Abstract
hjerne-spesifikk angiogenese-inhibitor 1 (BAI1) -associated protein 2-lignende 1 (BAIAP2L1), også kjent som insulin reseptor-tyrosinkinase substrat (IRTKS), er involvert i plasmamembranen fremspring og aktin formasjon under celle morphogenesis og migrasjon. BAIAP2L1 er nylig rapportert å fremme celleproliferasjon gjennom aktivering av EGFR-ERK-reaksjonsveien i hepatocellulær karsinom. I denne studien rapporterer vi den første omfattende studien av BAIAP2L1 oppregulering i menneskelig eggstokkreft. Oppregulering av BAIAP2L1 i ovarietumorer ble først funnet i løpet av RNA screening og bekreftet av immunhistokjemiske studier på eggstokkreft og andre krefttyper. Betydelig oppregulering av BAIAP2L1 i eggstokkreft ble validert ved å analysere flere uavhengige kohorter i offentlig tilgjengelige datasett. Videre BAIAP2L1 protein uttrykk i metastatiske lesjoner var høyere enn de tilsvarende primære svulster. Funksjonelle analyser i eggstokkreft celler viste at BAIAP2L1 er involvert i å fremme celleproliferasjon og unngå apoptose. Som konklusjon, Resultatene av denne studien ikke bare indikere at BAIAP2L1 kan brukes som en biomarkør for human ovarian cancer, men også avsløre dens rolle i kreft biologi. Videre klarlegging av den rollen BAIAP2L1 i sammenheng med insulinreseptoren signalveier kreftceller er garantert for utvikling av kreftbehandling ved å målrette kreftspesifikke metabolisme
Citation. Chao A, Tsai CL, Jung SM, Chuang WC Kao C, Hsu A, et al. (2015) BAI1-Associated Protein 2-Like 1 (BAIAP2L1) er en potensiell Biomarker i eggstokkreft. PLoS ONE 10 (7): e0133081. doi: 10,1371 /journal.pone.0133081
Editor: David Wai Chan, The University of Hong Kong, Hongkong
mottatt: 27 mars 2015; Godkjent: 22 juni 2015; Publisert: 29.07.2015
Copyright: © 2015 Chao et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Dette arbeidet ble finansiert av Chang Gung Medical Foundation: CMRPG3E0391 (Chao A), CMRPG3C1621-2 (Tsai CL), CMRPG3C0281-3, CMRPG3C0941-2 og CRRPG3D0031 (Wang TH). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. Forfatterne av dette manuskriptet har følgende konkurrerende interesser: Yi-Chao Lee er en av oppfinnerne av US patent No: 7192709B2, datert den mar 20, 2007 innehaveren av Digigenomics Co, Ltd forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
ovarialcancer. er den ledende dødsårsaken i gynekologiske kreftformer [1]. Det er, sammen med peritonealt karsinom og egglederen karsinom, den niende mest vanlige døds hos kvinner i Taiwan [2]. Den totale overlevelse for ovariekreft forblir dårlig til tross for forbedringer i behandlingen av kreft i eggstokkene [3,4]. Den typiske sen diagnostisering av kreft i eggstokkene, når sykdommen allerede har spredd seg utover bekkenet ved klinisk presentasjon, er en del av årsaken til den dårlige resultatet [5]. Immunologisk påvisning av serum-antigenet kreft CA125 [6] har blitt integrert i standard praksis for diagnostisering av ovarian masser [7]. CA125 er også nyttig for å overvåke respons og legge til rette for overvåking av pasienter med eggstokkreft [8]. Imidlertid er graden av CA125, med en sensitivitet på 80%, ikke er forhøyet i alle ovarietumorer, og spesifisiteten kan bli påvirket av andre maligniteter, fysiologiske betingelser, og endometriose [9]. Derfor er identifisering av flere markører sterkt behov for å utfylle CA125 for tidlig deteksjon, behandling evaluering og vurdering av prognosen for pasienter med eggstokkreft.
