Abstract
Bakgrunn
I denne studien har vi undersøkt den prognostiske nytten av fosforylert Akt immunoreaktivitets (Pakt-IR) i prostatakreft ved hjelp av et godt karakterisert vev microarray fra menn som hadde gjennomgått transurethral reseksjon som følge av lavere urinveissymptomer.
metodikk /hovedfunnene
Pakt-IR i prostata epitelceller og kreftceller ble vurdert ved hjelp av et monoklonalt anti-Pakt (Ser
473 ) antistoff. Immunoreactive intensitet ble bestemt for 282 (tumor) og 240 (ikke-mlignant vev) tilfeller. Tumor Pakt-IR score korrelerte med Gleason score, tumor Ki67-IR (en markør for celledeling) og tumor fosforylert epidermal vekstfaktor reseptor (pEGFR) -IR. For tilfeller fulgt med forventning, ble en stor tumor Pakt-IR assosiert med en dårlig sykdomsspesifikk overlevelse, og den prognostiske informasjon fra denne biomarkøren var tilsetningsstoff til det som tilbys av enten (men ikke begge) svulst pEFGR-IR eller Ki67-IR . Ved delingen av tilfellene med hensyn til sine Gleason score, ble den prognostiske verdien av Pakt-IR sett for pasienter med Gleason score 8-10, men ikke for pasienter med Gleason scorer 6-7.
Konklusjoner /Betydning
Tumor Pakt-IR er assosiert med både sykdommens alvorlighetsgrad og sykdomsspesifikk overlevelse. Men den klinisk bruk som en biomarkør begrenset, siden det ikke gir prognostisk informasjon hos pasienter med Gleason score 6-7
Citation. Hammarsten P, Cipriano M, Josefsson A, Stattin P, Egevad L, Granfors T, et al. (2012) Phospho-Akt immunreaktivitet i Prostate Cancer: Forholdet til sykdommens alvorlighetsgrad og utfall, Ki67 og Fosforylert EGFR Expression. PLoS ONE 7 (10): e47994. doi: 10,1371 /journal.pone.0047994
Redaktør: Kaustubh Datta, University of Nebraska Medical Center, USA
mottatt: 9 juli 2012; Godkjent: 19 september 2012; Publisert: 25 oktober 2012
Copyright: © 2012 Hammarsten et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Forfatterne takker Vetenskapsrådet (Grant ingen 12158, medisin, CJ Fowler.); den svenske Cancer Society (. Grant ingen CAN2010 /437, C.J. Fowler); Løve Cancer Research Foundation, Umeå universitet (P. Hammarsten C.J. Fowler); Kreft Research Foundation i Nord-Sverige (P. Hammarsten), og forskningsmidlene av Det medisinske fakultet, Universitetet i Umeå (C.J. Fowler) for økonomisk støtte. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Ifølge siste statistikk, den globale forekomsten av prostatakreft (PCA) i 2008 var ca 900 000 tilfeller [1]. Behandlingen av Pca varierer i henhold til tumorstadium og histologisk grad. Alternativer spenner fra vaktsom venter hos eldre pasienter med lavgradig sykdommen til onkologisk behandling av generalisert kreft. Radikal prostatektomi og strålebehandling er forbundet med betydelig sykelighet [2] og en stor andel av pasientene ville ha dødd av andre årsaker enn prostatakreft selv uten den kurative [3] – [5]. Derfor er robuste biomarkører sterkt behov for å hjelpe behandling beslutninger.
