Abstract
Målet
med vår studie var å undersøke serum inhibin A og inhibin B konsentrasjoner i eggstokkene kreftpasienter i forhold til clinicopathological funksjoner og 5-års overlevelse.
Materiale og metode
Vi har registrert 90 ovarialcancer pasienter i vår studie, i alderen 45-81 år, som gjennomgikk optimal cytoreduserende kirurgi. Hos alle pasienter ble serum inhibin A og inhibin B konsentrasjoner målt ved hjelp av en to-trinns sandwich-typen enzym immunoassay før operasjonen.
Resultater
I gruppen av pasienter med eggstokkreft median serumkonsentrasjon av inhibin A var 3,87 pg /ml (0,96 til 10,09) og inhibin B var 13,9 pg /ml (5,1 til 45,0). Median konsentrasjoner av inhibin A og B i forhold til FIGO stadium og histologisk subtype var ikke signifikant forskjellig. Inhibin A-nivåene var signifikant høyere hos pasienter med lavere gradering (G1 og G2) i forhold til de med høyere klasse G3 (p = 0,001). Det var ingen forskjell i inhibin B konsentrasjoner i forhold til gradering. Kaplan-Meier analyser viste ingen forskjeller i overlevelse i forhold til inhibin A nivåer, mens det var en trinnvis svekkelse av 5-års overlevelse med økt inhibin B-nivå. I gruppen av pasienter med inhibin B nivåer høyere enn 20 pg /ml overlevelsesraten var lavere (p = 0,00625, log-rank test).
Konklusjon
1. Høyere inhibin A-serumnivåer ble funnet hos pasienter med svært differensiert eggstokk-karsinom i forhold til gruppen av pasienter med dårlig differensiert kreft, som kan bekrefte innvirkningen av inhibin A på celleproliferasjonsprosesser. 2. En vesentlig betydning av inhibin B ble demonstrert i prediksjon av døden i løpet av mindre enn en fem års periode. Sannsynligheten for overlevelse hos pasienter med høy inhibin B nivåer var lavere med statistisk signifikans. Dette kan indikere behov for videre studier om hvordan å blokkere inhibin B aktivering veien i ovarialcancer terapi
Citation. Walentowicz P, Krintus M, Sadlecki P, Grabiec M, Mankowska-Cyl A, Sokup A , et al. (2014) Serum Inhibin A og Inhibin B nivåer i ovarialcancer pasienter. PLoS ONE 9 (3): e90575. doi: 10,1371 /journal.pone.0090575
Redaktør: Surinder K. Batra, University of Nebraska Medical Center, USA
mottatt: 8 november 2013; Godkjent: 01.02.2014; Publisert: 05.03.2014
Copyright: © 2014 Walentowicz et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Forfatterne har ingen støtte eller finansiering for å rapportere
konkurrerende interesser:. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
ovarialcancer er den femte største dødsårsaken. hos kvinner i Europa og USA [1]. Selv om forståelse av eggstokkreft har bedret seg mye, etiologi og forløpet av sykdommen er fortsatt ukjent [2]. Forholdene som gjør kreftcellene til å initiere metastaser til fjerne steder representerer et avgjørende men fortsatt dårlig forstått klinisk problem. Dessuten, selv om nye markører ble introdusert til klinisk praksis, mer enn 70% av pasientene stede med avansert sykdom (stadium III eller IV), og langsiktige overlevelse er (bare rundt 30%) lav [3], [4 ], [5].
inhibiner ble opprinnelig isolert fra gonadale fluider basert på deres respektive evner til å hemme follikkelstimulerende hormon (FSH) sekresjon fra hypofysen. Deretter ble disse proteiner identifiseres som medlemmer av en familie av vekstfaktorer, de transformerende vekstfaktor-beta (TGFfi) superfamilien, med flere funksjoner som lokale regulatorer av gonadal biologi [6], [7]. Inhibin A og inhibin B hører til en liten undergruppe av TGF-β superfamilien som virker som antagonister og er strukturelle homologer av aktiviner, bestående av aktivin β-subenheten og et unikt α-subenheten. Heterodimerisation gir opphav til inhibin A (α /βA) og B (α /βB) [8], [9]. I sin struktur, den modne inhibin A-dimer er lik aktivin A [10].
