Abstract
Familiær opphopning av kolorektal kreft oppstår i 15-20% av tilfellene, men anerkjente kreftsyndromer forklare bare en liten brøkdel av denne sykdommen. Således, den genetiske basis for de fleste av arvelig tykktarmskreft er ukjent.
EPHB2
har nylig blitt innblandet som en kandidat tumor suppressor genet i tykk- og endetarmskreft. Målet med denne studien var å evaluere bidraget av
EPHB2
til arvelig tykktarmskreft. Vi screenet for kimcellelinje
EPHB2
sekvensvarianter i 116 populasjonsbaserte familiære kolorektal kreft tilfeller av DNA-sekvensering. Vi estimerte befolkningen frekvenser og preget de biologiske aktivitetene til
EPHB2
varianter identifisert. Tre nye nonsynonymous missense endringer ble oppdaget. To av disse variantene (A438T og G787R) føre til betydelige rester endringer, mens den tredje fører til en konservativ substitusjon i karboksyterminale SAM domene (V945I). De tidligere to varianter ble funnet en gang i 116 tilfeller, mens V945I varianten var til stede i 2 tilfeller. Genotyping av flere pasienter med tykktarmskreft og kontrollpersoner viste at A438T og G787R representerer sjeldne
EPHB2
alleler.
In vitro
funksjonelle studier viser at G787R substitusjon, som ligger i kinasedomenet, forårsaker nedsatt reseptor-kinase-aktivitet og er derfor sykdomsfremkallende, mens den A438T varianten beholder sin reseptor-funksjon og sannsynligvis representerer en nøytral polymorfisme. Svulstvev fra G787R variant saken manifestert tap av heterozygositet, med tap av villtype-allelet, som støtter en tumor suppressor rolle for
EPHB2
i sjeldne kolorektal krefttilfeller. Rare kimcellelinje
EPHB2
varianter kan bidra til en liten brøkdel av arvelig tykktarmskreft
Citation. Zogopoulos G, Jorgensen C, Bacani J, Petit A, Lepage P, Ferretti V, et al. (2008) kimcellelinje
EPHB2
Receptor Varianter i Familiær tykktarmskreft. PLoS ONE 3 (8): e2885. doi: 10,1371 /journal.pone.0002885
Redaktør: Jörg Hoheisel, Deutsches Krebsforschungszentrum, Tyskland
mottatt: 20 desember 2007; Godkjent: 03.07.2008; Publisert: 6. august 2008
Copyright: © 2008 Zogopoulos et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av National Cancer Institute, National Institutes of Health i henhold til RFA # CA-96-011 (til SG) og gjennom samarbeidsavtaler med medlemmer av tykktarmskreft Family Registeret og PI Innholdet i dette manuskriptet ikke nødvendigvis gjenspeiler synspunktene eller retningslinjer fra National Cancer Institute eller noen av de samarbeidende institusjoner eller etterforskere i Colon CFR, heller ikke omtale av handelsnavn, kommersielle produkter, eller organisasjoner innebærer godkjennelse av amerikanske myndigheter eller Colon CFR. Cancer Care Ontario, som vertsorganisasjonen til ARCTIC Genome Project, erkjenner at dette prosjektet ble delvis finansiert av Genome Canada gjennom Ontario Genomics Institute, ved Genome Québec, den Ministère du Développement ÿconomique et Régional et de la Recherche du Québec og Ontario Institute for Cancer Research. GZ er et Scholar i Society of Universitetet kirurger og en mottaker av en Terry Fox Foundation Stipend fra National Cancer Institute of Canada. TJH er en mottaker av en Kliniker-forsker Award i translasjonell forskning fra Burroughs Wellcome fondet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
tykktarms~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP er en vanlig kreftform i vestlige samfunn, med 15-20% av tilfellene utvikler på grunnlag av tilsynelatende genetisk predisposisjon [1]. Men de anerkjente familiær med kolorektal kreft syndromene-Familiær adenomatøs polypose (FAP), arvelig ikke-polypose kolorektal kreft (HNPCC) og
MYH
-Associated polypose (MAP) -account for mye mindre enn en tredjedel av arvet . kolorektal kreft, forlater ekstra arvelig komponent av denne sykdommen uforklarlig [1]
i de aller fleste av kolorektal kreft, mutasjoner aktivering av Wnt signalveien spiller en avgjørende rolle i å initiere tumorigenesis [2] – [4 ]. Hyperaktive av WNT signale oppstår som oftest tidlig i adenom til karsinom sekvens som en konsekvens av inaktive mutasjoner i
APC
tumorsuppressorgenet eller aktivere onkogene
β-catenin
mutasjoner. Disse genetiske endringer fører til konstitutiv aktivering av β-catenin /TCF4 kompleks som i sin tur driver overekspresjon av wnt signale mål. Disse nedstrøms effektorer av Wnt veien inkluderer gener med en avgjørende rolle i utviklingen av kolorektal tumorer, slik som
EPHB Kjøpe og
Efrin
gener [5], [6].
