Abstract
Denne studien tar sikte på å bestemme forekomsten og kliniske implikasjoner av
HER2
status i primær kolorektal kreft (CRC).
HER2
status ble undersøkt i to retrospektive kohorter av 365 påfølgende CRC pasienter (cohort 1) og 174 avanserte CRC pasienter med synkron eller metachronous fjernmetastaser (kohort 2).
HER2
status ble bestemt ved å utføre dual-farge sølv in-situ hybridisering (SISH), mRNA in-situ hybridisering (ISH), og immunhistokjemi (IHC). Forekomsten av HER2 protein overekspresjon (IHC 2 + /3 +) var ca 6% (22 av 365 i kohort 1; 10 av 174 i kohort 2).
HER2
genamplifisering ble observert hos 5,8% av pasientene fra kohort 1 og 6,3% av pasientene fra kohort 2.
HER2
genamplifisering ble oftere observert i CRC ligger i endetarmen enn i høyre og venstre colon (
P
= 0,013 i kohort 1;
P
= 0,009 i kohort 2).
HER2
status, bestemmes av IHC, ISH, og dual-color SISH, var ikke signifikant assosiert med aggressiv CRC atferd eller pasientenes prognose i begge kohortene. Av den kombinerte gruppen med totalt 539 tilfeller, samstemmighet var 95,5% mellom dual-color SISH og IHC deteksjonsmetoder. På unntatt equivocally immunostained tilfeller (IHC 2+), den samstemmighet var 97,7%.
HER2
mRNA overtranscription, oppdaget av ISH, signifikant korrelert med protein overekspresjon og genamplifisering (
P
0,001).
HER2
genamplifisering ble identifisert i et mindretall av CRC pasienter med høye konkordans priser mellom dual-color SISH og IHC deteksjonsmetoder. Selv
HER2
status ikke forutsi pasientens prognose, kan våre funn tjene som grunnlag for fremtidige studier på pasient utvalg for
HER2
målrettet terapi
Citation. Seo AN , Kwak Y, Kim DW, Kang SB, Choe G, Kim WH, et al. (2014)
HER2
Status i Colorectal Cancer: Dens klinisk betydning og forholdet mellom
HER2
Gene Amplification og Expression. PLoS ONE 9 (5): e98528. doi: 10,1371 /journal.pone.0098528
Redaktør: Chad Creighton, Baylor College of Medicine, USA
mottatt: 6 mars 2014; Godkjent: 02.05.2014; Publisert: May 30, 2014
Copyright: © 2014 Seo et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. Den forfatterne bekrefter at alle data som underbygger funnene er fullt tilgjengelig uten restriksjoner. Alle data er inkludert i manuskript og saksdokumenter filer
Finansiering:. Denne studien ble støttet av tilskudd nummer 02-2013-041 fra Seoul National University Bundang Hospital Research Fund. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. Forfatterne har erklært ingen interessekonflikter
Innledning
til tross for fremskritt i kirurgiske teknikker og adjuvant kjemoterapeutiske regimer, tykktarmskreft (CRC) er fortsatt en av de viktigste ledende årsakene til kreftrelaterte dødsfall verden over [1], [2]. Ytterligere forbedringer i forståelsen tumorbiologi og identifisere onkogene sjåfører har ført til utvikling av nye terapeutiske mål [2], [3]. Derfor identifikasjon av biologiske markører for målrettet terapi fortsetter å være en høy prioritet i human behandling [4] kreft. Anti-epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR) monoklonalt antistoff behandling, herunder at med cetuximab og panitumumab, har blitt rapportert å forbedre progresjonsfri overlevelse i avanserte CRC pasienter med villtype
KRAS product: [5] – [7 ]. Til tross for det unektelig terapeutisk fremgang, en betydelig andel av kreftpasienter som reagerer dårlig på terapi, og terapeutisk respons, kan ikke forutsies nøyaktig. Derfor er det av stor interesse å identifisere molekylære biomarkører for å forutsi utfallet, terapeutisk respons, og potensielle terapeutiske mål i CRC-pasienter.
