Abstract
Innledning
Mange anti-angiogene midler er nå utviklet for å begrense tumorvekst og metastasering. Selv om disse stoffene gir håp for kreftpasienter, deres forbigående effekt på tumorvaskulatur vanskelig å vurdere i kliniske settinger. Konfokal laser endomicroscopy (CLE) er en roman endoskopisk bildeteknologi som gjør det mulig histologisk undersøkelse av mage-tarmslimhinnen. Målet med denne studien var å vurdere muligheten for å bruke CLE til bilde vaskulære nettverket i ferske biopsi av menneskelige kolorektal vev. For dette formålet har vi fotografert normale og maligne biopsi vevsprøver og sammenlignet de vaskulære nettverksparametre oppnådd med CLE med etablerte histopatologiske teknikker.
Materialer og metoder
Friske ikke-faste biopsiprøver av både normal og ondartet tykktarmsslimhinnen ble farget med fluorescerende merkede anti-CD31 antistoff og avbildes ved CLE bruke en dedikert endomicroscopy system. Tilsvarende biopsiprøver gikk immunhistokjemisk farging for CD31, vurdere microvessel tetthet (MVD) og vaskulære områder for sammenligning med CLE data, som ble målt pålogget bruker spesifikk programvare.
Resultater
Fartøyene ble fotografert av CLE i både normale og tumorprøver. Den midlere diameter av normale kar var 8,5 ± 0,9 um, mens det var i tumorprøver 13,5 ± 0,7 um (p = 0,0049). Vaskulær tetthet var 188,7 ± 24,9 fartøy /mm
2 i normalt vev vs. 242,4 ± 16,1 fartøy /mm
2 i kolorektal kreft prøver (p = 0,1201). I immunhistokjemi prøvene, MVD var 211,2 ± 42,9 /mm
2 og 351,3 ± 39,6 /mm
2 for normal og ondartet slimhinner, henholdsvis. Den vaskulære området var 2,9 ± 0,5% av total vev område for normal slimhinne og 8,5 ± 2,1% for primære kolorektal kreft vev.
Konklusjon
Selektiv avbildning av blodårer med CLE er gjennomførbart i normal og svulst kolorektal vev ved hjelp av fluorescensmerkede antistoffer rettet mot en endothelial markør. Metoden kan bli oversatt til klinisk setting for overvåking av anti-angiogen terapi
Citation. Cartañá T, Săftoiu A, Gruionu LG, Gheonea DI, Pirici D, Georgescu CV, et al. (2012) Confocal Laser Endomicroscopy for Morfometrisk Evaluering av microvessels i Human tykktarmskreft ved hjelp av målrettede Anti-CD31 antistoffer. PLoS ONE 7 (12): e52815. doi: 10,1371 /journal.pone.0052815
Redaktør: Anthony W.I. Lo, det kinesiske universitetet i Hong Kong, Hong Kong
mottatt: 10 september 2012; Godkjent: 21 november 2012; Publisert: 28.12.2012
Copyright: © 2012 Cartañá et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet fra forskningsstipend tittelen «klinisk og Biomathematical modellering av vaskulær endringer etter antiangiogen terapi i Advanced Colorectal Carcinoma», finansiert av National Research Council (CNCs), Romania, kontrakt nummer PN-II-ID-PCE-2011- 3-0664. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Anti-angiogen terapi har nylig hevet økende interesse på grunn av mulige konsekvenser knyttet til målrettet behandling og prognose lagdeling for en rekke solide svulster [1]. Likevel har framveksten av nye anti-angiogene midler i onkologisk klinisk praksis generert behovet for forbedret bilde metoder for evaluering av mikrovaskulær nettverk under behandlingen.
Angiogenese har tradisjonelt blitt evaluert ved å måle microvessel tetthet (MVD ) på faste vev immunofarget for en rekke av endoteliale markører, inkludert faktor VIII, CD31, CD34 [2] og tidligere studier har identifisert mikrovaskulær tetthet (MVD) som en potensiell prognose faktor for en rekke faste tumorer. CD31, også kjent som blodplate endotelceller adhesjonsmolekyl-1 (PECAM-1) er en pan-endotelial markør for både små og store fartøy [2]. Blant de mange funksjoner CD31 har også blitt knyttet til vekst og metastatisk spredning av tumorer, å være involvert i prosessen med angiogenese og vaskulær permeabilitet [3].
