Abstract
Mus har vært ansatt som modeller for kreft i over hundre år, noe som gir betydelige fremskritt i vår forståelse av dette mangefasetterte familie av sykdommer. Spesielt er ortotopiske tumor xenograft musemodeller fremstår som den preferanse for kreftforskning på grunn av økt klinisk relevans i løpet av subkutane musemodeller. I denne studien har vi utviklet ortotopiske bukspyttkjertelkreft xenograft modeller i mus ved en minimal invasiv metode, ultralydveiledet injeksjon (USGI) kan sammenlignes med svært invasive kirurgiske orthotopic injeksjon (SOI) metoder. Denne optimaliserte fremgangsmåten forhindres injeksjons komplikasjoner som rekyl av celler gjennom injeksjonskanalen eller lekkasje av cellene av bukspyttkjertelen i bukhulen. Tumorveksten ble undersøkt in vivo og kvantifisert ved ultralydavbildning ukentlig, ble svulster også påvist ved in vivo fluorescens avbildning ved hjelp av et tumormålrettet molekylær probe. De gjennomsnittlige tumorvolum for USGI og SOI modeller etter 2 uker med tumorvekst var 205 mm
3 og 178 mm henholdsvis
3. Ved USGI av menneskelige bukspyttkjertelen kreft cellelinjer, ble menneske ortotopiske kreft i bukspyttkjertelen xenografter etablert. Basert på ultralydavbildning, den orthotopic menneskelig kreft i bukspyttkjertelen xenograft ta rente var 100% for både menneskelige bukspyttkjertelen kreft cellelinjer som benyttes, MiaPaCa-2 og Su86.86, med gjennomsnittlige tumorvolum på 28 mm
3og 30 mm
3 . Vi viste at dette USGI metoden er gjennomførbart, reproduserbar, facile, minimal invasiv og forbedret i forhold til den svært invasive SOI metode for å etablere ortotopiske pancreatic svulst xenograft modeller som passer for molekylær avbildning
Citation. Huynh AS, Abrahams DF , Torres MS, Baldwin MK, Gillies RJ, Morse DL (2011) Utvikling av en ortotopiske menneskelig kreft i bukspyttkjertelen Xenotransplantat Modell Bruke ultralydveiledet injeksjon av celler. PLoS ONE 6 (5): e20330. doi: 10,1371 /journal.pone.0020330
Redaktør: Maria G. Castro, University of California, Los Angeles, og Cedars-Sinai Medical Center, USA
mottatt: 11 mars 2011; Godkjent: 20 april 2011; Publisert: May 27, 2011
Copyright: © 2011 Huynh et al. . Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering: Grant Support : NIH /NCI R01-CA123547 (https://www.nih.gov/, https://www.cancer.gov/). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Mus har vært ansatt som modeller for kreft i over hundre år, noe som gir betydelige fremskritt i vår forståelse av dette mangefasetterte familie av sykdommer. Det er for tiden fire hovedområder kreftforskning som bruker musemodeller: grunnleggende biologi og fysiologi, eksperimentelle behandlingsformer, forebygging og genetikk mottakelighet og risiko. Disse modellene har vist seg å være nyttig i validering av gen-funksjon, karakterisering av nye kreftgener og kreft biomarkører, få innsikt i de molekylære og cellulære mekanismene bak startfasen og flertrinnsprosesser tumorigenesis, og gir bedre kliniske modeller i å teste nye behandlings strategier [1]. Spesielt er tumor xenograft musemodeller som vanligvis anvendes i prekliniske studier. Human tumor xenograft-modeller er skapt ved injeksjon av humane tumorceller dyrket fra kultur i en mus, eller ved transplantasjon av en human tumormasse inn i en mus. Den xenograft kan lett aksepteres av immunsupprimerte mus som atymiske hårløse mus eller alvorlig kompromittert immunodeficient (SCID) mus [2]. Det er flere viktige fordeler ved å bruke humane tumorxenografter: de har kompleksiteten av genetiske og epigenetiske abnormaliteter som finnes i humane tumor populasjonen; kan brukes til å hjelpe til med utviklingen av individualisert molekylære terapeutiske tilnærminger; og kan implanteres orthotopically for å reprodusere det organ miljø hvor tumoren vokser, slik at virkningen av tumoren på sin mikromiljø kan moduleres [3].