human epidermal vekstfaktor-reseptor-2 (HER2) er et transmembran reseptor tyrosinkinase, hvilken er et medlem av EGFR familien [8], [9]. Aktivering av
HER2
spiller en nøkkelrolle i celleproliferasjon, celledifferensiering, hemming av apoptose, og tumorprogresjon [8] – [10]. Trastuzumab, et humanisert monoklonalt antistoff, rettet mot det ekstracellulære domenet til
HER2
reseptoren. Dens terapeutisk effekt har blitt vist i
HER2
-positive brystkreftpasienter [11], [12]. I tillegg er en banebrytende studie i 2010 rapporterte at kombinasjonen av trastuzumab med konvensjonell kjemoterapi betydelig forbedret pasientenes overlevelse hos pasienter med
HER2
-positivt avansert mage eller gastro-esophageal krysset kreft [13].
HER2
genamplifisering og /eller protein overekspresjon ble observert hos 15-20% av brystkrefttilfeller og ble korrelert med aggressive fenotype, metastaser, og negativ klinisk utfall [14], [15]. På den annen side,
HER2
genamplifisering og /eller protein overekspresjon ble detektert i -22% av magekreftpasienter, men prognostisk signifikans var kontroversiell [16]. Fordi trastuzumab har betydelig forbedret total overlevelse i bryst og mage kreft, er det av stor klinisk interesse om HER2 blokade kan være et nyttig klinisk strategi i andre menneskelige kreft [17]. Selv om noen få studier har rapportert forekomst og klinisk implikasjon av
HER2
status på CRC pasienter [18] -. [22], den kliniske betydning er ennå ikke fullstendig klarlagt
Vi har derfor gjennomførte denne studien å bestemme forekomsten og kliniske betydningen av
HER2
-positivt status på rad primære CRC pasienter. Fordi målrettet kjemoterapi ble brukt til avanserte CRC pasienter i daglig praksis og avanserte tilfeller ikke var tilstrekkelig inkludert i påfølgende kohort en, vi i tillegg registrert avanserte CRC pasienter med synkron eller metachronous fjernmetastaser (kohort 2). Vi evaluerte
HER2
genamplifisering, messenger RNA (mRNA) transkripsjon og protein uttrykk status i de primære svulster i to retrospektive kohorter, og også analysert konkordans priser av deteksjonsmetoder.
Materialer og metoder
Pasienter og prøver
det er totalt 539 CRC saker behandlet av radikal kirurgi uten preoperativ behandling ble inkludert i studien fra Institutt for patologi, Seoul National University Bundang Hospital. Cohort 1 besto av 365 sammenhengende CRC pasienter behandlet mellom januar 2005 og desember 2006. Cohort 2 består av 174 avanserte CRC pasienter med synkron eller metachronous fjernmetastaser, som hadde gjennomgått kirurgiske reseksjoner for primær CRC mellom mai 2003 og desember 2009, bortsett fra kohort 1. Alle pasientene fikk behandling i henhold til standard praksis retningslinjer etter operasjonen, med mindre medisinsk kontraindisert. Alle sakene ble anmeldt av 2 patologer (A.N.S og H.S.L) og ble iscenesatt i henhold til 7
th utgaven av det amerikanske Joint Committee er
Cancer Staging Manuell product: [23]. Clinicopathological egenskaper ble hentet fra pasientenes journaler og patologi rapporter. Oppfølging informasjon, inkludert pasientens utfall og tidsintervallet mellom datoen for kirurgisk reseksjon og død ble samlet. Sakene tapt for oppfølging og dødsfall fra andre enn CRC årsaker ble vurdert sensurerte data for overlevelse analyse.
Etisk uttalelse
Alle menneskelige prøver ble hentet fra filer av kirurgisk resected tilfeller undersøkes ved Institutt for patologi, Seoul National University Bundang Hospital for den patologiske diagnosen. Den retrospektiv studie ble utført ved hjelp av de lagrede prøver etter den patologiske diagnose, og alle prøvene ble anonymisert før studien. Studien ble godkjent av Institutional Review Board of Seoul National University Bundang Hospital (referanse: B-1210 /174-301). Deltakerne fikk ikke gi skriftlig informert samtykke i denne studien. The Institutional Review Board fravikes behovet for skriftlig informert samtykke under forutsetning av anonymiserings og ingen ekstra intervensjon til deltakerne.
