Abstract
Sirkulasjonstumorceller (CTC) oppregning lover å være en viktig prediktor for klinisk utfall for en rekke kreftformer. Etablerte CTC oppregning metoder først og fremst stole på affinitet fangst av celleoverflateantigener, og har blitt kritisert for undervurdering av CTC tall på grunn av antigen bias. Emerging CTC fangststrategier typisk skille disse cellene basert på deres antatte biomekaniske egenskaper, som ofte er validert ved hjelp av dyrkede kreftceller. I denne studien, har vi utviklet et verktøy for å undersøke de morfologiske egenskapene til CTCs fra pasienter med kastrering motstandsdyktig prostatakreft og prostata dyrkede kreftceller for å etablere hvorvidt den sistnevnte er en passende modell for den førstnevnte. Vi isolert både CTCs og kultiverte kreftceller fra fullblod ved hjelp av CellSearch®, og vurdert ulike cytomorphological egenskaper. I motsetning til dyrkede kreftceller, ble CTCs beriket av CellSearch® system funnet å ha betydelig mindre størrelse, større kjernefysisk-cytoplasma ratio, og mer langstrakt form. Disse CTCs ble også funnet å vise betydelig mer variasjon enn kultiverte kreftceller i atom cytoplasma ratio og formen profil
Citation. Park S, Ang RR, Duffy SP, Bazov J, Chi KN, Black PC, et al. (2014) morfologiske forskjellene mellom Sirkulasjonstumorceller fra pasienter med prostatakreft og Cultured prostata kreft celler. PLoS ONE 9 (1): e85264. doi: 10,1371 /journal.pone.0085264
Editor: David T. Eddington, University of Illinois i Chicago, USA
mottatt: 13 juli 2013; Godkjent: 25 november 2013; Publisert: 08.01.2014
Copyright: © 2014 Park et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet med tilskudd fra Natural Science and Engineering Research Council of Canada, Canadian Institutes of Health Research, Prostate Cancer Canada, Vancouver Prostate senterets translasjonell forskningsinitiativet for Accelerated Discovery and Development, Ingeniører-in-Scrubs treningsprogram på UBC, Terry Fox Research Institute , og en pris fra Movember Global handlingsplan (GAP) Prostate Cancer Biomarker Initiative. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. Forfatterne bekrefter at medforfatter Peter Black er en PLoS ONE Editorial styremedlem. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer.
introduksjon til
Sirkulasjonstumorceller (CTCs) har vært innblandet som potensielle frø av kreft metastasering og er derfor av stor betydning i forskning, sykdom ledelse, og narkotika utvikling [1] – [3]. Etablerte fremgangsmåter for å fange disse cellene, slik som Veridex CellSearch® systemet (Raritan, NJ, USA), er avhengige av affinitet fangst av epiteliale celleoverflateantigenet, EpCAM, etterfulgt av fluorescens-merking av intracellulær cytokeratin (CK) [4] – [ ,,,0],6]. Mens CTC identifikasjon og telling, på grunnlag av epitelial biomarkør ekspresjon, kan anvendes til å forutsi dårlig klinisk resultat [7] – [10] Denne strategi kan være utsatt for underestimering av CTC antall på grunn av epitelial-til-mesenchymale overgang [11] – [ ,,,0],14], dårlig ekspresjon av disse faktorene i visse tumortyper, [14], eller endringer i ekspresjon av disse faktorene etter kjemoterapi [15]. Disse begrensningene kan være særlig aktuelt, gitt at utseendet på mesenchymale CTCs er assosiert med sykdomsprogresjon [16] og inkludering av tilleggskriterier CTC identifikasjon kan være et verdifullt supplement til konvensjonell CellSearch® CTC telling.
I tillegg til sin ekspresjon av tumorantigener, er det bredt akseptert at CTCs har forskjellige biomekaniske egenskaper, herunder større format enn leukocytter, større atom til cytoplasma (N: C) forholdet, så vel som forskjellig morfologi atom [17]. En rekke strategier er blitt utviklet for å anrike for CTCs basert på disse karakteristikkene [18]. CTCs er blitt isolert ved hjelp av tetthetsgradient-sentrifugering [19] eller etter størrelse, ved hjelp av mikroporøs filtrering [20] – [22]. Nylig har microfluidic teknologier oppnådd overlegen CTC fangsteffektivitet og anrikning ved hjelp av metoder slik som hydrodynamisk kromatografi [23] – [28], mikrofluidfiltrerings [29] – [31], og dielectrophoresis [32] – [35]. Utviklingen av disse teknologiene vanligvis brukes dyrkede kreftceller som en morfologisk modell for kliniske CTCs. Men mens kreftceller og noen CTCs har felles biofysiske egenskaper [17], kan CTCs oppvise forskjellige morfologiske egenskaper, avhengig av typen av tumor opprinnelse [36]. En alternativ strategi vil være å innlemme biomekaniske karakterisering med de mer etablerte antigen-basert CellSearch® CTC oppregning strategi.
