Abstract
Bakgrunn
Anacardic syre (AA) er en blanding av to-hydroxy-6-alkylbenzoic syre homologer. Enkelte antitumor-aktivitet av AA er blitt rapportert i en rekke krefttyper. Men funksjonen av AA i eggstokkreft, til dags dato, har vært ukjent.
Metoder
eggstokkreft cellelinjer ble utsatt for AA, etter som celleproliferasjon, apoptose, invasjon og migrasjonsanalyser Var fremført. Phalloidin farging ble anvendt for å observere lamellipodia formasjonen. Revers transkripsjon polymerasekjedereaksjon (RT-PCR) og western-blotting ble brukt for å vurdere de mRNA og protein uttrykk nivåer av fosfatidylinositol 3-kinase (PI3K), vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF) og kaspase 3.
Resultater
Våre resultater viste at AA fremmer ovariecancer celleproliferasjon, inhiberer apoptose sen, og induserer cellemigrering og invasjon, så vel som lamellipodia formasjonen. AA eksponering signifikant oppregulert PI3K og VEGF mRNA og protein ekspresjon, mens, i motsetning til den nedregulert caspase 3 mRNA og protein ekspresjon i forhold til ubehandlede kontrollceller.
Konklusjon
Tatt sammen, våre resultater viser for første gang at AA kan potensere spredning, invasjon, metastaser og lamellipodia formasjonen i eggstokkreft cellelinjer via PI3K, VEGF og caspase 3 trasé
Citation:. Xiu YL, Zhao Y, Gou WF, Chen S, Takano Y, Zheng HC (2014) Anacardic Acid Forbedrer spredning av menneskelig eggstokkreft celler. PLoS ONE 9 (6): e99361. doi: 10,1371 /journal.pone.0099361
Redaktør: Javier S. Castresana, Universitetet i Navarra, Spania
mottatt: 18 desember 2013; Godkjent: 14 mai 2014; Publisert: 12 juni 2014
Copyright: © 2014 Xiu et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet av Shenyang enestående talent Foundation of China; Shenyang Science and Technology Grant (F11-264-1-10, F12-277-1-01); Prosjektet støttes av Scientific Research Fund of Liaoning Provincial Education Department (L2010633); Liaoning Science and Technology Grant (2009225008-11; 2013021077); og Natural Scientific Foundation of China (81172371, 81202049). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Eggstokkreft er fortsatt den vanligste dødsårsaken fra gynekologiske kreftformer [1], [2]. Primær behandling av eggstokkreft er kirurgisk fjerning av synlig sykdom etterfulgt av adjuvant kjemoterapi, som vanligvis består av en kombinasjon av platina-basert og taxan-basert kjemoterapi. Gitt at tilbakefall og metastase alvorlig påvirke prognosen for eggstokkreft, har fem års overlevelse for alle stadier av eggstokkreft er estimert til å være 35-38% [3], [4]. Dermed har studiet av nye andrelinje kjemoterapi narkotika, som hemmer de metastatiske og tilbakefall prosesser av eggstokkreft, blir fokus for nyere forskning interesse som deres utvikling kan forbedre fem års overlevelse.
Anacardic syre (AA) er en blanding av 2-hydroksy-6-alkylbenzoic syre homologer og er ofte funnet i planter av familien Anacardiaceae [5], [6]. Det er et kosttilskudd komponent som finnes i cashew eple (
Anacardium Occidentale
) og ginkgo (
Ginkgo biloba
) forlater og frukt. AA fungerer som en mitokondriell Avbryt av oksidativ fosforylering [7] og sensitizes humane tumorceller for ioniserende stråling ved hemning av histon-acetyltransferase-aktivitet [8]. AA har også vist visse antitumor-aktivitet i prostata cancer, lunge-carcinom og brystcancer, samt noen andre kreftformer, og er antatt å utøve sin virkning via forskjellige mekanismer [9] – [13]. Nylig har et økende antall studier har undersøkt rollen til AA i kreft, med håp om at det kan eventuelt anvendes i klinisk behandling. Imidlertid har den funksjon av AA i eggstokkreft forble ukjent. Dermed vår studie viser rolle og mulige mekanismer for AA i eggstokkreft for første gang.