Tissue matrise metode
For begge kohorter, kirurgisk resected primære CRC prøver ble formalin -Fast og parafin-embedded (FFPE). Disse primære tumorvev ble brukt til bygging av vev matriseblokker. I korte trekk fra de representative deler av de høstede blokkene i hvert tilfelle ble en enkelt kjerne med en diameter på 2 mm oppnås og nøyaktig innrettet i nye mottaker blokker med en trephine apparat, som tidligere beskrevet av forfatteren gruppe (Superbiochips Laboratories, Seoul, sør-Korea) [24]. En tilstrekkelig saken ble definert som en svulst opptar ≥20% av kjerneområdet
Immunohistochemistry (IHC)
HER2 IHC ble utført ved hjelp PATHWAY anti-HER2 /neu (4B5;. Kanin monoklonalt; pre-fortynning, Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, USA) antistoff og Ultra Universal DAB kit (Ventana Medical Systems) på en automatisk immunostainer (BenchMark XT, Ventana Medical Systems), i henhold til produsentens instruksjoner. IHC scoring ble uavhengig utført av to patologer (A.N.S og H.S.L) uten forkunnskaper om clinicopathological informasjon eller molekylære resultater oppnådd via andre metoder. Poeng ble utført i henhold til den DAKO HercepTest ™ føringer (DAKO) for magekreft som følger [25]: 0, ingen reaktivitet eller membranfarging i 10% av tumorceller; 1+, svak /knapt merkbar delvis membranfarging i ≥10% av tumorceller; 2 +, svak til moderat fullstendig eller basolateral membranfarging i ≥10% av tumorceller; 3+, moderat til sterk fullstendig membranfarging i ≥10% av tumorcellene. De to patologer helt enige om alle IHC 3+ tilfellene, mens endelig konsensus ble bestemt av diskusjonen via multi-head mikroskop i noen avvikende tilfeller med IHC 1+ eller 2+. IHC 2+ og 3+ ble ansett å indikere protein overekspresjon.
HER2
mRNA in situ hybridisering (ISH)
For å påvise
HER2
mRNA overtranscription , RNAscope 2-plex (Advanced Cell Diagnostics, Hayward, CA, USA) ble utført i henhold til produsentens standard anbefalinger. Tolkningen ble utført i henhold til instruksjonene i RNA omfanget FFPE analysesett som beskrevet tidligere [26]: ingen farging (score på 0); farging i 10% av tumorceller som var vanskelig å identifisere ved x40 objektivlinse (score 1); farging i ≥10% av tumorceller som var vanskelig å identifisere ved x20 objektivlinsen, men lett ved x40 objektivlinse (score på 2); farging i ≥10% av tumorceller som var vanskelig å identifisere ved x10 objektivlinsen, men lett ved x20 objektivlinse (score på 3); flekker på ≥10% av kreftceller som var lett å identifisere på x10 objektiv (score på fire). En score på 4 indikerer
HER2
overtranscription. ISH ble uavhengig tolket av to patologer (ANS og HSL) uten forkunnskaper om clinicopathological informasjon eller HER2 status innhentet via andre metoder.
Dual-farge sølv
in-situ
hybridisering (SISH)
Bright-feltet dual-color SISH analyse ble utført ved hjelp av automatisk SISH fargeinnretning (BenchMark XT, Ventana Medical Systems), i henhold til produsentens protokoller for INFORMERE
HER2
DNA og informere kromosom 17 ( CEP17) prober (Ventana Medical Systems).
HER2 Twitter /CEP17 SISH signaler ble talt i henhold til den fortolkende retningslinje for Ventana INFORMERE
HER2
DNA probe farging av mage kreftceller (Ventana Medical Systems). Tumorceller ble skannet for hot spots ved å bruke 20 x eller 40 × mål, og området med de høyeste signalene ble valgt. Signalene ble talt i 20 ikke-overlappende svulst cellekjerner fra hvert enkelt tilfelle ved bruk av 60 × eller 100 × mål av to patologer (A.N.S og H.S.L) som var blindet for HER2 status av andre deteksjonsmetoder og klinisk informasjon. Små eller store klaser ble ansett for å være 6-signaler og 12 signaler, henholdsvis.