Vi har utviklet et verktøy for å analysere cytomorphological egenskapene til kreftceller. Vi benyttet dette verktøyet til å undersøke både pasient CTC og modell kreft cellelinje morfologi, etter CellSearch® berikelse. Disse resultatene vil gi viktige data til hjelp i CTC identifikasjon basert på kombinert antigen og biomekaniske kriterier [36] samt i å velge hensiktsmessige modeller for optimalisering av biomekaniske CTC berikelse.
Materialer og metoder
Blood Prøvetaking
blod~~POS=TRUNC prøver~~POS=HEADCOMP fra friske donorer og pasienter med metastatisk kastrering resistent prostatakreft (CRPC) ble oppnådd med skriftlig informert samtykke og samlet inn ved hjelp protokoller godkjent av UBC klinisk Etikk Review board (http: //forskning. ubc.ca/ethics/clinical-research-ethics-board). De CRPC pasientene i denne studien varierte i alder fra 53-83 år, og PSA nivåer, 21,1 til 2200 ug /L (tabell S1). Blodprøver i begge tilfeller blir innsamlet og lagret i CellSave® Vacutainer-rør (Becton Dickinson, Raritan, NJ).
Isolering og opptelling av CTCs av CellSearch
CTCs isolering og telling ble utført ved hjelp av CellSearch® system som tidligere beskrevet [4], [5], [37]. Kort sagt ble blodprøver trukket inn i 10 ml CellSave Vacutainer-rør (Becton Dickinson) som inneholder proprietær antikoagulant og konserveringsmiddel. Prøvene ble holdt ved romtemperatur og behandlet i løpet av 48 timer etter innsamling. Den CellSearch® fanger opp EpCAM uttrykkende celler ved anvendelse av antistoff-belagte magnetiske kuler og deretter etiketter disse cellene med fluorescerende fargestoffer, slik som DAPI, CD45, og cytokeratins, for å skille potensielle CTCs fra leukocytter. Etter Immunomagnetisk fangst og fluorescens flekker, er bilder av kandidaten CTCs innhentet i lysfelt og tre fluorescens kanaler (DAPI, CD45, og cytokeratins). Bildene som er delt inn i flere mindre bilder som hver inneholder en enkelt celle og satt sammen i et panel i programvare. Til slutt, en sertifisert tekniker positivt identifiserer CTCs ved å se på størrelse, form, og fluorescens intensitet av hver kandidat celle
Cell Culture and Processing
Menneskelig prostata kreft cellelinjer inkludert LNCaP (ATCC.: CRL-1740), DU145 (ATCC: HTB-81), og c4-2 (ATCC: CRL-1595) ble dyrket i kultur ved å bruke RPMI-1640 medium (HyClone, Logan, UT) med 10% føtalt bovint serum ved 37 ° C med 5% CO
2. PC3 (ATCC: CRL-1435) celler ble dyrket på samme måte, men ved hjelp av DMEM (HyClone, Logan, UT) medium i stedet. Dyrkede kreftceller ble tilsatt i 7,5 ml blod fra en frisk donor inn CellSave® Vacutainer-rør og behandlet innen 48 timer identisk som pasientprøve.