en rolle for
EPHB2
, et medlem av Ef reseptortyrosinkinasehemming familie, som en tumor suppressor genet i kolorektal kreftutvikling har blitt foreslått av flere nyere funn.
EPHB2
kart til en kromosom region (1p36.1) ofte slettet i disse svulstene [7]. I tillegg har immunhistokjemiske studier vist at ekspresjon av multiple EPHB isoformer blir ofte undertrykkes i invasive humane kolorektale tumorer [8]. Videre Alazzouzi
et al
. nylig har vist en høy forekomst av
EPHB2
rammeskifte mutasjoner i mikro ustabil tykktarmssvulster og avvikende
EPHB2
promoter metylering i både mikro stabile og ustabile svulster [9]. Tap av EPHB2 uttrykk i tykktarmssvulster har også vært forbundet med dårligere prognose [10].
mutasjonsinaktivering av
EPHB2
har vært knyttet til prostata kreftutvikling. Huusko
et al.
Nylig beskrevet en rekke
EPHB2
mutasjoner i prostatakreft og i cellelinjer [11], og en felles tull mutasjon har vært assosiert med prostatakreft i African American menn med en familiehistorie med denne sykdommen [12]. Disse funnene er tatt sammen med den etablerte rolle EPHB reseptorer i kolorektal kreft, bedt oss om å hypoteser om at kimcellelinje
EPHB2
mutasjoner kan utgjøre minst en brøkdel av de genetiske endringer som ligger til grunn uforklarlig del av arvelig tykktarmskreft, og kan representere en ny kreft syndrom forårsaker genetisk predisposisjon for tykktarms og prostatakreft. Derfor, i denne studien, vi skjermet 116 populasjonsbaserte familiære kolorektal krefttilfeller for kimcellelinje
EPHB2
mutasjoner. De 116 probands testet hadde minst én ekstra berørte første grad slektning. Disse sakene hadde mikro stabile svulster, og møtte ikke diagnostiske kriteriene for FAP, HNPCC og MAP. Vi har også beriket vår serie med personer som møtte de oveninklusjonskriterier og hadde personlige eller familiens historie av prostatakreft. Våre funn tyder på at sjeldne
EPHB2
alleler bidra til en liten brøkdel av familiær tykktarmskreft.
Materialer og metoder
forsøkspersonene og DNA-prøver
Biospecimens ble hentet fra Ontario Familiær Colorectal Cancer Registry (OFCCR), medlem av National Cancer Institute Cooperative Familie Meldingssystem for tykktarmskreft Studies (https://epi.grants.cancer.gov/CFR/about_colon.html) [13]. Den OFCCR inneholder 3,770 kolorektal kreft tilfeller diagnostisert i provinsen Ontario, Canada mellom 1997-2000, med en alder på tidspunktet for diagnostisering av 20 til 74. Alders- og kjønns matchet kontrollpersoner uten personlige historie av tykktarmskreft ble rekruttert telefon fra en liste over tilfeldig valgte boliger telefonnumre for Ontario og fra befolkningsbaserte lignings Rolls av Ontario Finansdepartementet. Forsøkspersonene donert en venøs blodprøve og perifere lymfocytter ble isolert ved hjelp av Ficoll-Paque, i henhold til produsentens anbefalinger (Amersham Biosciences, Baie d’Urfe, Quebec, Québec, Canada). Fenol-kloroform-metoden ble anvendt for å isolere genomisk DNA fra lymfocytter og tykktarmskreftcellelinjer. Den QIAamp protokollen (Qiagen Inc., Mississauga, Ontario, Canada) ble anvendt for å ekstrahere genomisk DNA fra parafininnstøpte vev. Alle forsøkspersonene signert skriftlig samtykke til å delta i en Mount Sinai Hospital forskningsetikk Styret godkjente forskningsstudie.
