Abstract
Bakgrunn
Lungekreft er den ledende årsak til kreftdødelighet i verden, men den terapeutiske strategi for avansert ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) er i begrenset grad effektive. I tillegg inhibitorer validert histon-deacetylase (HDAC) for behandling av faste tumorer gjenstår å bli utviklet. Her foreslår vi en ny HDAC hemmer, OSU-HDAC-44, som et kjemoterapeutisk medikament for NSCLC.
metodikk /hovedfunnene
cytotoksisitet effekten av OSU-HDAC-44 ble undersøkt i tre humane NSCLC cellelinjer inkludert A549 (p53 villtype), H1299 (p53 null), og CL1-1 (p53 mutant). De antiproliferatative mekanismer for OSU-HDAC-44 ble undersøkt ved flowcytometrisk cellesyklus analyse, apoptose analyser og genome-wide kromatin-immunoprecipitation-on-chip (Chip-on-chip) analyse. Mus med etablert A549 tumor xenograft ble behandlet med OSU-HDAC-44 eller bærerkontroll og ble brukt til å evaluere effekter på tumorvekst, cytokinese inhibering og apoptose. OSU-HDAC-44 var en pan-HDAC hemmer og viser 3-4 ganger mer effektivt enn suberoylanilide hydroxaminsyren (Saha) undertrykke celle levedyktighet i ulike NSCLC cellelinjer. Ved OSU-HDAC-44-behandling, ble cytokinese hemmet og senere førte til mitokondriene-mediert apoptose. Den cytokinese hemming resulterte fra OSU-HDAC-44-mediert degradering av mitose og cytokinese regulatorer Auroroa B og Survivin. Dereguleringen av F-aktin dynamikk indusert av OSU-HDAC-44 var assosiert med reduksjon i RhoA aktivitet som følge av srGAP1 induksjon. ChIP-on-chip analyse viste at OSU-HDAC-44 indusert kromatin løsne og tilrettelagt transkripsjon av gener som er involvert i viktige signalveier som apoptose, axon veiledning og protein ubiquitinering. Endelig OSU-HDAC-44 effektivt hemmet A549 xenograft tumorvekst og indusert acetylering av histoner og ikke-histonproteinene og apoptose
in vivo
.
Konklusjon /Betydning
OSU -HDAC-44 undertrykker betydelig tumorvekst via induksjon av cytokinese defekt og iboende apoptose i prekliniske modeller for NSCLC. Våre data gir overbevisende bevis for at OSU-HDAC-44 er en potent HDAC målrettet hemmer og kan testes for NSCLC kjemoterapi
Citation. Tang YA, Wen WL, Chang JW, Wei TT, Tan Y-HC, Salunke S, et al. (2010) A Novel histondeacetylase inhibitor utstillinger Antitumor aktivitet via apoptoseinduksjon, F-Actin avbrudd og Gene acetvlering i lungekreft. PLoS ONE 5 (9): e12417. doi: 10,1371 /journal.pone.0012417
Redaktør: Chun-Ming Wong, University of Hong Kong, Hong Kong
mottatt: 22 februar 2010; Godkjent: 02.08.2010; Publisert: 14. september 2010
Copyright: © 2010 Tang et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet delvis av tilskudd NSC97-2627-M-006-005 og NSC99-2628-B-006-004-My3 fra National Science Council og gi DOH98-TD-G-111-024 fra Department of Health (The Executive-Yuan, Kina). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Lungekreft er den ledende årsak til kreftdødelighet i verden. Den fem-års overlevelse av ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) er mindre enn 15% i mange land, [1], [2]. Standarden terapeutiske strategi for avansert NSCLC er platinabasert dobbel-middel kjemoterapi som imidlertid har nådd et platå av potens for forbedring av overlevelse av pasienter [3], [4]. Bare noen få «target agenter» har vist fordeler når det brukes i kombinasjon med platinabasert dobbeltagent for NSCLC kjemoterapi, for eksempel bevacizumab, erlotinib og gefitinib, i en undergruppe av pasienter [5], [6]. Derfor er utvikling av nye molekylære målrettede medikamenter med mer generell effektivitet for lungekreftpasienter en viktig oppgave.
epigenetiske endringer så vel som genetiske endringer er forbundet med tumorgenese [7]. En fersk rapport identifiserer at epigenetiske forandringer involverer modifikasjoner av histoner H2A og H3 i NSCLC påvirke total overlevelse og sykdomsfri overlevelse, og gir den prognostiske verdien av histonmodifikasjonene [8]. Det avslører også begrunnelsen for bruk av narkotika mot histone modifikasjon som en terapeutisk strategi for NSCLC.