Bildebehandling
For å studere morfologi CTCs og kultiverte kreftceller, vi eksporterte bilder av enkeltceller fra CellSearch® system og analysert dem ved hjelp av et program vi utviklet ved hjelp av LabView (figur S1, National Instruments, Austin, TX). Bildene var kvadratiske matriser med størrelser fra 80 til 200 piksler, og formatert som Portable Network Graphics (PNG) filer som 8 bit mono eller 24-biters farge kompositter (Figur S1). Slik beregnes område i piksler, ble bildene i utgangspunktet behandles ved hjelp av klynge thresholding å oppdage lyse objekter for å matche den automatiske eksponeringen utføres av CellSearch® system (figur 1A). Partikler med piksler i kontakt med kanten av bilderammen ble fjernet ved hjelp av en ramme avvisning partikkelfilter for å fjerne celler ufullstendig avgrenset av bildene (figur S1). Multi-partikkel bildene ble også eliminert ved hjelp av vannskillet segmentering. Rusk partiklene ble fjernet ved hjelp av to-gjentakelser av en 3 × 3 erosjon partikkelfilter. Celle og kjernefysisk størrelse ble bestemt ved telling av antallet av oventerskel piksler i cytokeratin og DAPI kanal hhv. Resultater for beregning cellen og kjernestørrelse ble filtrert for å fjerne celler med usannsynlige kjernefysiske størrelser, som vi definerer som den kjernefysiske areal som overstiger 95% av cellearealet. Disse behandlingstrinn forkastet 209 ut av 732 bilder, eller 28,5% av det totale. Flertallet av de forkastede bildene inneholdt cellefragmenter eller dårlig kvalitet (Figur S2).
LabVIEW programvaren utfører rekke operasjoner på store varierende Mages datasett levert av CellSearch® system. To parallelle filtrering og målinger, for eksempel beregning av området i piksler (A) og estimere den optimale ellipse (B) utføres for optimal ytelse og resultater.
eksentrisitet Cell Shape Måling
for å analysere eksentrisiteten av celleformen, ble en ellipse montert til omrisset av cellen. Oversikten over beregne den optimale ellipse ved hjelp LabView programvare er vist i figur 1B. For å forbedre oppdagelse av cellen disposisjon, bildene var kontrastforsterket før auto-terskel. Tre gjentakelser av en 3 x 3 erosjon filter, samt et enkelt dilate filter ble utført for å glatte kantene av partiklene. Figur ble utført på et binært bilde ved hjelp av konturen tracing metode for å søke etter den lengste ellipsen omkretsen innenfor bildet (figur S1). Etter montering av ellipsen resultatene ble bekreftet visuelt av operatøren. For å kvantifisere eksentrisitet av cellen form, vi beregnet forlengelse faktor (EF), definert som forholdet mellom de store og små akser av den optimale ellipse.
Størrelse Måling Kalibrering
Å kalibrere størrelsesmålinger fra CellSearch® bilder, vi separat målte størrelsen av de dyrkede prostatakreftceller i suspensjon ved hjelp av CEDEX XS avbildes basert celle analysator (Roche, Tyskland). Dyrket dyrkede kreftceller blir trypsinisert og resuspendert i kulturmediet. -Celler ble evaluert ved anvendelse av en 1:01 fortynning av cellesuspensjonen i trypanblått (Gibco, Grand Island, NY). En 10 ul av cellesuspensjonen blir lastet på Smart skyve (Roche, Tyskland), og deretter leses for å måle cellediameteren. Omregningsfaktoren fra piksler til mikrometer kan bestemmes ved hjelp av følgende ligning, etter
Størrelsen på CTCs fra pasientprøver ble anslått av produkter av omregningsfaktor og areal av CTCs målt fra CellSearch® bilder.
Nuclear cytoplasmatiske ratio Måling
atom~~POS=TRUNC cytoplasma ratio er definert som forholdet mellom kjernefysiske området (A
N) til cytoplasma (A
C) område, hvor A
C anses som området av cellen unntatt A
N.
Prøvevalg
CTCs analysert i denne studien ble innhentet fra baseline blodprøver av samtykkende pasienter diagnostisert med metastatisk kastrering resistent prostatakreft som var kjemoterapi-naive og registrert på en randomisert fase II klinisk utprøving av et nytt middel [38]. Vi har samlet alle bildene som viser DAPI + CK + CD45- hendelsene som ble identifisert av CellSearch® for de 83 fagene rekruttert til studien. Basert på sannsynligheten for at en liten brøkdel av disse hendelsene representert legitime CTCs vi begrenset analysen til 19 pasienter som hadde 40 DAPI + CK + CD45- hendelser. Tre av disse pasientene ble ytterligere ekskludert på grunn av lav kvalitet på bildene. CTC oppregning ble uavhengig bestemt for de resterende 16 pasienter ved en CellSearch®-kvalifisert tekniker og teller varierte fra 11 til 106 CTCs /7,5 ml, med en medianverdi på 41,5 CTCs /7,5 ml. Etter eksklusjon uegnede bilder (Figur S2), fordi de ikke kunne bli tolket av vår programvare, ble totalt 523 CTCs fra prostatakreftpasienter analysert sammen med 800 kultiverte kreftceller fra de fire prostata kreft cellelinjer.