EPHB2
Mutation Screening
Ved hjelp av automatisert sekvensering (Applied Biosystems 3730xl DNA Analyzer , Foster City, CA, USA), vi skjermet for kimcellelinje
EPHB2 plakater (Entrez Gene ID: 2048; RefSeq: NM_004442, NM_017449) sekvensvarianter i 116 familiære kolorektal tilfeller (gjennomsnittsalder ved diagnose 54 år, range 22 til 74 år, 59 kvinner, 57 menn). Vår analyse inkluderte pasienter med personlige (n = 6) og /eller slektshistorier (far, n = 19; søsken, n = 23; halvsøsknene, n = 4) av prostatakreft. Pasienter med FAP, HNPCC eller MAP ble ekskludert. En serie av kolorektal kreft cellelinjer (Caco2, Colo320DM, Colo320HSR, HT29, LS513, LS1034, SW837, SW948, SW1417, T84) ble også undersøkt. Vi sekvensert hele den kodende region og minst 50 bp av intronic sekvens på ekson /intron grensene. PCR primersekvenser og betingelser er gitt i tabell S1. Varianter identifisert er nummerert i forhold til RefSeq NM_004442.
A438T, D679N og G787R allelfrekvenser
Et tilfeldig utvalg av saker og matchede kontroller fra OFCCR serien ble valgt for studier for å evaluere A438T, D679N og G787R allel frekvenser. Lymfocytt DNA-prøver fra en ekstra serie OFCCR tilfeller (n = 364 for A438T; n = 1160 for D679N; n = 182 for G787R) og befolknings-matchet kontroller (n = 384 for A438T; n = 1133 for D679N, n = 199 for G787R) ble testet for å vurdere bestands frekvensene til A438T, D679N og G787R varianter. Genotyping analyser for de A438T, D679N og G787R varianter ble utviklet ved hjelp av FluorescencePolarization-Single Base Extension (FP-SBE) [14], SNPstream [14] og RFLP, henholdsvis (tabell S2).
Aner og tap av heterozygositet (LOH) Analyser
Testing for segregering i familiene til de probands bærer A438T og G787R varianter ble utført ved direkte sekvensering, enten ved hjelp av lymfocytt eller arkiv DNA fra parafin-embedded tissue blokker. Tap av heterozygositet ble utført ved sekvensesammenkoblet tumor /normal arkiv DNA prøver og å sammenligne sekvens autoradiogrammene for en reduksjon i intensitet av den ikke-muterte signal i forhold til den muterte sekvens (tabell S2). Disse reaksjonene ble utført ved hjelp av Thermo Sequenase Radiomerket Terminator Cycle Sequencing kit, i henhold til produsentens protokoll (USB Corporation, Cleveland, Ohio, USA)
Biokjemisk karakterisering av A438T G787R Varianter
A438T Hotell og
G787R
cDNA sekvensvarianter ble generert ved hjelp av PCR-basert nettsted rettet mutagenese og RefSeq NM_004442 (OriGene Technologies Inc., Rockville, MD, USA) som templat. PCR-produktene ble klonet inn i pcDNA3 (Invitrogen Canada Inc.), og sekvensen bekreftet. DU145 (en gave fra Dr. Irene Andrulis, Samuel Lunenfeld Research Institute) ble dyrket i MEM /10% FBS. Cellene ble transient transfektert med ulike
EPHB2
cDNA konstruerer (villtype,
A438T
, eller
G787R
) ved hjelp lipofektamin 2000 (Invitrogen Canada Inc., Burlington, Ontario , Canada), i henhold til produsentens instruksjoner. Fem timer etter transfeksjon, ble mediet forandret til sultemedium (MEM /0,5% FBS) i 16 timer. Cellene ble deretter stimulert med 2 mg /ml preclustered Efrin b1-Fc (Efrin b1-Fc, R G787R) vi identifisert resultat i biokjemisk betydelige og potensielt patogene rester endringer. Resten påvirkes av A438T substitusjon er lokalisert i den ekstracellulære fibronektin type III domene [17]. Siden dette domenet kan være involvert i ligand binding, postulerte vi at A438T variant kan ha redusert bindende aktivitet og signalfunksjon. Den G787R variant påvirker en rest i kinasedomenet, og denne substitusjonen kan derfor påvirke reseptorens kinaseaktivitet og biologisk aktivitet [18] direkte. Den tredje nye varianten (V945I) ble påvist hos to pasienter, og fører til en konservativ substitusjon ved det ekstreme karboksy-terminus i SAM domenet [19]; vi har ikke preget dette allelet videre.