Likevel, ved hjelp av immunohistokjemi og MVD for å estimere angiogenese i sammenheng kliniske studier har brakt opp noen etiske og praktiske bekymringer knyttet til gjentatt høsting av biopsier fra pasienter [4]. Funksjonell avbildning av svulst vascularity er et lovende alternativ, men de fleste av de klinisk tilgjengelige bildeteknikker ikke har mikroskopisk oppløsning kreves for kliniske applikasjoner [5]. Nylig ble konfokal laser endomicroscopy (CLE) utviklet for sanntids
in vivo
histologisk analyse av tarmen slimhinnen. Høyoppløselige optiske seksjoner i horisontalplanet av målrettede vev skjerm cellulære og subcellulære detaljer under pågående endoskopi [6]. En rekke kliniske anvendelser av teknikken er allerede beskrevet i lesjoner i både den øvre og nedre fordøyelseskanalen, med spesiell interesse på neoplasi, hvor CLE genererer sanntids histologisk diagnose og målrettede biopsier av aktuelle områder for en høyere diagnostisk utbytte enn tilfeldig biopsier [7], [8], [9], [10], [11], [12]. I kolorektal lesjoner har CLE vist høy nøyaktighet i å oppdage intraepitelial neoplasi basert på mønsteret til vaskulære nettverket og krypten arkitektur [7].
Foreløpig godkjent kontrastmidler for kliniske endomicroscopy undersøkelser inkluderer fargestoffer med uspesifikke flekker egenskaper som fluorescein, acriflavin eller kresyl-fiolett [13]. Imidlertid har nyere studier blitt utført på dyremodeller og eksempler menneskelig vev ved hjelp av fluorescensmerkede antistoffer som mulig spesifikk endomicroscopic avbildning av epidermal vekstfaktor-reseptor (EGFR) og vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF) [14], [15], [16] . Ved å bruke fluoresceinisotiocyanat merkede antistoffer, CLE var i stand til å skille uttrykk nivåer av EGFR i murine xenografttumorer og lov æren av menneskelig neoplastiske og ikke-neoplastiske kolorektal vev basert på deres EGFR uttrykk mønstre [14]. Den samme gruppen viste at molekylær avbildning av VEGF er mulig i forskjellige gnagermodeller av gastrointestinale kreftformer. Forskjeller mellom den fluorescerende styrken av VEGF signal av normale og maligne humane vevsprøver ble også demonstrert [15]. Molekylær avbildning av EGFR og survivin, en apoptose hemmende protein, ble også oppnådd med sonden baserte CLE system i spiserøret og mageslimhinnen av svin modeller [16].
Formålet med studien var å evaluere gjennomførbarheten av CLE system for avbildning av det vaskulære nettverket av de humane kolorektale vevsprøver for både normal og ondartet slimhinne ved hjelp av fluorescerende merkede anti-CD31-antistoffer. Siden tiden er det ingen CD-31 markører som er godkjent for bruk på mennesker, har vi brukt CLE avbildningsteknikk på ferske ikke-faste menneskelige biopsiprøver farget med anti-CD31 antistoff for å teste hypotesen om at CLE systemet tilbyr riktig oppløsning for avbildning svulsten blodkar og samle vaskulære parametere som ligner på tiden aksepterte histopatologiske teknikker.
Materialer og metoder
pasienter
Den nåværende mulighetsstudie ble utført på endoskopiske biopsier hentet fra fire pasienter med avansert kolorektal adenokarsinomer, som ble diagnostisert under rutinemessig koloskopi prosedyrer. Pasientene ble utsatt for konvensjonell biopsitang prøvetaking av sammenkoblede deler av normal tykktarmsslimhinne (tatt minst 10 cm fra tumor) og av kolorektal masse. Studien ble godkjent av etikkomiteen ved University of Medicine og Pharmacy av Craiova. Alle pasienter gitt sitt skriftlig informert samtykke etter å ha mottatt et standardskjema for biopsi innsamling via koloskopi som uttalte at biopsiprøver ble videre analysert ved immunhistokjemiske teknikker og brukes til forskningsformål. Biopsier ble analysert i henhold til en felles flekker protokoll (nedenfor) for konvensjonell histopatologi undersøkelse og ved CLE undersøkelser etter farging med spesifikke antistoffer.
