Abstract
Microseminoprotein-beta (MSMB,
MSMB
) er en rikelig sekresjonsprotein bidratt med prostata, og er innblandet som en prostatakreft (PC) biomarkør basert på observasjoner av sin lavere uttrykk i kreftceller sammenlignet med benign prostata epitel. Imidlertid, som det gjeldende litteratur på MSMB er inkonsekvent, vurderte vi uttrykket av MSMB ved protein- og mRNA-nivåer i et omfattende sett av forskjellige kliniske stadier av PC. Immunhistokjemi bruker monoklonale og polyklonale antistoffer mot MSMB ble brukt til å studere protein uttrykk i vevsprøver som representerer prostatectomies (n = 261) og i diagnostiske nålbiopsier fra pasienter behandlet med androgen deprivasjon (ADT) (n = 100), og i lokalt residiverende kastrering motstandsdyktig PC (CRPC) (n = 105) og CRPC metastaser (n = 113). De transkripsjonsnivåer av
MSMB
, kjernekraft reseptor co-aktivator 4 (
NCOA4
) og
MSMB-NCOA4
fusjon ble undersøkt ved QRT-PCR i prostatektomi prøver og av RNA -sequencing i benign prostatahyperplasi, PC, og CRPC prøver. Vi har også målt serum MSMB nivåer og genotypet de enkeltnukleotidpolymorfi rs10993994 bruker DNA fra blodet av 369 PC-pasienter og 903 kontroller. MSMB uttrykk i PC (29% av prostatectomies og 21% av nålbiopsier) var hyppigere enn i CRPC (9% av lokalt tilbakevend CRPCs og 9% av CRPC metastaser) (
p
0,0001). Påvisning av MSMB protein ble omvendt korrelert med Gleason score i prostatektomi prøver (
p
= 0,024). Lese-through
MSMB-NCOA4
avskrift ble oppdaget på svært lave nivåer i PC. MSMB nivåer i serum var lik i tilfeller av PC og kontroller, men var signifikant assosiert med PC risiko justert for alder ved diagnose og grad av fri eller total PSA (
p
0,001). Serumnivåer av MSMB i både PC pasienter og kontroller var signifikant assosiert med rs10993994 genotype (
p
0,0001). I konklusjonen, redusert uttrykk for MSMB paralleller den kliniske utviklingen av PC og justert serum MSMB nivåer er assosiert med PC risiko
Citation. Sjöblom L, Saramäki O, Annala M, Leinonen K, Nättinen J, Tolonen T, et al. (2016) Microseminoprotein-Beta uttrykk på ulike stadier av prostatakreft. PLoS ONE 11 (3): e0150241. doi: 10,1371 /journal.pone.0150241
Redaktør: Irina U. Agoulnik, Florida International University, USA
mottatt: 30 oktober 2015; Godkjent: 02.02.2016; Publisert: 03.03.2016
Copyright: © 2016 Sjöblom et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. arbeidet ble støttet med tilskudd fra den finske Finansiering Agency for teknologi og innovasjon Finland Distinguished professor program, Academy of Finland, Kreftforeningen i Finland, Sigrid-Juselius Foundation, Medical Research Fund of Tampere universitetssykehus, National Cancer Institute ved National Institutes of Health (R01 CA160816, R01 CA175491); Sidney Kimmel Senter for Prostata og Urologiske Kreft; David H. Koch gjennom Prostate Cancer Foundation; Statens institutt for helseforskning (NIHR) Oxford Biomedical Research Centre Program; den Cancer Research UK Oxford Centre; den svenske Cancer Society (prosjekt nr 14-0722.); og Fundacion Federico SA samt ved Universitetet i Tampere
Konkurrerende interesser:. Hans Lilja innehar patenter for fri PSA (US 5501983), HK2 (US patent US 5614372), og intakt PSA (US Patent No . US 7872104 B2) analyser, og er navngitt på en patentsøknad for en statistisk metode for å oppdage prostatakreft. Analyse patenter og patentsøknaden for den statistiske modellen er lisensiert og kommersialisert av OPKO og Dr. Lilja mottar royalties fra salget av disse testene. Dr. Lilja eier aksjer i OPKO. Andre ikke avsløre noen COIS.