A438T varianten ble funnet hos en pasient som hadde to primære kreft. Han ble diagnostisert med prostatakreft og en mikro stabil høyresidig tykktarmskreft i alderen 61 og 64 år, henholdsvis (figur 1A, Familierom 1). Den proband far også gjennomført A438T variant, og er den eneste andre familiemedlem med tykktarmskreft, ble han diagnostisert med en mikro stabil sigmoid kreft i en alder av 76 år. Av de 6 upåvirkede familiemedlemmer testet for dette missense endringen, 3 ble funnet å bære A438T variant (figur 1A). Sekvense analyser av sammenkoblede tumor normal genomiske DNA-prøver viste tap av villtype
EPHB2
allel i tykktarmskreft fra proband, men ikke i tykktarmskreft fra sin far (data ikke vist). Farens svulst manifestert LOH av varianten, snarere enn villtype,
EPHB2
allel. Denne siste observasjonen kan gjenspeile den hyppige tap av 1p36.1 kromosomale regionen under tumorigenesis [7], [8], og ikke målrettet inaktivering av
EPHB2
locus av LOH.
+ /-, carrier; – /-, Ikke-bærer; LOH +, kolorektale svulstvevet ble funnet å manifestere LOH, med tap av villtype-allel; Ca, kreft.
G787R varianten ble oppdaget hos en pasient med diagnosen endetarmskreft i en alder av 67 år (figur 1B, Familie 2). Denne tumor viste tap av villtype-allel (Figur 2). Pasienten rapporterte også en historie med follikulær typen skjoldbrusk kreft i en alder av 73 år. Dette proband ble valgt for mutasjon screening på grunn av en familiehistorie med tykktarmskreft på mors side. Imidlertid genotyping data viste at G787R varianten allele enten stammer på fars side eller er et resultat av en
de novo
mutasjon (figur 1B). Den proband datter er den eneste andre bærer av denne varianten, og hun er for tiden upåvirket i en alder av 45 år.
I forhold til de intensiteter av guanin band i sekvenseringsreaksjon, intensiteten av guanin nukleotid på posisjon 2359 blir vesentlig redusert i den tumor-prøven, noe som antyder tap av villtype-allelet (G) i tumoren, men ikke i den tilstøtende normalt vev (pil viser nt. 2359).
Vi estimerte allelfrekvenser av A438T og G787R varianter av screening en ekstra serie av befolkningsbaserte kolorektal krefttilfeller og alder og kjønn matchet kontrollpersoner. De genotyping Resultatene tyder på at disse to allelene er sjeldne varianter (tabell 1). Verken varianten ble oppdaget i kontrollpersoner, og de ble ikke identifisert i ytterligere kolorektal krefttilfeller. Derfor, for å ytterligere evaluere mulige patogene rolle A438T og G787R reseptor varianter, vi preget deres iboende tyrosinkinaseaktivitet.
Biokjemisk karakterisering av A438T og G787R isoformer avslørte at at G787R varianten er funksjonelt svekket, mens A438T endringen representerer sannsynligvis en nøytral polymorfisme. DU145 celler, som ikke uttrykker en endogen funksjonell EPHB2 reseptor [11], ble transient transfektert med enten villtype EPHB2 reseptor eller en av de to variantene. Vi fant redusert autofosforylering av G787R-reseptoren, men ikke den A438T variant, etter ephrinB1 stimulering sammenlignet med villtype-reseptor (figur 3A). Vi har bekreftet at G787R reseptoren har redusert katalytisk aktivitet ved å bruke en in vitro kinase analyse. Muligheten av G787R-reseptoren for å autophosphorylate eller for å fosforylere det enolase substratet var omtrent 9-ganger lavere enn den til villtype-reseptor (figur 3B) viser at den G787R mutasjonen forandrer reseptor-aktivitet og er ikke en sjelden nøytral polymorfisme.