Materialer og Metoder
Cell kultur
ovarialcancer cellelinjer, SKOV3 ( serøs papillær cystisk adenokarsinom), HO8910 (serøs cystisk adenokarsinom) og meget inngripende HO8910 (HO8910-PM), ble kjøpt fra ATCC. Cisplatin bestandig SKOV3 (SKOV3 /DDP) ble kjøpt fra Tumor Cell Bank of Chinese Academy of Medical Science (Peking, Kina). Celler ble opprettholdt i RPMI 1640-medium (HO8910, HO8910-PM og SKOV3 /DDP) og McCoys 5A medium (SKOV3) supplert med 10% føtalt bovint serum (FBS), 100 enheter ml
-1 penicillin (SKOV3 /DDP var også supplert med 20 ng ml
-1 cisplatin (DDP) og 100 ug ml
-1 streptomycin. Cellelinjer linjer~~POS=HEADCOMP ble holdt i en fuktet atmosfære av 5% CO
2 ved 37 ° C med eller uten AA behandling (Sigma, St. Louis, USA). Alle celler ble høstet ved sentrifugering etter at cellene ble utsatt for trypsin, renset med fosfat-bufret saltvann (PBS) og underkastet total protein utvinning ved sonikering i radio-immunutfelling assay (RIPA) buffer.
spredningsanalyse
Cell Counting Kit-8 (CCK-8, Xiongben, Japan) ble benyttet for å bestemme antall levedyktige celler via en kolo analysen. korthet 2,5 × 10
3-celler /brønn ble sådd ut i en 96-brønns plate og tillatt å sitte fast. på forskjellige tidspunkter, 10 ul av CCK-8-løsning ble tilsatt til hver brønn av platen og platen ble deretter inkubert i 3 timer ved 37 ° C forut for opptak av den optiske tetthet ved 450 nm.
cellesyklusanalyse
etter inkubering i 48 timer ved 37 ° C i en atmosfære av 5% CO
2, cellene ble løsnet ved trypsinering, oppsamlet, vasket to ganger med PBS og fiksert i 10 ml is-kald etanol (70%) i minst 2 timer. Cellene ble vasket to ganger med PBS og på nytt inkubert med 500 pl RNase (0,25 mg ml
-1) ved 37 ° C i 30 minutter. Cellene ble pelletert, resuspendert i propidiumjodid (PI) i en konsentrasjon på 50 ug ml
-1 og inkubert i mørke ved 4 ° C i 30 minutter. Cellesyklus analyse ble utført ved analyse av PI farging av flowcytometri.
apoptose analysen
Flowcytometri ble utført etter farging med PI og FITC-merket annexin V (keygen Biotech, Nanjing, Kina) henhold til produsentens protokoll for å oppdage phosphatidylserine eksternalisering som et endepunkt indikator på tidlig apoptose i cellene. I korthet, etter inkubering i 48 timer ved 37 ° C i en atmosfære av 5% CO
2, ble cellene vasket to ganger med iskald PBS, resuspendert i 1 x bindingsbuffer ved en konsentrasjon på 1 x 10
6 celler mL
-1 og deretter inkubert med 200 pl 1 x bindingsbuffer og 10 ul FITC-annexin V. prøver ble forsiktig blandet og inkubert i 15 min ved 25 ° C i mørke, deretter 300 ul 1 x bindingsbuffer og 5 ul PI ble tilsatt til hvert rør. Prøver ble forsiktig blandet og inkubert i mindre enn 1 time ved 25 ° C i mørket. Strømningscytometri ble utført i løpet av 1 time med inkubering.
sårhelende assay
Celler ble sådd ut ved en tetthet på 1,0 x 10
6 celler /brønn på 6-brønners kulturplater. Etter at de hadde vokst til konfluens, ble cellemonolaget skrapet med en pipettespiss (200 ul) for å lage en ripe. Cellene ble deretter vasket med PBS tre ganger og dyrket i FBS-fritt medium. Celler ble fotografert på 0, 12, 24, 48 og 72 h (
n
= 9) og ripete områdene ble målt ved hjelp av Image programvare. Den sårhelende ble beregnet etter følgende formel:
sårhelende rate = (Area of opprinnelige såret – Areal av selve såret på ulike tidspunkt) /Area of opprinnelige såret × 100%
.