resultater og diskusjon
Cell size
Analysere bilder av celler behandlet med CellSearch® system og kalibrert mot standard mikroskopi, vi fant betydelige størrelsesforskjeller mellom prostatakreft CTCs og dyrkede prostatakreftceller (figur 2 ). Spesielt den gjennomsnittlige diameter av CTCs fanget av CellSearch® blant våre 16 pasienter, er litt over halvparten av de dyrkede kreftceller, med 7,97 ± 1,81 mikrometer for CTCs og 13,38 ± 2,54 mikrometer for dyrkede kreftceller (p 0,001) henholdsvis . Mens Coumans og kolleger [21] benyttet en Micropore filtrering strategi for anriking av både kreft cellelinjer og pasient avledet CTCs, preget de biomekaniske egenskaper av samme EpCAM
+ CK
+ CD45
– CTC befolkning presentert i denne studien. Deres analyse rapporterte at prostata CTCs var mindre enn de i bryst eller kolorektal kreft, men de antas at prostatakreft CTCs var omtrent 25% større enn vår nåværende rapport. Selv om dette avviket kan representere stress i cellene pålagt i utvalgets behandling av immunocapture, i denne studien, og Micropore filtrering, i det tidligere, kan denne forskjellen også har oppstått fra de ulike strategier som benyttes for å måle cellestørrelse. Coumans brukt en pipette for Coulter størrelse kalibrering, som var mindre nøyaktig enn bildeanalyse for liten lengdeskala ( 10 um) størrelse anslag. Videre vårt estimat av cellediameteren er forenlig med liten gjennomsnittlig cellevolum rapportert av Ligthart og medarbeidere [36], samt et annet nylig studie som viser LNCaP totale celleområdet er 1,6 ganger større enn den for EpCAM
+ CK
+ CD45
– prostatakreft CTCs [39]. Det er også interessant å merke seg at den optimale porestørrelse anvendt i tidligere studier for filtrering basert fangst av CTCs var 8 pm, som sammenfaller med vår beregnet cellediameter på 7,97 pm [21], [22], [29], [40] . Micropore filtrering strategier har rapportert så høyt som 90% CTC utvinning [40], men har relativt dårlig utvalg renhet [41] sikret likhet i størrelse mellom CRPC CTCs undersøkt i denne studien og leukocytter, kan dette representere en fundamental begrensning av filtrering baserte strategier . Denne begrensning kan overvinnes ved å potensielt berikelse strategier som kombinerer CTC berikelse basert på en kombinasjon av cellestørrelse og deformerbarhet [29] -. [31]
Den gjennomsnittlige diameter på CTCs (7,97 um) var signifikant mindre enn dyrket kreftceller (13.38 pm) (p 0,001)
Vi har også vurdert muligheten av våre pasientutvelgelseskriterier (CTC telle 40). kan ha påvirket det for et større antall mindre CTCs. Mens de utvalgte pasientene kjemoterapi-negative, ville de ha deltatt i en rekke terapeutiske intervensjoner og vil representere pasienter i de sene stadier av sykdommen. På grunn av disse eller andre unike fysiologiske byrder innenfor vår pasient kohort, bør det utvises forsiktighet ved generalisere disse resultatene til alle CRPC CTCs. Men observerte vi ingen sammenheng mellom CTC celle størrelse og celletall (tabell S1 og figur S3) som ellers ville foreslå at sykdommens alvorlighetsgrad påvirker cellestørrelse. Interessant, mens andre studier har rapportert en høy grad av heterogenitet i CTC cellestørrelsen [21], [36], [42], [43], vår størrelse estimering basert på mikroskopisk analyse viste at den interindividuelle variasjon av den midlere celle størrelse var ganske liten, som strekker seg fra 7,05 mikrometer til 8,94 mikrometer med en median på 8,04 mikrometer. Videre er det for tiden aksepterte kriterium brukes av CellSearch® systemet til å bekrefte CTCs er at deres størrelse må være større enn nabo leukocytter [17]. Men denne størrelsen definisjonen var i stor grad fastsettes på grunnlag av CTCs avledet av brystkreft [44] – [47] som har en median celle diameter på 13,1 nm [21]. Vår observasjon at CTCs fra pasienter med CRPC er betydelig mindre i størrelse (~8 mikrometer) tyder på at disse konvensjonelle kriterier for CTC identifikasjon kan undervurdere den sanne CTC telling.
