Abstract
Andrographis lineata
er en urte medisinsk plante som brukes i tradisjonell medisin som en erstatning for
Andrographis paniculata
. Her, ved hjelp av modne blad explants av
A
.
lineata
vi viser for første gang callus induksjon etablert på MS medium som inneholder 1,0 mg l
-1 IAA. Tørket callus ble underkastet oppløsningsmiddel ekstraksjon med aceton. Ytterligere acetonen rest ble separert ved silikagel-kolonnekromatografi, krystallisert og karakterisert ut fra kjernemagnetisk resonans (proton og C13) og væskekromatografisk massespektroskopi. Denne analysen viste forekomsten av to kjente flavones nemlig 7-
O
-methylwogonin (MW) og Echioidinin (ED). Dessuten ble disse forbindelsene testet for deres cytotoksisitet mot leukemicellelinje CEM. Vi identifiserer at ED og MW indusert cytotoksisitet i en tids- og konsentrasjonsavhengig måte. Ytterligere økning i LDH-frigivelse ved behandling med ED og MW ytterligere bekreftet våre cytotoksiske resultater mot leukemicellelinje. Påfallende, MW var mer potent enn ED når sammenlignet med trypanblått og MTT-analyser. Våre resultater rekapitulere anvendeligheten av callus kulturer for fremstilling av plante spesifikke bioaktive sekundære metabolitter stedet for å bruke ville planter. Sammen våre
in vitro
studiene gir ny innsikt i
A
.
lineata
callus kulturer fungerer som en kilde for kjemoterapeutika
Citation. Mohammed A, Chiruvella KK, Rao YK, Geethangili M, Raghavan SC, Ghanta RG (2015)
I vitro
Produksjon av Echioidinin, 7-
O
-Methywogonin fra callus kulturer av
Andrographis lineata
og deres Cytotoksisitet på kreftceller. PLoS ONE 10 (10): e0141154. doi: 10,1371 /journal.pone.0141154
Redaktør: Brett Neilan, University of New South Wales, Australia
mottatt: May 26, 2015; Godkjent: 03.10.2015; Publisert: 21 oktober 2015
Copyright: © 2015 Mohammed et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
finansiering:.. forfatterne har ingen støtte eller finansiering for å rapportere
konkurrerende interesser:. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Forkortelser: MS, Murashige og Skoog; BA, Benzyladenine; IAA, indol 3-eddiksyre; NAA, naftalen-eddiksyre; 2,4-D, 2,4-D; TLC, tynnsjiktskromatografi; NMR, kjernemagnetisk resonans; LC /MS, væskekromatografi /massespektroskopi; UV, ultrafiolett synlig spektroskopi; IR infrarød spektroskopi; MTT, 3- (4,5-dimetyltiazol-2-yl) -2,5-difenyltetrazoliumbromid; MW, 7-
O
-methylwogonin; ED, echoidinin; DMF, dimetylformamid; DMSO, dimetylsulfoksid; nm, nanometer; MHz, mega hertz
Innledning
Blant alle typer kreft, er leukemi anses som et av de mest aggressive livstruende hematologiske maligniteter med millioner av pasienter diagnostisert hvert år. Leukemi er funnet å være meget følsomme overfor kjemoterapeutiske midler [1]. Screening naturprodukter basert på medisinske planter har vært lovende som verdifulle kilder for antitumor narkotika. Naturlige produkter utøve kreft potensialer ved å hemme celleproliferasjon og indusere apoptose [2,3]. Planteekstrakter som oppviser anticanceraktivitet er blandingen av alle de forbindelser som er tilstede i ekstrakten i stedet for spesielle forbindelse [4,5]. Dette oppfordrer til søk av isolerte forbindelser med veldefinerte farmakologiske egenskaper.
In vitro
kulturer benytter anlegget vev kultur teknologi er fordelaktig intakt anlegg for å produsere sekundære metabolitter uten å ødelegge naturlige habitat [6,7,8]. Dette skyldes det faktum at frekvensen av cellevekst og biosyntese i kultur initiert fra en liten mengde av plantemateriale er ganske høy, en betydelig produseres i løpet av kort tid. Manipulering dyrkningsbetingelser, er phytohormones et verdifullt verktøy for å øke nivået av bioaktive metabolitter [9]. Dette er i motsetning til mange
in vivo
planter som brukes for å oppnå en liten mengde av medikamentet.
