Abstract
Mål
Denne studien er å undersøke hvilken rolle Mas-relaterte genet (Mrg) C i patogenesen og behandlingen av bein kreftsmerter (BCP).
Metoder
BCP musemodell ble etablert av osteosarkomcellelinje vaksinasjon. Smerterelatert atferd ble vurdert med spontan løfte oppførsel test og mekanisk allodyni test. Expression nivåer av MrgC, Gi, og NR2B i ryggmargen ble påvist med Western blot analyse og immunhistokjemi.
Resultater
Pain-relaterte atferdstester viste signifikant økt spontan flinches (NSF) og redusert pote uttak mekanisk terskel (PWMT) i musemodeller av BCP. Western blot analyse viste at sammenlignet med kontrollgruppen, og før modellering, alle ekspresjonsnivåer av MrgC, Gi, og NR2B i ryggmargen av BCP mus ble dramatisk forhøyet, som ble spesielt økt ved dag 7 etter operasjon og deretter, i en tidsavhengig måte. Videre behandling av MrgC agonist BAM8-22 signifikant oppregulert Gi og nedregulert NR2B ekspresjonsnivåer, i ryggmargen av BCP mus, på en tidsavhengig måte. På den annen side, anti-MrgC signifikant nedregulert Gi uttrykk, mens dramatisk oppregulert NR2B uttrykk i de BCP mus. Lignende resultater ble oppnådd fra immunhistokjemisk deteksjon. Viktigere, BAM8-22 dempes betydelig de nociceptive atferd i BCP mus.
Konklusjon
Våre resultater angitte MrgC-mediert GI og NR2B uttrykk endringer i BCP mus, som kan bidra til smerte overfølsomhet. Disse funnene kan gi en ny strategi for behandling av BCP i klinikken
Citation. Sun Y, Jiang M, Hou B, Lu C, Lei Y, Ma Z, et al. (2016) Mas-Related Gene (Mrg) C Aktivering demper Bone Cancer Pain via Moduler Gi og NR2B. PLoS ONE 11 (5): e0154851. doi: 10,1371 /journal.pone.0154851
Redaktør: Shao-Jun Tang, University of Texas Medical Branch, UNITED STATES
mottatt: 27 desember 2015; Godkjent: 20 april 2016; Publisert: 06.05.2016
Copyright: © 2016 Sun et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. All relevant data er innenfor papir
Finansiering:. Denne studien ble støttet av National Natural Foundation of China (81400914, 81500954, 81371207, 81300950, og 81500955), National Natural Foundation i Jiangsu-provinsen, Kina (RC2011006 og XK201140), og medisinsk teknologi Development Project i Nanjing (YKK13068). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Bone kreftsmerter (BCP) er en av de mest fastlåste faktorer hos pasienter som lider av primær bein svulster eller skjelettmetastaser, som sterkt påvirker pasientenes livskvalitet [1]. Så langt mekanismen for BCP er ennå ikke fullstendig klarlagt, og de nåværende behandlinger er alltid uunngåelig ledsaget med betydelige bivirkninger [2, 3]. Derfor er det veldig viktig og presserende å utvikle nye effektive terapeutiske strategier for BCP i klinikken.
Mange studier tyder på at, i gnagere, mas-relaterte genet (Mrg) C, en sensorisk neuron-spesifikke GPCR, aksjer betydelig homogenitet med sin human homolog, MrgX1, med omtrent 45-65% aminosyre-sekvensidentitet [4]. MrgC ligger spesielt i liten diameter dorsal root ganglion (DRG) nevroner, som er antagelig nociceptive. Det har vist seg at, intratekal injeksjon av MrgC agonist, dvs. BAM8-22 og γ2-MSH, kunne produsere antinociseptiv virkning og dempe varme hyperalgesi i akutte smertemodeller [5-7]. Dessuten, upubliserte data fra vårt laboratorium har også vist at, intratekal administrering av MrgC agonist BAM8-22 ville dempe BCP i en musemodell, på en doseavhengig måte.