Cell invasjon analyser
for invasjonen analysen, 5 × 10
4 celler ble resuspendert i FBS-fri RPMI-1640 og sådd ut de beste kamre Matrigel-belagte Transwell inserts (BD Biovitenskap, San Jose, CA, USA). Den nedre avdeling av kammeret inneholdt 10%
v /v
FBS som et kjemotiltrekkende. Etter inkubering i 48 timer ved 37 ° C i en atmosfære av 5% CO
2, ble cellene på den øvre overflaten av membranen tørket bort, og cellene på den nedre overflate av membranen ble vasket med PBS, fiksert i 100% metanol og farget med krystallfiolett fargestoff for å kvantifisere omfanget av invasjonen.
sanntids~~POS=TRUNC revers transkripsjon polymerasekjedereaksjon (sanntids RT-PCR)
Total RNA ble ekstrahert fra ovarian carcinoma cellelinjer ved hjelp TRIzol (Takara, Kyoto, Japan). Real-time RT-PCR ble utført fra 2 mikrogram total RNA ved hjelp av AMV revers transkriptase og tilfeldige primere (Takara, Kyoto, Japan). PCR-primere ble utformet i henhold til de sekvensene i genbanken og er oppført i tabell S1. Forsterkning av cDNA ble utført i henhold til produsentens protokollen med en SYBR Premiks Ex Taq II kit (Takara, Kyoto, Japan) og
GAPDH
som en intern kontroll. I korthet, ble RT-PCR-amplifisering av cDNA for hver primer utført i et endelig volum på 20 ul, inneholdende 10 ul SYBR Premiks Ex Taq (x 2), 0,08 ul primere, 0,4 ul ROX referanse fargestoff og 1 pl templat cDNA (50 ug il
1). Protokollparameterne var som følger: initial inkubering ved 95 ° C i 30 s etterfulgt av 40 sykluser med denaturering ved 95 ° C i 5 s og annealing ved 60 ° C i 34 sek. Alle PCR eksperimenter ble akkompagnert med et nei-mal kontroll og
GAPDH
som en intern kontroll. Den relative genekspresjon nivå (mengden av target normalisert til den endogene kontroll-genet) ble beregnet ved hjelp av den sammenlignende CT metode: 2
-ΔΔCt. Sekvensene til primerne for sanntids kvantitativ PCR leveres i tabell S1.
Western blot-analyse
Proteinanalyser ble utført i henhold til Bradford-metoden ved bruk av Bio-Rad proteinanalysesett (Bio -Rad, Hercules, CA, USA). Denaturerte proteiner ble separert ved natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE) på 12% akrylamidgeler, og deretter overført til Hybond-membraner (Amersham, Tyskland). Membranene ble blokkert over natten i 5% skummet melk i Tris-bufret saltvann med Tween 20 (TBST; 10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 0,1% Tween 20). For immunoblotting ble membranene inkubert i 1 time med det primære antistoff, skyllet med TBST og inkubert med anti-kanin-anti-mus eller anti-geite-IgG-antistoff konjugert til pepperrotperoksidase (HRP, Dako, Carpinteria, CA, USA) ved en fortynning av 1:1000. Etter bruk forsterket kjemiluminescerende (ECL) -Plus gjenkjenning reagenser (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), ble proteinbåndene visualisert ved hjelp av en X-ray film (Fujifilm, Tokyo, Japan). De immunoblotter ble vasket med western blotting (WB) stripping buffer (pH 2-3; Nacalai, Tokyo, Japan) og analysert ved hjelp av et monoklonalt antistoff spesifikt for β-aktin (1:1000, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA ).