BAIAP2L1 /IRTKS (Gene ID 55971) ligger på kromosom 7q21.3 -q22.1. BAIAP2L1 koder for et 511 aminosyre-protein med molekylvekt på omtrent 57 kD [10,11]. BAIAP2L1, sammen med BAIAP2 (IRSp53), BAIAP2L2 (FLJ22582), tilhører den IRSp53 familien, og alle av dem har IMD (IRSp53 og mangler i metastase domene) og SH3-domenet [12]. IMD domenet tilhører større familie av Bin-Amphipsin-Rev167 (BAR) domene [12], og BAR domene danner en halvmåneformet dimmer som kan binde seg sterkt buet, negativt ladet membran [13]. I tillegg har IMD aktin filament-bindingsevnen [12]. Den SH3 domene er kjent for flere protein-protein interaksjoner [14]. Derfor er medlemmer av familien IRSp53 på som stilla proteiner eller adaptere som bidrar til sammenstillingen av proteinkomplekser til aktin filament eller på membranen med en bestemt krumning.
BAIAP2L1 kan modulere klynger av korte aktin bunter i løpet celle bevegelse [15]. I enterohemorrhagiske
Escherichia coli
, mange av rapportene på BAIAP2L1 gjelder sin likhet til BAIAP2 i aktin-rik membran fremspring, kalt pidestaller [16,17,18,19]. I pattedyrceller, er BAIAP2L1 også vært knyttet til Src-avhengig cellemigrasjon [14,19,20] og MDM2-p53 medierte ubiquitinering [21]. I tumorgenese, har BAIAP2L1 blitt rapportert å fremme celleproliferasjon gjennom aktivering av EGFR-ERK-reaksjonsveien i leverkreft [22]. Onkogene FGF reseptor 3 (FGFR3) -BAIAP2L1 fusjonsgenet ble identifisert i blære kreft [23] og lungekreft [24], og dens identifikasjon kan hjelpe til å velge pasienter for FGFR-rettet behandling. Hittil har rollen BAIAP2L1 i eggstokkreft ikke definert.
Vi rapporterer her den første omfattende studien av BAIAP2L1 oppregulering i eggstokkreft. Oppregulering av BAIAP2L1 i ovarietumorer ble først avslørt på Clontech Cancer Profilering Array og bekreftet med immunhistokjemiske studier. Public domain datasett ble brukt til å validere at uttrykket av BAIAP2L1 er vesentlig høyere i eggstokkreft enn normalt vev og andre typer kreft. Funksjonelle analyser i eggstokkreft celler indikerer at BAIAP2L1 er involvert i å fremme celleproliferasjon og unngå apoptose. Disse resultatene tyder på at oppregulering av BAIAP2L1 kan brukes som en potensiell biomarkør i eggstokkreft.
Materiale og metode
Microarray analyse for differensielt uttrykte gener
Oligonukleotid mikromatriser inneholder 18861 prober (Compugen Inc., Tel Aviv, Israel) ble brukt til å analysere differensielt uttrykte gener mellom RNA av menneskelig normal eggstokk (katalognummer CR0856, Clontech, CA, USA) og menneskelig eggstokkreft tumor (katalognummer 64011-1, Clontech, Palo Alto, CA). Prosedyrer for CyDye merking og skanning var lik som ble tidligere rapportert [25]. Blant differensielt uttrykte gener mellom den normale eggstokk og ovarian tumor, ble BAIAP2L1 valgt til å bli ytterligere validert. Kreft Profilering Array II membraner (katalog # 7847-1, Clontech, Palo Alto, CA) ble hybridisert med den radiomerkede cDNA probe for BAIAP2L1. Matrisen inneholder 154 prøver av forskjellige typer kreft fra bryst, eggstokk, rektum, mage, lunge, nyre, blære, vulva, prostata, uterus, cervix, skjoldbruskkjertel, testis, hud, tynntarmen, bukspyttkjertelen, luftrøret, og lever ( S1 figur).