Produksjon av plante-avledet medisinske forbindelser er en sak av betydelig samfunnsøkonomisk betydning. Dette har bedt bransjer, samt forskere til å vurdere bruken av
in vitro
kulturer som et alternativ forsyning. Produksjon av plantesekundærprodukter av voksende udifferensierte vev
in vitro
store mengder har lenge vært anerkjent som et middel der både sesongvariasjoner og tid spesifisitet av produksjonen vil bli omgått. Callus kulturer er lovende for å få anleggsspesifikke verdifulle metabolitter utnyttes for å forbedre utbyttet av bioaktive forbindelser, å fremskynde tempoet i bevaring og forplantning av et viktig etno-medisinske planter [10]. Tidligere studier har lyktes i produksjon av sekundære metabolitter gjennom
in vitro
kultur [11,12,13,14,15,16]. For eksempel prenylated flavanones som sophoraflavanone G og lehmanin ble hentet fra
Sophora flavescens
callus kultur [17]. Callus av
Hypericum perforatum
yeilded 6-C-prenyl luteolin, sammen med luteolin-5,3′-dimethyl ether, luteolin-5-glucoside og luteolin-3’glucoside [18]. Viktigere anticancerforbindelse slik som taxol ble også oppnådd fra callus kulturer av Taxus arter [19,20,21]. Påfallende, isoflavoninnhold fra callus kulturer av Genista arter var mer enn
in vivo
planter [22,23].
Andrographis plakater (akantusfamilien) består av 250 slekter og 2500 arter. Blant alle slektene, Andrographis
paniculata
er av potensiell betydning i tradisjonell medisin for behandling av ulike sykdommer på grunn av sitt store spekter av biologiske aktiviteter [24,25]. De farmakologiske aktiviteter
Andrographis
er på grunn av tilstedeværelsen av flavonoider, terpenoids og flavonoid glykosider som andrografolid, echiodinin og echiodinin 5-
o
-β-D-glukopyranosid. Andrographis og deres derivater har potensielle kreft egenskaper [26]. 7-
O
metyl dihydrowogonin, 5-hydroxy-3,7,8,2′-tetrametoksy flavone og flavone 7-
O
-methylwogonin fra røttene av
A
.
paniculata
er identifisert [27]. Callus kulturer av
A
.
paniculata
ble rapportert å være 7-
O
-methylwogonin, skullcap flavone jeg og 5-hydroksyl-7,8,2′-trimetoksy flavone [28]. Forekomsten av 7-
O
-methylwogonin utgjør den første rapporten fra en 2′-deoxyflavone.
Andrographis lineata
brukt i denne studien er en tribal medisinsk plante som serverer så god erstatning for
A
.
paniculata
. Tilsvar dette anlegget blir brukt av leger til behandling av slangebitt, diabetes, hudsykdommer, feber, forstoppelse, bronkitt, kreft, betennelser og stomachic. Det har også antihelminthic, betennelsesdempende, febernedsettende og antiperiodic egenskaper [29,30]. Leaf lim brukes for herding luftveisinfeksjoner mens rot avkok som motgift. Flavonoider sammen med andrografolid har blitt rapportert fra blad ekstrakter [31]. Farmakologiske studier med blad ekstrakter vises antibakteriell, vanndrivende hepatoprotective og antidiabetiske aktiviteter [32,33,34].
Tidligere studier med
A
.
paniculata
har demonstrert nytten av callus kulturer for fremstilling av sekundære metabolitter stedet for å bruke ville planter. Dette fikk oss til å utvikle callus induksjon for
in vitro
produksjon av sekundære metabolitter i en relativt kort periode ved å sende sesong press rundt året. Her rapporterer vi for første gang etablering av callus kulturer fra blad explants av
A
.
lineata
. Vi viser isolering og strukturell karakterisering av echioidinin (ED) og 7-
O
-methywogonin (MW) ved silikagel-kolonnekromatografi, fulgt av kjernemagnetisk resonans (proton og C13) og væskekromatografisk massespektroskopi. Videre viser vi ED og MW indusert cytotoksisitet mot leukemiceller i et tids- og konsentrasjonsavhengig måte.