CLE Farging Protocol
En paret prøve av friske mennesker biopsi av om 2-3 mm i diameter ble høstet i løpet av lavere endoskopiske prosedyrer fra både normale og neoplastiske tykktarmsslimhinne fra hver pasient og neddykket i fysiologisk saltvann. De friske biopsier ble inkubert i mørket med et monoklonalt mus antistoff (IgG1, klone MEM-05, 1:10 fortynning) rettet mot humant CD31 /PECAM-en (Exbio, Praha, Tsjekkia) og merket med Alexa-Fluor 488 for 1 time ved 37 ° C, og skylles med fysiologisk saltløsning for å fjerne eventuelt ubundet reagens. Prøvene ble plassert på objektglass og umiddelbart avbildes ved CLE for vaskulære strukturer. For å optimalisere teknikk, forskjellige antistoff fortynninger på 1% bovint serumalbumin i PBS (BSA, Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA), som strekker seg 01:05 til 01:30, ble tidligere testet på friske, ikke- faste vevsprøver og avbildes med en automatisert fluorescens mikroskop (Nikon 90i, Tokyo, Japan). En tidsramme på ca 60 minutter som tillater binding av antistoffer mot sine mål og prøve bildebehandling uten vev degradering ble også etablert.
CLE Imaging
I denne studien brukte vi CLE system som integrerer en miniatyr konfokalt mikroskop inn i den distale enden av et konvensjonelt fleksibelt endoskop (EC-3870 CIFK, Pentax, Tokyo, Japan). Den confocal objektivet ved den distale spissen er litt avansert utenfor endoskop, slik målrettet skanning av strukturene. Under skanning, leverer laser en eksitasjonsbølgelengde på 488 nm med en maksimal lasereffekt på ≤1 mW på overflaten av vevet som blir styrt av brukeren i løpet av undersøkelsen for optimal avbildning kontrast. Den maksimale dybde av avbildning er 250 pm fra overflaten av slimhinnen. De resulterende optiske seksjoner har en lateral oppløsning av 0,7 um for et 7 mikrometer tykk skive (z-aksen) og et synsfelt på 475 x 475 um.
endomicroscope ble montert på en fast ramme og biopsier ble plassert på histologi glass, i direkte og milde kontakt med den distale spissen av konfokal laser endomicroscope. Bildene ble tatt ved å trykke på en pedal pedal og ble digitalt lagret på harddisken systemets som gråtonebilder (150-250 for hver biopsi prøve) for senere nedlasting og behandling.
Vaskulær Network Målinger
Vi analyserte CLE bilder ved hjelp av Image J (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA). Fem bilder med sterkest fluorescente signalet og en god fremvisning av vaskulære nettverket ble valgt ut fra hver vevsprøve for analyse av vaskulære strukturer. For en mer klart skille av skipene, ble en farge overlegg lagt for å matche den fluorescerende kontrastmiddel (figur 1). Den rette linje verktøyet ble anvendt for å måle diameteren til hver vaskulær segment mellom enten to forgreningspunkter eller et forgreningspunkt og en løs ende manuelt. Hver vaskulær segment ble merket og regnet for vaskulær tetthet. Resultatene ble eksportert i et Excel-fil, og rapportert som gjennomsnitt ± standardfeil (SE) for hvert utvalgt bilde og enkelt tilfelle. Målingene for diameter og vaskulær tetthet ble utført uavhengig av to ulike aktører som var blindet for hverandres funn og til patologi rapporten. Resultatene ble rapportert som gjennomsnittet av de to målinger
I den normale slimhinne, blir skipene arrangert i et heksagonalt nettverk (A).; tilsvarende område i svulsten viser mer utvidet, uregelmessig formet fartøy, med varierende diametre langs sin lengde (B); de samme optiske delene er vist med ekstra farge overlegg (C, D). * Scale bar er 50 mikrometer.