Immunhistokjemisk analyse av kliniske tumorvev
formalinfiksert parafin-embedded (FFPE) tumorvev av eggstokkreft ble hentet fra Chang Gung Memorial Hospital. Klinisk informasjon av pasientene ble arkivert i databank av gynekologisk Cancer Research Center, Chang Gung Memorial Hospital, Taiwan. Studien ble godkjent av Institutional Review Board av Chang Gung Memorial Hospital (IRB No.95-1328B). Skriftlig informert samtykke fra donor eller pårørende ble innhentet for bruk av denne prøven i forskning. Kommersielt tilgjengelige vev arrays inkludert: FDA805-1and 805-2 (S1 Tables) (US Biomaks Inc, Rockville, MD, USA.), BC 111109, BC 111 110, og OV8011-2-BX (S2 Tables) (US Biomaks Inc. , Rockville, MD, USA).
FFPE vev glidere (ovarian cancer og normal eggstokk, ble hver 4 mm tykke) deparaffinized i xylen og rehydratisert i avtagende konsentrasjoner av etanol. Snittene ble immunfarget med et anti-BAIAP2L1 antistoff ved 1: 1000 fortynning ved hjelp av Bond-Max automatisert immunhistokjemisk Stainer (Leica, Tyskland). Den samlede immunhistokjemisk stillingen (histoscore) i dette studiet var prosentandelen av positive celler multiplisert med dens fargeintensitet (0 = negativ 1 = svak 2 = moderat 3 = sterk), og varierte 0-300 (100% multiplisert med 3) [26,27].
Kultur og behandling av cellelinjer
Menneskelige eggstokkreft cellelinjer (TOV112D, TOV-21G, SKOV3, MDAH2774), lunge fibroblast celler (HFL1), og normale aorta glatte muskelceller (T /G HA-VSMC) ble oppnådd fra American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA). TOV112D, TOV-21G, SKOV3, MDAH2774, og HFL1 ble dyrket i DMEM /F12 med 10% føtalt bovint serum, og passende mengder av penicillin og streptomycin ved 37 ° C med 5% CO2. T /G HA-VSMC-celler ble dyrket i DMEM /F12 med 10% føtalt bovint serum, 0,05% mg /ml askorbinsyre, 0,01 mg /ml insulin, 0,01 mg /ml transferrin, 10 ng /ml natriumselenitt, og 0,03 mg /ml endotelial cellevekst supplement. For apoptose analyse, celler transfektert med BAIAP2L1 siRNA var enten bestrålt med UV (100 J /M
2) eller behandlet med 10 mm cisplatin (Fresenius Kabi, NC, USA) i 24 timer før analyse.
transfeksjon av små interfererende (si) RNA
MDAH2774 og SKOV3 (8000 og 4000 celler, henholdsvis, i 96-brønners plater) ble transfektert med 1 picomol liten interfererende-BAIAP2L1 (CCCGAATTCACAAAGGGTAAATAAT, Invitrogen, Carlsbad, CA) i Lipofectamine RNAimax (Invitrogen, Carlsbad, California) i henhold til produsentens protokoll. Etter 48 timer av transfeksjon ble undertrykkelse av målrettede gener bekreftet av western blot analyser.