De to hovedtyper av humane xenograft musemodeller som brukes til kreftforskning, heterotop og orthotopic er definert av plasseringen av implantert xenograft. For heterotop subkutane modeller er xenograft implantert mellom dermis og underliggende muskler og er vanligvis plassert på kanten og på baksiden eller fotbladet av musen. I over 30 år har det subkutane xenograft modell vært den mest brukte preklinisk musemodell for kreftforskning fordi det er rask, billig, lett reproduserbar, og har vært ansett tilstrekkelig preklinisk å teste anti-kreft narkotika. Den subkutane modellen har også fordelene med å tilveiebringe visuell bekreftelse på at musene anvendt i et eksperiment har tumorer før terapi; og tilveiebringe et middel for å vurdere tumorrespons eller vekst over tid, sammenlignet med intrakavitær modeller hvor dyret overlevelse er det eneste mål på respons [4]. Imidlertid har store ulemper i prekliniske bruk av subkutane xenograft modeller bli avdekket. Det har vært konsekvent observert at legemiddelregimer som er kurativ i muse subkutan xenograft modeller ofte ikke har en betydelig effekt på sykdom hos mennesker. Den primære årsaken til denne svikt kan være på grunn av den observasjon at det subkutane mikromiljøet ikke er relevant til den av organet området av primær eller metastatisk sykdom. I tillegg subkutane tumormodeller sjelden danne metastaser. Disse observasjonene tyder på at heterotop tumormodeller som ikke representerer egnede områder for humane tumorer er ikke forutsigbare når de brukes til å teste reaksjoner på anti-kreft narkotika [5].
For å møte de mangler av subkutane modeller, ortotopiske tumorxenotransplantater blir i økende grad utforsket for økt klinisk relevans. I denne modellen er svulsten xenograft enten implantert eller injisert inn i tilsvarende organ fra hvilket kreft stammer, eller hvor metastaser er funnet i pasienter. Fordeler med ortotopiske modeller inkluderer bruk av det aktuelle området for tumor-vert interaksjoner, fremveksten av sykdom-relevante metastaser, evnen til å studere setespesifikk avhengighet av behandling, organ-spesifikk ekspresjon av genene og at kliniske situasjoner kan replikeres, f.eks kirurgisk fjerning av primærtumor, eller adjuvant terapi av okkult metastase [5]. Største ulempene er at ortotopisk tumor xenograft generasjon er arbeidsintensiv, teknisk krevende, dyre og krever lengre tid helbredelse og utvinning tid, og at overvåkingstumorvolum krever forholdsvis lavere gjennomstrømning avbildningsmetoder sammenlignet med anvendelsen av målepunkter [5]. Likevel er ortotopiske tumormodeller fremstår som den preferanse for kreftforskning på grunn av økt klinisk relevans.
Det er et sterkt behov for å utvikle bedre modeller for pre-klinisk undersøkelse av kreft i bukspyttkjertelen. Det er anslått at 43,140 mennesker (21.370 menn og 21,770 kvinner) vil bli diagnostisert med kreft i bukspyttkjertelen i 2010, og at 36,800 menn og kvinner vil dø av denne sykdommen [6]. Prognosen er dårlig, med færre enn 5% overlevelse fem år etter diagnose, og komplett remisjon er sjelden. Ingen effektive tidlig deteksjon metoder har blitt utviklet og fremdrift i utviklingen av behandling og terapi er stillestående. Gemcitabin har vært standard kjemoterapi for mer enn et tiår. Imidlertid er fordelen med mono gemcitabin behandling i avansert og metastatisk kreft i bukspyttkjertelen liten [7]. Bruken av ortotopiske xenograft modeller for preklinisk kreft i bukspyttkjertelen forskning kan forbedre utviklingen av behandlinger og diagnostiske bildediagnostikk mot denne sykdommen.