HER2
genamplifisering ble definert som en
HER2 Twitter /CEP17 forhold på ≥2.0 i 20 kreft kjerner. Den tvetydige tilfeller (ratio: 1,8 til 2,2) ble gjengitt i minst 20 ikke-overlappende kjerner av ulike kreftceller på et andre målområde, og en ny
HER2 Twitter /CEP17 forholdet ble beregnet på nytt. Normale kolon epitelceller og andre tilstøtende godartede celler fungerte som de interne kontrollene.
mikro ustabilitet (MSI)
MSI resultater ble generert ved sammenligning av allele profiler av de 5 mikro markører (BAT 26, BAT-25, D5S346, D17S250, og S2S123) i svulsten og tilsvarende normale prøver. Polymerase-kjedereaksjonen produkter for FFPE-vev ble analysert ved hjelp av en DNA-sekvens auto (ABI 3731 genetisk analysator; Applied Biosystems, Foster City, CA). I henhold til den protokoll som er beskrevet tidligere [27]
Statistiske analyser
Sammenhengen mellom clinicopathological funksjoner og
HER2
status ble analysert ved hjelp av Chi-square eller Fishers eksakte test, og Wilcoxon /Mann-Whitney test, hvis det er hensiktsmessig. Den Spearman rank korrelasjon eller Kendall tau-b test ble brukt for å vurdere sammenhengen mellom deteksjonsmetoder. Sammenhengen mellom
HER2
status og total overlevelse ble bestemt ved hjelp av Kaplan-Meier-metoden, og betydningen av forskjellene mellom gruppene ble sammenlignet med log-rank test eller Breslow test, hvis overlevelseskurver ble krysset i løpet av oppfølgings -up perioder. Multivariate overlevelses analyser ble utført ved hjelp av Cox-modell, og hasardratio og dens 95% konfidensintervall ble beregnet for hver faktor. Alle testene ble tosidige, med
P
verdi av 0,05 ansett for å indikere statistisk signifikans. Alle de statistiske analysene ble utført ved hjelp av IBM SPSS statistikk 20 (Armonk, NY, USA) programvare.
Resultater
Pasient clinicopathologic egenskaper
Tabell 1 gir demografi og baseline clinicopathological kjennetegn ved pasientene inkludert i hver årsklasse. Cohort en inkludert 202 (55,3%) menn og 163 (44,7%) kvinner med median alder 65 år (range: 20-95 år). I tillegg er blant 353 pasienter med MSI analyse tilgjengelige, 321 (90,9%) hadde mikro stabil (MSS) eller mikro ustabilitet-lav (MSI-L), mens 32 (9,1%) hadde mikro ustabilitet-høy (MSI-H). På den annen side, kohort 2 inkluderte 94 (54,0%) menn og 80 (46,0%) kvinner med median alder på 60 år (range: 28-93 år). MSS /MSI-L ble funnet i 159 (98,1%) og MSI-H i tre (1,9%) av 162 pasienter med MSI analyse tilgjengelige.
HER2
status i CRC pasienter
HER2-proteinet ble svakt eller svakt uttrykt på membranen og /eller cytoplasma av normal kolonepitelet, mens membranen av tumorcellene som er presentert forskjellige fargemønstre (figur 1). I påfølgende kohort 1, ble IHC 0 funnet i 296 av 365 pasienter (81,1%), IHC 1+ i 47 (12,9%), IHC 2+ i 14 (3,8%), og IHC 3+ i 8 (2,2%). I kohort 2 av avanserte tilfeller ble IHC 0 observert i 139 av 174 pasienter (79,9%), IHC 1+ i 25 (14,4%), IHC 2+ i 5 (2,9%), og IHC 3+ i 5 (2,9% ). Økt forekomst av HER2 ble påvist i 6,0% av kohorten 1 og 5,8% av kohorten 2.
(A) IHC 0 (40 × objektiv); (B) 0 poeng av mRNA ISH (40 × objektiv); (C)
HER2
gen disomy (60 × objektiv); (D) IHC 3+; (E) scorer fire av mRNA ISH; (F)
HER2
genamplifisering (
HER2 Twitter /CEP17 forholdet ≥2).