NR2B er en av underenhetene av NMDA-reseptor , som har vist seg å være involvert i regulering av smerte i ulike skader [8, 9]. Tyrosinfosforylering av NR2B i ryggmargen er knyttet til sentral sensitivisering, øker dorsal horn oppstemthet og legge til rette for sanseinntrykk, som kan være ansvarlig for BCP [10, 11]. Tidligere studier har vist at NMDA-reseptorantagonister (for eksempel ketamin) og NR2B-selektiv antagonister (for eksempel ifenprodil og Ro25-6981) kunne utøve kraftige smertestillende effekter i dyremodeller av BCP [12, 13]. Imidlertid har disse antagonister også vist seg å være assosiert med utålelige bivirkninger, inkludert svekket hukommelse og psychotomimetic effekter. Derfor er det av stor betydning for å utforske nye måter å modulere NMDA-reseptorer, uten å påvirke den basale reseptor aktivitet, for å oppnå bedre analgetisk virkning.
I denne studien var det musemodell for BCP ble etablert av det inokulering av osteosarcom-celler, og rollen til MrgC i patogenesen og behandling av BCP ble undersøkt. Smerterelatert atferd ble vurdert i disse musemodeller, og uttrykket nivåer av Gi og NR2B i ryggmargen ble også oppdaget, før og etter manipulering av MrgC.
Materialer og metoder
dyr og cellekultur
Voksen mann C3H /HeJ mus, 4-6 uker gamle, veier 18-22 g, ble kjøpt fra Vital River Experimental Animal Center, Beijing, Kina. Disse dyrene ble tilvendt individuelt i henhold til en 12/12-timers lys /mørke syklus, med en konstant romtemperatur på 24 ° C, med fri tilgang til mat og vann. Alle dyre eksperimentelle prosedyrer ble godkjent av Animal Care og bruk komité av Affiliated Drum-Tower Hospital of Medical College of Nanjing University. Fysiske forhold til musene ble overvåket før hver opptreden tester, og ingen av disse musene døde uventet før den eksperimentelle endepunktet
Fibrosarkom NCTC 2472 celler (2087787;. American Type Culture Collection, ATCC, Manassas, VA, USA ) ble dyrket med NCTC 135-medium (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) med 10% hesteserum (Gibco, Grand Island, NY, USA) i en 5% CO
2, 37 ° C inkubator .
Animal gruppering og modellering
BCP modellen ble etablert i henhold til en tidligere prosedyren fra Schwei
et al
. [14]. I korthet, ble musene bedøvet med intraperitoneal injeksjon av 50 mg /kg pentobarbital natrium (1% i saltløsning), og en overfladisk innsnitt ble gjort i huden liggende den høyre articulatio ekt. Gonarthrotomy ble utført for å eksponere de femur kondylene, som så ble utsatt for lys depresjon forårsaket av tann bur. Cortex ble perforert med en 30-gauge nål. Til musene i modellgruppen (n = 60), 20 ul α-MEM inneholdende 2 x 10
5 NCTC 2472-celler ble injisert inn i margrommet til høyre femur ved hjelp av en 25-mL mikrosprøyte. Mus i sham gruppen (n = 20) ble injisert med α-MEM alene. Injeksjonen hullet ble tettet med amalgam, og innholdsrik vanning ble gjennomført med saltvann før såret ble endelig avsluttet. Alle nødvendige tiltak ble gjennomført for å minimere potensiell smerte og nød. For eksempel, ble musene var under generell anestesi når de prosedyrer ble utført. Tilstrammende ble brukt til å redusere blødning så mye som mulig. Infeksjon ble forhindret ved å operere under sterile forhold og med sterile utstyr.
Smerterelaterte atferdstester
Etter modellering, den spontane løfte oppførsel test og mekanisk allodyni test ble utført for å måle antall spontan flinches (NSF) og pote uttak mekanisk terskel (PWMT), henholdsvis. Alle testene ble utført i løpet av den lette fasen, og musene ble tillatt å akklimatisere seg i minst 30 minutter før hver test. NSF og PWMT ble undersøkt før dyret modellering (dag 0), på dager 3, 5, 7, 10 og 14 etter modellering, og på dag 1, 3 og 7 etter legemiddeladministrasjon.