inhibiner blokkere virkningene av aktivin på hypofysen [11]. Dele β-subenheten kan inhibin binde aktivin type II-reseptorer, med en lavere affinitet [12]. En membranbundet proteoglycan, betaglycan, fungerer som en inhibin ko-reseptor og dessuten betaglycan har blitt karakterisert som et tilbehør reseptor for beslektede TGF-β ligander, TGF-β1, -β2 og -β3 [13]. I nærvær av betaglycan danner inhibin en høy affinitet kompleks med aktivin reseptor type II [13]. Dette samspillet hemmer activin adgang til sin type II-reseptorer, og blokkerer intracellulære signalkaskade [14].
At inhibiner uttrykk er begrenset til eggstokkene granulosa celler i kvinner, førte til etablere inhibin nivåer som et nyttig serum markeringen av granulosa-cellesvulster (GTCs).
dessuten som inhibin A og B hører til transformerende vekstfaktorer familien og deres representanter spiller en viktig rolle i eggstokkreft karsinogenese, kan den hypotese at de også kan spille en rolle i eggstokkene kreftutvikling. Det ble vist at noen områder av gener som koder for inhibiner tendens til å bli svekket i ovariekarsinomer, men et forhold mellom disse skader og karsinogenisitetsstudier prosesser i epiteliale kreftpasienter ovarian ikke er klarlagt [15]. En av foreslåtte mekanismer som deltar i kreftutvikling av ovarialcancer er activin pathway forstyrrelser resulterte fra redusert uttrykk av p-glykaner. I likhet med andre neoplasmer, er eggstokkreft kjennetegnet ved tap av β-glykan ekspresjon, men rollen som aktivin vei, og interaksjoner mellom inhibiner, aktiviner og andre komponenter av TGF-β familie, fortsatt uklar [15].
med tanke på de fakta Målet med denne studien var å undersøke inhibin A og inhibin B konsentrasjonen i serum av epiteliale kreftpasienter eggstokkene i forhold til clinicopathological funksjoner, for eksempel en patologisk subtype av svulsten, FIGO stadium, sortering, overgangsalder status og samlet 5-års overlevelse.
pasienter
Vi har registrert 90 ovarialcancer pasienter i alderen 47-81 år (gjennomsnitt 59,6 +/- 10,3 år) behandlet i avdeling for gynekologi og obstetrikk, Ludwik Rydygier Collegium Medicum i Bydgoszcz i perioden 2005-2006. Alle kvinner var postmenopausal.
Bare kvinner som gjennomgikk optimal cytoreduserende kirurgi ble vurdert for videre analyse, alle av dem med rest kreft fokuserer mindre enn 1 cm i diameter. Alle pasientene ble operert av erfarne gynekologisk onkolog. Standarden kirurgisk protokollen inkludert tumorectomy, hysterektomi med bilateral salpingoovariectomy, bekkenglandeltoalett, Omentektomi og appendektomi. International Federation of gynekologi og fødselshjelp (FIGO) eggstokkreft iscenesettelse system ble brukt for å vurdere klinisk stadium av sykdommen. Tidlige stadier ble bekreftet hos 26 pasienter (FIGO jeg i 16 kvinner, II i 10) og avansert sykdom hos 64 pasienter (FIGO III-56, IV-8). Alle eggstokkreft tilfellene var med histologisk bekreftelse, hvorav 68 (75%) serøs, 7 (8%) mucinous and15 (17%) endometrioid. Histologisk undersøkelse ble utført ved Patologisk avdeling, Universitetssykehuset i Bydgoszcz, og histologisk gradering ble bestemt (G1 i 13, G2 i 28 og G3 i 49 pasienter).