I denne studien undersøkte vi muligheten for å utvikle ortotopiske menneskelige bukspyttkjertelkreft xenograft modeller ved hjelp av ultralydveiledet injeksjon (USGI) av tumorceller. Ortotopiske svulst xenograft musemodeller for kreft i bukspyttkjertelen har vært godt etablert i mange år. Men disse modellene krever meget invasive kirurgiske implantering ortotopisk (SOI) av tumorceller eller biter inn i bukspyttkjertelen. Denne prosedyren kan føre til betydelige traumer, som krever postoperativ utvinning tid, og kan føre til bivirkninger som infeksjon, blødning, tumor adhesjon til andre organer, og andre effekter fra kirurgisk stress, f.eks sårheling.
Nyere fremskritt har gjort for utvikling av bildestyrte metoder for ortotopisk injeksjon av celler eller vev inn i indre organer, potensielt eliminere behovet for sterkt invasive kirurgiske prosedyrer. Spesielt kan minimal invasiv sanntids-ultralyd styrt injeksjon (USGI) av tumorceller bli utført for å skape ortotopiske xenograft-modeller. USGI av svulster celler har blitt en akseptert metode for å utvikle ortotopiske leverkreft modeller. For eksempel ble en multiresistent modell opprettet i nakne mus via orthotopic implantasjon av multiresistent menneskelige HCC celler regissert av ultralyd [8]. Vi har utviklet en ny orthotopic xenograft modell for lymfeknutemetastase, hvor nøyaktige antall tumorceller ble injisert i axillaris lymfeknuter ved hjelp av ultralydbildet veiledning [9].
En syngene orthotopic murine bukspyttkjertelkreft musemodell var utviklet ved injeksjon av murine bukspyttkjertel ductal adenokarsinom-celler, Pan02, inn i eller i nærheten av bukspyttkjertelen fra C57BL /6-mus ved hjelp av SonoCT ultralyd [10]. Ultralyd veiledet metode ble konkludert å være gunstig sammenlignet med subkutan modell for undersøkelse av innflytelsen av immunterapi på tumorvekst [10]. Men svulster som følge av denne studien viste seg å være lett spres utover i bukhulen og ikke isolert utelukkende til bukspyttkjertelen, og det var ikke klart om dette var et resultat av metastaser, eller muligens celler blir gitt ut i det omkringliggende området under prosedyren.
Vår nåværende studien er den første til å rapportere orthotopic injeksjon av menneskelige kreft i bukspyttkjertelen celler direkte inn i bukspyttkjertelen av immunsupprimerte mus ved ultralydbilde veiledning. Vi har fullstendig karakterisert tumor ta som står i forhold til det kirurgiske modell og har bekreftet ved histologi at tumorene ble opprinnelig isolert til bukspyttkjertelen, etterfulgt av etterfølgende metastaser inn i det peritoneale hulrom i senere uker. I tillegg har vi vist at en målrettet molekylær avbildning agent kan være spesielt leveres gjennom blodkar til de resulterende svulster i bukspyttkjertelen.
Materialer og metoder
Etikk erklæringen
All prosedyrer var i samsvar med guide for omsorg og bruk av forsøksdyr Resources (1996), National Research Council, og godkjent av Institutional Animal Care og bruk komité, University of South Florida under godkjente protokollen R3715. Immunsupprimerte mus befinner seg i en ren anlegg med spesielle forhold som inkluderer HEPA filtrert ventilerte merder, autoklaveres sengetøy, autoklaveres bolig, autoklaveres vann, bestrålt mat og spesielle bur endrede prosedyrer. Mus blir håndtert under aseptiske forhold, inkludert bruk av hansker, kjoler og sko gulvbelegg.