Materialer og metoder
reagenser og kjemikalier
Kjemikalier som NAA, 2,4-D, IAA ble oppnådd fra Sigma. HgCl
2 var fra E. Merck, sukrose fra Sisco, silikagel fra Acme syntetiske kjemikalier og Agar fra CDH, Mumbai, India. DMSO, DMF, aceton, heksan, etylacetat og metanol ble oppnådd fra Sigma.
plantemateriale og Tissue Culture Betingelser for Callus Induksjons
modne bladene hentet fra felt dyrket planter av
A
.
lineata
ble brukt som explants. Bladene ble flate sterilisert i 70% etanol i 30 sekunder, etterfulgt av skylling i sterilt destillert vann, så behandlet med 0,1% HgCl
2 (vekt /volum) (Merck) i 2 minutter og etterfulgt av vasking i sterilt destillert vann. De kappede ender av eksplantater ble trimmet med skarp kant sterile kirurgiske kniver. Videre ble explants blottet på sterilt filter papir plater før vaksinasjonen. Næringsmedia som anvendes i denne studien var Murashige og Skoog-medium, 1962. Mediene ble stivnet med agar (0,8%), og sakkarose 3% ble anvendt som en kilde for karbohydrat. PH i mediet ble deretter justert til 5,6-5,8, og mediet ble endelig gjort til et kjent volum. Agar ble tilsatt til mediet før dispensering inn i beholderne (15 ml i 25 x 150 mm prøverør) som ble autoklavert i 15 minutter ved 15 Ibs /in
2. Prøverørene inneholdende sterilt medium ble plassert i en hellende stilling for å øke overflatearealet til mediet. Alle kulturer ble inkubert i et dyrknings rom ved 25 ± 2 ° C med en relativ fuktighet på 50-60%, og 16 timer fotoperiode ved et foton flukstetthet på 15-20 μ E m
2 s
-1 fra hvit kule lysrør
MS medium med ulike konsentrasjoner av auxins (2,4-D, IAA og NAA) som spenner 0,1 til 1,0 MGL
-. l ble brukt til å studere deres virkninger på callus induksjon på varierende konsentrasjoner (tabell 1). Deretter, veletablert callus innhentet på MS medium tilsatt 1,0 mg l
-1 IAA ble dyrket 4-5 ganger for optimal callus produksjon med jevne intervaller på 20 dager etter vaksinasjonen. Denne teknikken av callus induksjon for fremstilling av sekundære metabolitter er tidligere blitt beskrevet i forskjellige grupper [10,14,23,35].
ekstraksjon, isolering og identifisering av rensede forbindelser fra
A
.
lineata
Calli
anskaffet Calli ble først tørket ved romtemperatur i noen dager, og materialet ble deretter knust til et fint pulver (750 g). Det oppnådde pulver ble underkastet ekstraksjon ved hjelp av oppløsningsmiddel varm aceton i et Soxhlet-appartus [10]. Varm ekstraksjon forbedrer oppløsningsmaterialet løseligheten av naturlige produkter, og trekker ut mesteparten av de sekundære metabolitter. For å oppnå det maksimale antall forbindelser fra
Andrographis lineata
kalli, vi brukte aceton for soxhlation henhold varm tilstand. I tillegg er bruk av aceton som ekstraksjonsløsningsmiddel er ikke å ekstrahere lipider med den samme effektivitet som den ville for sekundære metabolitter. Fordampning av ekstraktet
i vakuum
ga et mørkebrunt residuum, aceton-ekstrakt (30 g) (figur 1B). Den aceton-ekstrakt suspenderes i H
2o, ble fordelt med heksan for å gi hexan oppløselige og uoppløselige fraksjoner. Videre gjennomførte vi heksan fraksjonering som den fjerner ut klorofyll og ikke-polare bestanddeler.
(A) Callus ble indusert fra blad explants på MS-medium tilsatt 1,0 mg l
-1 IAA (Bar = 2,5 mm) etter 4 uker. (B) Skjematisk fremstilling av plantekjemikalie analyse av kallus fra
Andrographis lineata
for isolering av bioaktive forbindelser.