Etter optimal cytoreduserende kirurgi, alle kvinner gjennomgikk 6 kurs kjemoterapi basert på carboplatin og paclitaxel. Baseline karakteristikker av deltagerne er vist i tabell 1.
Bioetisk Utvalget ved Ludwik Rydygier Collegium Medicum, Nicolaus Copernicus University i Torun har gjennomgått og godkjent denne studien. Alle deltakerne har gitt skriftlig, informert samtykke.
Metoder
Blodprøver ble samlet inn (10 ml) etter innleggelse på sykehuset, dagen før operasjonen. Etter sentrifugering i standard betingelser serum ble oppnådd, alikvotert og lagret ved -70 ° C inntil analyse.
Serum inhibin A og inhibin B-konsentrasjonene ble målt ved anvendelse av et enzymatisk amplifisert to-sete to-trinns sandwich-type immunoassay ( inhibin-A /B ELISA, diagnosesystemer Laboratories, Inc., Webster, Texas, USA). Den unøyaktighet av analysen for inhibin A var 6,2% ved 23 pg /mL og 3,0% ved 781 pg /ml. Den laveste inhibin A-konsentrasjoner i en prøve som kan bli detektert var 1 pg /mL (nedre deteksjonsgrense). Som referanseverdi for kvinner over 45 år har vi akseptert inhibin En konsentrasjon av 1 til 3,88 pg /ml.
intra- og inter-assay variasjonskoeffisient med serumkontroller for inhibin B var ca 3,5% -5,6% og 6,2% -7,6%, respektivt. Den nedre påvisningsgrense var 6 pg /ml. Analyse målt utvalg for inhibin B var 10-531 pg /ml.
Kolmogorov-Smirnov test ble brukt for å vurdere normalitet av fordelingen av undersøkte parametre. Data ble uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik og median med 25.-75-prosentiler. Sammenligning mellom gruppene ble utført ved hjelp av Mann-Whitney test og Kruskal-Wallis test for ikke-gaussisk fordelt variabler med post hoc Dunns tester. P-verdi 0,05 ble ansett som statistisk signifikant
Totalt overlevelse ble undersøkt for signifikans ved hjelp av log-rank test og Kaplan-Meier-kurver
Univariat og multivariat Cox regresjon ble utført… For analyse ble en fremre utvalg med en P-verdi på mindre enn 0,05 for oppføring anvendt. Virkningene av variablene ble uttrykt som hazard ratio per 1 SD endring for å tillate en bedre sammenlignbarhet mellom effektstørrelser av de ulike variablene som ble testet.
Alle statistiske analyser ble utført ved hjelp av Statistica 10,0 for Windows (Statsoft, Tulsa , OK, USA).
Resultater
i gruppen av pasienter med eggstokkreft median serumkonsentrasjon av inhibin A var 3,87 pg /ml (0,96 til 10,09) og inhibin B var 13,9 pg /ml (5,1 til 45,0).
Median konsentrasjoner av serum inhibin A og B i forhold til FIGO stadium var ikke signifikant forskjellig. Men det var en trend å statistisk signifikans for inhibin A (tabell 2).
Median serum inhibin A nivåer var signifikant høyere hos pasienter med lavere gradering (G1), samt hos pasienter med G2 i forhold til de med høyere klasse G3 (p = 0,001). Vurderer serum inhibin B konsentrasjoner i forhold til gradering, var det ingen forskjeller observert (Tabell 3).
Ingen signifikante forskjeller ble funnet mellom inhibin A og B konsentrasjoner og histopatologiske subtype av svulsten (tabell 4) .
Vi evaluerte ROC kurver for å vurdere diagnostiske nøyaktighet på variabler undersøkt for prediksjon av død innen fem år (Tabell 5, fig. 1). Det høyeste nivå av diskriminering ble funnet for inhibin B (areal under kurven [AUC] = 0,705), men dette var ikke signifikant forskjellig fra den diagnostiske nøyaktigheten av to andre variabler: alder (AUC = 0,629), og inhibin A (AUC = 0,640)
Videre sammenhengen mellom inhibin A, inhibin B og overlevelse ble også utført i henhold til univariable og multivariat Cox regresjonsanalyse (inkludert variabler som:. alder, histologisk subtype (serøs), høy klasse (G2 + G3), avansert FIGO stadium (tabell 6, 7). grade og avansert FIGO stadium var statistisk viktige prognostiske faktorer i univariat analyse for total overlevelse (tabell 6). i multivariat analyse bare avansert FIGO stadium var statistisk viktig (tabell 7).