RNA ekstraksjon og real-time Q-PCR
Total RNA ble isolert med TRIzol reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA). For RT-QPCR, ble første kjede-cDNA syntetisert med en oligo-T primer ved bruk av superscript III første tråd syntese-sett (Invitrogen, Carlsbad, CA). Uttrykket nivået av BAIAP2L1 (forover primer: CACCCGACTACTTGGAATGCT, reverse primer: CGTTGGCATCGTTAGGAGC) ble kvantifisert ved hjelp av SYBR Grønn analyse (Applied Biosystems). Glyseraldehyd-3-fosfat dehydrogenase (GAPDH) uttrykket (forover-primer: 5′-GGTATCGTGGAAGGACTCATGAC-3 «, revers primer: 5′-ATGCCAGTGAGCTTCCCGT-3») ble anvendt som intern kontroll. De thermocycles var som følger: initial denaturering ved 95 ° C i 10 minutter, etterfulgt av 45 sykluser på 95 ° C i 15 s og 60 ° C i 1 min. Reaksjonene ble utført i ABI PRISM 7900 HT instrument (Applied Biosystems). Beregningene er utført med den midlere syklus av terskel (Ct) verdi for hver duplikate målinger.
Western blot-analyse
Cellene ble lysert i iskald radioimmunopresipitasjonsanalyse analyselyseringsbuffer [1% Triton X- 100, 1% NP-40, 0,1% SDS, 0,5% DOC, 20 mM tris-hydroksymetyl-aminometan (Tris-HCl, pH 7,4), 150 mM NaCl, proteaseinhibitorer (Sigma, St. Louis, MO, USA), og fosfatase hemmere (Sigma, St. Louis, MO, USA)] i 30 minutter. Etter elektroforetisk separasjon på 13% natriumdodecylsulfat-polyakrylamid-geler, ble proteinene i gelene overført til nitrocellulosemembraner (Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Sverige). Proteinprøvene ble analysert ved hjelp av anti-BAIAP2L1 (Abnova, Taipei, Taiwan), anti-spaltet caspase 3 (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA), anti-PARP (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA) og anti- aktin (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, California) som primære antistoffer, og tilsvarende pepperrotperoksidase-konjugert sekundære antistoffer (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, California). Merkede proteiner ble senere oppdaget av forsterket kjemiluminescens (ECL, Millipore, og Bradford, MA, USA). For hver prøve, ble bandet intensiteter normalisert p-aktin.
Celleviabilitet analysen
Etter knockdown av endogen BAIAP2L1 uttrykk med siRNA i 48 timer, celleproliferasjon aktivitet ble målt med 3- (4 , 5-dimetyltiazol-2-yl) -2,5 difenyltetrazoliumbromid (MTT) metode (Sigma, M5655-1G). MDAH2774 og SKOV3-celler ble sådd ut ved 8000 og 4000 celler /brønn, henholdsvis i 96-brønners plater. Arbeide konsentrasjonen av MTT-løsning var 1 mg /ml. Optisk tetthet ble målt ved anvendelse VICTOR2 Scanning multi-brønn spektrofotometer med absorbansen ved 570 nm. For BrdU-analysen ble BAIAP2L1 knockdown eggstokkreft celler inkubert med BrdU i 6 timer. DNA-syntese aktivitet ble analysert ved hjelp av BrdU ELISA kit (Roche Applied Science) som tidligere beskrevet [26].
Påvisning av genet fusjon mellom FGFR og BAIAP2L1
Den totale RNA ble ekstrahert fra åtte ferskt frosset eggstokkreft vev med protokoller som tidligere ble rapportert [28]. Påvisning av FGFR3-BAIAP2L1 fusjonsgenet ble utført med KAPA2G hurtig PCR-sett (Kapabiosystem, Wilmington, MA) i de følgende betingelser: 95 ° C i 3 minutter, etterfulgt av 35 sykluser av 95 ° C i 30 sek, 53 ° C i 30 sek og 72 ° C i 30 sekunder, og ble avsluttet ved 72 ° C i 10 min. PCR-primere ble tidligere rapportert [24]. RNA fra blærekreft SW780-celler ble anvendt som en positiv kontroll for å detektere FGFR3-BAIAP2L1 fusjonsgenet [23].
Data-analyse av mikromatriser i offentlig tilgjengelige databaser
data med serienummer GSE14407 [29], GSE2109, og GSE36133 [30] ble hentet fra Gene Expression Omnibus (GEO, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/geo/). Expression analyse ble utført ved hjelp av Affymetrix Expression Console (Affymetrix, Santa Clara, CA).
