Abstract
Bakgrunn
KRAS
mutasjoner i kolorektal kreft primære svulster forutse motstand mot anti-epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR) monoklonale antistoffer hos pasienter med metastatisk kolorektal kreft, og dermed representere en sann indikator på EGFR pathway aktiveringsstatusen.
metodikk /hovedfunnene
KRAS
mutasjoner ble retrospektivt undersøkt ved hjelp av polymerase kjedereaksjoner og påfølgende sekvensering av kodoner 12 og 13 (ekson 2) i 110 pasienter med metastatisk kolorektal tumorer. Disse studiene ble utført ved anvendelse av vevsprøver fra både primærtumor og de tilhørende metastaser (93 lever, 84%, 17 lunge, 16%). Alle pasientene fikk adjuvant 5-Fluorouracil-baserte polychemotherapy etter reseksjon av metastaser. Ingen fikk anti-EGFR terapi. Mutasjoner i
KRAS
ble observert i 37 (34%) av primære tumorer og i 40 (36%) av beslektede metastaser, noe som ga et 94% nivå av samstemmighet (kappa indeks 0,86). Pasienter med primære svulster i besittelse av
KRAS
mutasjoner hadde en kortere sykdomsfri overlevelse perioden etter metastase reseksjon (12,0 vs 18,0 måneder; P = 0,035) enn de som ikke gjorde det. En høyere andel av
KRAS
mutasjoner ble oppdaget i primære svulster i patiens med lungemetastaser enn hos pasienter med levermetastaser (59% vs. 32%, p = 0,054). For ytterligere å evaluere dette funnet vi analysert 120 flere pasienter med inoperabel metastatisk kolorektalcancer som tidligere hadde sine primære svulster evaluert for
KRAS
mutasjonsstatus for kliniske formål. Separat, analysen av disse 120 pasienter viste en tendens mot en høyere grad av
KRAS
mutasjoner i primære svulster hos pasienter med lungemetastaser, selv om det nådde ikke statistisk signifikans. Til sammen gruppen av 230 pasienter viste at
KRAS
ble mutert signifikant oftere i primærsvulster hos pasienter med lungemetastaser (57% vs. 35%, p = 0,006).
Konklusjoner /betydning
Våre resultater tyder på en rolle for
KRAS
mutasjoner i tilbøyelighet til primære kolorektal tumorer å metastasere til lungene
Citation. Cejas P, López-Gómez M, Aguayo C, Madero R, de Castro Carpeño J, Belda-Iniesta C, et al. (2009)
KRAS
Mutasjoner i Primær Colorectal Cancer Svulster og relaterte metastaser: en potensiell rolle i Prediksjon av Lung Metastase. PLoS ONE 4 (12): e8199. doi: 10,1371 /journal.pone.0008199
Redaktør: Alfons Navarro, Universitetet i Barcelona, Spania
mottatt: 01.09.2009; Publisert: 18.12.2009
Copyright: © 2009 Cejas et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet mottatt stipend støtte fra Amgen, Red Tematica de INVESTIGACION Cooperativa en kreft (RTICC, RD06-0020-1022), Fundación Mutua Madrileña og fra Fundación para la INVESTIGACION BIOMEDICA del Hospital Universitario La Paz (FIBHULP), Madrid, Spania. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
tykktarms~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP (CRC) er en av de vanligste kreftformen, og en av de viktigste årsakene til kreft-relaterte dødsfall i utviklede land [1]. Fjernmetastaser er den viktigste dødsårsaken i CRC pasienter. Avhengig av fasen av den primære tumor, levermetastaser forekomme i 20% til 70% av pasientene, og lungemetastaser i 10% til 20% av pasientene [2]. Kirurgisk reseksjon er fortsatt den eneste potensielt kurative alternativ for pasienter med metastatisk CRC. Imidlertid er kurativ reseksjon mulig på mindre enn 25% av pasienter med stadium IV sykdom [3], og mindre enn 5% av pasienter med inoperabel metastatisk CRC er i live etter 5 år. Store anstrengelser blir gjort for å bedre prognosen for pasienter med metastatisk CRC, særlig i utviklingen av nye terapeutiske strategier. Den epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR) signalveien er blitt et sentralt mål for terapeutisk intervensjon fordi to monoklonale antistoffer rettet mot EGFR har blitt viktige verktøy i behandling av avansert sykdom: cetuximab og panitumumab [4], [5]. EGFR aktiverer proliferative og antiapoptotic signalveier, slik som den fosfatidylinositol-3′-kinase /Akt og Ras /Raf /mitogen-aktivert proteinkinase (MAPK) trasé [6]. Avvikende aktivering av EGFR reaksjonsveien i CRC kan forårsakes av enten EGFR overekspresjon eller mutasjons aktivering av nedstrøms elementer av EGFR pathway [7].