Histone deacetylases (HDACs) er enzymer som katalyserer deacetyleringen av histoner og epigenetiske regulerer kromatin arkitektur og genuttrykk. Det har blitt demonstrert at hemming av HDACs reverserer avvikende epigenetisk status og utviser potent antitumor-aktivitet ved induksjon av cellesyklus-stans, differensiering og /eller apoptose i forskjellige kreftceller [9], [10]. HDAC hemmere er klassifisert i seks grupper etter deres kjemiske strukturer og minst 12 av dem har kommet til kliniske studier [9], [11]. Til dags dato, godkjenner den amerikanske Food and Drug Administration to HDAC hemmere, vorinostat (Saha suberoylanilide hydroksamsyre, Zolinza®) og romidepsin (FK228, depsipeptide, Istodax®), for behandling av kutane manifestasjoner av kutant T-cellelymfom (CTCL ) [12]. Men noen bivirkninger forekomme hos pasienter som behandles med vorinostat eller andre HDAC hemmere, som kan resultere fra de høye konsentrasjonene av dosen som brukes under behandling for solide tumorer i kliniske studier [11], [13].
I den foreliggende studien, foreslår en ny klasse av potente fenylbutyrat-baserte HDAC-inhibitor, OSU-HDAC-44 [4- (2,2-dimetyl-4-fenyl-butyrylamino) –
N
– hydroksy-benzamid ], et derivat av kjent HDAC-inhibitor,
N
hydroxy-4- (4-phenylbutyryl-amino) benzamid (HTPB) [14]. De antitumor aktiviteter og mekanismer for OSU-HDAC-44 ble undersøkt i NSCLC celle og mus xenograft modeller. Vi fant ut at OSU-HDAC-44 var en pan-HDAC hemmer og utstilt 3-4 ganger mer effektiv i å undertrykke celleproliferasjon
in vitro Hotell og tumorvekst
in vivo
forhold til Saha eller trichostatin A (TSA). I tillegg OSU-HDAC-44 induserte mitose og cytokinese defekt fulgt av mitokondriene-mediert apoptose i begge celle og dyremodeller. Kromatin-immunoprecipitation-on-chip analyse avslørte genom-wide målgener som ble indusert av OSU-HDAC-44-mediert hyperacetylation av kromatin. Våre data tyder på at OSU-HDAC-44 var en HDAC hemmer og kan brukes som målrettet kreft narkotika for NSCLC kjemoterapi.
Resultater
OSU-HDAC-44 hemmer celledeling og viser synergieffekter med cisplatin uavhengig av p53 status
strukturen av OSU-HDAC-44 og Saha er vist i fig. 1A. Docking analyse viste at OSU-HDAC-44 samhandlet med den katalytiske domenet av HDAC 8, noe som tyder på direkte funksjon av OSU-HDAC-44 i målretting HDACs (Fig. 1B).
(A) Kjemisk struktur av OSU -HDAC-44 og Saha. (B) Molekylær docking analyse av OSU-HDAC-44 og Saha. Strukturene til OSU-HDAC-44 og Saha ble beregnet og docking-modus på katalytisk domene av HDAC8 ble spådd med docking program GOLD 4.0.1. (C) doseavhengig effekt av OSU-HDAC-44 (
venstre
) og Saha (
høyre
) på celle levedyktighet i IMR90, H1299, A549 og CL1-1 celler. Celler ble behandlet med 0,5-10 pM av OSU-HDAC-44 eller Saha i 48 timer, og cellelevedyktigheten ble bestemt ved trypan blå eksklusjon assay. (D) OSU-HDAC-44 synergized med cisplatin å undertrykke celleproliferasjon. Celler ble utsatt for cisplatin (cis) alene i 4 timer, OSU-HDAC-44 (HDAC-44) alene i 48 timer, eller forbehandlet med OSU-HDAC-44 i 48 timer før cisplatin behandling i 4 timer, og deretter medikament var trakk seg og cellene ble inkubert med stoff-fri media for ytterligere 48 timer. Cellelevedyktigheten ble bestemt ved trypan blå eksklusjon assay. CL1-1 celler ble behandlet med 4,4 mikrometer cisplatin eller 0,3 mikrometer OSU-HDAC-44. A549-celler ble behandlet med 1,6 uM cisplatin eller 0,2 uM OSU-HDAC-44. Data representerer gjennomsnitt ± SEM fra tre uavhengige forsøk. *