heksan uoppløselige rest (20 g) ble kromatografert over silikagel ved bruk av heksan etylacetat gradient eluat, og tilsvarende fraksjoner ble kombinert for å frembringe fire sub-fraksjoner (Fr. i til Fr. IV). Fraksjoner II ble videre separert ved anvendelse av en silikagel-kolonne under eluering med en gradient av heksan-etylacetat, hvilket ga et gult, fast stoff (24 mg) som ble betegnet som ALC-1. Dette ga en grønn farge med Fe
3+ en oransje rød farge med både Mg-HCI og Zn-HCI. På den annen side gjentas silicagel CC (5 x 90 cm) av de heksanoppløselige fraksjon med økende polaritet ved bruk av blandinger av etylacetat /heksan ga tre sub-fraksjoner (F1-F3). Fraksjon F2 ble rekromatografert over en silikagelkolonne under anvendelse av heksan /EtOAc (60:40) for å gi et hvitt faststoff (20 mg). Fremme dette på krystallisering fra metanol ga fargeløse nåler (19 mg). Dette ble betegnet som ALC-2. Det ga en grønn farge med alkohol jernklorid og en rosa farge med Mg-HCl syre.
Videre rensing av subfractions fra heksan uløselig (Fr. jeg, Fr. III-IV), og heksan løselig (F1 og F3) fraksjoner gav ikke noe krystallinsk prinsipp. Alle eluatene som inneholdt «rest» eller «nei rest» ble undersøkt ved hjelp av TLC som beskrevet nedenfor ved å spraye 8% metanolisk svovelsyre. Dette er etterfulgt av oppvarming på en varm plate ved 100 ° C i 4 min for optimal fargeutvikling. Platene ble visualisert og Rf-verdier ble beregnet. Ved siden av de rensede forbindelsene ble eluert inn i de tilsvarende løsningsmiddelsystemer, og eluatene ble bevart for spektralanalyse.
ultrafiolett (UV) spektra ble registrert på Beckman 25 og Shimadzu UV-240 spektrofotometre og verdiene er gitt i nm. Infra-rød (IR) spektra ble registrert på Perkin-Elmer modell 283B og 297 dobbel stråle spektrofotometre og
ν
verdiene er gitt i cm
-1. Proton magnetisk resonans (
1H NMR) spektra ble registrert på Varian, 200, JEOL FX-90Q og Bruker-AM-300 spektrofotometere med TMS som intern standard. Karbon-13 kjernemagnetisk resonans (
13C NMR) spektra ble registrert på JEOL FX-90Q spektrofotometer. De kjemiske skift ble angitt i δ ppm. Massespektra (MS) ble registrert på LC-MSD-Trap-SL (Agilent Technologies) ved Nasjonalt senter for massespektroskopi ved Indian Institute of Chemical Technology, Hyderabad.
Tynnsjiktkromatografi (TLC)
glassplater på (20 x 20 cm) ble grundig vasket under rennende vann, etterfulgt av destillert vann, og platene ble holdt klar for silikagel anvendelse. Silica gel 25 g (acme) ble oppløst i 50 ml dobbeltdestillert vann, omrørt godt, og oppslemmingen ble deretter ført i sprederen. Sprederen ble forsiktig trukket langs platene (2-3 mm tykkelse) for å få en jevn påføring. Platene ble aktivert ved 100 ° C i ca 45 minutter, fikk avkjøles, fjernet fra ovnen og utsatt for i bruk.
Eluatene ble påført i form av flekk med mikropipette, 2 cm over bunnen av plate og fikk lov til å tørke med hårføner. Da platene ble utviklet i heksan: etylacetat 9: 1 (v /v) og i heksan: etylacetat 8: 2 (v /v). Oppløsningsmidlet ble tillatt å gå opp til 15 cm, og deretter ble fjernet, tillatt å tørke. Platene ble sprayet med 8% metanol svovelsyre, der etter underkastet oppvarming i en varm luft ovn ved 100 ° C i 5 minutter. Da forbindelsene ble visualisert og Rf-verdier ble beregnet. På tilsvarende måte tidligere gjort silikagelplater belagte platene ble utviklet i forskjellige oppløsningsmiddelsystemer med heksan, etylacetat og metanol ekstrakter. De var i opposisjon til de chromatoplates platene fikk spray reagent. Omrisset av forbindelsene ble markert med en nål på unsprayed silica gel plater.