Konvensjonell immunhistokjemisk farging
Korrespondent biopsiprøver fra kolorektal tumorer ble plassert i 4% nøytral bufret formalin for fiksering og parafin innebygging. Konvensjonell patologi diagnosen ble basert på H E flekker, mens immunhistokjemisk farging av profiler for CD31 ble gjort i henhold til produsentens angivelser (Dako, Glostrup, Danmark). I korthet, etter sitratbuffer-mediert antigen gjenfinning ble snittene avkjølt til romtemperatur og inkubert i 30 minutter i 1% hydrogenperoksyd. Snittene ble deretter vasket i PBS, etterfulgt av et blokkeringstrinn på 30 minutter i 1% skummet melk. Den anti-CD31 primære antistoff (IgG1, klon JC70A, muse-anti-human, Dako, Glostrup, Danmark) ble tilsatt fortynnet som 1:100, og objektglassene ble inkubert over natten ved 4 ° C. Neste dag, ble objektglassene vasket, ble det signalet som forsterkes ved bruk av en peroksydase-EnVision polymerbaserte artsspesifikt sekundært deteksjonssystem (Dako, Glostrup, Danmark), og deretter påvist med 3,3′-diaminobenzidin (DAB, Dako, Glostrup , Danmark). Alle vasketrinn ble utført i 0,1 M PBS, pH 7,2, og det primære antistoff ble fortynnet i PBS med 1% BSA. Alle inkubasjonstider ble holdt konstant for alle skinnene som inngår i den foreliggende undersøkelsen. Til slutt ble lysbildene coversliped etter Hematoxylin farging.
microvessel Density (MVD) Måling
Alle mikroskopisk bildeanalyse ble utført med et Nikon Eclipse 55i mikroskop koblet til en 5 Mp farge CCD-kamera ( Nikon, Tokyo, Japan) og et bilde-analyse stasjon basert på bilde ProPlus AMS7 programvare (Media Cybernetics, Bethesda, Maryland, USA). For å kunne vurdere MVDS på CD-31 farget tumor og korresponderende seksjoner ikke-svulstvev ble hotspot metode anvendt som beskrevet [17]. I svulstvev, operatør brukte 10x og 20x mål å identifisere de «hot-spots», dvs. de områdene med høyest vaskulær tetthet. I disse områdene er tre til fire tilfeldige Bildene ble tatt under 40x objektiv. I normalt vev tre til fire tilfeldige bildene ble tatt under 40x objektiv, med unntak av områder rik på ikke-slimhinne /betennelsesceller.
De vaskulære relaterte CD31 flekker områder (område av interesse, ROI) ble markert direkte på bildene ved to uavhengige operatører og inngår fartøy med en identifiserbar lumen, så vel som enkelt eller klynger av ikke-luminal endotelceller. Inflammatoriske celler tar opp flekken (dvs. plasmocytes) og røde blodceller med ingen farging rundt dem ble ekskludert. En makro kommando i Image ProPlus ble utviklet for å telle antall og måle ROI områder i hvert bilde, og dataene ble rapportert i en Excel-fil som henholdsvis MVD og vaskulær område,. Til sammenligning med andre publiserte data, både CLE fartøy tetthet og MVD bestemt fra immunhistokjemi ble normalisert til en mm
2 område.
Statistical Analysis
Statistisk analyse ble utført i Microsoft Office Excel® (Microsoft, Redmond, Washington, USA). Resultatene ble uttrykt som gjennomsnitt ± SE av gjennomsnittet. For morfometrisk evalueringen ble sammenlikning mellom normal og tumor blodkar. For å finne ut betydningen av forskjellene mellom de vaskulære målinger, ble en to-tailed t-test utført med statistisk signifikans oppnås ved ap verdi. 0,05
Resultater
Mikrovaskulær CLE Patterns
En spesiell fluorescerende signal ble identifisert med CLE omfang i alle biopsier i normale og neoplastiske vevsprøver. Fartøyene i normale biopsier dannes et sekskantet mønster med homogen fordeling av diametere som er karakteristiske for en normal slimhinne som skissert ved den selektive CD31-farging (figur 1A og 1C). I tumorprøver skipene dukket utvidet og uregelmessig form i forhold til normal slimhinne, med variabel diameter langs sin lengde (figur 1B og 1D).
Morfometrisk Analyse av microvessels
Skip ble talt og deres diameter målt mellom to vaskulære kryss, for hele synsfeltet (figur 2). Den gjennomsnittlige kardiameteren i tumorprøver var 13,5 ± 0,7 um, betydelig høyere enn den kardiameteren i normal tykktarmsslimhinne (8,5 ± 0,9 um, p = 0,0049). Den vaskulære tetthet var 242,4 ± 16,1 fartøy /mm
2 i tumor vevsprøver og 188,7 ± 24,9 fartøy /mm
2 i normalt vev (p = 0,1201).
