Abstract
Somatiske mutasjoner i epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR) genet er assosiert med klinisk respons på EGFR tyrosinkinasehemmere (TKI), for eksempel gefitinib, hos pasienter med ikke-småcellet lungekreft ( NSCLC). Men humorale immunresponser mot EGFR i NSCLC pasienter har ikke blitt godt undersøkt. I denne studien undersøkte vi den kliniske betydningen av immunglobulin G (IgG) respons til EGFR-avledet peptider i NSCLC pasienter som får gefitinib. Plasma-IgG-titere til hver av 60 forskjellige EGFR-avledet 20-mer peptider ble målt ved Luminex system i 42 NSCLC pasienter som får behandling med gefitinib. Sammenhengene mellom peptid-spesifikke IgG titre og nærvær av EGFR mutasjoner eller pasientens overlevelse ble evaluert statistisk.
IgG titer mot egfr_481-500, egfr_721-740 og egfr_741-760 peptider var signifikant høyere hos pasienter med exon 21 mutasjoner enn hos de uten. På den annen side, IgG titere mot egfr_841-860 og egfr_1001-1020 peptider var betydelig lavere og høyere, henholdsvis, hos pasienter med delesjon i exon 19. Multivariabel Cox regresjonsanalyse viste at IgG-responser til egfr_41_ 60, egfr_61_80 og egfr_481_500 var signifikant prognostisk for progresjonsfri overlevelse uavhengig av andre clinicopathological kjennetegn, mens de til egfr_41_60 og egfr_481_500 peptider var signifikant prognostisk for total overlevelse. Påvisning av IgG respons på EGFR-avledet peptider kan være en lovende metode for forutsigelse av NSCLC pasienter som får gefitinib. Våre resultater kan gi ny innsikt for bedre forståelse av humorale responser til EGFR i NSCLC
Citation. Azuma K, Komatsu N, Hattori S, Matsueda S, Kawahara A, Sasada T, et al. (2014) humorale immunresponser til EGFR-peptider Tippe progresjonsfri og total overlevelse av ikke-småcellet lungekreft pasienter som behandles med gefitinib. PLoS ONE 9 (1): e86667. doi: 10,1371 /journal.pone.0086667
Redaktør: Alfons Navarro, Universitetet i Barcelona, Spania
mottatt: 29 august 2013; Akseptert: 12. desember 2013, Publisert: 31 januar 2014
Copyright: © 2014 Azuma et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet med tilskudd fra departementet for utdanning, kultur, sport, vitenskap og teknologi i Japan: Grant-i-Aid for Unge Forskere (B), JSP KAKENHI Grant nummer 19790571. de bevilgende myndighet hadde noen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
konkurrerende interesser:. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Lungekreft er den ledende årsak. av kreft død på verdensbasis [1]. Epidermal vekstfaktor-reseptor (EGFR), en av de mest studerte tyrosin-kinase-reseptorer, er et prototypisk celleoverflate-reseptoren som kan bli angrepet av medikamenter mot lungekreft. EGFR familien er kjent for å spille en viktig rolle i reguleringen av celleproliferasjon, differensiering og migrering [2]. Somatiske mutasjoner i EGFR-genet har blitt identifisert som en viktig faktor for den kliniske responsen på behandling med EGFR tyrosinkinasehemmere (TKI), for eksempel gefitinib og erlotinib, hos pasienter med ikke-småcellet lungekreft (NSCLC). De fleste av EGFR mutasjoner forekommer i eksoner 19 til 21, som koder for tyrosinkinase-domenet av reseptoren. Slettinger i ekson 19 (som delE746-A750) og L858R punkt mutasjon i ekson 21 er de vanligste mutasjonene som finnes i NSCLC, sto for om lag 90% av alle EGFR mutasjoner. Disse mutasjonene er funnet oftere hos kvinnelige pasienter, hos personer som aldri har røykt, og hos pasienter med østasiatisk etnisitet [3] – [5]. Prospektive kliniske studier av EGFR-TKI behandling i NSCLC pasienter med
EGFR
mutasjoner har vist bemerkelsesverdig responsrater i størrelsesorden 80% [6] -. [8]
Tidligere har vi utviklet personlig peptid vaksinasjon (PPV) som en ny modalitet for kreft terapi, hvori vaksineantigener er valgt på basis av eksisterende immunresponser mot tumor-assosierte antigener (TAA) [9] – [13]. Vi har rapportert at immunoglobulin G (IgG) responser til TAA-avledede CTL-epitop-peptider var godt korrelert med total overlevelse (OS) i pasienter med fremskreden kreft som gjennomgår PPV [14], [15]. Disse resultatene antydet at humorale immunresponser mot TAA-avledede peptider som kan ha betydelig innvirkning på kliniske forløpet av kreftpasienter. Men det er lite informasjon om den kliniske betydningen av humorale immunresponser mot EGFR-avledet peptider i NSCLC pasienter.