Noen spredte brune punctate prikker ble observert i kjernen og /eller cytoplasma av normal tarm epitel ved hjelp av
HER2
mRNA ISH, mens ulike kjernefysiske og /eller cytoplasmisk farging ble observert i tumorceller (figur 1). I kohort 1, ISH 0 poeng ble observert i 12 av 365 pasienter (3,3%), scorer 1 i 118 (32,3%), scorer 2 i 160 (43,8%), scorer 3 i 66 (18,1%), og scorer 4 i 9 (2,5%). I kohort 2, ISH 0 poeng ble observert hos 11 av 174 pasienter (6,3%), scorer 1 i 41 (23,6%), scorer 2 i 93 (53,4%), scorer 3 i 25 (14,4%), og scorer 4 i 4 (2,3%).
HER2
mRNA overtranscription ble observert hos 2,5% av kohorten 1 og 2,3% av kohorten 2.
HER2
signaler ble oppdaget som disomy i normal colonic epitel, slik at det ble anvendt som interne kontroller. Imidlertid
HER2
signaler variert i løpet av tumorceller (figur 1). Median
HER2 Twitter /CEP17 forholdet var 1,16 (område: 0,68 til 19,62) i kohort 1 og 1,19 (område: 0,57 til 21,89) i kohort 2.
HER2
genamplifisering ble påvist i 21 av 365 pasienter (5,8%) i kohort 1 og 11 av 174 (6,3%) i kohort 2. det var ingen signifikant forskjell i forekomsten av
HER2
positivitet mellom påfølgende kohort 1 saker og avansert kohort 2 tilfeller , uavhengig av påvisningsmetoden (IHC, ISH, eller SISH). Av totalt 32 forsterkede tilfeller bety
HER2
gen kopiantall (GCN) var 6 eller mer i 16 tilfeller. Ifølge kreft mage kriterier satt av toga rettssaken [13],
HER2
positivitet er definert som IHC 3+ eller IHC 2+ med
HER2
genamplifisering.
HER2
positivitet ble funnet hos 3,6% (13 av 365 pasienter) av kohort 1 og 4,0% (7 av 174 pasienter) av kohort 2. Vi har også undersøkt kromosom 17 (CEP17) endringer og observerte en homogen CEP17 signal mønster. Median CEP17 var 2,15 (område: 1,25 til 3,50) i kohort 1 og 1,95 (område: 0,83 til 3,15) i kohort 2. CEP17 polysomy, som ble definert som en verdi på ≥3 CEP17 signaler /kjerne, ble observert hos 2,7% (10 av 365 pasienter) av kohort 1 og 2,3% (4 av 174 pasienter) av kohort 2.
konkordansen priser mellom deteksjonsmetoder
for å kunne vurdere samsvar mellom ulike metoder, vi kombinerte begge kohorter. Av de totalt 539 tilfeller,
HER2
genamplifisering var signifikant assosiert med protein overekspresjon (ρ, 0,601,
P
0,001) og mRNA overtranscription (ρ, 0,626,
P
0,001; tabell 2). Alle IHC 3+ saker og all ISH scorer 4 tilfeller viste
HER2
genamplifisering av dual-color SISH. Den samstemmighet var 95,5% mellom dual-color SISH og IHC deteksjonsmetoder. Når unntatt equivocally immunostained tilfeller (IHC 2+), den samstemmighet var 97,7%.
HER2
mRNA overtranscription signifikant korrelert med protein overekspresjon (ρ, 0,575,
P
0,001; Tabell S1).
Av de 539 tilfellene, 12 saker viste
HER2
genamplifisering, men ved IHC 0 eller 1 +, som er beskrevet i detalj i Tabell S2. I ett tilfelle, homogen
HER2
genamplifisering og mRNA overtranscription ble observert over hele tumoren kjernen, men HER2-protein ble ikke uttrykt i en hvilken som helst bestemt område av tumoren kjernen (figur 2). I de andre 11 tilfeller ble HER2 protein uttrykt fokalt med IHC 1+ score, og
HER2
genamplifisering ble observert lokalisert innenfor protein uttrykk området (figur 2).
(A- C) HER2 IHC 1+ i kreft fokusområdet (A), fokus mRNA overtranscription (B) og
HER2
genamplifisering (C) i samsvar med protein uttrykk området. (D-F) nr uttrykk for HER2 protein (D), men diffuse mRNA overtranscription (E) og
HER2
genamplifisering (F) i ett tilfelle.