På samme måte vår observasjon at prostatakreft EpCAM
+ CTCs er gjennomgående mindre enn dyrkede kreftceller er potensielt viktig for nye label-free CTC berikelse strategier. For det første kan berikelse av CTCs basert på størrelsen alene ha begrenset effekt for fangst av de mindre CTCs finnes i CRPC pasienter fordi de ikke vil være så klart discriminable fra pasient leukocytter. Mens større kreftceller blir typisk brukt for å demonstrere effekten av disse teknikker, slik som HELA (ved 20 um), LNCaP (18 um), MCF-7 (mer enn 15 um), MDA-231 (15 um) [21 ], [48], [49], dyrkede kreftceller, såsom L1210 muselymfomceller (10 uM), med mindre diameter kan representere bedre modeller for anrikning CTC [31], [50], [51]. For det andre, bidraget av nukleoplasma til celle stivhet er 10 ganger større enn i cytoplasma [52]; CTC berikelse strategier som fange CTCs basert på størrelse og formbarhet kan vise seg å være bedre enn de som liksom basert på størrelsen alene.
Cell Shape
Bruk av dyrkede kreftceller tilsatt i blod fra friske donorer kan modellere separasjon av disse cellene fra hematologiske celler som varierer i cellestørrelsen, men den vanlige forbehandling av disse cellene med trypsin, for å skille dem fra vevskulturflasker, eller prøvebehandling ved hjelp av CellSearch affinitet fange strategi kan også dramatisk påvirke celle form. Gjennom sammenligning av tryptinisert dyrkede celler og CRPC CTCs, etter CellSearch® CTC berikelse, evaluert vi om disse dyrkede celler er hensiktsmessige modeller for pasient avledet CTCs. I motsetning til dyrkede celler, som var generelt rund form, CTCs oppviste signifikant variabilitet form med mange celler som har et mer langstrakt formet (figur 3). Vi kvantifisert eksentrisiteten av celleformen ved hjelp av forlengelsesfaktoren (EF), definert som forholdet mellom de store og små aksene av den optimale ellipse. Som vist i figur 4A, CTCs var signifikant mer langstrakt enn dyrkede cancerceller med en midlere median EF på 1,27 sammenlignet med 1,17 for dyrkede kreftceller (p 0,05). Denne observasjonen er i samsvar med andre studier som rapporterer betydelig pleomorhpism blant CTCs [21], [36], [42], [43]. En mulig årsak til mangfoldet i celle morfologi er apoptotiske hendelser assosiert med CTC formidling [53]. Imidlertid kan cytomorphological observerte endringene i CTCs representerer funksjonelle endringer knyttet til interaksjoner mellom CTC og endotelet eller mobil forlengelse assosiert med vaskulær transport [54], [55]. Interessant nok har cytomorphological abnormitet av CTCs vært korrelert til dårlig klinisk utfall ved metastatisk brystkreft, tykktarms, og prostatakreft. [36].
CTCs var merkbart mindre enn dyrkede kreftceller (A-D). Dyrkede kreftceller var for det meste runde med vanlig celle og kjernefysiske former. Kjernen er vanligvis sentrert og omgitt av cytokeratin (E-L). CTCs oppviste svært varierende former, deriblant rund (e), oval (F), langstrakt (G-J), og klynger (L). Ikke-runde og multi-nucleate celler ble ofte observert (G-K). Den gule skala Baren er fem mikrometer i lengde
A:. Forlengelse faktor (EF) av CTCs fra prostatakreftpasienter sammenlignet med dyrkede prostatakreftceller. Median EF av CTCs var generelt større med betydelige inter- og intra-pasient variabilitet. B: Nuclear cytoplasma (N /C) prosenter av CTCs fra prostatakreftpasienter sammenlignet med dyrkede prostatakreftceller. Median med øvre og nedre kvartiler er vist for hver prøve. Median N /C-forholdet for CTCs var generelt større med betydelige inter- og intra-pasient variabilitet.