P
0,05; **
P
0,01; ***
P
. 0,001
hemming av cellevekst aktiviteter OSU-HDAC-44 ble vurdert i tre humane NSCLC-cellelinjer inkludert A549 (p53 villtype) , H1299 (p53 null), og CL1-1 (p53 mutant). Saha ble inkludert som en positiv kontroll HDAC hemmer. OSU-HDAC-44 betydelig hemmet celledeling i alle kreftcellelinjer til tross for sine forskjeller i p53 bakgrunn, og ikke føre til åpen cytotoksisitet til IMR90 celler, en normal lungecellelinje (Fig. 1C). OSU-HDAC-44 trykt celleviabilitet av A549 og CL1-1 celler med submicromolar IC
50 verdier (0,65 ± 0,08 og 0,67 ± 0,01 um, henholdsvis) og IC
50 Verdien av H1299 ble ekstrapolert til å være 1,14 ± 0,14 mikrometer. Spesielt, OSU-HDAC-44 utstilt 3-4 ganger mer potens enn Saha i kreft kapasitet (IC
50: A549, 1,90 ± 0,16; CL1-1, 2,85 ± 0,27, H1299, 4,87 ± 0,98 mm). I tillegg viser fig. 1D viste at OSU-HDAC-44 handlet i synergi med cisplatin for å forbedre celledød i CL1-1 og A549 celler, som var både cisplatin-resistente celler.
OSU-HDAC-44 induserer cytokinese hemming og apoptose
for å undersøke den underliggende mekanismen for cellevekst undertrykkelse av OSU-HDAC-44, effekten av OSU-HDAC-44 på cellecyklusprogresjonen ble vurdert av flowcytometri. Behandling med 2,5 uM OSU-HDAC-44 i 24 timer forårsaket A549 og H1299 celler for å akkumulere i G2 /M fase (4N-celler), og deretter ført til apoptose (sub-G1-celler) ved 48 timers behandling, mens eksponering for høyere konsentrasjon (5 uM) av Saha i 48 timer hadde lignende effekt (fig. 2A), som indikerer at OSU-HDAC-44 utøves en mer potent cellesyklus deregulering virkning enn gjorde Saha. For å undersøke de cellulære konsekvensene av OSU-HDAC-44-mediert opphopning av 4N celler, ble intervall mikroskopiske analyser utført. Som vist på fig. S1A, OSU-HDAC-44 forårsaket utseendet av den defekte spalting fure struktur, og de to dattercellene ble fusjonert sammen igjen, mens ubehandlede celler føres normalt gjennom celledeling. Concordantly, ble omtrent 20% celler behandlet med OSU-HDAC-44 akkumuleres som bi-kjernedannelse celler, sammenlignet med mindre enn 5% av kontrollceller (Fig. 2B og fig. S1B). OSU-HDAC-44 også forårsaket mikronuklei dannelse og forstyrret den normale strukturen i F-aktin av A549 og H1299 celler (Fig. 2B). Derfor er disse resultatene antydet at OSU-HDAC-44 kan føre til avvikende cytokinese og deretter ført til apoptose i lungecancerceller.
(A) Virkningen av OSU-HDAC-44 på cellesyklusfordelingen i A549 og H1299 celler. Celler ble behandlet med 2,5 uM OSU-HDAC-44 eller 5 uM Saha for angitte tider og vurderes ved strømningscytometri.
Venstre
, resultater fra en representant eksperimentet er vist.
Høyre
den gjennomsnittlige andelen av G2 /M og sub-G1 brøkdel befolkning er plottet i histogrammet. (B) BI-kjernedannet celler og feilregulering av F-aktin indusert av OSU-HSAC-44. Celler ble behandlet med 2,5 uM OSU-HDAC-44 i 48 timer, og deretter fiksert og farget med DAPI (DNA) og phalloidin (F-aktin). Asterisk pekte på bi-kjernen. Skala barer: 30 mikrometer. (C) OSU-HDAC-44 indusert nedbrytning av Aurora B og survivin via 26S proteasomet sti.
Øvre
, tidsavhengige reduksjoner i Aurora B og survivin proteinnivå etter 2,5 mikrometer OSU-HDAC-44 behandling.
USA
, A549-celler ble behandlet med 2,5 uM OSU-HDAC-44 i nærvær eller fravær av MG132 i 24 timer.