Cell Kultur
MiaPaca-2 celler (ATCC CRL-1420), SU86.86 celler (ATCC CRL- 1837), og de paren HCT116-celler (ATCC CCL-247) ble anskaffet fra ATCC (Manassas, VA). De HCT116 /δOR + tykktarm kreft celler ble genmodifisert fra foreldre HCT116 cellelinje til svært over uttrykker δ-opioid reseptor [11]. Ekspresjon av δOR på overflaten av HCT116 og HCT116 /δOR + -celler ble karakterisert før injeksjon ved hjelp av en
in vitro
tids-oppløst fluorescens bindingsanalysen [12]. HCT116 /δOR +, og MiaPaCa-2-celler ble dyrket i DMEM /F12 media (Invitrogen, Carlsbad, CA) supplert med 10% normalt kalveserum (Atlanta Biologicals, Lawrenceville, GA) og 1% penicillin /streptomycin-løsning (Sigma, St. Louis, MO). De SU86.86-celler ble dyrket i RPMI-medium (Invitrogen) supplert med 10% FBS (Atlanta Biologicals). Alle celler ble dyrket ved 37 ° C og 5% CO2.
Operasjon ortotopiske Bukspyttkjertelkreft Xenotransplantat Mouse Model
Til sammenligning til USGI teknikk, 5 kvinnelige nu /nu mus 6-8 uker gammel (Harlan Sprague Dawley Inc., Indianapolis, IN) gjennomgikk en etablert kirurgisk metode for ortotopisk injeksjon av celler i bukspyttkjertelen. For denne fremgangsmåten ble musene bedøvd henhold isofluran gass; abdominal hud og muskel ble radert like ved midtlinjen og direkte over bukspyttkjertelen til å tillate visualisering av de pankreatiske fliker; bukspyttkjertelen ble forsiktig trukket tilbake og plassert for å tillate direkte injeksjon av en 20 ul bolus av 1 x 10
6 HCT116 /δOR + celler /PBS ved anvendelse av en 1 ml sprøyte med en 30 gauge nål; vellykket levering av celler i bukspyttkjertelen ble observert under forstørrelse ved hjelp av et mikroskop disseksjon; bukspyttkjertelen ble plassert tilbake i bukhulen; og både muskel- og hudlagene lukket med kirurgisk lim. Etter utvinning fra kirurgi, ble musene overvåket og veies daglig.
Ultralyd Imaging
Visual Sonics Vevo 2100 Imaging Station ble brukt for alt ultralydavbildning. Bilde oppkjøp ble utført ved hjelp av forbedret abdominal måling pakke i B-modus og innstillinger 3-D-modus. Fysiologiske status (ECG, åndedrett, blodtrykk, kroppstemperatur og) av musene ble nøye overvåket i løpet av hvert bilde-innhentings økt. Musene ble fotografert før svulsten xenografting å etablere baseline bilder og deretter avbildes ukentlig i opptil 4 uker ved hjelp av ultralyd for å overvåke utviklingen av ortotopiske kreft i bukspyttkjertelen xenografter.
Fluorescens Imaging
Mus peiling orthotopic bukspyttkjertelen xenotransplantater av HCT116 /δOR + celler ble administrert 4,5 nmol /kg kroppsvekt av Dmt-Tic-Cy5 ved haleveneinjeksjon. DMT-Tic-Cy5 er en høy affinitet (3 nM Ki) peptidomimedic rettet probe er konjugert til fluorescerende fargestoff (Cy5) som ble brukt for å bestemme plasseringen av de HCT116 /δOR + -celler ved
in vivo
og
ex vivo
fluorescens-avbildning [12]. Etter injeksjon ble musene holdt i en spesiell mørke kammeret og beskyttet mot lys eksponering så mye som mulig for å hindre bildet bleking av fargestoffet. Alfalfa-fri mat og spesielle bur sengetøy ble brukt for å minimere autofluorescence.