Videre Kaplan-Meier analyser ble utført. det var ingen forskjell i overlevelse i forhold til inhibin A nivåer (figur 2). Kaplan -Meier analyser viste en trinnvis svekkelse av kreft 5-års overlevelse med økt inhibin B-nivå. The Log-rank test viste signifikante forskjeller mellom inhibin B konsentrasjon og overleve; i gruppen av pasienter med inhibin B nivåer høyere enn 20 pg /ml overlevelsesraten var lavere (p = 0,00625, log-rank test) (figur 3).
Diskusjons
Ovariekreft fremdeles et betydelig problem for den foreliggende oncologic gynekologi forbundet med en sen diagnose, en lav behandlingseffekt og en høy dødelighet. Nye metoder for ovarialcancer diagnostikk blir introdusert på regelmessig basis, men slike handlinger ikke signifikant bedre behandlingsresultat [16]. Det er av stor betydning for å søke etter nye faktorer som ville gjøre det mulig for oss å prognosticate behandlingsresultatene og for å hjelpe oss med å velge en gruppe kvinnelige pasienter med dårlig prognose som krever en mer aggressiv behandling.
I vår studie, vi har evaluert serumnivåer av hormoner som hører til TGF-β-familien, nemlig inhibin A og inhibin B. Vi fant at A og B inhibin konsentrasjoner ikke signifikant forskjellig, avhengig av graden av klinisk utvikling (FIGO stadium) og type histopatologisk undersøkelse. Inhibin A nivåer korrelerte ikke med en 5-års overlevelse. På grunn av vår kunnskap vi er de første som har evaluert inhibin A nivåer med hensyn til 5-års overlevelse hos kvinner med epitelial ovarialcancer. Det er noen rapporter i litteraturen om inhibin A-nivå hos pasienter som er berørt av epitelial ovarialcancer. I sin studie, Roberts et al. viste blodplasma forhøyede konsentrasjoner av inhibin alfa-subenhet i ovarialcancer pasienter [17]. Forfatterne fant ingen sammenheng mellom inhibin A og clinicopathological karakteristikker av svulsten, som er i tråd med våre egne studier.
Likevel, vi har vist en positiv sammenheng mellom økende inhibin A nivåer og nivået på histologiske Differensiering. I undergruppen av pasienter, i hvem svulsten var preget av lav karakter (G1) ble de høyeste inhibin A nivåer bemerket (8,23 pg /ml for G1 vs. 0,96 pg /ml for G3, p = 0,001).
Knight og Glister vist at balansen mellom inhibiner og aktiviner, produsert av granulære celler er viktig for reguleringen av mange faktorer forbundet med follikkelutvikling, inkludert celleformering [18]. Kanskje, hvis en ubalanse i et slikt system skjer, vil det påvirke en forbedret spredning av ovarialcancer celler.
Basert på våre studieresultater, har vi funnet forskjeller i inhibin A nivåer blant kvinner rammet av ovarialcancer, mens det ikke var noen forskjell av inhibin B-nivåer mellom dem. Kanskje er dette fenomenet – til en viss grad – i slekt med tumorcelle-proliferasjon lidelse hos ovarie karsinom pasienter. Vi anser det som må bekreftes av videre studier også inkludert evaluering av activin nivåer.
Våre studier er banebrytende verk på rollen som inhibin A i epitelial ovarialcancer. For første gang var vi uheldig å bekrefte purposefulness av inhibin A nivå rutine evaluering i prediksjon av clinicopathological karakteristika hos pasienter rammet av ovarialcancer.