For den spontane løfte oppførsel test, ble en mus holdt i en individuell plexiglass kammer (10 cm x 10 cm x 15 cm) i 30 min, og det høyre bakbenet NSF ble registrert i 2 minutter. . Løft av høyre bakben ikke relatert til walking eller grooming ble regnet som en vike
På den annen side, var den mekaniske allodyni test utført med Von Frey filamenter (0,16 til 2,0 g bøyekraft; Stoelting, Wood Dale, IL, USA), som beskrevet av Chaplan
et al
. [15]. En mus ble plassert i en individuell gjennomsiktig plexiglass kammer (10 cm x 10 cm x 15 cm) på et metallnett etasje med 0,5 cm x 0,5 cm kvadrater. Filamenter ble orientert vertikalt mot plantar overflaten med en tilstrekkelig kraft forårsaker svak bøyning mot dyret labben, som ble holdt for 6-8 s hver gang, med en 10-minutters intervall. Positiv respons ble definert som den sterke uttak eller labb flinching, og den PWMT ble bestemt ved anvendelse av sekvensielt økende og minkende stimulus styrke (dvs. opp-og-ned-metoden). Hver pote ble testet fem ganger for per stimulus styrke, inntil cutoff kraft på 2,0 g. Den laveste filament styrke med minst tre positive svar ble ansett som PWMT.
Drug tilberedning og administrasjon
Narkotika ble utarbeidet og administrert i henhold til tidligere publiserte protokoller [5]. BAM8-22 (SML0729, Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) og anti-MrgC antistoff (orb101320; Biorbyt, San Francisco, CA, USA) var begge oppløst i saltvann. Etter 14 dager etter modellering, ble musemodeller tilfeldig delt inn i følgende tre grupper: (1) den BCP modellen kontrollgruppen (n = 20), hvori de tumorbærende mus ble behandlet med bærer (saltvann) alene; (2) BAM8-22 gruppe (n = 20), hvor BCP mus ble behandlet med BAM8-22; og (3) den anti-MrgC gruppe (n = 20), hvori BCP-mus ble behandlet med anti-MrgC. For de BCP + B og BCP + A grupper, 5 mL BAM8-22 (8,0 nmol) eller anti-MrgC (1/20 v /v) ble administrert intratekalt, en gang per dag, 7 dager på rad [16].
Western-blot-analyse
Mus ble avlivet ved halshugging etter dypt bedøvet med 100 mg /kg pentobarbital-natrium. Lumbar ryggmargen L
3-L
5 segmenter ble fjernet og lagret i flytende nitrogen. Vevsprøver ble homogenisert med lyseringsbuffer, etterfulgt av sentrifugering (4 ° C) ved 13 000 rpm i 10 min. Proteinkonsentrasjonen ble bestemt med BCA kit (Thermo Fisher Scientific Life Science Research, Shanghai, Kina). Proteinprøve ble separert på SDS-PAGE, og deretter overført til en polyvinylidendifluorid-membran (Millipore, Billerica, MA, USA). Etter blokkering med 5% fettfri melk ved romtemperatur i 1 time, ble membranen inkubert med kanin-anti-muse-anti-MrgC polyklonalt antistoff (1: 500 fortynning, orb101320, Biorbyt), muse-anti-mus anti NR2B monoklonalt antistoff (1: 1000 fortynning, ab93610, Abcam, Cambridge, MA, USA), og kanin-anti-muse-anti-Gi polyklonalt antistoff (1: 500 fortynning, ab140333, Abcam), respektivt. Etter vasking, ble membranen inkubert med geite-anti-kanin-IgG (1: 5000 fortynning, ab6721, Abcam) eller geite-anti-muse-IgG (1: 5000 fortynning, ab6789, Abcam). Protein bandet visualisering ble oppnådd med ECL-metoden (Santa Cruz, Santa Cruz, CA, USA), og protein kvantifisering ble utført med IPLab programvare (Scanalytics, Fairfax, VA, USA). β-actin ble brukt som referanse kontroll.
Immunohistochemistry
For immunhistokjemi, ryggmargen L
3-L
5 segmenter ble dynket med 4% paraformaldehyde i 0,1 M fosfatbuffer (pH 7,4) på dag 3 etter legemiddeladministrering. Vev ble kuttet i 25-mikrometer seksjoner på en glidende mikrotom. Etter vasking med PBS, ble seksjonene blokkert med 10% (volum /volum) normalt føtalt bovint serum ved romtemperatur i 1 time. Deretter ble seksjonene inkubert med kanin-anti-muse-anti-MrgC polyklonalt antistoff (1: 250 fortynning, orb101320, Biorbyt) eller muse-anti-mus anti NR2B monoklonalt antistoff (1: 500 fortynning, ab93610; Abcam) ved 4 ° C i 48 timer. Etter vasking, ble seksjonene inkubert med Alexa Fluor 594 geit-anti-kanin-IgG (1: 500 fortynning, ab150084, Abcam) og Alexa Fluor 488 geit-anti-mus IgG (1: 500 fortynning, ab150117; Abcam) ved 4 ° C over natten . Etter tetting, ble seksjonene avbildet på 200 × forstørrelse med Leica TCS SP2 multiphoton konfokal mikroskop (Leica Microsystems, Wetzlar, Tyskland), og bildene ble analysert med Image-Pro Plus-programvare (Media Cybernetics, Rockville, MD, USA) .