Immunofluorescence
Celler ble dyrket på dekkglass, fiksert med PBS inneholdende 4% formaldehyd i 10 minutter og permeabilisert med 0,2% Triton X-100 i PBS i 10 minutter ved romtemperatur. Etter vasking med PBS ble cellene inkubert over natten ved 4 ° C med Alexa Fluor 594 Phalloidin (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) for å muliggjøre lamellipodia som skal gjøres synlige. Kjerner ble farget med 1 mikrogram ml
1 (DAPI, Sigma-Aldrich St Louis, MO, USA) i 15 minutter ved 37 ° C. Glassene ble deretter montert med SlowFade Gold Antifade Reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) og observert under et konfokal laser mikroskop (Olympus, Tokyo, Japan).
Statistisk analyse
Statistisk evaluering ble utført ved anvendelse Spearmans rang korrelasjonskoeffisient for å analysere rangert data, og Mann-Whitney U-test for å differensiere hjelp av forskjellige grupper. En
p
-verdi av 0,05 ble ansett som statistisk signifikant. SPSS v. 10,0 programvare (SPSS, Chicago, IL, USA) ble benyttet for å analysere alle data.
Resultater
Effektene av anacardic syrer på eggstokkene carcinoma celler
to par cellelinjer, SKOV3 og SKOV3 /DDP-celler, og HO8910 og HO8910-PM-celler, ble utsatt for AA (0 uM, 2,5 uM, 5 uM, 10 uM, 15 uM, 20 uM) og utsatt for CCK-8 spredningsanalyser (Figur 1A,
p 0,05
). SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 og HO8910-PM celler viste sterkere spredning ved behandling med AA sammenlignet med kontrollcellelinjer. Vi fant at funksjonen av AA i å fremme spredning ble positivt korrelert med konsentrasjonen, 10 mm AA kan fremme spredning betraktelig, så vi velger 10 mikrometer, 15 um, 20 mikrometer som eksperimentelle forhold til å fullføre følgende eksperiment. AA behandling indusert S spredning i SKOV3 og SKOV3 /DDP celler; omvendt, AA indusert G1 arrest i HO8910 og HO8910-PM celler (figur 1B,
p 0,05
). Flowcytometrisk apoptose analyse viste at AA behandling (15 mm) hemmet sent apoptose i SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 og HO8910-PM celler (figur 2,
p 0,05
), og sårhelende og invasjon analyser viste at AA fremmet celle migrasjon og invasjon i en konsentrasjonsavhengig måte (figur 3A og B,
p 0,05
). I tillegg, AA eksponering indusert lamellipodia dannelse i alle fire cellelinjer, som antydet med F-aktin struktur (figur 4).
CCK-8-celle proliferasjonsanalyser viser at AA behandling av SKOV3 og SKOV3 /DDP, og HO8910 og HO8910-PM celle-linjeparene induserer celleformering (A). AA behandling indusert S spredning i SKOV3 og SKOV3 /DDP celler, og G1 arrest i HO8910 og HO8910-PM-celler (B). *
p 0,05
. Resultatene er representative for tre separate eksperimenter; Dataene er uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik.
Strømningscytometrisk apoptose analyse viser at AA-behandling inhiberer apoptose sent i SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 og HO8910-PM-celler. *
p 0,05
. Resultatene er representative for tre separate eksperimenter; Dataene er uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik.
sårhelende analyser viser at AA behandling øker muligheten for SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 og HO8910-PM-celler til å migrere i en konsentrasjonsavhengig måte (A). Behandlede celler utviser også invasiv potensial (B). *
p 0,05
. Resultatene er representative for tre separate eksperimenter; Dataene er uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik.
AA eksponering induserer lamellipodia formasjon i alle fire cellelinjer som angitt av F-aktin struktur.
Den mRNA og protein uttrykk for fenotype-relaterte molekyler i ovarialcancer celler etter eksponering for AA
Etter behandling med AA, de mRNA uttrykk nivåer av caspase 3 i SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 og HO8910-PM cellelinjer var lavere enn som ble observert i kontrollceller. I motsetning til dette mRNA ekspresjonsnivåer av PI3K og VEGF var høyere enn de i kontrollceller (figur 5A,
p 0,05
). Western blot-analyse av protein ekspresjonsnivåene viste at AA eksponering oppregulert PI3K og VEGF proteinekspresjon, og nedregulert kaspase 3 protein ekspresjon i både celle-linjeparene (figur 5B,
p 0,05
).