Panel A: Redusert autofosforylering av EPHB2 G787R variant som svar på ephrinB1 stimulering. DU145-celler ble transient transfektert med cDNA-konstruksjoner (tom vektor, vill-type, vekt, A438T, G787R) og enten venstre ustimulert (-) eller stimulert (+) med preclustered ephrinB1-Fc i 30 min. EPHB2 ble immunopresipitert (IP) og immunoblottet (IB) med antifosfotyrosin (4G10) for å evaluere reseptor autofosforylering. Cellelysatet ble immunoblottet med antiEPHB2 for å forsikre seg om at det ikke var lik transfeksjonseffektivitet. Panel B: Abolished kinase aktivitet av EPHB2 G787R variant. In vitro kinasebestemmelser ble utført ved anvendelse av villtype EPHB2 eller G787R immunoutfellinger og enolase som det eksogene substrat. Før avbildning eller immonoblotting mot EPHB2, ble fosforylerte proteiner separert ved gelelektroforese og farget med Coomassie. Autoradiogram som viser
32PγATP innlemmelse i EPHB2 og enolase (øvre panel), anti-EPHB2 immunoblot (midtre panelet) og lik belastning av enolase vises (nedre panel). Tabellen viser den relative kinase aktiviteten av villtype EPHB2 reseptor (satt til 100%)
vs.
G787R variant.
Diskusjoner
Ef -reseptorfamilien er den største kjente undergruppe av reseptor-tyrosin-kinaser. Denne familien er videre inndelt i to forskjellige klasser, EphA (A1 til A10) og EphB (B1 til B6), basert på deres bindende affinitet for to membran forankret ligand familier med tilsvarende navn på type A (A1 til A5) og B (B1 til B3) ephrins [19], [20]. Etter ligandbindende, Ef reseptorer aktivere celle frastøting veier å modulere celle oppdeling i seksjoner og bestilt celle migrasjon i en rekke biologiske prosesser [19].
Mus dyremodellstudier har vist at i tynntarmen, EphB reseptorene medierer intestinal stamcelleproliferasjon [21] samt epitelial cellemigrering og organisasjon sammen krypt-villøse aksen [5]. Siden tap av mitotisk aktivitet kontroll, epithelial mønster og vevsarkitektur er kjennetegnene ved tumorigenesis, forstyrrelse av normal EPHB reseptor uttrykk og funksjon fremmer sannsynlig kolorektal kreftutvikling. Konstitutiv EPHB reseptorekspresjon kan stimulere startfasen ved å forstyrre proliferativ stamcelle homeostase, og sekundært å stanse all EPHB reseptoraktivitet kan muliggjøre ekspansjon av kreftceller, utover de romlige grensene pålagt av intakt EPHB reseptor-funksjon for å fylle tilstøtende vev strukturer [5], [6 ], [21]. Til støtte for denne hypotesen, har vi og andre nylig vist en årsaks rolle for EphB inaktivering i tumor progresjon [22]. Vi fant ut at
EphB2
eller
EphB3
stanse i Apc
Min /+ mus resulterer i akselerert og mer aggressiv tykktarms tumorigenesis.
I denne studien har vi undersøkt 116 populasjonsbasert familiære tilfeller av tykktarmskreft for mutasjoner i en kandidat tumor suppressor genet, EPHB2, og identifisert tre søker varianter (A438T, D679N, G787R), som ble ytterligere karakterisert. Selv om A438T allele ikke ble observert hos kontrollpersoner, og ble funnet å segregere med sykdommen i familien 1, tyder på biokjemisk karakterisering som A438T er et sjeldent nøytral polymorfisme; vi kan ikke utelukke at det påvirker mer subtile aspekter av EPHB2 signale, for eksempel dannelsen av høyere orden oligomerer. Den D679N variant er tidligere blitt rapportert å være assosiert med prostatakreft [11]. Selv om det fortsatt er mulig at denne varianten modulerer predisposisjon for prostatakreft, våre data tyder på at det finner sted ved en befolkning frekvens på omtrent 1%, og at det ikke skjer, på egen hånd, øke mottakeligheten for kolorektal kreft. Vi har observert D679N allelet i et tilsvarende antall pasienter med tykktarmskreft og befolknings-matchet kontroller. I motsetning til disse sistnevnte varianter, våre data tyder på at den G787R varianten er funksjonelt kompromittert, og kan være en sjelden årsak til arvelig tykktarmskreft. Den G787R varianten ble identifisert i en pasient diagnostisert med kreft i endetarmen på 67 år, og biokjemisk karakterisering avslørte at G787R substitusjon avtar markert reseptoren iboende kinase aktivitet.