Innledning
Prostatakreft (PC) er den nest vanligste kreftformen blant menn over hele verden [1]. Målinger av prostataspesifikt antigen (PSA) i blodet er mye brukt for å påvise menn på PC-risiko og overvåke menn med PC. På grunn av lav test-spesifisitet ved forhøyete nivåer, ukritisk bruk av PSA-testing resultater i stort antall unødvendige biopsier og over-diagnose med påfølgende risiko for overbehandling [2,3]. Det er derfor et stort behov for flere biomarkører som kan gi økt spesifisitet for tidlig deteksjon av aggressive, dødelige former av sykdommen.
Microseminoprotein-beta (
MSMB
, MSMB aka MSP, PSP94) er en av de tre mest tallrike proteiner utskilt av prostata, sammen med PSA og prostatisk sur fosfatase (PAP) [4]. Flere studier har vist høyere MSMB uttrykk i normal og godartet prostatavevet enn i kreftvev [4-7]. Observasjoner av høyere MSMB uttrykk i godartet prostatavevet bedt noen etterforskere som tyder på at MSMB har en svulst undertrykkende rolle i PC [8]. Funksjonelle studier
in vivo Hotell og
in vitro
foreslår også en svulst undertrykkende rolle for MSMB [9]. Nivåer av MSMB i serum og urin har også vist seg å være lavere i PC-pasienter enn i kontrollgruppen [10]. Positive MSMB ekspresjon har blitt rapportert å assosiere med gunstig prognose i nålbiopsier [11] og tap av MSMB farving er blitt vist å være assosiert med kortere tid for å biokjemisk tilbakefall i klinisk lokaliserte PC [7]. I motsetning til dette har økt MSMB ekspresjon i prostatektomi prøver blitt foreslått å være assosiert med ugunstige resultater sykdoms [12]. Således forblir kontroversielt den prognostisk betydning MSMB ekspresjon i prostatavevet.
Det er blitt vist at serumnivået av MSMB er forbundet med et enkelt nukleotid polymorfisme (SNP) i rs10993994 i promoterregionen av
MSMB
, genet som koder for MSMB [13,14]. T allel av SNP rs10993994 har også vært forbundet med fare PC [15,16], som har blitt kopiert i flere undersøkelser [17-19]. Likevel, det er en sammenheng mellom lave nivåer av MSMB i serum og økt risiko for PC uavhengig av rs10993994 genotype [20].
Publiserte data om regulering av
MSMB
uttrykk ved androgener er inkonsekvent. Noen studier har vist at MSMB uttrykk er uavhengig av androgener [21,22]. Men Dahlman og medforfattere [23] fant at
MSMB
transkripsjon og MSMB protein ble begge betydelig redusert etter kortsiktig androgen deprivasjon terapi (ADT). Enhancer av Zeste homolog-2 (EZH2), en kjent epigenetisk lyddemper av genekspresjon, har blitt foreslått å slå
MSMB
uttrykk i avansert PC [24]. EZH2 har også vist seg å være overuttrykt i sent stadium PC [25].
MSMB
genet ligger på kromosom 10q11.2 [26]. En lese-gjennom fusjon transkripsjon kombinere
MSMB
med tilstøtende genet kjernefysisk reseptor co-aktivator 4 (
NCOA4
) har nylig blitt demonstrert av Nacu et al. [27] og bekreftet i PC vev og normalt prostatavev med Lou et al. [28]. De rapporterte også at
MSMB-NCOA4
fusjonsgenet omfatter androgen responselementer (ER) tyder på at fusjonsgenet kan bli regulert av androgener.
NCOA4 (
aka
ARA70)
koder en AR-assosiert protein som øker transkripsjonen aktivitet av AR i prostata celler [29]. Det har vært antydet at
MSMB-NCOA4
fusjon kunne ha en rolle i PC på grunn av de viktige rollene til
MSMB
i prostatavevet og av
NCOA4
som en forsterker av AR aktivitet [27].
på grunn av inkonsekvente data på vev uttrykk for MSMB /
MSMB
i prostata vi ønsket å evaluere protein uttrykk ved immunhistokjemi (IHC) i omfattende årskull av PC representerer hormon-naive lokalisert og avansert sykdom, samt lokalt residiverende kastrering motstandsdyktig PC (CRPC) og CRPC metastaser. I tillegg transkripsjonsnivåer av
MSMB
,
NCOA4 Hotell og
MSMB-NCOA4
ble undersøkt for å vurdere betydningen av skrive gjennom fusjon transkripsjon. Til slutt ble serumnivåer av MSMB samt rs10993994 genotype analysert i en kohort av PC pasienter og kontroller.