Nedre
, A549 celler ble behandlet med 2,5 mikrometer OSU-HDAC-44 for 24 timer og cellelysat ble utsatt for IP-analyse ved hjelp av anti-Aurora B eller anti-Survivin spesifikke antistoffer og utslettet med anti-ubiquitinering antistoff ( anti-Ub). (D) Caspase aktivitetsanalyse (
venstre) Hotell og Western blot analyser (
Høyre)
bekreftet at OSU-HDAC-44 indusert indre apoptose veien. Celler ble behandlet med 2,5 uM OSU-HDAC-44 for angitte ganger og utsatt for caspase aktivitetsanalysen og Western blot-analyser. Data representerer gjennomsnitt ± SEM fra tre uavhengige forsøk. *
P
0,05; **
P
. 0,01
For å identifisere molekylære mekanismen involvert i OSU-HDAC-44 indusert cytokinese hemming ble cellesyklus-regulatoriske proteiner undersøkt. Den svinging av mitotisk inhibitor Weel og mitotiske markører fosforylert histon H3 og cyclin B uttrykk indikerte at OSU-HDAC-44-behandlede cellene var i M fase etter 12 timer behandling og deretter gått ut M fase (Fig. S1C), akkompagnert med cytokinese defekt. Videre OSU-HDAC-44 forårsaket reduksjon i protein nivåer av Aurora B og Survivin (figur 2C;. Øvre), som er essensiell for utviklingen av mitose og cytokinese [15], [16]. Spesielt, OSU-HDAC-44 indusert ubiquitinering av Aurora B og Survivin, og cotreatment med proteosom inhibitor MG132 hindret OSU-HDAC-44-indusert nedbrytning av Aurora B og survivin (figur 2C,. Midtre og nedre). Deretter brukte vi nocodazol å synkronisere celler i pre-metafase og for ytterligere å bekrefte at OSU-HDAC-44 faktisk utløst unormal nedbrytning av Aurora B og survivin på mitotiske fasen. Som vist på fig. S1D og E, behandling med nocodazol i 24 timer forårsaket akkumuleringen i Aurora B og Survivin proteiner, mens kombinasjonen av OSU-HDAC-44 og nocodazol resulterte i minker Aurora B og Survivin proteinnivåer ved 24 timer etter behandling. Disse resultatene antydet at OSU-HDAC-44-mediert svikt i cytokinese kan delvis skyldes at nedregulering av Aurora B og Survivin proteiner via 26S proteasome sti.
OSU-HDAC-44 aktiverer den iboende apoptotiske sti
for ytterligere å belyse OSU-HDAC-44-indusert apoptose, utførte vi fosfatidylserin (PS) farging analyser for å påvise tidlig prosessen med apoptose. Som vist på fig. S2, OSU-HDAC-44 behandling i 24 timer øket intensiteten av PS farging i motsetning til lav fargeintensitet ved DMSO behandling i A549 og H1299 celler. I tillegg OSU-HDAC-44 behandling signifikant stimulert kaspase-3 og kaspase-9 (en indikator av den indre mitokondrie-veien) aktivitetene etter 24 timers behandling, mens aktiviteten av caspase-8 (en indikator på den ytre membranen reseptor-veien) forble upåvirket i A549 og H1299 celler (fig. 2D, venstre). Videre behandling med 2,5 uM OSU-HDAC-44 i 12 timer forårsaket en reduksjon i anti-apoptotiske protein Bcl-x
L, mens den økte den pro-apoptotiske protein, Bad, i løpet av 6-12 timer i behandling og A549 H1299 celler (fig. 2D, høyre). Frigjøringen av cytokrom c inn i cytosol ledsaget av spaltning av pro-kaspase-9 ble også observert etter OSU-HDAC-44 behandling i 24-48 timer. Disse resultatene ytterligere bekreftet at OSU-HDAC-44 kan indusere indre apoptotiske sti i lungekreftceller.