KRAS
er et lite GTP-bindende protein som transduces signaler fra aktiverte reseptorer på celleoverflaten til kjernen. Konstitutiv
KRAS
aktivering av punktmutasjoner i kodon 12 og 13 i exon 2 er blitt beskrevet som en viktig årsak til EGFR veien overaktivering [7], [8]. Forekomsten av
KRAS
mutasjoner i kolorektal tumorer varierer fra 35% til 45% [9], og
KRAS
mutasjoner synes å oppstå tidlig i kreftutvikling [10]. Følgelig, en høy grad av samsvar i
KRAS
mutasjonsstatus mellom primærsvulster og tilhørende levermetastaser har blitt rapportert [11], [12]. Nyere data har vist en sammenheng mellom
KRAS
mutasjonsstatus i primærtumor og motstand mot cetuximab og panitumumab hos pasienter med metastatisk CRC [13], [14]. Men KRAS
mutasjonsstatus og prognose er sammenhengen mellom
kontroversielt for pasienter med metastatisk CRC som ikke har blitt behandlet med anti-EGFR antistoffer, med noen studier rapporterer en kobling mellom
KRAS
mutasjoner og dårlig prognose [15] og noen rapportering ingen sammenheng [12]. Interessant, den største multisenterstudie utført på sammenhengen mellom
KRAS
mutasjon og prognose, som omfattet 3439 CRC pasienter, viste at tilstedeværelsen av en glycin-til-valin mutasjon ved kodon 12
KRAS
betydelig redusert progresjon og total overlevelse uavhengig av behandling mottatt [16].
Vi har søkt å belyse sammenhengen mellom
KRAS
mutasjonsstatus, clinicopathologic faktorer, prognose, metastase mønster og samsvar mellom den primære svulsten og matchet metastaser hos pasienter med metastatisk CRC.
Resultater
Pasient Kjennetegn
Vi retrospektivt analysert prøver fra 110 primærsvulster og 110 tilsvarende metastaser for tilstedeværelsen av
KRAS
mutasjoner i kodon 12 og 13. den vanligste metastatisk stedet var leveren, som var den metastatisk nettstedet i 93 prøver (84%). Lungen ble det metastatiske området i de resterende 17 prøver (16%). Metastaser dukket synkront med primær lesjon i 57 saker og metachronously i 53 tilfeller. Den primære svulst stedet var tykktarmen i 79 pasienter og endetarmen i 31 pasienter. Pasientgruppen inkludert 32 kvinner og 78 menn. Median alder var 64 år (29-86). Alle kreftformer var adenokarsinomer og ble gradert i henhold til WHO-kriterier (tabell 1).
KRAS
Mutasjoner og Histopatologisk Parametere
Mutasjoner i
KRAS
ble påvist hos 37 (34%) primære svulster og i 40 (36%) knyttet metastatiske lesjoner, med en 94% grad av samsvar mellom primære og metastatiske prøver (kappa indeks 0,86). Disharmoni ble observert hos 7 pasienter. Fem pasienter hadde
KRAS
mutasjoner i metastaser (fire med levermetastaser og ett med lungemetastaser) og villtype
KRAS
i primærtumor, mens de to andre pasientene hadde
KRAS
mutasjoner bare i primærtumor (1 med levermetastaser og 1 med lungemetastaser)
det var lite variasjon mellom mutasjon typen stede i primærtumor og dens metastaser. alle unntatt fire pasienter hadde samme mutasjon i både primær- og metastatiske prøvene. De typer mutasjoner er oppsummert i tabell 2. Det var ingen sammenheng mellom type mutasjoner og eventuelle clinicopathological parameter.
Ingen sammenheng mellom
KRAS
mutasjoner og histopatologiske egenskaper ble observert ( Tabell 3).