Det har vært to andre undersøkelser som undersøker bidrag kimcellelinje
EPHB2
mutasjoner til kolorektal kreft mottakelighet. Oba
et al.
Screenet for
EPHB2
mutasjoner i colontumorer og respektive normale tykktarm vev fra 50 pasienter med kolorektal kreft, og identifisert en intron 8 endring i en enkelt svulst prøve, noe som resulterer i en tull mutasjon. Det er imidlertid uklart om dette er en somatisk mutasjon, så det er ingen indikasjon på om denne genetiske endringen ble også observert i den sammenkoblede normal kolon prøven [23]. Denne undersøkelsen også identifisert 15 tilfeller med LOH involverer
EPHB2
gen og skjermet for mutasjoner i de resterende
EPHB2
allel. Siden mutasjoner i de resterende allelet ikke ble identifisert, Oba
et al.
Antydet at
EPHB2
er ikke en klassisk tumor suppressor genet. Men siden bare 50 prøver av sannsynlige sporadiske tilfeller av kolorektal kreft ble analysert, en tumor suppressor rolle for
EPHB2
kan ikke utelukkes. I en nyere studie, Kokko
mfl.
Rapporterte en sammenslutning av tre nye varianter med kolorektal kreft [24]. ble observert kimcellelinje missense endringer som resulterer i I361V, R568W og D861N i pasienter med kolorektal kreft, men ikke hos friske kontroller. Det er imidlertid mulig at disse tre varianter er sjeldne nøytrale polymorfismer siden den biologiske betydning av variantene ikke ble evaluert ved bruk av direkte funksjonelle analyser. Pasientene vist i disse to sistnevnte studiene ikke nødvendigvis har betydelige slektshistorier av tykk- og endetarmskreft. I motsetning til disse to tidligere rapporter, ble vår studie designet spesielt vurdere rollen til kimcellelinje
EPHB2
mutasjoner hos pasienter med familiær kolorektal kreft, og ikke i sporadiske tilfeller. Til tross for studien designforskjeller, sammen disse tre undersøkelsene tyder på at
EPHB2
germline mutasjoner er ikke vanlige hendelser i tykk- og endetarmskreft. Videre undersøkelser av større utvalgsstørrelser for å bekrefte denne observasjonen.
I sammendraget, vi identifisert en germline
EPHB2
variant (G787R) med redusert biologisk aktivitet i en kolorektal kreftpasient, og foreslår at
EPHB2
mutasjoner bidra til en liten brøkdel av arvelig tykktarmskreft. Sjeldenhet av kimcellelinje
EPHB2
mutasjoner støtter en mer betydelig rolle for EPHB2 i kolorektal tumorprogresjon i stedet for i startfasen. Siden EPHB reseptorer (EPHB2, EPHB3 og EPHB4) følger et lignende mønster av transcriptional stanse i kolorektal kreft, alle EPHB reseptor familiemedlemmer trolig spille en tilsvarende rolle i denne sykdommen. Derfor er det EPHB familien utgjør sannsynligvis for en mindre andel av genetisk predisposisjon for kolorektal kreft, men har en viktig rolle i tumorprogresjon. Selv om våre funn tyder på at
EPHB
genet familie bør ikke rutinemessig screenes for germline mutasjoner i familiære tilfeller,
EPHB
gener kandidat tumor dempere, sannsynligvis sto for sjeldne tilfeller av familiær kolorektal kreft .
Hjelpemiddel Informasjon
Tabell S1.
doi: 10,1371 /journal.pone.0002885.s001 plakater (0,06 MB DOC)
Tabell S2.
doi: 10,1371 /journal.pone.0002885.s002 plakater (0,05 MB DOC)
Takk
Forfatterne takker Dr. D. Daftary, Frøken S. Holter, Fru A. Janson for deres hjelp med datainnsamling, og Ms Joelle Fontaine, MS T. Selander og Mount Sinai Hospital Biospecimen Repository for teknisk assistanse.