Vi har også studert nivåene av inhibin B, en annen hormon som hører til TGF-β familien. Inhibin B nivåer avdekket ikke statistisk signifikante forskjeller avhengig av graden av klinisk utvikling, nivået på histologisk malignitet og histologisk type kreft. Men ved å bruke ROCer (Receiver Operating Curves), har vi funnet en sammenheng mellom en preoperative blodplasma inhibin B nivå og en 5-års overlevelse. Ved å gjennomføre en overlevelse analyse ved hjelp av Kaplan-Meier-kurver, har vi observert en vesentlig kortere tid til døden i gruppen av pasienter med inhibin B nivåer over 20 pg /ml.
På grunn av vår kunnskap vi var de første som har analysert en sammenheng mellom inhibin B nivåer og pasientenes overlevelse. I tilgjengelig litteratur, har vi ikke funnet rapporter om inhibin B effekt på ovarialcancer pasientenes overlevelse. Vi tror at økningen av inhibin B Nivået kan være antagelig på grunn av blokkering i transduksjon signalveien til activin. Noen forfattere foreslår at den aktivin signalveien utøver en hemmende virkning på tumorvekst, ganske lik TGF-β virkning i normale epitelceller. Svekkelsen av aktivin aktivitet kan føre til tap i enzymhemmende evne indusert på vekst, og inhibin B overproduksjon. En redusert β-glykan ekspresjon kan være en mulig mellomliggende mekanisme som er involvert i denne prosessen, men interaksjoner som deltar blant respektive agenter for TGF-β familie er usedvanlig kompleks [19]. Både inhibin A og inhibin B bind β-glykan utelukkende ved bindingsstedet lokalisert på den proksimale delen av cellemembranen [20], [21]. Det har blitt vist at bindingsstedene er felles for inhibiner og andre komponenter av TGF-β familie, men de skiller seg blant hverandre med hensyn til spesifikke aminosyrerester karakteristiske for de respektive faktorer [20]. Det synes å være sannsynlig at inhibin A og inhibin B presentere en annen affinitet for β-glykan [22]. Inhibin A binder med høyere affinitet for β-glykan og type II-reseptoren, i motsetning til inhibin B [23]. Likevel er inhibin B preget av en større evne til å motvirke FSH frigjøring fra hypofysen, som er en indikasjon på mulig inhibin B binding til activin type II reseptor via en annen vei [22].
Vi postulere at activin mediert vekst arrest ledsaget av en påfølgende heving av inhibin konsentrasjoner kan muligens utgjøre et viktig ledd i kreftutvikling av ovarialcancer.
Inhibin A, som hører til TGF-familien, har en innvirkning på NF-kB (Nuclear Factor kappa- lettkjede-enhancer av aktiverte B-celler) signalvei. NF-kB er en proteinkompleks som virker som en transkripsjonsfaktor. NF-kB signalveien aktivering skjer i ovarialcancer svulster i epitel opprinnelse [24]. Initiering av denne prosessen kan være ikke bare på grunn av en mutasjon, men også av tilstedeværelse av inflammatoriske prosess induktorer i svulsten mikromiljøet. Som et resultat av NF-kB-aktivering reaksjonsvei, målgener ansvarlig for en forbedret spredning, infiltrering, metastasering, og angiogenese blir aktivert [25]. De ovennevnte fremgangsmåter å bestemme en aggressiv fenotype av tumoren [26], [27].
Komponentene i TGF-β superfamilien ofte utøver en synergistisk virkning med FSH, derfor er det viktig å ta hensyn til det faktum at en antall signaloverføringsreaksjonsveier kan aktiveres samtidig. Det er blitt funnet at aktivin, via Smad2 /3-reseptorer, aktiverer PI3 Akt svei som finnes i epitel-ovariekarsinomer, og påvirker overekspresjon av gener antiapoptotic [28], [29]. Kompliserte samspill mellom inhibin, activin, østrogener og NF-kB signalveien har vist [30]. Det er allment kjent at TGF-B familien faktorer og østrogener spille en avgjørende rolle i eggstokkene funksjoner, fremdeles men NF-kB rolle obskure [31], [32], [33]. På den annen side, er det sannsynlig at inhibin, activin, østrogener og NF-kB spille noen rolle i patogenesen av ovarialcancer. Mekanismene bak denne prosessen dekke verdifall på spredning og apoptose. Hver av signaloverføringsreaksjonsveier som er beskrevet ovenfor inneholder gjensidige forhold. Derfor deres kryss interaksjoner er mulig.