Sammenheng mellom
HER2
status og clinicopathological funksjoner
for å undersøke den kliniske relevansen av
HER2
status, vi evaluert sammenhengen mellom clinicopathological variabler og
HER2
status. HER2 protein overekspresjon var ikke assosiert med MSI status eller aggressiv atferd blant infiltrerende tumor grensen, invasjon dybde, lymfeknutemetastase, fjernmetastaser, og perinevral invasjon (
P
0,05; Tabell S3), mens det var forbundet med svulst beliggenhet i endetarmen (
P
= 0,033 i kohort 1, Tabell 3).
HER2
mRNA overtranscription var ikke forbundet med noen clinicopathological variabler, bortsett fra svulst plassering i endetarmen (
P
= 0,001 i kohort 1,
P
= 0,026 i kohort 2; tabell 3).
HER2
genamplifisering var også assosiert med tumor beliggenhet og ble oftere funnet i i endetarmen enn i høyre eller venstre colon (
P
= 0,013 i kohort 1,
P
= 0,009 i kohort 2;. Tabell 3, tabell S4)
for å finne den prognostiske betydningen av
HER2
-positivt status, utførte vi overlevelse analyser i hver årsklasse. Alle pasienter fra kohort 1 og 2 ble vellykket fulgt opp for å overleve analyse. Gjennomsnittlig oppfølgingstid var 68 måneder (spredning: 1-85 måneder); 98 pasienter (26,8%) døde av kreft i kohorten 1. I kohort 2 var gjennomsnittlig oppfølgingstid var 66 måneder (variasjon: 1-105 måneder); 72 pasienter (41,4%) døde av kreft.
HER2
genamplifisering, mRNA overtranscription, eller protein overekspresjon var ikke assosiert med sykdomsspesifikk overlevelse i kohort 1 og kohort 2 (
P
0,05; Figur S1). I kohorten 1, alder, tumorstørrelse, tumor stadium, histologisk grad, lymfatisk invasjon, perinevral invasjon, venøs invasjon, og infiltrerende tumor grensen var signifikant assosiert med pasientenes prognose (
P
0,05) ved univariat overlevelse analyser. Histologisk differensiering, perinevral invasjon, alder og tumorstadium ble identifisert som uavhengige prognostiske faktorer for sykdomsspesifikk overlevelse (
P
0,05, data ikke vist). Men i kohort 2 tilfeller, svulst plassering, tumor stadium, histologisk differensiering, lymfatisk invasjon, og perinevral invasjon spådd pasientenes prognose ved univariate overlevelsesanalyse (
P
0,05), hvorav tumorstadium (
P
= 0,018) og lymfatiske invasjon (
P
= 0,024) var uavhengige risikofaktorer i henhold til multivariat analyse (data ikke vist).
Diskusjoner
Hensikten med denne studien var å identifisere forekomsten av
HER2
-positivt status i to retrospektive kohorter, inkludert sammenhengende CRC og avanserte CRC med fjernmetastaser, og for å avklare deres kliniske betydning. Heri, observerte vi at
HER2
genamplifisering og protein overekspresjon ble funnet i ca 6% av CRC fra begge kohorter, CRC med
HER2
genamplifisering ble plassert mer vanlig i endetarmen enn i høyre eller venstre kolon,
HER2
status var ikke assosiert med aggressiv clinicopathological funksjoner eller dårligere prognose, og konkordans priser mellom deteksjonsmetoder var svært høy. Så langt vi kjenner til, er dette den første rapporten til å vurdere
HER2
-positivt status ved hjelp av flere teknikker i en storstilt studie av østasiatiske CRC pasienter.