Dataanalyse
Resultatene av
in vitro
studier er avledet fra minst tre uavhengige eksperimenter og analysert med to-tailed t-tester. Forskjellene i de histoscores mellom to grupper ble sammenlignet ved bruk av Student t-test. Tosidige P-verdier 0,05 ble betraktet som signifikant. Statistiske analyser ble utført med SPSS statistisk programvare, versjon 17.0 (SPSS Inc, Chicago, IL, USA).
Resultater
eggstokkreft uttrykke høyere nivåer av BAIAP2L1 enn andre kreftformer
De 10 ovarietumorer eksemplarer studert består av 6 ondartet kreft, to border serøs cystadenoma (koordinere #E og N), og to leiomyoma (koordinerer #F og J) (fig 1A). Andre gynekologisk kreft og normalt vev av livmor og livmor opprinnelse ble også bestemt. I alle tre typer vev, BAIAP2L1 uttrykk nivåer i tumorvev var betydelig høyere enn normalt vev. Tilsvarende mRNA ekspresjon av BAIAP2L1 i ovarie cancer-cellelinjer var høyere enn normale cellelinjer (figur 1B). I overensstemmelse med RNA uttrykk resultater, er BAIAP2L1 proteinekspresjon høyere i ovarian cancer enn i normalt vev, slik som vist i FDA805-1and 805-2 vev arrays (figur 2).
(A) Kreft Profiling Array II (BD Clontech) av cDNA avledet fra normale vev (n) og tumorvev (T) av eggstokk, uterus, cervix og. Kvantifisering av mRNA av svulsten og normalt vev av forskjellige nettsteder er vist på høyre panel. BAIAP2L1 ekspresjon i tumorer var signifikant høyere enn i normale vev (** P 0,01). (B) BAIAP2L1 RNA uttrykk i eggstokkreft cellelinjer var høyere enn normalt cellelinjer. Eggstokkreft linjer inkludert serøs type (SKOV3), endometrioid type (TOV112D, MDAH2774), og klar celletype (TOV21G). HFL1 er normalt humant lunge fibroblast celle, og T /G HA-VSMC er human normal aorta glattmuskelceller.
Forkortelser
: T, svulst; N, normal.
Resultatene ble avledet fra kommersielt tilgjengelige vev arrays FDA805-1and 805-2, som inneholder normale organer og tilsvarende svulster (S2 tabeller). Tallet i parentes angir antall tilfeller i vevet arrays. Den samlede immunhistokjemisk stillingen (histoscore) var prosentandelen av positive celler multiplisert med dens fargeintensitet (0 = negativ 1 = svak 2 = moderat 3 = sterk), og varierte 0-300 (100% multiplisert med 3).
spredning eggstokkreft vev uttrykke høyere BAIAP2L1 enn primær kreft
Protein nivåer av BAIAP2L1 i 193 eggstokkreft vev, som inneholder serøs, endometrioid, klare celle, og mucinkjertler celletyper ble analysert ( fig 3). Expression nivåer av BAIAP2L1 var ikke annerledes mellom ulike celletyper av eggstokkreft, stadium og grad av hver histologisk subtype, men hver type eggstokkreft uttrykt betydelig høyere BAIAP2L1 enn normalt på eggstokkene vev (fig 3). Uttrykk for BAIAP2L1 ble videre analysert i 14 parvise prøver av primær eggstokkreft og tilhørende metastaser (S3 tabeller). De metastaser omfatter omentum (n = 7), lymfeknute (n = 3), parametrium (n = 1), tynntarm (n = 1), cecum (n = 1), og hjernen (n = 1). Tolv av de 14 parene hadde høyere BAIAP2L1 uttrykk i de metastaser enn i primære svulster (p 0,05). (Fig 4)
Immunohistokjemiske studier ble utført på eggstokkreft vev (n = 193) og normale kontroller (n = 20). Øvre panel viser immunhistokjemisk fargeintensitet (0 = negativ, 1 = svak, 2 = moderat, 3 = sterk). Den samlede immunhistokjemisk score (histoscore) var andelen positive celler multiplisert med sin fargeintensitet, og varierte 0-300 (100% multiplisert med tre).