Nylig har nye high-throughput teknologi er utviklet for å oppdage biomarkører som tydelig gjenspeiler kliniske resultater og /eller respons på behandling hos pasienter med kreft [16] – [21]. I denne studien, benyttet vi den høy gjennomstrømming Luminex suspensjon array system for å måle IgG respons på EGFR-avledet peptider hos pasienter med NSCLC. Her rapporterer vi for første gang at IgG respons på noen EGFR-avledet peptider kan påvises hos NSCLC pasienter, og at de kan være potensielt nyttige prediktorer for progresjonsfri (PFS) og OS i NSCLC pasienter som får gefitinib.
Materialer og metoder
pasienter, behandlinger, og prøvetaking
Vi har registrert 42 NSCLC pasienter som ble behandlet med gefitinib mellom 2006 januar og 2008 desember på en enkelt institusjon (Kurume universitetssykehus, Kurume, Japan) . Detaljer om pasientenes kliniske egenskaper, som alder, kjønn, histologi, røykestatus, performance status (PS), scene, behandlingsrespons, og type
EGFR
mutasjonene ble hentet fra chart vurderinger av en uavhengig anmelder som var ikke klar over de kliniske kursene (tabell 1). Alle pasientene hadde avansert NSCLC og mottatt gefitinib (250 mg) oralt en gang om dagen. Tumorrespons ble undersøkt av computertomografi (CT) og ble evaluert i henhold til de Response evalueringskriterier i solide tumorer (RECIST). Response ble bekreftet minst 4 uker (for en fullstendig eller delvis respons) eller 6 uker (for stabil sykdom) etter at den først ble dokumentert. Plasmaprøver ble samlet fra pasienter før gefitinib behandling og frosset ved -80 ° C inntil bruk. Plasma ble også samlet inn fra friske donorer (HD) (n = 20, 59 +/- 11 år, Mann = 8, Kvinne n = 12). Denne studien overholdt bestemmelsene i Helsinkideklarasjonen, og ble godkjent av Institutional Review Board of Kurume University. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle fag.
EGFR mutasjonsanalyse
Mutasjoner av EGFR-genet ble undersøkt i eksoner 19 (E746-A750del) og 21 (L858R) av peptid nucleic syre-låst nukleinsyre (PNA-LNA) PCR klemme, som tidligere beskrevet [22]. I korte trekk, ble genomisk DNA renset fra parafininnstøpte vev ved hjelp av en QIAamp DNA Micro kit (Qiagen, Inc., Valencia, California). PCR-primerne som anvendes ble syntetisert ved Invitrogen (Carlsbad, CA). PNA klemme primere og LNA mutante prober ble kjøpt fra FASMEC (Kanagawa, Japan) og IDT (Coralville, IA), henholdsvis. PNA-LNA PCR klemme ble utført ved hjelp av en SDS-7500 System (Applied Biosystems, Foster City, California).