serin-treonin kinase Akt er en viktig regulator av celledeling og apoptose. Nedstrøms effekter av Akt-aktivering omfatter fosforylering og derved inaktivering av proteinet BAD, et pro-apoptotiske protein [6], og en endring i den transkripsjonelle aktivitet av androgen-reseptorene [7]. Overekspresjon av en consitutively aktiv form av Akt resulterer i en økt vekst av prostata LNCaP kreftceller i en xenograft modell [8]. Hos mennesker immunhistokjemiske nivåer av fosforylert Akt (Pakt) er høyere i prostata svulstvev og skjelettmetastaser enn hos ikke-maligne prostatavevet [9], [10] og er høyere i Gleason score 8-10 svulster enn lavere Gleason score [ ,,,0],11]. Tre uavhengige studier har rapportert at høy tumor Pakt immunoreactivitiy er assosiert med dårlig klinisk resultat (biokjemisk tilbakefall vurderes med serum prostata-spesifikt antigen (PSA) [9], [12], og overlevelse [13]). I motsetning til en fjerde studie fant lite prognostisk verdi i Pakt IR [14]. Studiene måle overlevelse, imidlertid anvendes i stedet for små kohort størrelser (53 og 68 for [14] og [13], henholdsvis). Det er derfor viktig å vurdere hvorvidt eller ikke pakt immunreaktivitet har prognostisk signifikans når sykdomsspesifikk overlevelse hos et stort kohort av velkarakteriserte tilfeller. I tillegg er det viktig å vurdere om pakt immunreaktivitet i godartet vev tilstøtende til tumorer har prognostisk nytte, eller om den er begrenset til tumor ekspresjon alene.
epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR) er et celleoverflate-reseptor tyrosin kinase som reagerer på en rekke vekstfaktorer så som epidermal vekstfaktor og amfiregulin. Fosforylering av EGFRs fører til aktivering av en rekke forskjellige intracellulære signalveier, i sin tur resulterer i cellevekst og overlevelse [15]. Inhibering av EGFR har vist seg å forbedre kastrering-indusert prostata involusjon [16]. I Pca, er svulsten pEGFR immunoreaktivitets forbundet med biokjemiske gjentakelse priser [17] og med sykdomsspesifikk overlevelse [18]. En av de signalveier benyttes av EGFR er fosfoinositid 3-kinase /Akt sti [19] som i PCA-cellelinjer bidrar til cellemigrering mediert av EGF og til transformasjon av disse cellene for å gi dem egenskaper som minner av epitel-mesenkymale overgang [ ,,,0],20]. I PCA tumorvev, i pakt ofte ko-uttrykkes med EGFR [10], men det er ikke kjent hvorvidt eller ikke tilfelle med en høy ekspresjon av pEGFR og pakt kan vise forskjellige kliniske resultater til de med, for eksempel, en høy ekspresjon av pEGFR men en lav uttrykk for Pakt (eller vice versa).
i denne studien undersøkte vi Pakt immunoreaktivitets i en godt karakterisert Pca vevet rekke [3], og bestemmes a) forholdet mellom Pakt immunoreaktivitets med sykdommens alvorlighetsgrad og utfall (sykdomsspesifikk overlevelse) og b) påvirkning av pEGFR immunoreaktivitets på dette forholdet.
Metoder
Pasienter
formalinfiksert, parafininnebygd utvalget som ble brukt i denne studien ble samlet mellom 1975 og 1991 på Central Hospital, Västerås, Sverige, fra totalt 412 pasienter diagnostisert med prostatakreft ved transurethral reseksjon for lavere urinveis symtoms [3].
materialet ble samlet inn i henhold til svensk lov i en tid da informert samtykke ikke var nødvendig. Den forskningsetiske komité ved Umeå universitet sykehus (Regional Etisk Review Board i Umeå, Sverige) som er godkjent av studien og fravikes behovet for informert samtykke. I databasen som brukes for analysene ble vevsprøver gitt et saksnummer og år, og pasienten navn ble ikke angitt i databasen.
Tilstedeværelsen av metastaser ble bestemt av bein skanner kort tid etter transuretral reseksjon , og pasientene ble fulgt til døden eller til 2003. den Gleason score, var prosentandelen av prøven som inneholdt svulsten og sykdommen stadium vurderes i hver prøve. Dødsårsak ble bestemt ved evaluering av medisinske poster. Microarray bruker kjerner med en diameter på 0,6 mm ble bygget ved hjelp av en Beecher Instrument (Sun Prairie, WI, USA). Hver vev microarray lysbilde (56 totalt, vanligvis med kjerner fra 8 tilfeller per lysbilde) inneholdt opp til åtte (vanligvis fem) prøver av svulstvev (som inkluderte både primære og sekundære Gleason grad områder) og opp til fire prøver av ikke-ondartet vev fra hver pasient [3].