KRAS
Mutasjoner og prognose
Våre resultater viser lavere forekomst av sykdomsfri overlevelse etter metastase reseksjon hos pasienter med tumorer hadde en
KRAS
punktmutasjon i primærtumor; median sykdomsfri overlevelse var 12 måneder hos pasienter med
KRAS
mutasjoner i sine svulster og 18 måneder i de uten
KRAS
mutasjoner (p = 0,035) (figur 1). Den multivariate analysen viste at den viktigste uavhengige prediktor for sykdomsfri overlevelse var
KRAS
mutasjonsstatus (multivariat HR = 2,068; 95% CI, 1,136 til 3,766, P = 0,018) (tabell 4). Ingen sammenheng ble funnet mellom total overlevelse og
KRAS
mutasjonsstatus (figur 1).
Kurver for sykdomsfri overlevelse (A) og total overlevelse (B) i henhold til
KRAS
status.
KRAS
Mutasjoner og metastatisk Side
mutert
KRAS
ble oppdaget i en høyere andel av primære svulster av pasientene normalisering med lungemetastaser enn i de med levermetastaser (59% vs. 32%, p = 0,054). Når stratifisert etter opprinnelsen av primærtumor (kolorektalcancer), av de 10
KRAS
-mutated primære svulster hos pasienter med lungemetastaser, 7 var colonic opprinnelse (70%), mens de andre 3 oppsto i rektum (30%). Statistisk analyse viste at colonic primære svulster hos pasienter med lungemetastaser var signifikant mer sannsynlig å ha
KRAS
mutasjoner enn colonic primære svulster hos pasienter med levermetastaser (P = 0,046), mens endetarms primær hadde en lignende frekvens på
KRAS
mutasjoner hos pasienter med lunge eller levermetastaser (tabell 5). For ytterligere å undersøke tilstedeværelsen av
KRAS
mutasjoner som en prediktor for lungemetastaser, vi også undersøkt en serie på 120 pasienter med inoperabel metastatisk CRC. Den primære svulster i disse pasientene hadde blitt analysert for forekomst av
KRAS
mutasjoner ved et sentralt laboratorium før cetuximab administrasjon. Av de 120 metastatiske pasienter, 86 hadde levermetastaser og 34 hadde lungemetastaser. I tillegg var det en tendens til en høyere andel av
KRAS
mutasjoner i primære svulster hos pasienter med lungemetastaser enn i de med levermetastaser, selv om det ikke statistisk signifikant (56% vs 38%; P = 0,1027). Når vi analyserte hele serien av 230 pasienter, hyppigheten av
KRAS
mutasjoner i de primære tumorer i pasienter med lungemetastaser var signifikant høyere sammenlignet med levermetastaser (57% vs 35%; p = 0,006). Når pasienter ble fordelt etter primærtumor opprinnelse, bare pasienter med tykktarmsprimærtumor opprinnelse viste en signifikant høyere frekvens av
KRAS
mutasjoner i primære svulster hos pasienter med lungemetastaser sammenlignet med de med levermetastaser (59% vs 34 %;. P = 0,019) (Tabell 6)
Diskusjoner
prognosen for pasienter med metastatisk CRC har bedret seg siden introduksjonen av nye terapeutiske midler som anti- EGFR-antistoffer [17]. Dette terapeutiske suksess fremhever viktigheten av å motvirke EGFR vei til å kontrollere avansert sykdom. Avvikende aktivering av EGFR veien skjer noen ganger av mutasjons aktivering av
KRAS
. Nyere kliniske studier har vist at tilstedeværelsen av aktiverende mutasjoner i
KRAS
identifiserer pasienter som ikke responderte til cetuximab [13] eller panitumumab [14]. Faktisk, basert på disse resultatene, mutasjonsanalyse av
KRAS
er nå anbefalt av US Food and Drug Administration (FDA) før cetuximab eller panitumumab administrasjon til pasienter med metastatisk CRC. Mutasjonsanalyse av
KRAS
vanligvis utføres på den primære svulsten fordi det ofte er den eneste tilgjengelige vev. Videre er verdien av å utføre denne analysen på primærtumor videre støttet av bevis for at
KRAS
punktmutasjoner oppstår tidlig i CRC kreftutvikling [10]. Imidlertid har nyere data viste en økt frekvens av mutasjoner i lymfeknutemetastaser sammenlignet med tilhørende primærsvulster [18]. Med dette i bakhodet, det potensielle behovet for rebiopsy og analyse av
KRAS