Materialer og metoder
Kliniske tumorprøver
prostatektomi, nålebiopsi og lokalt tilbakevend CRPC vevsprøver samt serumprøver ble innhentet fra Tampere universitetssykehus (TAUH). Prøvene ble avidentifisert og analysert anonymt. Bruken av prospektivt innsamlede prøvene ble godkjent av etisk komité av Tampere universitetssykehus og skriftlig informert samtykke ble innhentet fra pasientene. Den godkjenning for bruk av retrospektiv samling av vevsprøver uten informert samtykke ble innhentet fra Statens autorisasjonskontor for medicolegal saker i henhold til finsk lov. Bruken av CRPC metastaser ble godkjent av Johns Hopkins Medicine Institutional Review Board, og skriftlig informert samtykke ble innhentet fra fagene. Alle prøver som brukes til IHC ble formalinfiksert, parafininnstøpte (FFPE) prøver. Tissue microarray (TMA) lysbilder ble opprettet fra den prostatektomi og CRPC prøver.
prostatektomi prøver.
MSMB uttrykk ble evaluert med IHC i 261 prostatektomi prøver. Det karakteristiske ved kohort er vist i tabell S1. De samme prøvestykker prostatektomi har tidligere blitt analysert for Ki-67 og EZH2 [25]. Sykdomsprogresjon ble definert i henhold til blod PSA-nivå, med biokjemisk tilbakefall (BCR) definert som en PSA-nivå ≥ 0,5 ng /ml i to påfølgende blod uavgjorte.
Needle biopsiprøver.
nålebiopsi kohorten besto av 99 diagnose nålbiopsier fra pasienter som senere fikk primær ADT. Gleason score og behandling informasjonen er presentert i S2 tabell. De samme prøver som tidligere er blitt analysert for Ki-67- og EZH2-immunhistokjemi [30]. Sykdomsprogresjon ble definert av PSA-måling i to påfølgende blod trekker å være 25% over nadir med en absolutt økning på ≥ 2 ng /ml over nadir eller utvikling av nye metastaser [30,31].
lokalt residiverende CRPC prøver .
Transurethral reseksjon av prostata (TURP) eksemplarer av 105 menn med tegn på sykdomsprogresjon under ADT. Behandling informasjonen blir vist i S2 tabell.
CRPC metastaser.
Ett hundre og tretten CRPC metastaser ble samlet inn fra 32 pasienter som døde av CRPC og gjennomgikk rask obduksjon. Alle pasientene hadde blitt behandlet med ADT. De samme metastaser har også blitt analysert for Ki-67 og EZH2 [25].
prostatektomi kohort for QRT-PCR-analyser.
Sytti-seks ferske frosne prostatektomi prøver som inneholder minimum 70% kreftceller ble anvendt for QRT-PCR-analyse. Det karakteristiske ved kohort er presentert i tabell S1. TRI-reagens (Molecular Research Center Inc., Cincinnati, Ohio, USA) ble brukt til å isolere total RNA fra de ferske frosne kliniske prøver og cellelinjer i henhold til produsentens instruksjoner.
RNA-sekvense kohorter.
data~~POS=TRUNC fra ferske frosne tumor materiale fra 12 benign prostatahyperplasi (BPH) prøver, 28 hormonnaive prostatektomi prøver og 13 CRPCs [32] samt 301 prøver, inkludert 251 kreftprøver og 45 tilliggende prøver normale vev fra Cancer Genome Atlas (TCGA) – kohorten, ble brukt for å evaluere uttrykket nivåer av
MSMB
,
NCOA4 Hotell og
MSMB-NCOA4
Immunohistochemistry.