In vivo Hotell og
ex vivo
fluorescens bilder ervervet ved bruk av Caliper Life Sciences Xenogen IVIS 200 Series Imaging System. Den 615-665 nm eksitasjon og 695-770 nm emisjonsfiltre ble brukt. Innhentingstider varierte fra 0 til s 10 s for å holde intensitet tellinger innenfor området fra 15 000 til 60 000 for å forhindre metning. Forut for dataanalyse, ble instrument bakgrunns subtraksjoner utført. Levende bilde 3.2 programvare ble anvendt for å tegne regioner av interesse (ROIs) i løpet av tumorer for å bestemme den midlere fluorescens-signalet (effektivitet enheter). Effektivitet enheter er beregnet ved å normalisere fluorescens utslipps bilder for variasjoner i hendelsen eksitasjon lysfordeling på scenen. Autofluorescence bakgrunn ble trukket ved å bestemme gjennomsnittlig tumor fluorescens signal før injeksjon.
Histologi av bukspyttkjertelen xenografter
pankreata av musene ble høstet, visuelt inspisert, fiksert i 10% formalin buffer, behandlet , innebygd, tri-seksjonert, H E farget, og analyseres av en patolog for tilstedeværelsen av svulster
statistikker
data er representert som gjennomsnitt ± sD. og t-test ble benyttet for å bestemme betydning.
Resultater
Utvikling av ortotopiske menneskelig kreft i bukspyttkjertelen Xenotransplantat Mouse Model Bruke USGI
orthotopic menneskelig kreft i bukspyttkjertelen musemodell var utviklet ved hjelp av 6-8 uker gamle kvinnelige atymiske nakne mus. Musene ble bedøvet ved bruk av 3% isofluran gass gjennom induksjonskammeret og deretter festes i ryggleie på ultralyd plattform med en neseseksjon for opprettholdelse av anestesi ved 1,5 til 2%. Ultralyd plattformen er plassert for å ha bukspyttkjertelen side av legemet mot den mekaniske nåleholderen. Ultralyd-gel ble påført til magen og bukspyttkjertelen som ligger ved mekanisk justering av posisjonen for ultralydsvingeren, med milten som en referanse. En Prøve scanne bildet av mus mageregionen ble utført ved hjelp av 3D-modus bildebehandling oppkjøpet funksjonen før xenografting å etablere en baseline for komparativ analyse. En 0,5 ml sprøyte med en 30 g nål ble plassert i den mekaniske sprøyteholderen og stilt opp parallelt med proben og vinkelrett på legemet. Sprøytespissen ble deretter riktig justert og avanserte inn i bukspyttkjertelen ved hjelp av nål guide overlay funksjon som gjør det mulig for visualisering av nålen justering og injeksjon målet på amerikanske skjermen. En 20 ul bolus av 1 x 10
6 tumorceller suspendert i PBS ble injisert direkte inn i bukspyttkjertelen ved hjelp av automatiserte bildestyrt presisjon mikro-injeksjon funksjonen. En optimalisert injeksjonsteknikk ble anvendt, hvori injeksjonsvolum ble redusert fra en opprinnelig volum på 50 ul til 20 ul. I stedet for straks å trekke tilbake nålen, en 5 sekunders pause etter celleinjeksjon med en langsom, bevisst uttak av nålen tillates for fullstendig levering av celler i bukspyttkjertelen. Den optimaliserte teknikk hindres injeksjons komplikasjoner som rekyl av celler gjennom injeksjonskanalen eller lekkasje av cellene av bukspyttkjertelen i bukhulen. Figur 1 viser sanntids ultralyd ervervet bilder av USGI av 1 x 10
6 HCT116 /δOR + celler i en 20 mL bolus i musen bukspyttkjertelen. Når en injeksjon er fullført, ble bedøvelse avbrytes og mus ble returnert til den opprinnelige huset og observert inntil stand målrettet bevegelse. Den fysiologiske status (hjertefrekvens, kroppstemperatur, EKG og respirasjon rate) av musene ble sporet under hele prosessen med Vevo Advanced Fysiologisk Monitoring Unit. Etter USGI xenografting ble musene overvåket og veiet daglig for å identifisere eventuelle tegn til stress eller traumer på grunn av den prosedyre og eller tumorbelastning, og ingen signifikant vekttap eller andre traumer ble observert.