Nuclear Cytoplasmatiske Ratio
atom cytoplasma ratio (N /C) er definert som forholdet mellom den tilsynelatende atomområdet, og den tilsynelatende celleområdet med kjernen trekkes. Sammenlignet med dyrkede kreftceller, blir CTCs forventes å ha større N /C på grunn av sin mindre cellestørrelse og større sannsynlighet for kjernefysisk størrelse på grunn av mulige kromosomale abnormaliteter. Vi fant median N /C i alle dyrkede kreftceller til å være 1,12, mens gjennomsnittet median N /C-forholdet fra CTC av pasienter, beriket av CellSearch® systemet til å være 1,43. Denne observasjonen understreker ytterligere potensiell effekt av formendringsevnen baserte CTC berikelse, som nukleoplasma bidrar ti ganger mer til celle stivhet enn den cytoplasma [52]. Videre, som vist i figur 4B, CTCs viste signifikant høyere N /C variabilitet enn dyrkede kreftceller. Tatt i betraktning at N /C-forhold på CTCs korrelerer til dårlig resultat sykdom [36], kan det spekulert i at, i denne heterogen populasjon, er det celle subpopulasjoner med større metastatisk potensial. Hvis ja, så kanskje en mer relevant mål på sykdomsstatus er tellingen av en viss undergruppe av CTCs stedet for telling av alle CTCs som brukes i dag [9], [56].
Cell Svinn
en bekymring i forbindelse med måling av cellestørrelsen ved hjelp av CellSearch® system er hvorvidt lagring av celleprøver i CellSave® rørene endrer størrelsen av cellen og kjernen. For å undersøke, sammenlignet vi kultiverte kreftceller tilsatt i blod fra friske givere behandlet umiddelbart med de samme cellene behandlet etter 48 timer med lagringsplass. Cellen diameter ble funnet å avta med ~6%, mens kjernediameteren ble funnet å avta med ~ 10% fra 0 til 48 timer (figur 5). Dette resultat gir et anslag av variasjonen av de målte cellemorfologi parametere som følge av prøvelagringstiden, men kan ikke forklare de betydelige forskjeller i morfologi av CTCs og dyrkede kreftceller, eller variasjonen innenfor hver CTC prøve.
A: diameteren på dyrkede prostata kreft celler redusert ~6% i gjennomsnitt. B:. Kjerne diameter cultured prostata kreft celler redusert ~ 10% i gjennomsnitt
Konklusjon
I konklusjonen, CTCs isolert fra kastrering motstandsdyktig prostatakreftpasienter, ved hjelp av CellSearch® system , var mindre i størrelse, mer langstrakt form, og hadde høyere N /C i forhold til dyrkede kreftceller. CTCs viste også betydelig større variasjon i form og N /C. Mens systemet bare fanger EpCAM-høy celler, CTC bilder fra CellSearch® oppregning er allment tilgjengelig, og dette analytisk strategi kan brukes til å identifisere karakteristiske morfologiske trekk CellSearch®-beriket CTCs. De morfologiske forskjellene mellom dyrkede cellelinjer og CTC må vurderes i design og testing av enheter som isolerer CTC i en etikett-free mote basert på cytomorphological kriterier.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
Screen-shot av LabView® program utviklet for å analysere bilder hentet fra CellSearch® system. Programmet henter bildene for hver CTC kandidat. En valgt bilde (uthevet i gult) er analysert for å måle området i piksler. En ellipse er montert på dette bildet og kledde på toppen av det opprinnelige bildet for å sjekke. Parametere for mellombildebehandlingstrinn, samt statistikk for hele samlingen vises også
doi:. 10,1371 /journal.pone.0085264.s001 plakater (docx)
Figur S2.
Avvist bilder av cellefragmenter fra CTC identifikasjon. Disse bildene av cellefragmenter ofte dukket opp i løpet av bildeanalyse og ble ikke inkludert i CTC telle eller celle størrelse målinger. Typiske CTC fragmenter inkluderer en kjerne delvis dekket av cytokeratin, eller en kjerne helt atskilt fra cytokeratin. Disse fragmentene sannsynlig stammer fra CTCs omgår apoptose
doi:. 10,1371 /journal.pone.0085264.s002 plakater (docx)
Figur S3.
Cell størrelse versus CTC teller. Det syntes å være noen sammenheng mellom CTC celle størrelse og celletall for CTCs identifisert av CellSearch fra pasienter med metastatisk kastrering resistent prostatakreft. Cellestørrelsen varierte fra 6,9 pm til 8,95 pm; mens CTC telle varierte fra 11 til 106.
doi: 10,1371 /journal.pone.0085264.s003 plakater (docx)
Tabell S1.
Pasientinformasjon oppsummering. Alle pasientene ble diagnostisert med metastatisk kastrering resistent prostatakreft (mCRPC). Det var ingen signifikant korrelasjon mellom PSA-nivå og størrelse på CTCs
doi:. 10,1371 /journal.pone.0085264.s004 plakater (docx)