Alle FFPE-prøver ble farget med et monoklonalt MSMB antistoff (ab19070; Abcam, Cambridge, UK), og prostatectomy- og CRPC-prøvene ble også farget med en polyklonale MSMB antistoff (4) .For fargingen , Power Vision
+ Poly-HRP IHC kit (immunologisk, AD, Duiven, Nederland) ble brukt i henhold til produsentens instruksjoner. Kort beskrevet ble prøver først deparaffinized og varmebehandlet på pH 6 trinatriumcitrat-buffer, inneholdende 0,05% Tween. Seksjoner ble inkubert over natten med den fortynnede primære antistoff. For mus-avledet kommersielle MSMB antistoff, ble prøver blokkert i post-blokkerende oppløsning og ble deretter inkubert med poly-HRP-løsning. Ultra Detection System (Thermo Fischer Scientific Inc., Waltham, MA, USA) ble anvendt for visualisering av det bundne primære antistoff. Negativ kontroll uten det primære antistoff ble inkludert i alle stainings. Lysbilder ble skannet med Aperio ScanScope XT scanner (Aperio Technologies, Inc., Vista, CA, USA). Scoring ble utført på en blindet måte ved hjelp av et virtuelt mikroskop (https://jvsmicroscope.uta.fi). Intensitet og prosentandel av det fargede tumorområdet ble evaluert. Ekspresjon av MSMB ble ansett for høy når 20% eller mer av tumorvevet ble farget med en intensitet av minst en på en intensitet skala fra 0-3. Middelverdiene for Ki-67 definert lav og høy ekspresjon av Ki-67. EZH2 uttrykk ble definert som høy når 50% av tumorceller ble farget
QRT-PCR for
MSMB
,
NCOA4 Hotell og
MSMB-NCOA4. Hotell og sekvensering av
MSMB-NCOA4
SYBR Grønn analysen (Thermo Fischer Scientific Inc., Waltham, MA, USA) ble brukt i henhold til produsentens protokoll for å detektere mRNA uttrykk nivåer av
MSMB
,
NCOA4 Hotell og
MSMB-NCOA4
fusjon. Sekvensene til primerne ble erholdt fra Lou et al. [28]. Termiske sykluser var som følger:.. 95 ° C i 5 minutter, 95 ° C i 10 sekunder, annealing temperatur 59 ° C (for
MSMB
), 62 ° C (for
NCOA4
) og 59,5 ° C (for
MSMB-NCOA4
) i 30 sek. og 72 ° C i 20 sek. Genet som koder for TATA- boksen bindende protein (
TBP
) ble anvendt for normalisering. Til slutt, ble PCR -produkter separert på 1% agarosegeler for å bekrefte spesifisiteten av reaksjonen.
MSMB-NCOA4
fusjon produktet ble sekvensert for å bekrefte tilstedeværelse av fusjon. For sekvensering ble PCR -produkter hentet fra gelen og renset med en QIAquick kit (Qiagen Inc., Valencia, CA, USA) i henhold til produsentens protokoll. Renset PCR-produktet ble klonet ved hjelp av en TOPO-TA kloning kit (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). En BigDye terminatorsekvenserings-settet (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) ble anvendt for sekvenseringsreaksjoner. I dataanalyser, ble medianverdier brukt som en grense mellom høyt og lavt uttrykk av mRNA nivåer av
MSMB
,
NCOA4 Hotell og
MSMB-NCOA4
.
genotyping SNP rs10993994 i bakterie-line DNA og måling av serum MSMB nivåer
måling av serum MSMB nivåer og genotyping av rs10993994 ble utført fra 369 PC-pasienter og 903 voksne mannlige alders matchet (± to år) kontroll fag henvist til Institutt for Urologi uten tegn på PC. Karakteristikken av sakene er presentert i S3 tabell. SNP rs10993994 ble genotypet fra DNA-prøvene som bruker Sequenom MassARRAY (Sequenom Inc., San Diego, CA, USA) system ved Institutt for molekylær medisin Finland (Fimm). Immunologiske målinger av MSMB ble gjennomført på AutoDelfia 1235 automatisk immunoassay system (PerkinElmer, Waltham, MA, USA) ved Dr. Lilja laboratorium ved Wallenberg Research Laboratories, Institutt for translasjonell medisin, Universitetet i Lund i Skåne universitetssykehus, Malmö, Sverige som tidligere beskrevet [20,33,34]. Fritt og totalt PSA ble målt ved hjelp av dual-label DELFIA Prostatus total /fri PSA-analysen (PerkinElmer, Turku, Finland) [35] kalibrert mot WHO 96/670 (PSA-WHO) og WHO 68/668 (gratis PSA- WHO) standarder. Alle analyse målingene ble utført med prøver blindet for utfallet.