Peptider og måling av IgG titer mot peptider som stammer fra EGFR
Sixty annen ikke- overlappende 20-mer peptider ble konstruert fra sekvensen av EGFR-protein, og syntetisert ved hjelp av Sigma Aldrich (St. Louis, MO), som vist på figur 1E. Peptidene ble oppløst i DMSO som rapportert tidligere [23]. IgG-titere er spesifikke for hvert av peptidene ble målt ved anvendelse av en multipleks perlesuspensjon rekke på Luminex system, som rapportert tidligere [24]. I korte trekk ble 100 ul fortynnet plasma inkuberes med Xmap kuler (Luminex Corp., Austin, TX), som ble belagt med EGFR-avledede peptider, i en 96-brønns filterplate (MABVN1250, Millipore Corp., Bedford, MA ) i 2 timer ved romtemperatur på en plateryster. Platen ble deretter vasket og inkubert med 100 pl av biotin-konjugert geit anti-humant IgG (BA-3080, Vector Laboratories, Burlingame, CA) i 1 time ved romtemperatur på en plateryster. Etter vasking ble 100 pl av streptavidin-PE tilsatt til brønnene, og platen ble inkubert i 30 minutter ved romtemperatur på en plateryster. Kulene ble vasket tre ganger, etterfulgt av tilsetning av 100 ul PBS til hver brønn. Fluorescensintensiteten i 50 ul av hver prøve ble undersøkt ved hjelp av Luminex system. Peptid-spesifikke IgG-titere ble beregnet med hensyn til fluorescensintensitet og uttrykt som fluorescensintensitet enheter (fyll), som rapportert tidligere [24]. Cut-off nivå ble satt til 10 EFE fordi EFE kurver innhentet fra prøvefortynnings analysene var lineær fra 10 til 10 000 EFE (data ikke vist).
Log-rank test avslørte at gefitinib behandling signifikant forlenget PFS (A), men ikke OS (B), i NSCLC pasienter med EGFR mutasjoner. Signifikante forskjeller i PFS (C), men ikke i OS (D), mellom pasienter med og uten EGFR mutasjoner var også tydelig for mutasjoner i både EGFR ekson 19 (E746-A750del) og ekson 21 (L858R). (E) Seksti forskjellige 20-mer peptider ble utformet fra aminosyresekvensen av EGFR-protein. Sekvensene vist i rødt (egfr_481-500, egfr_721-740, egfr_741-760, egfr_841-860, og egfr_1001-1020) representerer peptider som stiller spesifikke IgG responser som ble korrelert med EGFR mutasjoner. Sekvensene vist i blått (egfr_41_ 60, egfr_61_80, og egfr_481_500) representerer peptider stiller spesifikke IgG responser som ble korrelert med PFS.
Statistisk analyse
For å undersøke om IgG titer mot hver av de 60 forskjellige peptider ble forbundet med EGFR-mutasjonstatus, deres medianverdier ble sammenlignet blant pasienter med EGFR mutasjoner (delE746-A750 og L858R) og villtype-EGFR ved hjelp av Wilcoxon rank-sum-test. PFS ble beregnet fra datoen for oppstart av gefitinib behandling inntil enten dato for sykdomsprogresjon eller dato for siste kontakt. OS ble definert som perioden fra datoen for oppstart av gefitinib behandling frem til dato for død på grunn av enhver årsak, eller til datoen for siste kontakt. For å undersøke om IgG titer mot hver av de 60 forskjellige peptider ble assosiert med PFS eller OS, vi anvendt Cox modellen med anti-peptid IgG titer, mutasjonsstatus, røyking status, kjønn og PS som forklaringsvariabler. Vi undersøkte også om de ble forbundet med kreftsvulster ved hjelp av logistisk regresjon, hvor CR og PR ble ansett som svar. Siden 60 forskjellige peptider ble undersøkt, en alvorlig mangfold problemet eksisterte i denne studien. Derfor har vi identifisert peptider som var signifikant assosiert med PFS, OS, eller tumorrespons ved å kontrollere den falske funnraten (FDR) på 5% nivå.