OSU-HDAC-44 induserer protein acetylering med sin evne til å målrette mange HDACs
biomarkører av HDAC hemming er acetylering av histoner og ikke-histonproteinene, og induksjon p21
Cip1 uttrykk i en p53-uavhengig måte [17], [18]. Eksponering til OSU-HDAC-44 induserte acetylering av histon H3, histon H4 og p53 på en doseavhengig måte (fig. 3A) og tidsavhengig måte (fig. 3B), samtidig som den ikke påvirker de HDAC1 og HDAC6 proteinnivåer (fig. 3B og fig. S3). Spesielt slike effekter var høyere sammenlignet med Saha. Til tross for p53 status, OSU-HDAC-indusert 44 ekspresjon av p21
Cip1 mRNA og protein i A549 og H1299-celler (fig. S4). For å undersøke målet spesifisitet OSU-HDAC-44 på klasse I, II og IV HDACs,
in vitro
HDAC hemming analysen ble utført. Som vist på fig. 3C, de deacetylase aktiviteter av forskjellig HDAC isotypes inkludert klasse I (HDAC1 og HDAC8), klasse II (HDAC4 og HDAC6) og klasse IV (HDAC11) ble betydelig hemmet av OSU-HDAC-44. Disse effektene var større sammenlignet med Saha, en kjent pan-HDAC-inhibitor. Disse resultatene antydet at OSU-HDAC-44 indusert protein acetylering ved å utøve bred hemmende aktivitet på en rekke HDACs.
doseavhengig effekt (A) og tidsavhengige effekter (B) av OSU-HDAC-44 på histone og ikke-histonproteinene. Ac-H3, acetylert histon H3; Ac-H4, acetylert histon H4; Ac-p53, acetylert p53; p53, total p53. (C) OSU-HDAC-44 trykkes aktiviteter i klasse I (HDAC1 og HDAC8), klasse II (HDAC4 og HDAC6) og klasse IV (HDAC11) HDACs. Forskjellige HDAC-isotyper ble immunopresipitert fra H1299 atom ekstrakt av spesifikke antistoffer, og deretter underkastet
in vitro
HDAC-inhiberingsanalysen som beskrevet i Materialer og Metoder seksjon. Data representerer gjennomsnitt ± SEM fra tre uavhengige forsøk. **
P
0,01; ***
P
. 0,001
OSU-HDAC-44 øker genuttrykk ved å løsne kromatinstruktur
For å finne de direkte virkningene av OSU- HDAC-44 på kromatinstruktur og genekspresjon, den kromatin-immunpresipitasjon (chip) -on-chip-analyse ble utført ved anvendelse av antistoff mot den løse kromatin mark, acetylert lysiner 9 og 14 av histon H3 (H3K9K14Ac), etter 2,5 uM OSU- HDAC-44 behandling i 2 timer i A549 og H1299 celler. Induksjon av histone acetylering i 33 felles gen loci av A549 og H1299 ble identifisert etter OSU-HDAC-44 behandling (tabell S1). Flere av disse 33 gener var blitt demonstrert å spille en viktig rolle i enkelte signalveier, for eksempel apoptose, oksidativt stress respons, axon veiledning og protein ubiquitinering baner (tabell 1). For å bekrefte microarray data, validert vi kromatinstruktur av noen av genet loci inkludert
srGAP1
,
NR4A1 Hotell og
FOXO4
av Chip-PCR hjelp av antistoff mot H3K9K14Ac. Som vist på fig. 4A, behandling med 2,5 mikrometer OSU-HDAC-44 i 2 timer økt mengden av
srGAP1
,
NR4A1 Hotell og
FOXO4
promoter DNA med løs kromatinstruktur sammenlignet med ubehandlet celler. Concordantly, mRNA nivåer av
srGAP1
,
NR4A1 Hotell og
FOXO4
ble økt etter OSU-HDAC-44 behandling i 24 timer (fig. 4B).