Statistiske analyser
Fishers eksakte test, Chi-squared test, Mann-Whitney U-test og uparede t-tester ble brukt for å analysere sammenhengen mellom MSMB,
MSMB
,
NCOA4 Hotell og
MSMB-NCOA4
uttrykk og ulike klinisk-patologisk og uttrykk variabler. Sammenkoblede t-tester ble brukt til å analysere forskjeller mellom uttrykket nivåer av
MSMB
,
NCOA4 Hotell og
MSMB-NCOA4
. Kaplan-Meier analyse av progresjonsfri overlevelse ble brukt til å analysere den prognostiske betydningen av MSMB uttrykk i ulike kohorter med Mantel-Cox test. Fishers eksakte test, og Kappa-testen ble anvendt ved sammenligning av resultater oppnådd ved anvendelse av den kommersielle MSMB antistoffet og de som ble oppnådd med vår polyklonalt MSMB antistoff. Mann-Whitney U-test ble brukt for å sammenligne serumnivåene av MSMB og PSA mellom PC-pasienter og kontroller. Dataene ble analysert med analyse av samvariasjon (ANCOVA) for å undersøke sammenhengen av PC og serum MSMB nivåer, justert for alder ved diagnose og fri PSA eller total PSA. Begge MSMB og PSA variabler ble log transformert. Logistisk regresjonsanalyse ble utført, også med SPSS, for å studere sammenhengen mellom serum MSMB nivå og PC risiko indikert av Gleason score og scenen av PC. Spearman korrelasjon ble brukt til å studere sammenhengen mellom frie, totalt og fritt og totalt PSA nivåer og MSMB nivået i blodet hos pasienter og kontroller. Den Kruskal-Wallis-test ble anvendt for å analysere sammenhengen mellom serum MSMB nivå og genotypen av SNP rs10993994. Spearman korrelasjon ble brukt til å analysere sammenheng mellom serum MSMB nivå og alder ved diagnose.
Resultater
Sammenligning av monoklonale og polyklonale MSMB antistoffer
prostatektomi og lokalt tilbakevend CRPC prøver ble farget med både et kaninpolyklonalt MSMB-antistoff som beskrevet av Abrahamsson et al. [4] og et kommersielt monoklonalt antistoff MSMB (ab19070, Abcam, Cambridge, UK). Både fargingsintensitet og område av kreftvev ble vurdert i å utføre med MSMB uttrykk definert som positiv når 20% eller mer av tumorområdet hadde fargeintensitet fra 1 til 3. Farging resultater med det monoklonale og polyklonale antistoffer var like. Åtti prosent av de prostatektomi prøvene manifestert lavt nivå MSMB uttrykk farget med polyklonale MSMB antistoff viste også lavt nivå MSMB uttrykk når farget med monoklonalt antistoff (κ = 0,559,
p
0,0001, tabell 1). I CRPC prøver, de farge resultatene var enda mer konsekvent mellom polyklonale og monoklonale MSMB antistoffer (κ = 0,77,
p
0,0001, tabell 1). På grunn av den kontinuerlige natur av farging, ble alle andre prøver farget bare med det monoklonale antistoff.
prostatektomi og lokalt tilbakevendende CRPC prøver ble farget med et kaninpolyklonalt antistoff MSMB (33) og en kommersiell monoklonalt antistoff MSMB ( ab19070, Abcam, Cambridge, UK).
prostatektomi prøver
MSMB ble heterogent uttrykt i cytoplasma av ondartet prostata epitel med distinkte intensitet forskjeller observert i separate karsinomatøs kjertler av samme eksemplar. Godartede kjertler ble ofte farget med høy intensitet, mens kreft kjertler bare sjelden viste høy fargeintensitet og MSMB uttrykk var vanligvis lav (figur 1). MSMB ble uttrykt ved høyt nivå på 29% (75/261) av kreftvev i prostatektomi prøver. Til kreft hadde fargeintensitet fra 0 i 89% (166/186) av de prostatektomi prøver, som ble definert som lavt nivå ekspresjon av MSMB. MSMB uttrykk tendens til å være omvendt assosiert med Gleason score, men ikke med Gleason grad (
p
= 0,0544 og 0,1669, henholdsvis tabell 2). Høy MSMB ekspresjon ble observert i 52/178 tilfeller (29%) av PT2 prøver og 21/82 tilfeller (26%) i PT3 prøver (tabell 2). Det var ingen sammenheng mellom MSMB uttrykk og diagnostisk PSA nivåer eller mellom MSMB uttrykk og alder (
p
= 0,8248, 0,2563, henholdsvis tabell 2).