a) viser 30 måleren nål i mus pankreas pre-injeksjon. B) Viser injeksjon av en 20 mL bolus av kreftceller i musen bukspyttkjertelen.
HCT116 /δOR + modellen ble valgt fordi vi har utviklet en svært spesifikk molekylær avbildning probe (Dmt-Tic-Cy5 ) for påvisning av celler som uttrykker det menneskelige δ-opioid reseptor og har tidligere brukt denne sonde for
in vivo Hotell og
ex vivo
spesifikk påvisning av HCT116 /δOR + celler ved fluorescens bildebehandling [12] . Selv om det ikke orthotopic, bruk av denne linjen er også relevant fordi kolorektal kreft er kjent for å danne metastaser i bukspyttkjertelen [13].
I utgangspunktet mus med ortotopiske xenografter av HCT116 /δOR + via SOI og USGI ble fotografert ukentlig ved ultralyd i inntil fire uker for å kontrollere tumorvekst. 3D-modus avbildning anskaffelses funksjonen ble anvendt, hvor en 3D-motor oversetter Micro matrisen svingeren over magen for å oppnå multiple 2D stykker som er satt sammen og gjengis av den Vevo programvare i et 3D datasett av anatomiske strukturer i bukspyttkjertelen og annen abdominal organer. Figur 2 viser ultralydbilder av mus pankreata bærende tumorxenotransplantater ervervet ved tid 0 (før injeksjon av celler), 1 uke og 2 uker post- USGI og SOI av celler. Etter tre til fire uker, mus hadde ekstremt store svulster med hovne oppblåst underlivet, og at disse senere tidspunkter, noen dyr hadde metastaser i ulike regioner av bukhulen, f.eks mage-tarmkanalen, lever og lunger.
A) Normal mus bukspyttkjertelen, B) en uke etter USGI, C) 2 uker etter USGI, D) en uke etter SOI, og E) 2 uker post-SOI.
for å demonstrere gjennomførbarheten av å utvikle en orthotopic bukspyttkjertel modell av USGI som kan sammenlignes med SOI metoder, fem mus hver gikk USGI eller SOI av 1 × 10
6 HCT116 /δOR + celler til pankreata. Tumorvekst ble overvåket og kvantifisert ved ultralydavbildning ukentlig. Etter 2 uker ble store bukspyttkjertel xenografttumorer observert i alle 10 mus ved ultralydavbildning (figur 3). 3D volummålinger ble kvantifisert ved hjelp av 3D-modus Volume verktøy, hvor volumene er laget ved å tegne konturene rundt svulsten i hver 10 skiver serien av bilder for å lage en 3D-tumor volum og image. Figur 3 viser representative 3D ultralydbilder av USGI (3A) og SOI (3D) mus xenograft-modeller 2 uker etter injeksjon av tumorceller. Midlere tumorvolumer (n = 5) for USGI og SOI-modeller ble plottet over tid i Figur 4 og er oppført i Tabell 1. Mus ble deretter administrert 4,5 nmol /kg Dmt-Tic-Cy5 sonde via haleveneinjeksjon.
In vivo
fluorescens bilder ble ervervet 24 timer senere, som ga maksimal kontrast.
in vivo
fluorescens bilder i figur 3 viste opptak av den fluorescerende probe i området av pankreas for begge musemodeller, noe som indikerer tilstedeværelse av HCT116 /δOR + tumorceller.
in vivo
bety fluorescens signal (n = 5) var 2 ganger høyere for SOI i forhold til USGI modell, p 0,002 (figur 5). Basert på
in vivo
ultralyd og fluorescens bildebehandling, take hastighet var 100% for begge modellene mens du bruker HCT116 /δOR + tumorceller.