Immunohistochemistry
Snittene ble deparaffinized, rehydrert og deretter plassert i hydrogen peroxide og metanol i 20 min. Seksjonene blir deretter anbragt i citrat-buffer pH 6,0. Etter koking i 60 minutter i en trykkoker, ble prøvene plassert i TBS-buffer og etterfulgt av protein blokk i 15 min (DAKO, Stockholm, Sverige), hvoretter de ble utsatt for den primære (kanin-anti-fosfo-Akt (Ser
473) monoklonalt antistoff (736E11, Cell Signaling, Danvers, MA, fortynning 1/100) og sekundærsystem (CSA-kit som inkluderer DAB,. K1500, DAKO) Ki67 ble analysert enten som antall positive fargede celler krysset 11 horisontale linjer tvers over kjernen, eller som den prosentandelen av celler som var positive for denne markør (rapportert i [21]). i det foreliggende papir, vi har presentert data ved hjelp av nummeret snarere enn prosentandelen av positive fargede celler. med mindre annet angitt, svært like resultater ble sett med begge metoder for å score. pEGFR (utvalg av score 0-5), og PDFRß (utvalg av score 0-3) immunreaktive (IR) score var tilgjengelige i databasen, og har blitt rapportert andre steder [ ,,,0],18], [22]
Analyse av data
tumor og ikke-maligne kjerner ble scoret for Pakt i prostata epitelceller og kreftceller fra digitalt skannede bilder av to uavhengige evaluatorer (MC CF) som ikke har tilgang til de kliniske data på tidspunktet for evalueringen. De skannede score ble analysert på basis av intensiteten av (0 = ingen flekker, 4 = maksimal farging) og fordeling (0, 25, 50, 75 eller 100% for hver intensitet). Den sammensatte poengsum for hver kjerne ble så bestemt. Således kan for eksempel en kjerne med 25% intensitet 3 og 75% intensitet 2 ville bli gitt en score på 0,25 x 3 + 0,75 x 2 = 2,25. Eksempler på fargeintensitet 1-4 er vist i fig. 1. Ikke alle kjerner er like godt definert som de som er vist i figur 1, og i noen tilfeller er det en dom anrop om hvorvidt eller ikke en kjerne skal preges (slik som for eksempel et tilfelle med hovedsakelig stroma og bare ett eller to små områder av epitelceller). Følgelig vi bare brukt kjerner som hadde blitt scoret av begge evaluatorer. For de 1648 kjerner scoret uavhengig av både evaluatorer, en intra-klasse korrelasjonsanalyse ved hjelp av en blandet modell og testing for konsistens ga en Chronbach alfa på 0,92. Faktisk 1219 av de 1648 kjerner (74%) ble scoret av de to etterforskerne innen 0,5 poeng fra hverandre. Gitt at kjerner med flekker sted mellom enhetene som brukes er ikke uvanlig, kan godtas en forskjell i score på opp til ett. Totalt 68 (4%) av kjernene hadde forskjeller i score 1, og disse ble i følge rescores, igjen uavhengig og uten tilgang til tidligere score, gitt at så store forskjeller kan skyldes typografiske feil eller mønstre av immunoreaktivitets som var vanskelig å score. Etter den rescoring, ble 7 kjerner kassert på grunn av dårlig kvalitet, 55 kjerner hadde nå Stillingen innenfor en enhet av hverandre, og bare seks kjerner med resultater forskjeller 1 forble. Disse seks kjerner ble ekskludert fra analysen. Etter eksklusjon av data fra ett lysbilde (24 tilfeller) hvor det var ingen kjerner med score 1, noe som tyder på en teknisk svikt, ble median skår for hvert tilfelle avgjøres, og medianer fra de to etterforskerne ble gjennomsnitt og lagt inn i databasen. Påfølgende etterforskningen av kasserte tilfeller i databasen viste at 20 av de 24 tilfellene hadde Gleason score 4-5, og fire hadde Gleason score 8-10. Overvekt av Gleason scorer 4-5 betyr at deres inkludering kan skjevhet prognostisk vurdering av Pakt hvis disse immunoreaktivitetene er kunstig. Dermed ved å ekskludere dem, vi er feilende på siden av forsiktighet.