(A) Høy, middels og lav MSMB farging i normal prostata vev. (B) Høy, middels og lav MSMB flekker i prostata kreft vev.
Disse resultatene er basert på IHC-analyse av ulike årskull.
Selv om det var ingen signifikant Sammenhengen mellom MSMB uttrykk og EZH2 uttrykk, EZH2 uttrykk tendens til å være høyere i prøvene uttrykker lave nivåer av MSMB (
p
= 0,1040, tabell 2). Det var ingen sammenheng mellom uttrykk for MSMB og uttrykk for markør spredning Ki-67 (
p
= 0,2208; Tabell 2) eller med tid til biokjemisk tilbakefall (
p
= 0,8997; S1 Fig ).
Needle biopsier
Tissue deler av diagnostiske nål biopsier representerte en kohort av eldre pasienter og /eller mer avansert sykdom ved diagnose enn prostatektomi årsklasse, og som fikk primær ADT. Twenty-en ut av 99 (21%) av biopsiprøver uttrykt MSMB på et høyt nivå (Table2), med noen sammenheng mellom MSMB uttrykk og Gleason score eller T-stadium (
p
= 0,7869; 0,8097, henholdsvis tabell 2). Tilsvarende var det ingen sammenheng mellom MSMB uttrykk og uttrykk for EZH2 eller Ki-67 (
p
= 0,4849 og 0,4055, henholdsvis tabell 2). Videre tilfeller med høy sammenlignet med lav MSMB uttrykk viste ingen forskjell i tid til biokjemisk progresjon av Kaplan-Meier analyse (
p
= 0,5621; S1 figur).
lokalt residiverende CRPC eksemplarer
MSMB uttrykk var høy i bare 9% (9/105) av lokalt tilbakevendende CRPC prøvene (tabell 2), med noen sammenheng mellom uttrykk for MSMB og EZH2 eller Ki-67 uttrykk (
p
= 0,1024, 0,1545, henholdsvis. tabell 2)
CRPC metastaser
Høy MSMB uttrykk ble observert hos 9% av tilfellene (3/32) (tabell 2). En av disse tre pasientene hadde høy MSMB ekspresjon i en av to av sine metastaser. En annen pasient hadde høy MSMB ekspresjon i 3 av 5 av de metastaser, og den tredje pasienten i 3 av 4 av de metastaser. MSMB ble uttrykt ved høyt nivå på 6% (7/112) av alle metastaser (tabell 2). MSMB uttrykk var ikke forbundet med uttrykket av Ki67 eller med EZH2 (
p
= 0,2412 og 0,3295, henholdsvis tabell 2).
MSMB
,
NCOA4 Hotell og
MSMB-NCOA4
fusjon
Først transkripsjoner av
MSMB
,
NCOA4 Hotell og sammensmeltingen av
MSMB-NCOA4
ble målt ved QRT-PCR i RNA isolert fra kreftvev i en kohort av pasienter med klinisk lokalisert PC behandlet med prostatektomi (n = 76). Dataene hadde en ikke-gaussisk fordeling, med de fleste prøvene som viser under- gjennomsnittlig
MSMB
uttrykk og bare 25% (19/76) av prøvene manifestert MSMB utfoldelse over gjennomsnittet.
NCOA4
ble uttrykt ved høyt nivå på 41% (31/76) av prøvene og høye nivåer av
MSMB-NCOA4
fusjon ble funnet i 32% (23/73) av prøver (tabell 3). Uttrykket av
MSMB-NCOA4
fusion transkripsjoner ble korrelert med uttrykk for
MSMB plakater (Pearson r = 0,5092,
p
0,0001, figur 2).
MSMB
uttrykk tendens til å være lavere ved høyere svulst klasse, men uttrykket nivåer av
MSMB
,
NCOA4
, og
MSMB-NCOA4
fusjon avskrift var ikke signifikant assosiert med Gleason score (
p
= 0,0913, 0,2577, og 0,1963, henholdsvis), PT-scenen (
p
= 0,2760, 0,4819, og 1.000, henholdsvis tabell 3), eller tid til biokjemisk tilbakefall (
p
= 0,3862, 0,4126, og 0,5940, henholdsvis. S2 figur)
MSMB
uttrykk var positivt korrelert med uttrykk av
MSMB-NCOA4
.