Hittil har flere studier har rapportert at hyppigheten av HER2-proteinet overekspresjon varierer mye, fra 0% til 80% i CRC [28], [29], og dens prognostisk betydning er kontroversiell [28], [30] – [32]. Denne debatten kan bli tilskrevet av flere årsaker, som primært antistoff forskjell, en forskjell i poengsystemer for HER2 protein uttrykk, en forskjell på teknisk tilnærming, utvalgsstørrelse, raseforskjeller, og heterogenitet av studiepopulasjonen. Når akseptert flekker og scoringsteknikker ble anvendt, ble frekvensen av membran og cytoplasmatisk overekspresjon av HER2 rapportert hos omtrent 5% og 30%, henholdsvis [29]. Vi brukte akseptert flekker og telling, og membran overekspresjon av HER2 ble observert hos ca. 6%. Disse funnene tyder på at trastuzumab kan være effektiv i et mindretall av CRC pasienter [33]. Alternativt kan intracellulære HER2-rettet mot forbindelser være attraktivt alternativ behandling i en tredjedel av CRC pasienter, hvis cytoplasma HER2 er virkelig aktivt involvert i kreftutvikling av CRC [29], [33].
Det er verdt å merke seg at den samstemmighet var 95,5% mellom dual-color SISH og IHC deteksjonsmetoder i denne studien. Når unntatt equivocally immunostained tilfeller (IHC 2+), den samstemmighet var 97,7%. Disse samstemmighet ratene var nok til å bruke bare den IHC fremgangsmåte for å screene
HER2
genamplifisering, og i likhet med satsene sett i gastro-øsofageal kreft i tidligere studier [4], [34], [35]. Blant de avvikende tilfeller, ett tilfelle hadde
HER2
genamplifisering med homogen fordeling, men HER2 protein ble ikke uttrykt. Dette funn har blitt rapportert i gastro-øsofageal kreft utgjør 2% til 33% av tilfellene [4], [34] – [37]. Dette fenomenet nødvendiggjør videre studier, men den følgende hypotese kan forklare det: feilaktige post-oversettelses prosesser, slik som uriktig tredimensjonal folding, dysfunksjonell lokalisering av proteinet til cellemembran, og upassende protein glykosylering, noe som fører til redusert HER2 proteinekspresjon, selv om
HER2
gen forsterkes [4]. I vårt tilfelle,
HER2
mRNA ble overtranscribed med homogen fordeling som støtter hypotesen er nevnt ovenfor. Men til tross for høye konkordans priser mellom deteksjonsmetoder i denne studien,
HER2
mRNA ISH er ikke en standard metode for vurdering av
HER2
status, og det har ennå ikke blitt fastslått kutt off å definere mRNA overtanscription. Følgelig videre studier er nødvendig for å validere
HER2
mRNA ISH metode.
Nylig Conradi et al. [21] screenet for
HER2
positivitet etter de samme metoder og kriterier som våre, og rapporterte at
HER2
positivitet ble observert hos 12,4% av endetarms biopsiprøver og 26,7% av endetarms resected prøven. Videre
HER2
positivitet i resected prøver uavhengig korrelert med langvarig kreftspesifikk overlevelse i endetarmskreftpasienter. Sclafani et al. [22] også evaluert for
HER2
positivitet i høy-risiko, lokalavansert endetarmskreftpasienter i EXPERT-C prøveversjon av neoadjuvant kapecitabin og oksaliplatin og kjemoradioterapi (CRT) med eller uten cetuximab. Men i sin studie,
HER2
positivitet var bare 4,3%, og det hadde ingen sammenheng med clinicopathologic parametere og pasient utfall. Vår studie omfattet høyre og venstre tykktarm kreft og endetarms kreft; dermed var vi i stand til å analysere hyppigheten av
HER2
forsterkning og overekspresjon ifølge primære stedet.
HER2
forsterkning ble oftest funnet i endetarmskreft enn i noen andre primære område, og
HER2
positivitet av endetarmskreft var 8,0% i kohort 1 og 7,5% i kohort 2. inkonsekvens for hyppigheten av
HER2
positivitet reflekterer trolig den mulige effekten av flere faktorer som etnisitet, ulike studiepopulasjonen, og svulst heterogenitet. Spesielt i to tidligere studier, uenighet av
HER2
positivitet mellom biopsi og resected eksemplar ble observert [21], [22]. I lys av disse funnene, er det foreslått at intratumoral
HER2
heterogenitet kan eksistere i CRC, som også har blitt rapportert i studier av magekreft [10]. Videre studier er nødvendig for avklaring.