Disse fotografiene (20 ×) ble brukt som standarder av både evaluatorer hele scoring fase av prosjektet. De to øverste ledere er fra svulster, mens de to nederste kjerner er fra ikke-ondartet vev.
statistikker
Med unntak av intra korrelasjonskoeffisient og Cox proporsjonal farer regresjon analyser, som ble utført ved bruk av SPSS programvare (SPSS Inc., Chicago, IL, USA), alle statistiske beregninger ble foretatt ved hjelp av statistikkpakke innebygd i GraphPad Prism 5 dataprogram for Macintosh (GraphPad Software Inc., San Diego, CA , USA). Delvis korrelasjonskoeffisienter ble beregnet på et Excel-regneark fra Spearman korrelasjonskoeffisienter for matchet prøver (dvs. scoret for alle tre parametre under etterforskning). For å overleve analyser, ble en hendelse definert som dødsfall på grunn av prostatakreft og lagt inn i databasen som «event = 1», og dermed tillater oss å bestemme sykdomsspesifikk overlevelse. Død av andre årsaker ble sensurert, som var tilfeller der pasienten var i live på datoen for siste oppfølging. Tre tilfeller der sykdommen utfallet ikke var kjent ble ekskludert fra overlevelsesanalyser.
Resultater
Fordeling av Pakt immunreaktivitet (Pakt-IR) i ikke-ondartede og Tumor Tissue
kjerner fra 282 (tumorprøver) og 240 (prøver ikke-maligne vev) tilfeller ble scoret for Pakt-IR. I samsvar med tidligere undersøkelser [9], [10], [12], pakt-IR var forbundet med epitelcellene i stedet for stroma (fig. 1). Det var et stort utvalg av fargeintensitetene (se for eksempel fig. 1 for eksempler og fig. S1 for en fordelingskurve). Generelt er den pakt-IR var større i tumorprøver enn i de ikke-maligne prøver: median skår var 2,75 og 2,0625 for tumor- og ikke-maligne prøver, henholdsvis. For de 189 tilfellene vist som en del av fig. 1B der både svulsten og ikke-maligne kjerner ble scoret, de Pakt-IR skårer signifikant korrelert (Spearmans rho = 0,31, P 0,0001), og resultatet for tumor kjernene var betydelig høyere enn for de ikke-maligne kjerner ( P 0,0001, Wilcoxon matchet-parene signert rank test)
Korrelasjonen av Pakt-IR med sykdommens alvorlighetsgrad ved diagnose
Korrelasjonskoeffisienter for svulsten og ikke-maligne Pakt-IR skårer vs.. kliniske og biokjemiske parametere skåret for de samme prøvene er oppsummert i tabell. 1. Den tumor pakt-IR korrelerte signifikant med Gleason score, prosentandelen av kjernen som ble tumorassosiert (% ca), tumorstadiet, og svulsten Ki67-IR (et mål på celleproliferasjon). Således er svulsten pakt-IR sterkt assosiert med sykdommens alvorlighetsgrad ved diagnose. Den ikke-ondartet Pakt-IR ble svakere knyttet til disse parametrene.
Et viktig spørsmål som skal undersøkes er om sammenhenger mellom ikke-ondartet Pakt-IR og de kliniske markører for sykdomsgrad er sanne korrelasjoner, eller bare reflektere sammenhengen mellom svulst og ikke-maligne Pakt-IR. Dette kan vurderes ved hjelp av formelen: der Γ
ab er Spearman korrelasjonskoeffisient for samspillet mellom parametrene a og b, og Γ
ab.c refererer til den første ordren delvist koeffisient mellom parametrene a og b når parameter c er tatt hensyn til. Ligningen representerer den generelle formelen for delvis sammenheng utledet i [23]. Ved hjelp av denne formelen for prøvene scoret for både tumor og ikke-ondartet pakt, blir det klart at korrelasjonen mellom den ikke-ondartet (N) pakt-IR og de kliniske variabler er ikke av betydning når påvirkningen av tumoren (T) pakt -IR er tatt hensyn til (tabell S1). I motsetning til de assosiasjoner mellom Pakt-IR (T) og Gleason score eller tumor spredning Ki67-IR er fortsatt betydelig når enten påvirkning av Pakt-IR (N) eller andre kliniske variabler er tatt hensyn til. Men sammenhengen mellom Pakt-IR (T) og enten% ca eller svulst scenen gikk tapt da de Gleason skår ble tatt hensyn til (tabell S1), selv om sammenhengen mellom Pakt-IR (T) og% ca forble signifikant da Ki67 ble scoret som% av cellene var positive for denne markør i stedet for antallet av positive fargede celler som krysser 11 horisontale linjer på tvers av kjernen (data ikke vist). Dermed kan det konkluderes med at Pakt-IR (T) er først og fremst knyttet til Gleason score og frekvensen av tumor spredning vurdert ved Ki67-IR, mens Pakt-IR (N) ikke er assosiert med sykdommens alvorlighetsgrad.