En kar ble talt og dens diameter ble målt for hver vaskulær segment mellom to forgreninger punkter eller et forgreningspunkt og en løs ende. Vaskulær tetthet ble rapportert per mm
2. Både fartøyet diameter og vaskulær tetthet ble øket i tumorvevet (B) sammenlignet med normal slimhinne (A). * Scale bar er 50 mikrometer.
Immunohistochemistry
Tilsvar biopsier fra nærliggende vev til CLE biopsier var forberedt for immunhistokjemisk undersøkelse med en anti-CD31 antistoff i både normale og kolorektal kreft prøver . I normal slimhinne, MVD var 211,2 ± 42,9 mens i ondartet vev var det 351,3 ± 39,6 /mm
2 (p = 0,0637). Det vaskulære området, beregnet som prosentandelen av ROI over hele bildeområdet, var høyere i tumorprøver (8,5 ± 2,1%) i forhold til den normale tykktarms vev (2,9 ± 0,5%), p = 0,0735 (figur 3). Oppsummeringen av de vaskulære parametre målt i den primære kolorektal kreft og den tilsvarende normal slimhinne, fra immunhistokjemi og CLE prøver, er presentert i tabell 1.
Bright felt bilder av formalinfiksert og parafininnebygd biopsier av normal og primær kolonkreft farget for CD31 som viser: blodkar regelmessig fordelt mellom de intestinale kjertler i normal tykktarmsslimhinne (A); flere uregelmessig fartøy i intratumoral stroma, i ondartede prøver (b); de samme bildene med vaskulære områder merket for automatisert telling (C, D). * Scale bar er 50 mikrometer.
Diskusjoner
Siden den første hypotese av den rollen angiogenese i tumorprogresjon formulert av Juda Folkman fire tiår siden [18], vår grunnleggende forståelse av denne prosessen har avansert og flere anti-angiogene narkotika er enten nå i klinisk bruk eller under klinisk undersøkelse [4]. Likevel er det fortsatt mange bekymringer knyttet til valg av optimal dosering og timing, prediksjon og overvåking av pasienters respons som begrenser bruken av anti-angiogen terapi for kreftpasienter. I denne studien har vi brukt en CLE endoskop til bilde vaskulære mønster fra ferske biopsier av normal og ondartet kolorektal vev og sammenlignet resultatene med tradisjonelle histopatologiske teknikker.
Så vidt vi vet, er dette den første rapporten om histologisk avbildning av fartøy oppnådd med CLE ved anvendelse av fluorescensmerkede antistoffer som er rettet mot en endotelial markør (CD31). Denne metoden genererer lignende resultater som den tradisjonelle immunhistokjemi, men på fersk ikke-fast vev. Således er enhver behandling gjenstand av biopsiene unngås og avbildning av vev blir utført i sin naturlige tilstand i løpet av en kort tid etter biopsi samling som i betydelig grad påskynder diagnose prosessen. Vi har valgt som et molekylært mål en pan-endotelial markør for merking av både normale og tumorblodkarene for å oppnå en differensial morfometrisk evaluering. Ved visuell undersøkelse, viste confocal optiske seksjoner forskjeller mellom de vaskulære mønstre av normal og tumorvevet. De ondartede blodkarene så mer dilatert og buktet i forhold til den vanlige utseende av de normale kar. Det er et kjent faktum at tumorblodkarene er uvanlig i deres struktur og funksjon. Dette ble også vist av tidligere CLE klassifiseringer av neoplasi etter intravenøs administrering av fluorescein [7], [19]. Men dette uspesifikke kontrastmiddel har en tendens til å diffundere inn i overdrevet det interstitiale rom som følge av øket permeabilitet av de patologiske fartøy. Som et resultat vaskulære grenser er skjult og deres kvantitative vurderinger blir en utfordring. I den foreliggende tilnærmingen, har selektiv farging av fartøyer med en endothelial markør vinne denne ulempen.