i metastaser har blitt foreslått [9]. Andre nyere studier har rapportert en høy grad av samsvar i
KRAS
mutasjonsstatus mellom primærsvulster og tilhørende levermetastaser [11], [12], [19]. Resultatene fra vår serie av 110 pasienter er helt enige med disse rapportene, både i hyppighet av
KRAS
mutasjoner i primære svulster, som var 34% i vår studie, og i stor grad av samsvar mellom primær svulster og tilhørende metastaser. Alle disse funnene bekrefter at analyse av
KRAS
mutasjonsstatus i den primære svulsten er en tilstrekkelig surrogatmarkør for
KRAS
mutasjonsstatus i metastaser. Vår studie omfatter en analyse av både lever og lungemetastaser. Så vidt vi vet, er dette den første studien å analysere primære kolorektal tumorer og deres relaterte lungemetastaser og korrelert
KRAS
mutasjonsstatus basert på både clinicopathological funksjoner og overlevelsesdata. Leveren og lungene er både felles områder av CRC metastaser. Sekundært til deres respektive anatomisk blodåre distribusjon, lungemetastaser er mer vanlig med rektal kreft og levermetastaser er hyppigere med tykktarm kreft. Men noen tykktarmskreftpasienter opplever lungemetastaser uten bevis av tidligere levermetastaser. Dette uforklarlig anatomisk mønster av metastaser, observert med økende frekvens på grunn av mer nøyaktige diagnoser basert på høyeffektive CT [20], antyder en særegen biologisk mekanisme for kreftutvikling eller en spesiell mottakelighet for lungeparenkym til svulster hos disse pasientene. Våre resultater viser en høyere prosentandel av
KRAS
mutasjoner i primære svulster hos pasienter med lungemetastaser sammenlignet med de med levermetastaser (59% vs. 32%). Dessuten, når vi stratifisert våre resultater basert på primærtumorlokalisering, bare svulster i kolon opprinnelse hadde en signifikant høyere frekvens av
KRAS
mutasjoner i primære svulster hos pasienter med lungemetastaser. I motsetning endetarms primære svulster viste en tilsvarende frekvens av
KRAS
mutasjoner hos pasienter med lungemetastaser enn i de med levermetastaser. For ytterligere å analysere disse funnene vi studerte en uavhengig serie primære svulster fra pasienter med inoperabel metastatisk CRC og undersøkt forholdet mellom
KRAS
mutasjonsstatus i den primære svulsten og området av tumormetastaser. Hos disse pasientene
KRAS
mutasjonsstatus i den primære svulsten ble tidligere analysert for kliniske formål før cetuximab administrasjon. Statistisk analyse av hele serien (230 pasienter) viste at
KRAS
blir oftere mutert i den primære tumorer i pasienter med lungemetastaser sammenlignet med pasienter med levermetastaser (57% vs 35%, P = 0,006). Når resultatene er stratifisert ifølge nettstedet av primærtumor, analysen vi utførte inkludert alle 230 pasienter bekreftet resultatene vi oppnådde med mindre utvalg av 110 pasienter: at betydelig økt hyppighet av
KRAS
mutasjoner i primære svulster hos pasienter med lungemetastaser ble begrenset til de primære svulster som oppsto i tykktarmen. Dette funnet tyder på at EGFR pathway aktivering kan tillate colonic kreftceller å hekke fortrinnsvis i lungeparenkym unngå et første skritt av levermetastaser. En tidligere studie som evaluerte
KRAS
status i primære kolorektal tumorer og ikke-matchet lever- og lungemetastaser viste samstemmige resultater med vår studie og avslørte en høyere forekomst av
KRAS
mutasjoner i lungemetastaser enn i levermetastaser (57% vs 50%) [21]. Men i denne undersøkelsen, en stor forskjell i
KRAS
aktivering mellom primær- og metastatiske svulster kan ha blitt maskert av fraværet av relaterte primære og metastatiske prøver. Dette funnet har klinisk betydning fordi det kan tillate identifisering av pasienter som er mer sannsynlig å utvikle lungemetastaser basert på
KRAS
analyse av primærtumor. Disse pasientene bør potensielt få en mer grundig klinisk workup, inkludert en thorax scan, som ikke alltid inkludert i standard klinisk workup for CRC.