sammenheng mellom Pakt-IR og pEGFR-IR
Pakt-IR (T) var signifikant korrelert til pEGFR-IR skår for begge kreft og ikke-maligne prøvene (tabell 2). I kontrast, var det ingen signifikante sammenhenger mellom Pakt-IR score og enten stromale eller epitelceller PDFRß-IR score (tabell 2). Korrelasjonen mellom pakt-IR (T) og pEGFR-IR (T) forble signifikant når kontrollert for pakt-IR (N), mens korrelasjonen mellom pakt-IR (T) og enten pEGFR-IR i luminal eller basal ikke- ondartet vev gikk tapt da kontrollert denne variabelen. Derimot er korrelasjonen mellom pEGFR-IR (T) og pakt-IR (N) gikk tapt da kontrollert for pakt-IR (T) (tabell S2). Med andre ord, er foreningen av pEGFR-IR og Pakt-IR primært innenfor samme område av vev.
Prøvene ble gruppert i fire grupper på grunnlag av deres tumor Pakt-IR og pEGFR-IR score og deres Gleason score, forekomst av metastaser ved diagnose og svulst Ki67-IR skår ble sammenlignet (tabell 3). Fordelingen av Gleason score var signifikant forskjellig for gruppene. På ytterpunktene, bare 10% av tilfellene med «lav» pEGFR-IR ( 3,2) og Pakt-IR ( 2,75) skårer ble diagnostisert med Gleason score i området 8-10, mens det tilsvarende tallet for saker med «høy» pEGFR-IR (≥3.2) og Pakt-IR (≥2.75) score var 57%. For de Ki67-IR score, var det ingen effekt av pEGFR-IR på et gitt Pakt-IR, mens resultatet var høyere for Pakt-IR ≥2.75 sammenlignet med 2,75 for enten pEGFR-IR-gruppen. Det motsatte ble sett på forekomsten av metastaser ved diagnosetidspunktet.
Association of Pakt med sykdomsspesifikke Survival
For de 282 tilfellene hvor svulsten Pakt-immunoreaktivitets (Pakt-IR) kunne scores, 207 ble fulgt av forventning, som var standard tilnærming på gang i Sverige. De andre pasientene fikk strålebehandling, hormonbehandling eller radikal prostatektomi. Tre tilfeller der utfallet ikke var kjent, ble ekskludert, noe som gir totalt 204 tilfeller tilgjengelig for overlevelsesanalyse. Det tilsvarende antall saker for ikke-maligne Pakt-IR var 194. Disse prøvene tillate beslutning om hvorvidt Pakt-IR har prognostisk verdi. For de 204 kreft tilfeller, 101, 20 og 83 tilfeller var under, lik og over medianverdien (2,75), henholdsvis.
I søke potensielle prognostiske markører, er viktig valget av cut-off . For å undersøke dette, ble Cox proporsjonal farer regresjonsanalyser gjennomført for både svulsten og ikke-maligne Pakt-IR og over et bredt spekter av cut-off-verdier. Dataene er vist i fig. 2. For tumor pakt-IR, er det en forholdsvis bredt bånd av cut-off-verdier som gir en betydelig økning i relativ risiko for verdier over cut-off i forhold til de under cut-off (fig. 2A). Med andre ord, dele data, for eksempel, ≤2 og 2 vil gi en betydelig prognostisk verdi av Pakt-IR, men så vil dele data, for eksempel ≤2.81 og 2,81, eller som en median dele. Vi har valgt ≤2.6875 og 2,6875 [dvs. 2,75 og ≥2.75, median split (se ovenfor)] som cut-off, da dette gir størst betydning (vist som røde symbolet i figur 2A.). Ved hjelp av denne cut-off, pasienter med en Pakt-IR ≥2.75 ( «høy») hadde en betydelig dårligere prognose enn de med en Pakt-IR 2,75 ( «lav») (Fig. 2B). Den 15 år frekvensen av sykdomsspesifikk overlevelse var 42 ± 7% og 72 ± 7% for høye og lave Pakt-IR score, henholdsvis.