ovarialcancer er fortsatt en av de mest aggressive sykdommen, spesielt hos kvinner med høy sosioøkonomisk status som bor i industrialiserte land. I løpet av de siste årene, sammen med en intensiv utvikling av molekylær biologi, tallrike studier av mekanismen av eggstokkkreftutvikling har blitt publisert [34], [35]. På tross av det, er sykdommen ofte diagnostisert etter kreftceller har spredt i bukhulen, på slutten stadier av klinisk utvikling, og andelen vellykket behandlede pasienter har holdt seg nesten på et uendret nivå i flere tiår. Epitelial eggstokkreft er en aggressiv sykdom som det finnes få effektive biomarkører og terapier [36].
Viktigheten av inhibin A og inhibin B i epitelial eggstokkreft er relevant. Endring av inhibin /aktivin vei kan bidra til utvikling av ovarialcancer på grunn av endring av krysstale mellom granulosa og epitelceller. I sin siste studiene Tournier på al. identifisert en enkelt de novo-mutasjon (c.1157A G /p.Asn386Ser) inne i INHBA genet som koder for βA-subenheten av inhibiner /aktiviner, som spiller en nøkkelrolle i utviklingen ovarial [36]. Videre i en kohort av 62 tilfeller, de oppdaget en ekstra urapportert germline mutasjon av INHBA genet (c.839G A /p.Gly280Glu). Forfattere gi argumenter som tilsier at germline inhibin mutasjoner bidra til genetisk determinisme av epiteliale ovarietumorer ved å endre inhibin /activin produksjon. Resultater oppnådd av forfattere sterkt antydet at inhibin mutasjoner bidratt til genetisk determinisme av epiteliale ovarietumorer [37]. Virkningen av INHBA mutasjon på inhibin /activin produksjon og rollen til inhibin veien i eggstokkene og eggstokkreft kreftutvikling er av stor interest.In konklusjon, basert på våre studier har vi observert kortere 5-års overlevelse i gruppen av pasienter med inhibin B nivåer over øvre normalgrense. Kanskje, kanskje inhibin B evaluering i klinisk praksis bidra til å finne en gruppe av ovarialcancer pasienter i hvem prognoser er ille nok til å bruke mer aggressive behandlingsmetoder. Denne antakelsen krever videre studier, inkludert de på mulighetene for å blokkere inhibin B aktiveringsveier i ovarialcancer terapi. Man bør også ta hensyn til det faktum at i den studerte gruppen av pasienter bare nivået av klinisk utvikling, ifølge Figo var en uavhengig prediktor for fem-års overlevelsesrater basert på en multivariabel analyse, som fremhever en vesentlig rolle for riktig utført kirurgisk stadieinndeling.
Forhåpentligvis studier utført av oss vil føre til utvikling av ytterligere diagnostiske analyser som åpner for en mer nøyaktig anslag av kreft behandlingsresultatene.
Konklusjoner
1. Høyere inhibin A-serumnivåer ble funnet hos pasienter med svært differensiert eggstokk-karsinom i forhold til gruppen av pasienter med dårlig differensiert kreft, som kan bekrefte innvirkningen av inhibin A på celleproliferasjonsprosesser.
2. En vesentlig betydning av inhibin B ble demonstrert i prediksjon av døden i løpet av mindre enn en fem års periode. Sannsynligheten for overlevelse hos pasienter med høy inhibin B nivåer var lavere med statistisk signifikans. Dette kan indikere behov for videre studier om hvordan å blokkere inhibin B aktivering veien i ovarialcancer terapi.