Med tradisjonelle immunhistokjemisk farging protokoller vevet er vanligvis delt i 4 mikrometer tykke skiver som fanger bare crossections av blodkar i forskjellige vinkler. Den foreslåtte CLE avbildningsmetode tillater visning av hele vaskulære segmenter i det samme bildet. Vi var dermed i stand til å utføre en morfometrisk analyse på de optiske confocal seksjoner som kom for å validere de kvalitative forskjeller allerede nevnt mellom de to vaskulære senger. Vi fant ut at svulsten blodkar har en betydelig større gjennomsnittlig diameter enn normale blodårer (13,5 mikrometer
vs.
8,5 mikrometer, p = 0,0049). I vevsprøver fra kolorektal kreft regioner, var det en 28,5% økning i vaskulær tetthet i forhold til normal slimhinne (242,4
vs
. 188.7 fartøy /mm
2). Bare én parameter (fartøy diameter) nådde statistisk signifikans i vår studie. Dette kan forklares ved den lille antall prøver er inkludert i analysen. Fremtidige studier på et større pasientprøve for å bekrefte funnene utover dagens proof of concept studie.
De vaskulære parametrene oppnådd med CLE er sammenlignbare med de tradisjonelle metodene og publisert litteratur [20], [21] [22]. De CLE resultatene ble validert av en klassisk immunhistokjemisk teknikk som avslørte et positivt signal for CD31 i både kontroll og ondartede prøver. Det var en lignende trend for økt MVD og vaskulær område i prøvene fra den primære kolorektal kreft sammenlignet med normal slimhinne. Tidligere rapportert resultater på menneskers tykktarms vaskulær morfometri varierer mellom ulike studier på grunn av forskjeller i metodikk og behandlingsteknikker [20], [21] men samlet er enig med våre resultater. I en studie av den normale tarmmikrosirkulasjonen på korrosjon avstøpning en diameter på 10 mikrometer ble rapportert for precapillary arterioler i slimete plexus [22]. Ved immunhistokjemisk farging for CD34, også en pan-endotelial markør, den midlere diameter for vaskulære normal tykktarmsslimhinne var 7,6 ± 1,5 um [21].
Vårt bevis på konseptet funn demonstrerer gjennomførbarheten av teknikken og kunne legge grunnen for videre forskning. Selv om denne studien brukte en pan-endotelial markør, kan fremtidige lignende studier rettet mot andre markører for prolifererende endotelet, som VEGFR2, som er relevant for tumorindusert angiogenese. Den korte tidsrammen (en time mellom samle biopsi og bildebehandling CD31 merket vev med CLE) og bruk av en standard farging protokoll for ferske biopsi prøver muliggjør en målrettet CLE teknikken kompatibel med klinisk setting, forutsatt at utstyret er tilgjengelig.
Våre nåværende resultater og tidligere rapporter om lignende tilnærminger tyder på at CLE har potensial for bildebehandling neovascularization
in situ
under live-prosedyrer. Siden anti-angiogene stoffer har en tendens til å normalisere tumorvaskulatur for en kort tidsperiode på flere dager til noen få uker, er det ønskelig å finne en måte å overvåke den vaskulære nettverket remodellering i løpet av denne muligheten, da tumoren blir også mer mottakelig for kjemoterapi og /eller strålebehandling [23]. CLE, alene eller i kombinasjon med andre molekylære og cellulære biomarkører, kunne brukes til dette spesielle formål, ventende på oppdagelsen av nye målrettede kontrastmidler. Som nevnt, siste rapportene viser gode foreløpige data med fluorescensmerkede antistoffer rettet mot EGFR eller VEGF, noe som tyder på muligheten for slike immunoendoscopy tilnærminger. Likevel, utvikling av menneskelig bruk målrettet pan-endoteliale markører slike som fluorescensmerkede anti-CD31-antistoffer kan representere en gyldig sanntid alternativ til den konvensjonelle MVD analyse av faste biopsiprøver.
I konklusjonen, vi viste at selektiv avbildning av blodkar er mulig med CLE ved hjelp av fluorescensmerkede antistoffer rettet mot en bestemt endothelial markør i friske biopsier. Offline morfometrisk analyse av confocal bilder med ekstra prosessering programvare viste signifikant forskjellige mønstre mellom normale og maligne vaskulære nettverk. I fremtiden denne tilnærmingen kan brukes for et bedre utvalg av pasienter for kliniske forsøk og en mer fornuftig overvåkning av de vaskulære virkninger av anti-angiogene midler i individuelt tilpassede terapier.