Paneler A og B er for svulst Pakt-IR (n = 204 ), C og D for ikke-maligne pakt-IR (n = 194). I Paneler A og C, Exp (B) (± 95% konfidensintervall), hentet fra Cox proporsjonale-farer regresjonsanalyser er vist for ulike cut-offs. Exp (B) er definert som økning i risiko for død på grunn av prostatakreft for en score over cut-off-verdi i forhold til en poengsum under cut-off-verdi. Når begge konfidensintervall er over enhet (fylte symboler i figuren), gir cut-off-verdien betydelig prognostisk informasjon. Verdier med et signifikansnivå 0,05 p 0,1 er vist som åpne trekanter. Cut-off verdi med den høyeste betydning vises som en rød fylt symbol. Den blå stiplede linjen viser% av tilfellene over cut-off verdi. Således, for eksempel, for symbolet i panel A i pakt-IR cut-off-verdi 2,5 (dvs. prøven fordelt som ≤2.5 og 2,5), 82 tilfeller (40%) ble ≤ cut-off-verdi og 122 tilfeller ( 60%) over cut-off-verdi. I Paneler B og D, er Kaplan-Meier plott vises for cut-offs som viser de høyeste betydninger.
† Pca refererer til antall pasienter som døde som et resultat av deres prostatakreft i løpet av oppfølgingsperioden. K
2 verdier er for log-rank (Mantel-Cox) tester, med P-verdiene vist. *** P 0,001, * P 0,05
I motsetning til situasjonen for tumor pakt-IR, ikke-maligne pakt-IR-score hadde et smalt bånd ved signifikant prognostisk verdi ble observert (fig. 2C), og Kaplan-Meier-plottet ved hjelp av den optimale cut-off viste en lavere grad av betydning enn ble sett for tumoren pakt-IR (fig. 2D). Videre, en bivariate COX regresjonsanalyse indikerte at signifikant effekt av pakt-IR (N) gikk tapt når analysert sammen med pakt-IR (T) (tabell 4).
Tumor pakt-IR og enten tumor pEGFR-IR eller Ki-67-IR Gi Additiv Prognostic Informasjon
Cox regresjon data ved hjelp av et bredt spekter av cut-offs ble også konstruert for svulsten Ki67-IR og pEGFR-IR data er tilgjengelige i databasen [18], [21]. For pEGFR-IR, cut-off som gir den høyeste betydning samsvarer 3,2 og ≥3.2 (fig 3A.). I tilfellet med Ki67-IR, er det så ut til å være to toppene med tilnærmet samme betydning nivåer, og i følge de høyeste punkter av betydning ble tatt for begge topper, for å gi tre omganger: 1.5, 1.5 til 2.9 og ≥3 (score representerer antall tumor celler som var positive for dette biomarkør i krysset 11 horisontale linjer på tvers av kjernen, fig. 3C). Ved hjelp av disse cut-off-serier, analyser bivariate COX regresjon viste at Pakt-IR gitt additiv prognostisk informasjon til det som er fastsatt enten ved pEGFR-IR eller ved Ki67-IR (tabell 4). I et trivariat analyse med alle tre parametre, ble innflytelsen av pakt-IR ikke helt nå signifikans (p = 0,054, tabell 4). Et lignende resultat ble observert når Ki67-IR ble uttrykt som% av cellene var positive for denne markør, selv om det var færre pasienter i det høyeste porsjon (data ikke vist).
Panel A viser Exp (B) oppnådd fra Cox proporsjonale-farer regresjonsanalyser er vist for ulike cut-offs av pEGFR-IR (n = 253). Cut-off verdi med den høyeste betydning vises som en rød fylt symbol. Verdier med et signifikansnivå 0,05 p 0,1 er vist som åpne trekanter. Panel B viser en Kaplan-Meier plott for de 185 tilfellene scoret for både tumor Pakt-IR og pEGFR-IR, delt opp på grunnlag av deres optimale cut-offs. I Panel C, Exp (B) verdiene er vist for ulike cut-offs av Ki67-IR (n = 286). De røde og blå symboler angir de høyeste betydning nivåer for nedre område og for høyere området, henholdsvis. Panel D viser en Kaplan-Meier plott for de 202 tilfellene scoret for både tumor Pakt-IR og Ki67-IR, delt opp på grunnlag av deres optimale cut-offs.