Disse resultatene er basert på Q-RT-PCR-analyse. Hjelp av de normaliserte verdier ble brukt som en cut-off verdi mellom høyt og lavt uttrykk for
MSMB
,
NCOA4 Hotell og
MSMB-NCOA4
. Alder refererer til alder ved diagnose.
For det andre, påvisning av
MSMB
,
NCOA4 Hotell og
MSMB-NCOA4
fusion transkripsjoner ble vurdert ved hjelp av RNA-seq i to kohorter; en som inneholder 12 BPH, 28 hormon naive PC, og 13 CRPC prøver [32], samt en andre TCGA-kohort bestående av 301 prostata adenokarsinom svulster. Totalt sett er uttrykk for
MSMB-NCOA4
var lav og uttrykk ble observert hyppigere hos PC enn i BPH vev, selv om lave nivåer av uttrykk ble påvist i to av de 12 BPH prøver (figur 3). I utvalget som uttrykte
MSMB-NCOA4
på høyeste nivå, bare 2,2% av karakterutskrifter fra og med
MSMB
promoter dannet en transkripsjon med
NCOA4 plakater (fig 3B ).
NCOA4
ble uttrykt på et betydelig lavere nivå enn
MSMB
i begge gruppene (figur 3 og S3 Fig).
(A)
MSMB
var uttrykt ved høyere nivå enn
NCOA4
. (B) Nedre panel viser hvor stor andel av
MSMB-NCOA4
leser fra total leser av
MSMB Hotell og
MSMB-NCOA4
.
NCOA4
ble uttrykt på lavere nivå enn
MSMB
. Sammensmeltingen genekspresjon delen var 2,2% ved høyeste, av summen av MSMB og MSMB-NCOA4 leser. Y-aksen representerer normalisert lese teller.
Serum MSMB nivåer og SNP rs10993994
Det var ingen signifikant sammenheng mellom MSMB nivåer i serum og alder ved diagnose av PC pasienter (Spearman r = 0,1550) eller alder ved blodprøvetaking blant kontrollene (Spearman r = 0,1876; S4 fig). I PC tilfeller, medianverdien av MSMB i serum (23,0 ng /ml; interkvartile området (IQR) 15,9) var ikke annerledes (
p
= 0,2422) fra den i kontroller (21,8 ng /ml; IQR 15.3 ; tabell 4). Men når justert etter alder og fri eller total PSA ved diagnose, var det en signifikant sammenheng mellom PC risiko og serumnivåene av MSMB i kovarians analyse (
p
0,001; tabell 5). MSMB nivåene var høyere i kontrollene (det betyr MSMB nivået var 29,7 ng /ml når justert etter alder og total PSA ved diagnose og 29,2 ng /ml når justert etter alder og fri PSA ved diagnose) sammenlignet med PC-pasienter (gjennomsnitts MSMB nivå var 21.1 ng /ml når justert etter alder og total PSA ved diagnose og 22,4 ng /ml når det ble justert etter alder og fri PSA ved diagnose) (tabell 5). Videre ble det serum MSMB nivå forbundet med risiko angitt ved Gleason stillingen og med klinisk stadium ved diagnose (S4 tabell), med den gjenværende krets betydelig i ikke-metastatiske eller metastatiske tilfeller alene. I tillegg PC pasientene hadde signifikant lavere fri /total PSA-forhold sammenlignet med kontroller (
p
0,0001, tabell 4). Det var en statistisk signifikant om enn svak positiv korrelasjon mellom nivåer av MSMB og fritt PSA samt mellom MSMB og total PSA i serum fra krefttilfeller (Spearman r = 0,3990 og 0,3200, henholdsvis) og kontroller (Spearman r = 0,3421 og 0,2710, henholdsvis),
p
0,0001 i alt (S5 figur), og signifikant sammenheng mellom free-to-total PSA ratio og serumnivåene av MSMB i saker og kontroller (Spearman r = 0,2142; r = henholdsvis 0,1351,),
p
. 0,0001 i alt (S5 figur)
Blant PC-pasienter, de MSMB nivåer i serum var ikke forbundet med Gleason score i prostatektomi eller biopsiprøver (
p
= 0,6621, 0,819, henholdsvis Tabell 6), men serum MSMB nivåer og pT-trinns (
p
= 0,0288) og alder ved diagnose (
p