Våre resultater viser også at tilstedeværelsen av
KRAS
mutasjoner er en uavhengig prognostisk faktor i prediksjon av sykdomsfri overlevelse (statistisk signifikant). Konstitutiv aktivering av Ras-Raf-MAP-kinase veien er kjent at ensidige proliferativ og disseminative fordel å tumorceller. Det finnes imidlertid uenighet om prognostisk rolle KRAS-mutasjoner i CRC. Den største kliniske studien designet for å analysere den prognostiske verdien av
KRAS
status var RASCAL studien, som viste at en glycin til valin mutasjon i kodon 12 økt risiko for tilbakefall og død med 30%, uavhengig av den type terapi administrert [16]. Men en fersk studie utført med et lite antall pasienter ikke gjengi dette resultatet, og ikke påvise noen påvirkning av
KRAS
mutasjoner på overlevelse [12]. Dermed den prognostiske verdien av
KRAS
mutasjonsstatus fortsatt kontroversielt. Våre resultater er i samsvar med RASCAL studere og foreslå en dårligere prognose for pasienter med
KRAS
-mutated primære svulster, med en signifikant sammenheng mellom
KRAS
mutasjonsstatus og en kortere sykdomsfri overlevelse . I motsetning ble ingen sammenheng finnes mellom
KRAS
status og total overlevelse. Dette kan forklares ved administrering av kjemoterapi etter tilbakefall. Den multivariate analysen viser at tilstedeværelsen av
KRAS
mutasjoner er en uavhengig prognostisk faktor i prediksjon av sykdomsfri overlevelse (statistisk signifikant), og dermed fremhever betydningen av
KRAS
mutasjonsstatus i den foreliggende serie av pasienter. Når det gjelder en mulig påvirkning av den mutasjonstypen på prognose, våre resultater, i motsetning til den RASCAL studien viser ingen forskjeller med hensyn til mutasjon type. Selvfølgelig, den potensielle verdien av
KRAS
mutasjoner som prognostisk faktor i denne undersøkelsen må tas med forsiktighet, på grunn av begrenset og bestemt serie av pasienter evaluert.
I sammendraget, våre funn tyder på at
KRAS
-mutated primære CRC svulster har en tendens til å metastasere oftere til lungene og er forbundet med en høyere rate av tilbakefall etter reseksjon av metastaser. Dette funnet kan være av klinisk interesse med hensyn til oppfølging av pasienter med
KRAS
-mutated primære CRC svulster, og dermed fortjener nærmere undersøkelse.
Metoder
Etikk Uttalelse
Etisk komité i La Paz Universitetssykehuset i Madrid, Spania, godkjent den aktuelle studien. Alle pasientene ble informert og samtykket skriftlig.
Kvalifiserte Pasienter
Ett hundre og ti pasienter med metastatisk CRC med tilgjengelige primærtumor og sammenkoblede metastatisk eksemplarer ble valgt ut fra en database med pasienter fra La Paz universitet Hospital i Madrid. Denne studien ble godkjent av sykehusets etikkomité. Pasientene ble diagnostisert med metastatisk CRC mellom 1997 og 2007. Av de 326 tilfellene av metastatisk CRC diagnostisert i løpet av denne tidsperioden, studere inkludering var begrenset til de med kurativ metastase reseksjon, prøver tilgjengelige vev (både fra primærtumor og relaterte metastaser), tilgjengelige oppfølgingsdata etter metastase fjerning, og vellykket
KRAS
mutasjonsstatus analyse. Median oppfølging etter operasjonen var 10 måneder (variasjon: 0-144 måneder). Alle tumorer ble histologisk bekreftet å være kolorektal adenokarsinomer. I tillegg patologiske rapporter med informasjon på tumorstedet, tumorstørrelse, patologisk stadium, tumor klasse (basert på graden av histologiske differensiering), nærvær eller fravær av lymfeknutemetastase, tumorvekst mønster (infiltrerende eller ekspansiv), nærvær eller fravær av vaskulære og lymfatiske invasjon, og nærvær eller fravær av tumor lymfocyttiske infiltrater. Den primære stadium er blitt klassifisert i 4 etapper i henhold til WHO-kriterier. Antallet og størrelsen av metastaser ble bestemt ved diagnostisk avbildning, enten med abdominal og bekken computertomografi eller magnetisk resonans imaging. Metastase reseksjon ble utført da det var ingen bevis for utenomleversykdom, noe som sikrer nok funksjon rest leveren etter reseksjon (ca. 25% -30% av normal levervolum) for å gi leverfunksjon postoperativt, justert basert på eksisterende leversykdom som skrumplever eller hepatitt. Metastatiske Prøver ble erholdt fra enten lever eller lunge. Disse metastatiske prøver ble oppnådd fra enten synkron eller metachronous lesjoner. Pasientene fikk en av tre ulike kjemoterapiregimer etter metastase reseksjon (beskrevet i tabell 1).