† Pca refererer til antall pasienter som døde som et resultat av deres prostatakreft i løpet av oppfølgingsperioden. K
2 verdier er for log-rank (Mantel-Cox) tester, med P-verdiene vist. *** P 0,001
Kaplan-Meier plott av påvirkning av tumor pakt-IR på overlevelse for hele datasettet og oppdelt på grunnlag av enten pEGFR-IR eller Ki67-IR cut-offs er vist i fig. 3B og D. Det generelle mønsteret sett i begge tilfeller var tilfeller med lav score på begge merkene hadde en god prognose, de med høy score på begge merkene hadde en dårlig prognose, med andre kombinasjoner clustering i midten med ganske like prognoser. Parvise sammenligninger viste at ved en lav ekspresjon hastighet på pakt-IR, påvirkning av pEGFR-IR nå ikke helt betydning (og vice versa), mens det ved en høy ekspresjon hastighet på pakt-IR, er av stor betydning effekten av pEGFR ( og vice versa) (tabell 5).
Prognostic Nytten av Tumor Pakt-IR på forskjellige Gleason Poeng
kurvene vist i fig. 3 tok ikke hensyn til Gleason score til prøvene. Det var ingen tilfeller av Gleason score 4-5 som ble skåret for Pakt-IR som døde som et resultat av deres kreft, og så bare sakene med Gleason score 6-10 ble undersøkt. Til sammen 153 tilfeller etterfulgt av aktiv levealder og scoret for svulst Pakt-IR hadde Gleason score i denne serien. De Cox regresjon ved flere cut-offs igjen viste en optimal cut-off på tumor Pakt-IR score til 2,75 og ≥2.75, selv om omfanget av betydelige Exp (B) verdiene var veldig smal, med bare to cut-off punkter nådde signifikans (data ikke vist). For Gleason score 6-7 (n = 102), ingen av cut-offs nådd betydning (figur 4A.) Og Kaplan-Meier plott ved hjelp av cut-off av 2,75 og ≥2.75 (illustrasjon) viste ingen forskjellen mellom overlevelseskurver for de to populasjoner (fig. 4B). På Gleason score 8-10 (n = 51) bare cut-off på tumor Pakt-IR score til 2,75 og ≥2.75 var signifikant (figur 4C.). Fra Kaplan-Meier plott bruke denne cut-off (fig 4D.), 5 år sykdomsspesifikke overlevelsesraten av 79 ± 14% og 37 ± 9% for Pakt-IR score til 2,75 og ≥2.75 henholdsvis var funnet. For sammenligningsformål ble exp (B) verdier også bestemt for de Gleason gruppene 6-7 og 8-10 for både tumor pEGFR-IR og Ki67-IR. pEGFR-IR beholdt prognostisk verdi for Gleason gruppe 6-7, men ikke 8-10, mens Ki67-IR beholdt prognostisk verdi på begge Gleason score grupper (figur S2). En bivariat Cox proporsjonal farer regresjonsanalyse for Gleason score 8-10 tilfeller viste at svulsten Pakt-IR poengsum ikke gi additiv prognostisk informasjon til det som tilbys av svulsten Ki67-IR score (tabell S3). Når Ki67-IR skår for Gleason score 8-10 tilfeller ble analysert i% av cellene positive for denne markøren i stedet for antall positive fargede celler krysset 11 horisontale linjer på tvers av kjernen, bare en eneste cut-off i Cox proportional- farer regresjonsanalyse ga en betydelig Exp (B) verdi, og antall saker over denne cut-off var så få (n = 5) som bivariate Cox proporsjonal farer regresjonsanalyser med Pakt-IR ble ikke ansett for å være meningsfylt.