= 0,0452) tendens til å bli svakt forbundet i prostatektomi tilfeller (Tabell 6). Kaplan-Meier analyse viste ingen sammenheng mellom serum MSMB nivå og tid til biokjemisk tilbakefall hos pasienter behandlet med prostatektomi eller strålebehandling (
p
= 0,1396, 0,1925, henholdsvis; S6 figur) eller hormonbehandlede pasienter (
p
= 0,2070;. S6 figur)
i kontrast, det var en veldig sterk sammenheng mellom lav MSMB nivåer i serum og TT risiko genotype av SNP rs10993994 av både krefttilfeller og kontrollene (
p
0,0001, 0,0001, henholdsvis figur 4). Men SNP rs10993994 var ikke forbundet med Gleason score på biopsi eller prostatektomi prøver eller med PT-scenen på prostatektomi (
p
= 0,7959, 0,4683, 0,3584, henholdsvis tabell 7). Selv om hyppigheten av TT genotype tendens til å bli noe høyere i krefttilfeller (15%) sammenlignet med kontroller (12%), var det ingen assosiasjon av rs10993994 genotype og kreftrisiko i denne kohorten (
p
= 0,5114 ; Tabell 7)
Genotype av SNP rs10993994 og MSMB nivå i blod (A) PC-pasienter og (B) kontroller.. Lavere MSMB nivå var assosiert med T-allelet av SNP rs10993994. Kruskal-Wallis test ble brukt til å sammenligne de ulike gruppene. Linjene representerer gjennomsnittlig MSMB nivået av de forskjellige genotyper. *** betegner
p
. 0,0001
Diskusjoner
I denne artikkelen har vi studert den potensielle rolle MSMB /
MSMB Twitter /
MSMB-NCOA4
som PC biomarkører i kohorter som svarer til ulike stadier av PC fra tidlig til avansert sykdom. Vi viste at MSMB uttrykk er redusert i mer avanserte PC, er lavest i CRPC. De lave MSMB protein nivå i CRPC var i samsvar med våre RNA-seq data indikerer lav
MSMB
transkripsjonsnivåer i CRPC sammenlignet med PC-prøver. Oppdagelsen av redusert ekspresjon av MSMB /
MSMB
i PC sammenlignet med ikke-ondartet prostata, samt forening av tapet av uttrykket med mer avanserte og høyere Gleason-stillingen sykdom, er i samsvar med flere tidligere publikasjoner [5-7]. Men CRPC tilfeller ikke blitt grundig undersøkt før. Dahlman et al., [23] studerte MSMB uttrykk i 3 CRPC metastaser og funnet lave
MSMB
transkripsjonsnivåer. Her viste vi at både transkripsjon og MSMB proteinnivåene er lave i CRPC med bare 9% av CRPC tilfeller uttrykker MSMB.
I vår studie ble MSMB protein eller mRNA nivåer ikke assosiert med prognosen i prostatektomi eller ADT – behandlede pasienter. Noen tidligere publikasjoner har vist en sammenheng mellom lav MSMB og dårlig prognose i PC [7,11], mens andre viste høy MSMB eller
MSMB
transkripsjonsnivåer og dårlig prognose [12,36]. Det kan være flere årsaker til de uharmoniske funnene. Pasient kohorter variere. Her har vi brukt tre kohorter: (a) en prostatektomi kohort av 261 tilfeller med en gjennomsnittlig oppfølgingstid på 7,3 år, (b) en prostatektomi kohort av 76 tilfeller med en gjennomsnittlig oppfølgingstid på 5,2 år, og (c) en kohort av primært ADT-behandlede pasienter med en gjennomsnittlig oppfølgingstid på 3,6 år. Kohorter A og C ble brukt til immunhistokjemisk påvisning av MSMB protein og kohort b for QRT-PCR måling av
MSMB
transkripsjon. Konsekvent, ingen av gruppene viste prognostisk verdi for MSMB /
MSMB
. Ett antatte variabelen er antistoffet som brukes for farging. Vi testet to vanlig anvendte antistoffer, et monoklonalt antistoff og et polyklonalt en. De ga svært samstemmige fargemønstre. Dermed antistoffene er trolig ikke årsaken til avvikende data.
En lese-gjennom fusjon avskrift av
NCOA4 Hotell og
MSMB
nylig har blitt vist i noen prostatakreft [27,28]. Dermed forsøkte vi å måle ekspresjonen av fusjonstranskriptet i kliniske prøver.