I denne studien ble det betydelig utfordrende å identifisere anti -peptid IgG reaksjoner som vil være nyttig for prognostication enn å bare bruke clinicopathological egenskaper alene. Siden antallet peptider overskredet antall pasienter, kan standard multivariat Cox regresjon (multippel regresjon) ikke benyttes. For å unngå innflytelsesrike observasjoner, anti-peptid-IgG var log-transformert (anti-peptid-IgG-1), og også standardisert med null-middelverdi og standardavvik enhet. Vi har anvendt de Cox regresjon med et Lasso-type straff [25], [26], som nylig har blitt rapportert å være nyttig for analyse av høy-dimensjonale data. Siden en viktig egenskap av lasso metoden er dens sparsity kunne regresjonskoeffisientene for anti-peptid IgG responser ikke forbundet med PFS (OS) anslås til null. Basert på denne funksjonen, identifiserte vi noen peptider som kan være nyttig for forutsigelse. For å undersøke hvorvidt eller ikke IgG-responser på de identifiserte peptider var i virkeligheten nyttig for prognostication, søkte vi Cox regresjonsanalyse og tidsavhengig ROC-analyse [27]. Områder under ROC-kurven (AUC) ble beregnet for risiko score av Cox regresjon med clinicopathological egenskaper alene og også med både anti-peptid IgG responser og clinicopathological egenskaper. De ble sammenlignet ved å teste likestilling mellom AUC ved å beregne en bootstrap p-verdi for 1000 gjentak. Statistisk analyse ble utført med R-versjon 2.13 og SAS versjon 9.3 programvare (SAS Institute, Cary, NC).
Resultater
Pasient egenskaper og overlevelsesanalyse
De kliniske kjennetegn de 42 pasientene er vist i Tabell 1. Twenty-fem pasienter (60%) var kvinner og 24 (57%) hadde aldri røykt; median alder av pasientene generelt var 63,5 år (range, 38 til 82 år). Trettiåtte pasienter (90%) hadde adenokarsinom, 34 (81%) hadde en god allmenntilstand (Eastern Cooperative Oncology Group 0), og 15 (36%) fikk gefitinib som førstelinje kjemoterapi. Med hensyn til den type
EGFR
mutasjon, 8 pasienter (19%) hadde delesjoner i ekson 19, 13 (31%) hadde den L858R missense mutasjon i exon 21, og 21 (50%) hadde vill -type
EGFR
.
på tidspunktet for analysen var median oppfølgingstid var 418 dager (range, 16 til 1532 dager). Median PFS var 201 dager (range, 11 til 1379 dager), og median OS var 418 dager (range, 16 til 1532 dager). Kaplan-Meier-analysen av PFS og OS etter start av gefitinib behandling er vist i figur 1. Den log-rank-test viste at gefitinib behandling resulterte i en signifikant lengre PFS hos pasienter med EGFR mutasjoner enn i de uten dem (median på 347 versus 54 dager,
P
= 0,0029) (fig. 1A), mens det var ingen signifikant forskjell i OS mellom de to gruppene av pasienter (median på 575 versus 368 dager, henholdsvis
P
= 0,1095) (fig. 1B). Forskjellene i PFS, men ikke OS, mellom pasienter med mutasjoner og de med villtype-EGFR var tydelige for begge typer EGFR mutasjon (fig. 1C og 1D).
Korrelasjon mellom IgG titere mot EGFR peptider og EGFR mutasjoner i NSCLC pasienter som ble behandlet med gefitinib
Vi undersøkte IgG titer mot hver av 60 forskjellige peptider i plasmaprøver fra NSCLC pasienter ved hjelp av Luminex system. Vi analyserte hvorvidt peptid-spesifikke IgG-titere var korrelert med tilstedeværelse av EGFR mutasjoner, og funnet at IgG-titere spesifikke for egfr_481-500, egfr_721-740 og egfr_741-760 peptider var signifikant høyere hos pasienter med exon21 mutasjon enn hos dem uten det (P = 0,017 for egfr_481-500; P = 0,036 for egfr_721-740; P = 0,007 for egfr_741-760) (tabell S1). For disse tre peptider, medianverdier av peptid-spesifikke IgG titer hos pasienter med ekson 21 mutasjon var omtrent dobbelt så høye som hos pasienter uten exon 21 mutasjoner (tabell S1). På den annen side, titeren av IgG spesifikt for egfr_841-860 peptidet var signifikant lavere i pasienter med delesjon i exon 19 enn i de uten den (P = 0,047), mens titer IgG spesifikke for peptidet var egfr_1001-1020 betydelig høyere i de med sletting i ekson 19 (tabell S1). IgG reaksjoner på andre peptider viste ingen signifikant korrelasjon med EGFR mutasjoner.