Panel A og B er for tilfeller med Gleason score 6-7 (n = 102); Paneler C og D er for tilfeller med Gleason score 8-10 (n = 51). De Exp (B) verdier hentet fra Cox proporsjonal farer regresjonsanalyser (Paneler A og C) og Kaplan-Meier plott (Paneler B og D) ble bestemt som beskrevet i forklaringen til fig. 2. K
2 verdier er for log-rank (Mantel-Cox) tester, med P-verdiene som vises:. * P 0,05,
NSP 0,8
Diskusjoner
i denne studien, Pakt-IR ble vurdert i en godt karakterisert Pca vevet microarray [3]. Det er tre hovedfunn, som er omtalt i sving under.
Tumor Pakt-IR er høyere enn ikke-ondartet Pakt-IR og er korrelert til sykdommens alvorlighetsgrad ved diagnose
Tidligere studier har rapportert at Pakt-IR score er høyere i svulstvev enn hos ikke-ondartet vev [9], [10], og denne studien har bekreftet dette funnet. I vår studie ble svulst Pakt-IR korrelert til både Gleason score og forekomst av metastaser ved diagnose, mens forholdet mellom ikke-ondartet Pakt-IR til sykdommens alvorlighetsgrad var en refleksjon av sin egen sammenheng med tumor Pakt-IR. Tumor Pakt-IR ble også sterkt korrelert til Ki-67 IR, en markør for celledeling. Ayala et al. [9] rapportert i en stor kohort at mens tumor Pakt-IR var større enn den ikke-maligne Pakt-IR, ble resultatet korrelert med tumorstadium, men ikke Gleason score. I våre hender, er en signifikant korrelasjon med tumorstadium også sett, men dette går tapt når korrelasjon med Gleason score er tatt hensyn til. I mindre kohorter, Le Page et al. [14] fant ikke noen sammenheng mellom Pakt-IR og enten Gleason scorer eller svulst scenen. I motsetning til dette, Malik et al. [11] rapporterte at rapportert at 23/25 tilfeller med Gleason score 8-10 viste en sterk fargeintensitet for Pakt, mens de tilsvarende tallene for Gleason score 5-6 og 7 var 4/25 og 5/14, henholdsvis. Denne gruppen rapporterte også en signifikant sammenheng mellom Pakt fargeintensitet og svulsten Ki67 merking index [24]. Dermed tas sammen, er det bevis for at svulsten Pakt-IR nivåer er assosiert med sykdommens alvorlighetsgrad ved diagnose, men at graden av tilknytning varierer mellom studier. Dette kan skyldes forskjeller i sammensetningen av gruppene. Den store kohort beskrevet i [9] ble hovedsakelig består av tilfeller med Gleason scorer 6-7 (488 (~86%) pasienter av totalt 570 scoret for Pakt-IR), mens i våre studier, disse Gleason score var mindre dominerende ( 57 [20%], 121 [43%] og 104 [37%] av tilfellene hadde Gleason score til 4-5, 6-7 og 8-10, henholdsvis).
Tumor Pakt-IR har Limited Prognostic Nytten som en markør for sykdomsspesifikk overlevelse i Pca
i sin store kohort, Ayala et al. [9] rapportert at de 41 tilfeller med en meget høy pakt-IR hadde en dårligere biokjemisk gjentakelse overlevelse (median 97 måneder) enn de resterende 529 tilfellene (median 133 måneder). Forfatterne rapporterte også at de 8 tilfeller med denne cut-off for ikke-ondartet Pakt-IR har også hatt en dårligere biokjemisk tilbakefall overlevelse enn de resterende 556 sakene. Den prognostiske verdien av svulsten Pakt-IR ble beholdt da bare saker med Gleason score 6 eller 7 ble undersøkt [9]. I mindre kullene, har både betydelige og ikke-signifikante effekter av pakt-IR-upon biokjemiske gjentakelse overlevelse og /eller overlevelse blitt rapportert [12] – [14]. Den microarray i [9], [12], [14] besto av prøver oppnådd ved radikal prostatektomi, og mens pasienten ikke hadde blitt behandlet før operasjonen, er det viktig å merke seg at den prognostiske verdi av pakt-IR i disse studier er vurdert i denne klassen av pasienter. I studiet av [13], ble prøvene fås enten TURP eller TRUS-veiledet biopsi, og pasientene ble behandlet i løpet av oppfølgingsperioden. [9].