Det øverste panelet viser BAIAP2L1 uttrykk i en representant par primær eggstokkkreft og dens metastatisk nettstedet.
Flere uavhengige datasett validere oppregulering av BAIAP2L1 i eggstokkreft
data~~POS=TRUNC i GSE14407 datasett [29] viste at BAIAP2L1 mRNA-ekspresjon var signifikant høyere i eggstokk-kreft epitelceller (CEPI, 11,8 ± 0,28 vist som gjennomsnitt ± standardfeil) enn i normal eggløsnings flate epitel (OSE, 10,8 ± 0,22) (p = 0,004) (figur 5A). I vev uttrykk nivå, GSE36133 datasett viste at BAIAP2L1 var signifikant høyere i 182 primær eggstokkene og egglederne tubal kreft (10,4 ± 0,09) sammenlignet med 1680 primære kreft hovedsakelig fra bryst, tykktarm, endetarm, endometrium, lunge og nyre (9,8 ± 0,04) (p = 4,5 x 10
-7) (figur 5B). GSE2109 datasett [30] videre avdekket at BAIAP2L1 var betydelig høyere i 49 eggstokkreft cellelinjer (9,4 ± 0,17) enn 972 kreftcellelinjer avledet fra andre vev (8,6 ± 0,07) (p = 0,004) (figur 5C).
(A) mRNA uttrykk nivåer av BAIAP2L1 i ovarialcancer epitelceller (CEPI) isolert from12 eggstokkreft serøs adenokarsinom og eggstokkreft overflaten epitel (OSE) fra 12 normale menneskelige eggstokkene. Data er hentet fra GSE14407. (B) Et uttrykk nivåer av BAIAP2L1 i vev av kreft i eggstokkene (OV, n = 182) og kreft i andre primære områder (n = 1680). Data er hentet fra GSE36133. (C) Et uttrykk nivåer av BAIAP2L1 i cellelinjer på eggstokkreft (OV, n = 49) og annen opprinnelse (n = 972). Data er hentet fra GSE2109.
Fravær av genet fusjon mellom FGFR og BAIAP2L1 i eggstokkreft
Ingen av åtte testet eggstokkreft RNA inneholdt transkripsjon av fusjonsgenet mellom FGFR og BAIAP2L1, mens RNA av blærekreft SW780 celler uttrykte transkripsjoner av fusjonsgenet (S2 figur).
BAIAP2L1 ikke bare fremmer celledeling, men hindrer også apoptose i eggstokkreft celler
Siden BAIAP2L1 har vist å fremme celleproliferasjon i leverkreft (HCC) [22], vi også testet rolle BAIAP2L1 i cellevekst av eggstokkreft celler. Knockdown av BAIAP2L1 med (Fig 6A) siRNA teknologi hemmet cellevekst i flere eggstokkreft cellelinjer, som vises i resultatene av BrdU innlemmelse analyser (fig 6B) og MTT-analyser (figur 6C).
BAIAP2L1 i to eggstokkreft -cellelinjer (MDAH2774 og SKOV3) ble knockdowned med Si-RNA (A) og analysert med (B) BrdU incorportation assay og (C) MTT-analyse. (D) BAIAP2L1 knockdown i SKOV3-celler økt spaltning av kaspase 3 og PARP, som var tegn på apoptose. Cellene ble bestrålt med UV (100 J /M
2) eller behandlet med 10 uM cisplatin i 24 timer for å indusere apoptose. Å tydelig visualdifferensial intensiteter av spaltede PARP band, ble to eksponeringstider brukt under chemiluminescence: lang (60 sek) og kort (10 sek). Aktin nivå ble anvendt for å normalisere mengden av inngangs protein. (E) Kvantitativ analyse av spaltet kaspase 3 og PARP. Resultatene som er vist er gjennomsnitt ± standardfeil fra tre uavhengige eksperimenter. Stjernene betegne statistisk signifikans (p 0,05).