Effekter av AA eksponering på mRNA ekspresjonsnivåer av proliferasjon og apoptose-relaterte molekyler, og deres tilsvarende proteiner, i ovarie carcinom cellelinjeparene ved hjelp av sanntids-RT-PCR (A) og western blot analyse (B). *
p
0,05. Resultatene er representative for tre separate eksperimenter; Dataene er uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik.
Diskusjoner
AA er ofte funnet i planter av Anacardiaceae familien og er et kosttilskudd komponent som finnes i cashew eple (
Anacardium Occidentale
) og ginkgo (
ginkgo biloba
) forlater og frukt og finnes i en rekke medisinplanter som har potensial aktivitet mot kreft cellelinjer [14] – [15]. Flere studier har rapportert at AA spiller en anticancer rolle, noe som kan forbundet med redusert ekspresjon av Survivin og X-bundet inhibitor av apoptose protein, som er anti-apoptotiske proteiner forbundet med cellulær overlevelse og radioresistance, og bestrålingssensibilisering av hypofyse adenom celler [ ,,,0],16]. AA spiller også en antibakteriell rolle og en tidligere studie fokuserte på struktur-aktivitetsforhold viste at karboksyl-gruppen på den aromatiske ringen, og en umettet sidekjede i anacardic syrederivatet er viktige for motilitet inhibering og den lytiske aktivitet av AA mot zoosporer [17 ]. Det spiller også en rolle som en antioksidant og demonstrerer anti-fedme og anti-inflammatorisk aktivitet [18] – [20]
AA hemmer aktivering av både den induserbare og konstitutiv ekspresjon av nukleær faktor-kappa. B (NF-kB), som aktiveres av kreftfremkallende og vekstfaktorer, og er antatt å forsterke apoptose i tumorceller i en konsentrasjon på 25 uM [9]. I mellomtiden har en tidligere studie vist via en rekke undersøkelser, for eksempel påvisning av cytotoksisitet, uttrykk for relevante proteiner og Ca
2 + mobilitet, som AA induserer ER (endoplasmatiske retikulum) stress og autofagi i lungekreftceller på en konsentrasjon på 10 uM [10]. Sårheling migrasjon analyser, har Transwell migrasjon analyser og musemodellanalyser i tillegg foreslått at AA kan fungere som en potent tumor angiogenese hemmer ved å målrette den Src /FAK /Rho GTPase signalveien, som fører til betydelig undertrykkelse av prostata tumorvekst ved lave dosenivåer ( 5-50 uM) [11]. AA har blitt vist ved en serie eksperimenter, inkludert cellesyklusanalyse, RT-PCR og WB, for å hemme LNCaP-celleformering ved å indusere G1 /S cellesyklus og apoptose ved konsentrasjoner på 5, 25, 125 pM [12]. Imidlertid har AA ikke blitt anvendt i kliniske situasjoner, selv om mange mennesker er tenkt å ta det som et helsetiltak supplement. Det bør bemerkes at, i motsetning til enkelte andre kreftformer, tyder våre Liggende studie som AA kan fremme proliferasjon og hemme apoptose i eggstokkreft celler, noe som indikerer at funksjonen av AA i ovarie cancer cellelinjer er kontroversiell.