Cell Culture
Menneskelig leukemi cellelinje CEM ble kjøpt fra National Center for Cell Science, Pune, India. Celler ble dyrket i RPMI 1640 (SERA LAB, USA) som inneholdt 10% FBS (Gibco BRL, USA), 100 U penicillin G /ml og 100 ug streptomycin /ml ved 37 ° C i en fuktet atmosfære inneholdende 5% CO
2. Celler ble delt i forholdet 1:10 hver 3-5 dager.
Echioidinin (ED) og 7-
O
-methywogonin (MG) anvendt i denne studien er naturlige flavonoider renset fra blad callus av
A
.
lineata
. Forbindelser ED og MW ble oppløst i DMF (Sigma, USA). Den maksimale konsentrasjon av DMF (dimetylformamid) benyttet i forsøkene var lik 0,05%, og den samme mengde ble anvendt som bærerkontroll. I alle forsøkene beskrevet heri echioidinin og 7-O-methywogonin ble tilsatt 24 timer etter at kulturen.
celleviabilitet ved trypanblått Exclusion
Trypan blå eksklusjon analyse ble utført for å vurdere effekten av ED og MW på levedyktigheten til CEM-celler. Ca 0,75 x 10
5 celler /ml, ble behandlet med forskjellige konsentrasjoner av ED og MW. Etter 24 timer av cellevekst, forskjellige konsentrasjoner av ED og MW (10, 50, 100, eller 250 pM) eller bærer (DMF) ble tilsatt til cellene. Celler ble tatt ut fra kulturen etter hver 24 timer og farget med trypanblått som beskrevet [2,36]. Antall celler (levedyktig-unstained og ikke-levedyktig-blått) ble tellet ved bruk av hemocytometer. Hvert eksperiment ble utført tre uavhengige ganger med god overensstemmelse.
Cell Proliferation ved MTT-assay
Celleoverlevelse ble videre undersøkt ved 3- (4,5-dimetyltiazol-2-yl) -2, 5-difenyl-tetrazolium-bromid (MTT) reduksjon fargestoff assay, som er basert på evnen av levedyktige celler til å forbrenne et gult tetrazoliumsalt til fiolett formazanprodukt som kan bli detektert spektrofotometrisk. CEM-celler vokser i log-fase ble behandlet med forskjellige konsentrasjoner av ED og MW (10, 50, 100, 250 pM) og inkubert i 5% CO
2 atmosfære med høy fuktighet. Celler ble samlet opp etter 48 og 72 timer og behandlet med MTT (0,5 mg /ml) som beskrevet tidligere [36,37]. Absorbans ble målt ved 570 nm på en for flere brønner ELISA-plateleser. Den midlere absorpsjon av mellom kontroller var blank og ble subtrahert. Konsentrasjon av forbindelsen som forårsaker 50% hemning av cellevekst (IC
50) ble bedømt etter 72 timer med eksponering. Absorbansen av kontrollceller ble tatt som 100% levedyktighet og verdiene av behandlede celler ble beregnet som en prosentandel av kontroll. Viste data er innhentet fra tre uavhengige grupper av eksperimenter.
LDH Slipp analysen
Offentliggjøring av laktat dehydrogenase (LDH) er en indikator på membran integritet og dermed celleskade. LDH-analyse ble utført for å vurdere LDH-frigivelse i kulturen følgende ED og MW-behandling (10, 50, 100 og 250 uM) på CEM-celler etter 48 og 72 timer i henhold til standardprotokoller [37]. Det intracellulære LDH ble bestemt etter lysering av celler ved frysing og hurtig tining. LDH-frigjøring ble målt ved en absorbans på 490 nm. Prosentandelen av LDH meldingen ble beregnet som: (LDH aktivitet i media) /(LDH aktivitet i media + intracellulær LDH aktivitet) × 100. Hvert eksperiment ble utført tre uavhengige ganger med god overensstemmelse.
Statistical Analysis
Resultatene er uttrykt som gjennomsnitt pluss eller minus standardfeil. Alle analyser ble utført med GraphPad programvare ved hjelp av enveis ANOVA etterfulgt av Tukey-Kramer multiple sammenligningstest. Statistisk signifikans ble ansett på p. 0,05
Resultater
In vitro
Callus Induksjon fra modne Leaf explants
Vi etablerte callus kulturer fra modne blad explants på MS medium forsterket med auxins som NAA, 2,4-D og IAA. Naturen av callus varierte med konsentrasjonen av forskjellige auxins brukt (tabell 1). Hvit, myk og sprø callus ble innhentet på MS medium supplert med 2,4-D (0,1-0,5 mg l
1). Hyppigheten av lys gulaktig grønn, hard, organogenic callusing i form av vekst biomasse ble funnet å være maksimum (75%) i nærvær av 1,0 mg l
-1 IAA (fig 1A) etter 4 uker (tabell 1).