I apoptose trasé, er pro-caspase 3 aktivert og spaltet i 17-kDa og 12-kDa fragmenter, og deretter proteolytisk enzym fordøyer nedstrøms proteiner, slik som poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) [31]. Uten DNA fornærmelser (UV eller cisplatin), knockdown av BAIAP2L1 alene noe økt spaltes PARP nivåer (Fig 6D og 6E). Etter UV-bestråling eller cisplatin behandling i 24 timer, knockdown av BAIAP2L1 økt proteinnivå spaltet kaspase 3 og spaltet PARP. Disse resultatene tyder på at BAIAP2L1 kan beskytte cellene mot apoptose.
Diskusjoner
BAIAP2L1 uttrykk har vist seg å øke i leverkreft [22]. I denne studien analyserer integrerende database over BAIAP2L1 i GSE14407 og GSE36133 kreft vev samt GSE2109 cellelinjer validere våre immunhistokjemiske resultatene av høy BAIAP2L1 uttrykk i eggstokkreft. Disse resultatene indikerer, for første gang, at BAIAP2L1 er oppregulert i menneskelige eggstokkreft, sto for økt celledeling og motstand mot apoptose av eggstokkreft.
Våre funn som BAIAP2L1 histoscores av metastaser er høyere enn primær eggstokk kreft tyder på at BAIAP2L1 kan bidra til tumorinvasjon og metastasering. Disse resultatene er i samsvar med de funn som BAIAP2L1 er involvert i plasma membran deformasjon og aktin cytoskjelettet ombygging, som er viktige for cellemigrasjon [20]. Selv onkogene FGF reseptor 3 (FGFR3) -BAIAP2L1 fusion genet har blitt identifisert i blære kreft [23] og lunge kreft [24], kunne vi ikke påvise transkripsjon av fusjonsgener av BAIAP2L1 i denne studien av et begrenset antall eksemplarer. Tilstedeværelsen av FGFR-BAIAP2L1 genfusjon har vist seg å oversette et større protein i andre kreft [24], men vi identifisert BAIP2L1 bare som et enkelt bånd på 57 kD på western blot-analyse av eggstokkreft celler, utelukker tilstedeværelse av FGFR -BAIAP2L1 genfusjon.
BAIAP2L1 har også vist seg i sykdomsutviklingen av revmatoid artritt, hvor BAIAP2L1 ekspresjon i fibroblast-lignende synovialceller er positivt korrelert med C-reaktivt protein (CRP), en vanlig klinisk markør for inflammasjon [32]. CRP-nivå har vist seg å forutsi overlevelse hos pasienter med nyrecellekreft, blærekreft, og prostatakreft, og inkorporering av CRP i prognostiske modeller for disse kreftformer øker modellenes prediktiv nøyaktighet [33]. Disse funnene samlet støtte som BAIAP2L1 er involvert i betennelse og tumorigenesis generelt [34].
Den mest avgjørende funksjonene BAIAP2L1 hos pattedyr har nylig blitt avslørt av Han-gruppen ved hjelp av en knockout mus tilnærming [35]. BAIAP2L1 fungerer som en insulin-reseptor (IR) adapter som aktiverer IR-IRS1 /2 (insulin receptor substrat 1/2) -AKT signalveien via stimulering av tyrosinfosforylering av IR. BAIAP2L1-manglende mus vises insulinresistens og unormal glukosehomeostase [35]. Videre ble nedsatt ekspresjon av BAIAP2L1 redusert hos mus og mennesker med type 2 diabetes, noe som tyder på en sammenheng mellom BAIAP2L1 nedregulering og utvikling av diabetes. Interessant, nedsatt nedgang på BAIAP2L1 hos diabetespasienter syntes å ha en mannlig-kvinnelig avvik, der forfatterne postulert å være forårsaket av utilstrekkelig utvalgsstørrelser [35]. I lys av et genom-wide forening studie hvor BAIAP2L1 er sterkt assosiert med sirkulerende nivåer av kjønnshormonbindende globulin [36], er det fortsatt en sex avhengig regulering av BAIAP2L1 funksjoner verdig studere.