relaterte molekylære mekanismer av AA i eggstokkene carcinoma celler har til dags dato, forble ukjent. For å undersøke de relaterte mekanismer i eggstokkreft celler, valgte vi to par av ovarialcancer cellelinjer basert på deres legemiddelresistens og invasive evner (SKOV3 og SKOV3 /DDP, og HO8910 og HO8910-PM, henholdsvis). Våre eksperimentelle studier viste at AA betydelig indusert celle levedyktighet i eggstokkreft celler på 15 mikrometer. Det skal bemerkes at selv om AA-indusert celleproliferasjon i alle celler i en treringstrinnet og tidsavhengig måte, både de legemiddelresistente (SKOV3 /DDP) og sterkt invasive (HO8910-PM) celler viste større følsomhet for AA eksponering, som kan være på grunn av deres større andel stamceller (tumor-initiering celler) eller økt stamcelleaktige egenskapene til disse cellene. AA behandling indusert S spredning i SKOV3 og SKOV3 /DDP celler; omvendt, det indusert G1 arrest i HO8910 og HO8910-PM celler. Flowcytometrisk apoptose analyse viste at behandling med AA hemmet sent apoptose i SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 og HO8910-PM celler. Det var et tilfelle rapportert, i brystkreftcelle, kan AA hemmer fortrinnsvis ER-α (østrogenreseptor-α) -positivt brystkreftcelleformering ved direkte østrogenreseptor-DNA-bindende domene (ER DBD) interaksjon [13]. Vi videre komplett immunofluoresce eksperiment for å påvise uttrykk av ER i fire eggstokkreft cellelinjer, viste resultatet at fire eggstokkreft cellelinjer har alle ER uttrykk. Da foreslår vi at ER-negativ eller ER-positive kan ikke påvirke AA funksjon på eggstokkreft cellelinjer, kan forskjellen mellom AA funksjon på brystkreftcellelinjer og eggstokkreft cellelinjer gjennom ulike ruter. For å undersøke dette videre finne vurderte vi apoptose sti-relaterte indikator, caspase 3 [25] – [27], og fant at dens mRNA og protein uttrykk nivåer var signifikant lavere i celler eksponert for AA. I uenighet med noen eksperimenter [28] – [31]. Derfor vurderte vi at AA kan ha en pro-tumor funksjon i ovarialcancer.
For å studere dette finne ytterligere, undersøkte vi en rekke andre indikatorer og funnet ut at de uttrykk for PI3K mRNA og protein i eggstokkreft celler behandlet med AA var høyere sammenlignet med ubehandlede kontrollceller. Våre data er i samsvar med at av Zachary et al. [21], som rapporterte at PI3K /AKT /mTOR veien er mangfoldig og berører like varierte aspekter av ovarial tumor utvikling, progresjon og pasient overlevelse. Flere forsøk har blitt gjennomført for å undersøke målrettet kreftbehandling via PI3K veien. Faktisk har en fersk prospektiv, storskala genomisk analyse vist at PI3K /AKT veien er ofte deregulert i høy grad serøs ovarietumorer [22] – [23]. PI3K kan betraktes som en viktig mediator av overlevelsessignaler som beskytter eggstokkreft celler fra apoptoseinduksjon [24]. Av denne grunn antar vi at A kan fremme proliferasjon in ovarian cancer via PI3K veien. Videre har vår studie vist at AA fremmer cellemigrering og invasjon i en konsentrasjonsavhengig måte, og AA eksponering induserer lamellipodia dannelse i alle fire cellelinjer undersøkt, som antydet med tett konsentrert F-aktin struktur.
Vi har også oppdaget invasjon og metastaserelaterte indikatorer og fant at uttrykket nivåer av VEGF mRNA og protein i AA-behandlede celler økt sammenlignet med kontrollceller. VEGF er kjent som en av de viktigste vekstfaktorer som er involvert i kar formasjon [32], [33]. Tyder på at det unormale uttrykk for VEGF i eggstokkreft er nært knyttet til tumorinvasjon og metastase [34], [35]. Som vi har omtalt ovenfor, spiller AA en mangfoldig rolle i ulike kreftformer og virker gjennom flere veier. For eksempel har potent inhiberende aktivitet av AA på VEGF-stimulert migrasjon, kapillarstruktur formasjon, feste og paxillin aktivering i endotelceller tidligere blitt rapportert [11]. Men i vår studie, ble AA funnet å fremme uttrykk for VEGF mRNA og protein i eggstokkreft celler. Derfor spekulerer vi at AA kan fremme migrasjon og invasjon i eggstokkreft via VEGF veien.
I konklusjonen, foreslår vi at AA kan potensere spredning, invasjon og metastasering via PI3K og VEGF trasé i eggstokkreft cellelinjer . Men de avvikende spesifikke molekylære mekanismer av AA i ovarialcancer trenger videre studier og klinisk manipulasjon også må nøye vurderes i det videre arbeidet.
Hjelpemiddel Informasjon
Tabell S1.
Primer sekvenser valgt for real-time RT-PCR
doi: 10,1371 /journal.pone.0099361.s001 plakater (DOC)
