR1 i metastatisk RCC, impliserer opp regulering av angiogenese og lymphangiogenesis, og støtte for bruk av VEGF målrettet terapi i metastatisk sykdom.
Aktivering invasjon og metastasering er et annet kjennetegn på kreft [35] og epitelial til mesenchymale overgang (EMT) er antatt å være en viktig prosess i denne, hvor et fysiologisk utviklingsprosess er reversert. Sarcomatoid de-differensiering er sett i RCC [38], [39], og dette kan være en fenotypisk eksempel på EMT observert av patologen. Vi har vist betydelig større ekspresjon av både SLUG og snegle-proteiner i metastatisk RCC i forhold til de primære svulster, samt en sammenheng mellom økt SNAIL ekspresjon og øke tumorstørrelse og fremme pT stadium. Dette støtter utviklingen av en EMT fenotype på et molekylært nivå i RCC patogenesen.
Dette arbeidet så langt har indikert viktige proteiner kan være viktig i patogenesen av RCC og vist betydelige forskjeller i proteinuttrykk i grunnskolen og VTT RCC forhold til metastatisk innskudd. Vi hypotese at VTT ville være en mellomliggende prosess mellom den primære og metastaser, men var ikke i stand til å demonstrere dette med proteiner vurdert. Dette kan være som et resultat av en rekke faktorer. For det første, som tidligere angitt dette forblir en forholdsvis liten kohort, og som sådan kan være relativt svak. Det er en mulighet for at proteinene studert er ikke nøkkelen til invasiv forlengelse av den primære inn i en VTT. Imidlertid ville man forvente intuitivt markører for spredning, angiogenese og EMT å være involvert i en slik prosess. Til slutt må vi akseptere at en svulst som vandrer, tilpasser og vokser i et nytt miljø er forskjellig fra en svulst som invaderer lokalt, og at VTT kan være mer representativ for en forlengelse av primærtumor.
Som samt differensial protein uttrykk, rettet vi å vurdere den prognostiske betydningen av disse markørene i avansert RCC. Vi fant standard patologiske faktorer er de viktigste variablene i forutsi kreft spesifikk overlevelse. Nodal sykdom ved presentasjon har vist seg å være prognostisk i begge ellers lokalisert sykdom og metastatisk sykdom uavhengig av andre prognostiske faktorer [40], [41], [42]. Vi har bekreftet betydningen av denne patologiske funn i denne studien, hvor positive lymfeknuteaffeksjon har størst hasardratio (2,7) på multivariat analyse for CSS.
Fuhrman klasse ble også funnet å være signifikant på univariate og multivariate analyse. Fuhrman grad er basert på vurderingen av kjernefysisk størrelse, kjernekraft pleomorphism, og nukleolært fremtredende [43] og mens prognostisk betydning i papillær og chromophobe RCC er omdiskutert [44] Det har vært klart vist seg å være viktig i ccRCC [43], [ ,,,0],45], [46], [47]. I vår analyse Fuhrman klasse 1 hadde de fattigste prognose, og dette er trolig på grunn av den lille størrelsen på utvalget, mens klasse 2 sykdommen hadde signifikant forlenget CSS sammenlignet med grad 3 og 4, som ble utvisket. Tilsvar CSS av pasient med Fuhrman grad 3 og 4 sykdom kan være et resultat av andre konfunderende faktorer; men det er foreløpig bekymring for intra- og inter-patolog rapportering variasjon av Fuhrman klasse [44] noe som har ført til International Society of Urologisk patologi (ISUP) å anbefale å erstatte Fuhrman gradering med ISUP nukleolært karaktersystemet, basert utelukkende på nukleolært størrelse som beskrevet i Fuhrman men uten kompliserende og forvirrende spørsmål om kjernefysisk størrelse og form.
Patologisk tumorstadium var signifikant på Kaplan Meier-analysen, men ikke multivariat analyse. Den lille utvalgsstørrelse etapper annet enn pT3, og den høye risikoen i kohorten, valgt på grunn av nyrevenen engasjement og /eller samtidige eller påfølgende metastaser, har hindret identifikasjon av prognostisk rolle tumorstadium klart identifisert i lokalisert sykdom [4 ], [37], [45], [46]. Den lille størrelsen på utvalget av ikke-klarcellet RCC kan også ha hindret noen signifikant forskjell i CSS blir identifisert basert på histologisk subtype (sannsynlig type II feil), selv om det var en klar trend med lavere CSS med ccRCC.
den prognostiske betydningen av Ki67 og p53 uttrykk har vært mye studert i RCC. Markøren spredning, Ki67, er blitt vist å være assosiert med høyere atom karakter og dårligere prognose i lokaliserte ccRCC [12] og mRCC [48]. Imidlertid har andre studier i lokaliserte RCC ikke klarte å demonstrere uavhengig prognostisk betydning av Ki67, mye på grunn av sin nære tilknytning til tumor grad og stadium [49], [50]. Vår studie av lokalavansert eller metastatisk RCC, selv om viser en trend med dårligere prognose i høyere Ki67 uttrykk, klarte ikke å påvise noen signifikant forskjell i CSS basert på Ki67 uttrykk. Tilsvarende er prognostisk betydning av p53 i RCC også drøftet [32], [50], [51], [52], [53], [54], [55], [56], og i vår kohort ingen forskjell i CSS ble sett mellom høyt og lavt uttrykk. Genuttrykkstudier i RCC har vist en EMT signatur å bli assosiert med dårligere prognose [57], [58]. Til tross for disse funnene, kvantitativ vurdering av brev og SLUG, viktige proteiner i EMT, klarte ikke å vise noen signifikant forskjell i CSS.
VEGF uttrykk har også blitt undersøkt i RCC av andre, og funnet å være prognostisk. Spesielt har VEGFR1 blitt funnet å være assosiert med dårligere utfall i lokaliserte RCC [12], og vår studie har bekreftet dette på univariat analyse ved avansert sykdom. Andre har foreslått lav VEGFD å være forbundet med dårligere prognose [1], [12], men vi har sett det omvendte i fremskreden sykdom med dårligere resultat assosiert med høyere VEGFD i den primære tumor og vi foreslår dette er sannsynlig å være et resultat av opp regulering av lymphangiogenesis. Imidlertid kan tap av betydning av disse markørene i multivariat analyse være som et resultat av den meget rollen til VEGF i lymphangiogenesis diskutert.