Etter oppdagelsen av disharmoni mellom
KRAS
mutasjoner i lever- og lungemetastaser, en ekstra serie 128 metastatisk CRC pasienter (86 med levermetastaser, 34 med lungemetastaser, og 8 med andre typer mutasjoner (disse siste 8 pasienter ble ikke inkludert i den statistiske analysen) fra La Paz Hospital ble prospektivt samlet mellom 2007 og 2009, for å validere hypotesen av en høyere rate av
KRAS
mutasjoner hos pasienter med lungemetastaser. Disse pasientene hadde inoperabel metastatisk sykdom.
KRAS
status i den primære svulsten ble bestemt for kliniske formål før cetuximab administrasjon. den eneste clinicopathological innsamlede dataene for disse pasientene var stedet for primærtumor (colon vs endetarm).
KRAS
analyse ble utført ved hjelp av TheraScreen K-RAS mutasjons test kit (DXS Diagnostiske Innovations) av en uavhengig sentral laboratorium i Madrid etter produsentens anvisninger.
DNA Extraction
Parafin-embedded primære vevsprøver (n = 110) og metastatiske vevsprøver (n = 110) som inneholder minst 70% tumorceller ble valgt for hver enkelt pasient. Vevsblokker var makro dissekert ved anvendelse av en sikkerhets blad når prøvene var mindre enn 70% anriket med tumorceller. Metastatiske tumorer ble lokalisert i leveren (n = 93) og lungen (n = 17). DNA ble isolert fra 15 7-um parafinsnitt. Vevssnitt ble deparaffinated med xilol og rehydrert med nedgradert alkoholer. Vev ble fordøyd med proteinase K, og DNA ble isolert ved hjelp av en MasterPure DNA Kit (Epicentre, Bioteknologi). I hvert tilfelle ble negative kontroller forsterket av PCR og med i forsøket.
KRAS
Mutasjon analyse
En polymerase-kjedereaksjon (PCR) ble utført for å forsterke 139 bp av exon 2 i KRAS som bruker spesifikke primere (vennlig donert av Dr. Laurent-Puig laboratorium) og under PCR betingelser beskrevet tidligere [15]. PCR-primer sekvenser /betingelser er tilgjengelig på forespørsel. Effektiviteten og kvaliteten av PCR ble bekreftet ved å kjøre PCR-produktene på en 2% agarosegel. En negativ kontroll inneholdende alle komponentene i PCR bortsett fra malen ble inkludert i hver PCR-reaksjon. DNA Amplified produkter ble renset ved hjelp av en Quickstep TM to 96-Well PCR Purification Kit (Edge Biosystems, Gaithersburg, Maryland), i henhold til produsentens instruksjoner. Forsterkning produkter ble toveis sekvensert via fluorescens fargestoff terminator metode i en multi-kapillær DNA sekvens å bruke tjenestene til den vitenskapelige parken i Madrid (Madrid, Spania). Tilstedeværelse av mutasjon ble akseptert når det kromatografiske topphøyde var 25% eller høyere toppen av villtype referanse.
Statistiske analyser
Fishers eksakte test ble brukt for å undersøke sammenhengen mellom
KRAS
mutasjonsstatus og ulike clinicopathological funksjoner. Samsvar mellom den primære tumor og beslektede metastaser ble analysert ved hjelp av kappaindeks, og uoverensstemmelse ble analysert ved anvendelse av McNemar test av symmetri. Sykdomsfri overlevelse og total overlevelse analyser ble beregnet i henhold til Kaplan Meier-metoden, og overlevelseskurver ble sammenlignet med log-rank test. Sykdomsfri overlevelse ble definert som tiden fra kirurgisk reseksjon av metastaser til tidspunktet for dokumentert tumorprogresjon eller død. En Cox multivariat regresjonsanalyse ble utført. P 0,05 ble betraktet som signifikant. Statistiske analyser ble utført ved hjelp av SPSS versjon 12.0 (Chicago, IL, USA).
Takk
Vi takker Esther Díaz og María de Miguel for sakkyndig teknisk assistanse.