Det blå skraverte området representerer svulsten genereres ved å utføre 3D svulst volummålinger. A) ultralydbilde av USGI modell, B)
in vivo
fluorescens bilde av USGI modell, C)
ex vivo
fluorescens bilde av musen bukspyttkjertelen fra USGI modell, D) ultralydbilde av SOI modell, E)
in vivo
fluorescens bilde av SOI modell, og F)
ex vivo
fluorescens bilde av musen bukspyttkjertelen fra SOI modell.
for å finne ut om USGI kan brukes med menneskelige bukspyttkjertelen kreft cellelinjer, fem mus gikk USGI av 2 × 10
6 MiaPaCa-2 celler i en 20 mL bolus og ytterligere fem mus gikk USGI 2 × 10
6 SU86.86 celler. Etter 2 uker, alle musene hadde ortotopiske bukspyttkjertelen tumorxenotransplantater observert ved ultralydavbildning og visuell inspeksjon (figur 6). Midlere tumorvolum (n = 5) ble plottet over tid for MiaPaCa-2 og Su86.86 menneskelige pankreastumorer (figur 7) og gjengitt i tabell 1. Basert på
in vivo
ultralydavbildning, den orthotopic xenograft ta rente var 100% ved bruk av både menneskelige bukspyttkjertelen kreft cellelinjer, MiaPaCa-2 og Su86.86.
det blå skraverte området representerer svulsten genereres ved å utføre 3D-tumor volummålinger.
Validering av Ex vivo fluorescens bildebehandling og histologi
Umiddelbart etter
in vivo
fluorescens bildebehandling, den HCT116 /δOR + svulst xeongraft bærende mus ble humant avlivet, visuelt undersøkt for tilstedeværelse av svulster andre steder i kroppen, og store organer (hjerte, lunge, nyrer, lever, milt, bukspyttkjertel, GI skrift) fjernet, og
ex vivo
fluorescens bilder ervervet 24 timer etter administrering av målrettede fluorescerende probe.
ex vivo
bety fluorescens (n = 5) overtatt fra pankreata av begge modellene var relativt like (Figur 5). Som bestemt ved
ex vivo avbildning
, sonde spesifikk fluorescens var til stede i 100% av mus pankreata (n = 5) for begge modellene, og et lavt nivå av fluorescens ble observert i nyrer (figur 8).
Ved histologi, ble tumorer observert i 100% av pankreata som gjennomgikk USGI eller SOI hjelp HCT116 /δOR + celler. Svulster ble observert i kun fire av fem (80%) av pankreata injisert med MiaPaCa-2 eller SU86.86 celler, selv om take hastigheten var 100% basert på den amerikanske bildebehandling. Histologi fra disse pankreata var bare forberedt fra 3 seksjoner som var 50 mikrometer fra hverandre, derfor er det sannsynlig at svulster ble savnet under seksjonering. Figur 9 viser representative H 0,002, i disse vevene i forhold til USGI. Dette er muligens på grunn av økt metastaser fra xenotransplantater generert av SOI i forhold til USGI samtidig punktet etter injeksjon av celler (2 uker). Basert på den gjennomsnittlige mengden av kreft i forhold til normal bukspyttkjertelen vev som bestemmes av patologen (tabell 1), de 2 metodene ga nesten like kreftformer; med et gjennomsnitt på 85% cellulært, 11% stromale og 4% nekrotiske komponenter. Derfor har vi vist at orthotopic bukspyttkjertelen svulst xenografting av USGI er gjennomførbart og kan sammenlignes med resultatene som er oppnådd ved SOI.
Siden de innledende fasene av studien brukte kolorektal kreftceller, to menneskelige bukspyttkjertelen cellelinjer, MiaPaCa-2 og