Forholdet mellom titer av IgG mot EGFR-avledet peptider og overlevelse i NSCLC pasienter behandlet med gefitinib
Vi videre undersøkt om peptid spesifikke IgG titer var godt korrelert med PFS eller OS hos NSCLC pasienter som får gefitinib behandling. I Cox regresjon, IgG-respons mot 38 og 32 EGFR-avledede peptider viste p-verdier på mindre enn 5% for PFS og OS, respektivt. Når FDR ble kontrollert ved 5% nivået, ble IgG-respons mot 35 og 20 peptider identifisert som signifikante for PFS og OS, henholdsvis (tabell S2). Vi undersøkte også om IgG titer mot hverandre peptid ble assosiert med tumor respons (CR eller PR). Logistisk regresjonsanalyse indikerte at det var ingen peptid-spesifikke IgG responser assosiert med tumorrespons (data ikke vist).
Identifikasjon av peptid-spesifikke IgG respons nyttige for prognostication
Som vist ovenfor, IgG svar på mange av de EGFR-avledede peptider var signifikant assosiert med PFS og /eller OS. Siden mange par av peptider ble moderat eller sterkt korrelert (data ikke vist), ble det antydet at måling av IgG-titere mot et relativt lite antall peptider kan være tilstrekkelig prognostisk. Ved Cox regresjon med lasso straff, IgG titer mot egfr_41_60, egfr_61_80 og egfr_481_500 peptider hadde relativt store effekter på PFS (figur S1 A). Vi ansatt IgG titer mot disse tre peptider for å konstruere en prediksjon regel for PFS. Som vist i tabell 2A, Cox regresjon justert for mulige konfunderende faktorer, inkludert PS, alder, kjønn og røykestatus, viste at alle de IgG respons mot egfr_41_60, egfr_61_80 og egfr_481_500 peptider var betydelig prognostisk og uavhengig av eventuelle clinicopathological egenskaper ( P = 0,001, P = 0,020, og P = 0,028, henholdsvis).
etter Cox regresjon med lasso straff, IgG titer mot egfr_41_60, egfr_481_500 og egfr_881_900 peptider ble vist å ha relativt stor effekter på OS (figur S1B). Siden IgG titer mot egfr_41_60 og egfr_881_900 peptider ble sterkt assosiert (Spearmans rang korrelasjonskoeffisient 0,71; P 0,001), ansatt vi bare titer av IgG mot egfr_41_60 og egfr_481_500 for å konstruere en prediksjon regel for OS. Som vist i tabell 2B, Cox regresjon viste at IgG-responser på begge peptider var betydelig prognostisk, uavhengig av eventuelle clinicopathological egenskaper (P = 0,018 for egfr_41_60 og p = 0,027 for egfr_481_500).
Kaplan-Meier plot av PFS og OS etter lagdeling med IgG-titere til de utvalgte peptider er vist i figur 2A og figur 2B, for å gripe de marginale effekter uten å justere for clinicopathological egenskaper. Ved hjelp av tidsavhengig ROC-analyse, også undersøkte vi hvorvidt eller ikke tilsetning av peptid-spesifikke IgG-titere til clinicopathological egenskaper forbedres nøyaktigheten av forutsigelse. Figurene 3A og 3B viser ROC-kurver for 1 år og 2 år med risiko poengsum anslått av Cox regresjon gitt i Tabell 2A (for PFS) og tabell 2B (for OS) med peptid-spesifikke IgG-titere og clinicopathological characteristcs og de med den sistnevnte alene. ROC-kurvene viste at tilsetning av peptid-spesifikke IgG-titere til clinicopathological egenskaper førte til betydelig forbedring i evnen til å forutsi PFS på 1 år og 2 år (P 0,001 ved sammenligning av AUC). AUC for den tidsavhengige ROC for ett år og 2 år OS ble også signifikant økt ved tilsetning av peptid-spesifikke IgG-titere i sammenligning med clinicopathological egenskaper alene (P 0,001) (Fig.3C og 3D). Disse funnene antydet at å legge peptid-spesifikke IgG titre til clinicopathological egenskapene kan føre til mer nøyaktig forutsigelse av både PFS og OS.
Kaplan-Meier plott av PFS (A) og OS (B) hos pasienter som viser høyere og lavere IgG titer mot utvalgte peptider, egfr_41_ 60, egfr_61_80, og egfr_481_500, vises. Lavere og høyere IgG titer ble definert av deres medianverdier.