Tradisjonelt CEP17 endringer har påvirket målingen av
HER2 Twitter /CEP17 forholdet. Følgelig noen tilfeller ble feilklassifisert som ikke-forsterket. I denne studien, CEP17 polysomy var en sjelden begivenhet sto for 2,6% av tilfellene, slik at det ikke fremkalle misvisende tolkning i
HER2
genamplifisering. CEP17 polysomy var ikke klinisk signifikant hos pasienter med CRC.
Selv om to kliniske studier hadde prøvd å undersøke nytten av anti-HER2-behandling ved avansert eller metastatisk CRC, ble forsøkene stengt før tiden på grunn av lav opptjening knyttet til lav forekomst av økt forekomst av HER2 i avanserte CRC pasienter [38], [39]. Men en fersk undersøkelse viste at
HER2
servert å forutse motstand mot anti-EGFR monoklonalt antistoff i pasient avledet xenografter fra metastatisk CRC, som fører forfatterne å foreslå en mulighet for kombinert behandling i cetuximab-resistente CRC pasienter [ ,,,0],40]. Videre er en fersk HERACLES studie (HER2 Amplification for Colo-endetarmskreft Enhanced Stratifisering) undersøker bruk av trastuzumab pluss lapatinib eller pertuzumab i metastatisk CRC med
HER2
forsterkning [41]. Derfor vil våre funn være nyttig i å utvikle og anvende
HER2
målrettet terapi i CRC pasienter. Fordi mutasjon resultatene av
KRAS Hotell og
BRAF
ikke ble inkludert i studien, var vi ikke i stand til å belyse forholdet mellom
HER2
status og
KRAS
eller
BRAF
i CRC. Det er den aktuelle begrensning av vår studie siden
KRAS Hotell og
BRAF
er svært viktig for å bestemme behandling tilnærming i CRC pasienter. I tillegg har vår studie potensielle svakheter, for eksempel retrospektiv designet studie, vurdering av
HER2
bruker en vev matrise metode, heterogene studiepopulasjonen i en enkelt institusjon, og velge pasienter i kohort 2. Vi har registrert CRC pasienter med tilgjengelige kirurgisk resected kreft vev fra primære svulster i kohort 2. ikke alle avanserte CRC-pasienter med metastaserende sykdom ble inkludert, og langt avanserte saker ble ikke registrert på grunn av deres ikke virker. Derfor resultatførte fordommer kan ha påvirket vår overlevelse resultater. Videre er et lite antall av
HER2
positive tumorer kunne utelukke robust statistisk analyse, og dermed ytterligere store studier er nødvendig for å validere resultatene.
I konklusjonen,
HER2
genamplifisering og protein overekspresjon ble identifisert i omtrent 6% av CRC-pasienter, og har ingen klinisk innblanding unntatt i tumor sted i den foreliggende undersøkelse. Vi har også vist høy konkordans priser mellom IHC og dual-farge SISH metoder i den kombinerte kohorter. Selv om et mindretall av CRC pasienter utstilt
HER2
genamplifisering, disse pasientene ville være potensielle kandidater for anti-HER2-behandling, og IHC kan være primær screeningtest for pasientens valg.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
Kaplan-Meier overlevelseskurver i henhold til HER2 status etter hvert deteksjonsmetode. (A-B) Overlevelseskurver ifølge HER2 protein ekspresjon status i kohort 1 (A) og kohort 2 (B). (C-D) Overlevelseskurver i henhold til
HER2
mRNA-ekspresjon status i kohort 1 (C) og kohort 2 (D). (E-F) Overlevelseskurver henhold til
HER2
genamplifisering status i kohort 1 (E) og kohort 2 (F)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0098528.s001 product: ( JPG)
Tabell S1.
Forholdet mellom immunhistokjemi og mRNA in situ hybridisering for
HER2
i CRC av kombinerte gruppen
doi:. 10,1371 /journal.pone.0098528.s002 plakater (docx)
Table S2. Bedrifter Den detaljene i tilfeller med
HER2
genamplifisering, men IHC 0 eller 1+ resultater
doi:. 10,1371 /journal.pone.0098528.s003 plakater (docx)
Tabell S3.
Sammenhengen mellom HER2 protein uttrykk og clinicopathologic variabler i CRC i hver årsklasse
doi:. 10,1371 /journal.pone.0098528.s004 plakater (docx)
Tabell S4.