imidlertid 1,0 mg l
-1 NAA og 2,4-D sterkt forverret hyppigheten av callus formasjonen. Alderen på bladet eksplantering var kritisk for callus videre spredning. Bruk av eldre blader senket callus formasjon. Den optimale callus induksjon ble observert i nærvær av 1,0 mg l
-1 IAA og ble anvendt for isolering av bioaktive forbindelser (figur 1A). Organogenic callus ble økt i volum av subdyrking callus segmenter på MS medium tilsatt 1,0 mg l
-1 IAA for hver tjue dager. Callus var frisk under alle subkulturer og subdyrking av callus gitt bulk kvantitet for sekundær metabolitt utvinning. Som forventet, ved overføring til media som inneholder cytokinininnhold, BA viste skyte morphogenic respons (data ikke vist).
Struktur Identifikasjon av Echioidinin og 7-
O
-methylwogonin
Karakterisering og strukturbestemmelse av echioidinin (ED) og 7-
O
-methywogonin (MW) ble etablert hovedsakelig på grunnlag av 1D NMR og massespektraldata studier. Forbindelsen ALC-1 ble krystallisert fra metanol som gule krystaller (20 mg) med smeltepunkt, 264-265 ° C. Den ble analysert for sin molekylformel på C
16 H
12o
5 med molekylvekt på 285 [M + H]
+. Det var lilla under UV og UV /NH
3. De spektrale informasjon om forbindelsen er gitt nedenfor
UV (S1A figur):.
λ
max (MeOH) (log ε) 265 (4,40), 335 (4,19) nm . IR (S1B figur):
v
max (KBr) 3416 (OH), 2980, 1662 ( C = O), 1614, 1504, 1452, 1350, 1245, 1159, 865 , 831 cm
1.
1 H NMR (2A): (300 MHz, DMSO
d
6) δ 12,88 (1H, s, 5-OH, utbyttbar med D
2o), 10,90 ( 1H, s, 2′-OH, utbyttbar med D
2o), 7,90 (1H, dd,
J
= 2,0, 8,0 Hz, H-6 «), 7,40 (dt, 1H,
J
= 2,0, 8,0 Hz, H-4 «), 7,10 (s, 1H, H-3), 6,99-7,05 (m, 2H, H-3», 5 «), 6,75 (d, 1H,
J
= 2,5 Hz, H-8), 6,35 (d, 1H,
J
= 2,5 Hz, H-6), 3,90 (s, 3H, OMe-7) .
13C NMR (figur 2B): (300 MHz, DMSO
d
6) δ 182,0 (C-4), 165,1 (C-7), 161,4 (C-2), 161,0 (C-5), 157,3 (C-8a), 156,7 (C-2 «), 132,8 (C-4»), 128,4 (C-6) 119,3 (C-5 «), 117,0 (C-1 «), 116,9 (C-3), 109,1 (C-3), 104,6 (C-3a), 97,8 (C-6), 92,4 (C-8), 55,9 (OMe-7). LC-MSD (Fig 2C).
m Twitter /
z
= 284 [M]
+, 285 [M + H]
+
(A)
1 H NMR spektra (B)
13C NMR spektra (C) Væskekromatografi massespektra (D) Oppbygging av echioidinin.
Derfor, fra ovennevnte foregående spektrale studier ALC -1 ble karakterisert som fem, 2′-dihydroksy-7-Methoxyflavone (Echioidinin, ED) (figur 2D) som sine fysiske og spektrale data var i god overensstemmelse med litteraturverdier [38].
Neste, sammensatte ALC-2 ble krystallisert fra heksan som blekgule nåler (20 mg) med smeltepunkt 181-182 ° C. Det ble analysert for sin molekylformel C
17H
14O
5 med molekylvekt, 298. Det var lilla under UV og UV /NH
3. De spektrale detaljer om forbindelsen er gitt nedenfor
UV (S2A figur).
λ
max (MeOH) nm (log
ε
) 272 (4,52 ), 345 (3,78) nm. IR (S2B figur):
ν
max (KBr) 3416 (-OH), 2938 (-OMe), 1661 ( C = 0),