ROC kurver for 1-års (A) og 2-årig (B) PFS av risikoen skår estimert ved Cox regresjon indikerer en betydelig forbedret korrelasjon med 1-års og to års PFS. ROC kurver for 1-års (C) og 2-årig (D) OS er også vist.
Diskusjoner
Nylige fremskritt innen molekylær onkologi har dramatisk forbedret vår forståelse av vekst og overlevelse veier for NSCLC. For eksempel EGFR, et medlem av den HER eller Erb-B familien av reseptor tyrosin kinaser, er innblandet i utvikling og progresjon av NSCLC. EGFR består av et ekstracellulært ligand-bindende domene, en transmembranregion, og en multifunksjonell cytoplasmatisk hale med integrert kinaseaktivitet [2], [28] – [30]. EGF er et utskilt vekstfaktor hvis binding til EGFR induserer strukturelle endringer, som fører til reseptor-homodimer dannelse, etterfulgt av en økning av EGFR kinase-aktivitet og påfølgende fosforylering av intracellulære domenet [2], [28] – [30]. Den hyppigst observerte mutasjon i EGFR er substitusjons L858R i aktiverings sløyfe (A-loop), eller sletting av åtte rester i regionen spenner rester 746-759, som strekker seg fra beta3 tråden til alphaC helix i N-flik av kinasedomenet [2] – [5], [28] – [30]. I denne studien fant vi at IgG respons på peptider egfr_481-500, egfr_721-740, og egfr_741-760 var signifikant høyere hos pasienter med exon 21 mutasjon. På den annen side, IgG-responser på den egfr_841-860 og egfr_1001-1020 peptider var betydelig lavere og høyere, henholdsvis, hos pasienter med delesjon i exon 19. Interessant nok egfr_721-740, egfr_741-760, og egfr_841-860 er plassert i det ATP-bindende domene, som koder for tyrosinkinase-domene av reseptoren, og humorale immunresponser mot disse sekvenser var korrelert med tilstedeværelse av aktiverende EGFR mutasjoner, for eksempel L858R eller 746DEL. På den annen side, egfr_1001-1020 ligger i det regulatoriske domenet i den C-terminale hale, som kan øke autofosforylering av EGFR [31]. Tidligere studier har rapportert at dette domenet interagerer i stor utstrekning med både C-lobe og N-lapp av kinase-domenet [32] – [33]. Disse funnene tyder på at sekvensene knyttet til tyrosin kinase aktivitet i EGFR kan være immunogen hos pasienter med EGFR mutasjoner, men videre studier er nødvendig for å avklare mekanismene for de økte IgG respons på disse sekvensene.
Utviklingen av rask og presise diagnostiske metoder for påvisning av EGFR mutasjoner er spesielt viktig for å utforme tilpassede therapeutics for NSCLC pasienter med aktiverende EGFR mutasjoner. Flere svært følsomme fremgangsmåter for deteksjon av EGFR mutasjoner i vevsprøver er blitt rapportert [22], [37], men prøvetaking for disse fremgangsmåter krever invasive prosedyrer, slik som transbronchial biopsi eller pleural punktering. I motsetning til de foreliggende resultater antyder at screening av IgG-responser på EGFR-avledede peptider i perifert blod kan det være mulig for detektering av EGFR mutasjoner. Påvisning av humorale responser mot EGFR-avledede peptider ved hjelp av Luminex suspensjon rekkesystemet er enkelt og ikke-invasiv. Spesielt kan denne metoden være nyttig for pasienter med NSCLC, der tumor vev er vanskelig å skaffe for detaljert patologisk og molekylær karakterisering.
Vi videre undersøkt om IgG respons mot EGFR-deriverte peptider kan være forutsigbare for PFS og OS i NSCLC pasienter som får gefitinib. Vi fant at IgG respons mot peptider egfr_41_ 60, egfr_61_80 og egfr_481_500 hadde store effekter på PFS, og at de mot egfr_41_60 og egfr_481_500 hadde store virkninger på OS. Interessant, alle av disse sekvenser er lokalisert i det ekstracellulære domenet. Binding av EGF skjer innen den amino-terminale 622-aminosyre-ekstracellulært domene, som består av fire domener, I-IV, av EGFR. Nylig har strukturelle data vist hvordan anti-EGFR-antistoffer inhiberer signaloverføring fra EGFR. For eksempel, tilhører egfr_481_500 sekvensen til ekstracellulære domene III, hvor anti-EGFR-antistoffer, så som cetuximab, nimotuzumab, og matuzumab, er kjent for å binde seg og blokkere bindingen av EGF til EGFR [34] – [36]. Selv om årsakene til at IgG respons på disse peptidene kan påvirke overlevelsen er ikke fullt ut forstått, er en mulig forklaring på at IgG mot det ekstracellulære domenet kan påvirke signaloverføring fra EGFR.