I tillegg til aktin-relatert funksjoner av BAIAP2L1, som i hovedsak belyst fra bakterielle studier [16,17,18,19], kan oppdagelsen av BAIAP2L1 i IR-IRS-AKT trasé belyse sin rolle i kreftspesifikke metabolisme. For å tilveiebringe byggeblokker for tumorvekst, kreft celler øker syntesen av fettsyrer og glutamin metabolisme, på bekostning av å bruke ineffektive aerob glykolyse [37]. Konsentrasjonene av glukose i solide tumorer er generelt lavere enn normalt vev [38], og dermed kreftceller ofte krever glukose og glutamin [39]. Fremtidige studier kan bevise at BAIAP2L1 er involvert i å få mer glukose innreise til kreftceller, kanskje ved å øke effektiviteten i overflod transportører. I tillegg er flere nedstrøms effektorer av IR inkludere (i) MAPK som er kjent for å fremme celleproliferasjon [22] og (ii) PI-3K som øker syntesen av proteiner og fettsyrer og hindre kreftceller fra å apoptose [40].
Konklusjoner
Resultatene av denne studien ikke bare indikere at BAIAP2L1 kan brukes som en biomarkør for human ovarian cancer, men også avsløre dens rolle i cancerbiologi. Kliniske undersøkelser med et stort antall prøver og kvantitative bestemmelser vil være nødvendig å validere nytten av BAIAP2L1 i klinisk praksis. Videre klarlegging av den rollen BAIAP2L1 i sammenheng med IR-IRS-nedstrøms Effektor veier av kreftceller er garantert for å utvikle legemiddel rettet mot kreftspesifikke metabolisme.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 Fig. De mRNA profiler av BAIAP2L1 på vev og cellelinjer
doi:. 10,1371 /journal.pone.0133081.s001 plakater (docx)
S2 Fig. Fravær av fusjonsgenet mellom FGFR3 og BAIAP2L1
doi:. 10,1371 /journal.pone.0133081.s002 plakater (docx)
S1 tabeller. FDA vev arrays (805-1 og 2) og histoscores av BAIAP2L1
Doi. 10,1371 /journal.pone.0133081.s003 plakater (DOC)
S2 tabeller. Vev arrays (BC 111109, BC 111 110, og OV8011-2-BX) og histoscores av BAIAP2L1
Doi:. 10.1371 /journal.pone.0133081.s004
(DOCX)
S3 tabeller. Klinisk informasjon om 14 tilfeller av eggstokkreft og histoscores av BAIAP2L1 i primær kreft og metastasized nettsider
doi:. 10,1371 /journal.pone.0133081.s005 plakater (docx)
Takk
forfatterne takke tumor Bank, Chang Gung Memorial Hospital og Jung-erh Yang for henne utmerket teknisk assistanse. Vi takker Dr. Su-Fang Lin av National Health Research Institutes (Miaoli, Taiwan) for å gi total RNA fra SW780 celler og Dr. Shihtien T. Wang (Department of Pediatric Nefrologi, Barnesykehuset, University of Illinois Medical School i Chicago) for Norsk redigering. Denne studien ble støttet av Chang Gung Medical Foundation. CMRPG3E0391 (Chao A), CMRPG3C1621-2 (Tsai CL), CMRPG3C0281-3, CMRPG3C0941-2 og CRRPG3D0031 (Wang TH)