(A) Chromatin-immunoprecipitation-PCR-analyser bekreftet at behandling med 2,5 mikrometer OSU-HDAC-44 for to h indusert acetylering av histon H3 (H3K9K14Ac) i promoter-regionen i
srGAP1
,
NR4A1 Hotell og
FOXO4
gener. (B) OSU-HDAC-44 økte mRNA nivåer av
srGAP1
,
NR4A1 Hotell og
FOXO4
gener ved hjelp av real-time RT-PCR-analyser. Celler ble behandlet med 2,5 uM OSU-HDAC-44 i 24 timer, og total RNA ble ekstrahert for sanntids RT-PCR-analyser. Data representerer gjennomsnitt ± SEM fra tre uavhengige forsøk. *
P
0,05. (C) Immunpresipitasjon analysen indikerte at økt samhandling mellom srGAP1 og RhoA ble indusert av OSU-HDAC-44. A549-cellene ble behandlet eller ubehandlet med 2,5 uM OSU-HDAC-44 i 24 timer og underkastet IP-Western-analyser. (D) Si-srGAP1 avskaffet OSU-HDAC-44-indusert reduksjon i RhoA aktivitet (
øvre
) og reddet den normale strukturen i F-aktin etter OSU-HDAC-44 behandling (
lavere
). A549-celler transfektert med srGAP1 siRNA ble behandlet med 2,5 uM OSU-HDAC-44 i 24 timer og underkastet RhoA aktiveringstest og immunfluorescens analyser. Skala barer. 30 mikrometer
OSU-HDAC-44 nedregulerer F-aktin dynamikk via srGAP1 induksjon
OSU-HDAC-44 induserte behandlingen F-aktin aggregering (fig. 2B). Tidligere studie har indikert at srGAP1 binder seg til de aktive formene av RhoA og Cdc42 og hemmer deres aktiviteter i regulering aktin polymerisasjon i nevroner celler [19]. Men den biologiske funksjon av srGAP1 binding til RhoA fortsatt uklart i andre celler. Bruke immunoprecipitation (IP) -Western, viste vi at OSU-HDAC-44 økte samspillet mellom srGAP1 og RhoA i A549 lungekreft celler (fig. 4C). Interessant, knockdown av srGAP1 ikke bare avskaffet OSU-HDAC-44-formidlet reduksjon i RhoA-GTP nivå (fig. 4D, øvre), men også gjen dynamikken i F-aktin etter OSU-HDAC-44-behandling (fig. 4D , Nedre). Resultatene indikerte at OSU-HDAC-44 nedregulert RhoA aktivitet delvis via srGAP1 induksjon, som fører til ødeleggelse av normale F-aktin fibre.
OSU-HDAC-44 hemmer lunge svulst xenograft vekst
in vivo
for å vurdere antitumor aktivitet av OSU-HDAC-44, Bulb /c-null mus med A549 lunge svulst xenograft ytterligere ble injisert intraperitonealt med 7,5 til 30 mg /kg av OSU-HDAC-44, 3 dager /uke i tre uker. TSA på 0,5 mg /kg, noe som er blitt vist å oppvise antitumorvekstvirkningene i xenograft av bryst og blærecancerceller [20], [21], ble anvendt som en positiv kontroll medikament. Som vist på fig. 5A, behandling med 7,5, 15 og 30 mg /kg OSU-HDAC-44 signifikant inhiberte tumorvekst med 62%, 78% og 90%, henholdsvis, på dag 33 etter behandling sammenlignet med bærerkontroll. Behandling med OSU-HDAC-44 ikke negativt påvirker kroppsvekten og forårsaket ingen påvisbar toksisitet som undersøkt med hematoxylin og eosin farging av store organer (fig. 6A, B). Hematologiske biokjemi eksamen var i normalområdet for OSU-HDAC-44 behandlede dyr (Fig. 6C).
(A) mus med de etablerte A549 tumorer (-50 mm
3) ble injisert intraperitonealt med 7,5, 15 eller 30 mg /kg av OSU-HDAC-44 eller 1,5 mg /kg av TSA 3 dager /uke i tre uker. Åtte mus per gruppe ble brukt i eksperimentet xenograft. Tumorvolum hos mus ble målt. Poeng, mener; feilfelt, 95% konfidensintervall.
P
verdiene var for sammenligninger med kjøretøy kontroll (*
P
0,05; **
P
0,01; ***
P
0,001). (B-D) mus med etablert (ca. 100~200 mm
3) A549-tumorer ble injisert intraperitonealt med en enkelt dose av OSU-HDAC-44 ved 60 mg /kg. Etter behandling i den angitte tid, ble tumorer høstet og underkastet Western blot eller immunhistokjemi analyser. (B) Tumorer fra to representative mus av hvert tidspunkt (a-f) ble høstet og underkastet Western blot analyser med de angitte antistoffer. (C) immunhistokjemi analyser ble utført ved anvendelse av antistoff mot spaltet-formen av kaspase 3 (brunaktig farge). Original forstørrelse × 200. (D) Fluorescens immunhistokjemi analyser ble utført ved anvendelse av antistoff mot Aurora B og DAPI (DNA). Bildene (d-f og j-l, skala barer: 10 mikrometer) ble forstørret fra innrammet de (a-c og g-I, skala barer: 30 mikrometer).
(A) OSU-HDAC-44 behandlinger ikke føre til betydelig vekttap testede dyr. (B) H 0,05;