Vi undersøkte plasma fra 20 friske givere (HD ) ved hjelp av Luminex system for å detektere antistoffer mot egfr_41_ 60, egfr_61_80 og egfr_481_500 peptider. Vi fant at titer av antistoffer mot egfr_41_60, egfr_61_80, og egfr_481_500 i plasma var ikke signifikant forskjellig mellom NSCLC pasienter og HD (data ikke vist). Dette resultatet er i tråd med vår tidligere funn at antistoffer mot cytotoksiske T-lymfocytter (CTL) epitop peptider som stammer fra mange av tumorassosierte antigener ble påvist som positive i HD, og at deres titere var ikke signifikant forskjellig mellom kreftpasienter og HD [38] . Dette funn antydet at humorale immunresponser mot EGFR kan være vidt påvisbare, ikke bare hos kreftpasienter, men også i HD, ettersom dette molekylet er ubikvitært uttrykkes ikke bare kreftvev, men også i normalt vev.
Konklusjonen er at den foreliggende studie har vist at påvisning av humorale immunresponser overfor EGFR-avledede peptider i plasma ved hjelp av Luminex suspensjon rekkesystemet kan være en lovende metode for ikke bare å detektere nærværet av mutasjoner EGFR, men også den forutsigelse av NSCLC pasienter som får EGFR-TKI. Disse resultatene kan gi ny innsikt for bedre forståelse av humorale immunresponser til EGFR i NSCLC pasienter. Siden største ulempen med denne studien var det liten utvalgsstørrelse, er en ytterligere prospektiv studie nå i gang for å bekrefte funnene i større kohorter. I tillegg vil det være nødvendig å avklare klinisk anvendbarhet av våre funn til personlig behandling for NSCLC.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
Solution banen til Cox regresson med en lasso straff for PFS (A) og OS (B). (A) Ved Cox regresjon med lasso straff, IgG titer mot egfr_41_60, egfr_61_80 og egfr_481_500 peptider hadde relativt store effekter på PFS. (B) Ved Cox regresjon med lasso straffen ble IgG titer mot egfr_41_60, egfr_481_500 og egfr_881_900 peptider vist seg å ha relativt store effekter på OS
doi:. 10,1371 /journal.pone.0086667.s001 product: ( TIF)
Tabell S1.
Sammenheng mellom EGFR mutasjon og uttrykk for peptid i NSCLC pasienter. Vi undersøkte IgG titer mot hver av 60 forskjellige peptider i plasmaprøver fra NSCLC pasienter ved hjelp av Luminex system. Vi fant ut at IgG titre spesifikke for egfr_481-500, egfr_721-740, og egfr_741-760 peptider var signifikant høyere hos pasienter med exon21 mutasjon enn hos de uten. På den annen side, titeren av IgG spesifikt for egfr_841-860 peptidet var signifikant lavere i pasienter med delesjon i exon 19 enn i de uten den (P = 0,047), mens titer IgG spesifikke for peptidet var egfr_1001-1020 betydelig høyere i de med sletting i ekson 19.
doi: 10,1371 /journal.pone.0086667.s002 plakater (XLSX)
Tabell S2.
Cox regresjonsanalyse av PFS og OS for NSCLC pasienter. I Cox regresjon, IgG-respons mot 38 og 32 EGFR-avledede peptider viste p-verdier på mindre enn 5% for PFS og OS, respektivt. Når FDR ble kontrollert på 5% nivå, ble IgG respons mot 35 og 20 peptider identifisert som viktig for henholdsvis PFS og OS, etter doi:. 10,1371 /journal.pone.0086667.s003 plakater (XLSX)