Statistisk analyse
data ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD. Enveis ANOVA ble utført for gruppen sammenligning med LSD post hoc test når signifikante forskjeller ble observert.
P
0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Resultater
Smerterelatert atferd i BCP mus
For å vurdere smerterelatert atferd i høyre bakben av BCP mus, den antall spontane flinches (NSF) og potetilbaketrekning mekanisk terskel (PWMT) ble målt før modellering (dag 0), og på dag 3, 5, 7, 10, og 14 etter modell etablering. Våre resultater viste at det var ingen signifikant forskjell i NSF og PWMT mellom humbug og modellgrupper før modellering (fig 1). For NSF, i humbug gruppen, NSF ble signifikant forhøyet i dag 3 etter operasjonen (
P
0,05), som deretter tilbake til nivået sammenlignes før modellering på dag 5 etter operasjonen og deretter (fig 1A). På den annen side, i modellen gruppen, sammenlignet med før modellering, NSF ble også signifikant forhøyet i dag 3 etter modellering (
P
0,05), og deretter litt redusert på dag 5 etter modellering. Men NSF i modellen gruppen fortsatte å øke i dagene 7, 10 og 14 etter modellering, som var betydelig høyere enn før modellering (alle
P
0,05) (figur 1A). For PWMT, i humbug gruppen, PWMT ble betydelig redusert på dag 3 etter operasjonen (
P
0,05), som deretter tilbake til sammenlignbart nivå med før modellering 2 dager senere, og deretter (figur 1B). I modellen gruppen, sammenlignet med før modellering, den PWMT ble betydelig redusert på dag 3 etter modellering (
P
0,05), og deretter litt forhøyet 2 dager senere. Men PWMT i modellen gruppen holdt mink på dager 7, 10 og 14 etter modellering, som var betydelig lavere enn før modellering (alle
P
0,05) (figur 1B). Samlet utgjør disse resultatene viser en vellykket etablering av musemodell for BCP, som er egnet for følgende etterforskningen.
NSF (A) og PWMT (B) ble vurdert i humbug og BCP modellgrupper (n = 8) før dyret modellering (dag 0), og på dag 3, 5, 7, 10, og 14 etter modell etablering. Sammenlignet med før modellering, *
P
0,05; sammenlignet med sham gruppen på tilsvarende tidspunkt,
#
P
0,05.
Up-regulert uttrykk for MrgC, Gi, og NR2B i ryggmargen av BCP mus
For å undersøke uttrykket nivåer av MrgC, Gi, og NR2B i ryggmargen av BCP mus, ble Western blot analyse utført. Våre resultater viser at, sammenlignet med narre gruppe og før modellering, alle ekspresjonsnivåer av MrgC, Gi, og NR2B i BCP mus ble dramatisk forhøyet etter modellering, som ble spesielt øker på dag 7 etter operasjon og deretter, i en tid -avhengig måte (alle
P
0,05) (figur 2). Disse resultatene tyder på at uttrykket nivåer av MrgC, Gi, og NR2B i ryggmargen er oppregulert i de BCP mus, noe som kan bidra til patogenesen og utvikling av BCP.
(A) ekspresjonsnivåer av MrgC, Gi, og NR2B i ryggmargen av humbug mus og BCP mus ble detektert med Western blot analyse før dyret modellering (dag 0; D0), og på dag 3, 5, 7, 10 og 14 (D3- D14) etter modell etablering. (B-D) Statistisk analyser av MrgC (B), Gi (C), og NR2B (D) i ryggmargen av humbug og BCP mus (n = 6). Sammenlignet med før modellering, *
P
0,05; sammenlignet med sham gruppe,
#
P
0,05.
Effekter av MrgC agonist og anti-MrgC på Gi og NR2B uttrykk i ryggmargen av BCP mus
For å vurdere virkningene av MrgC agonist og anti-MrgC på uttrykket nivåer av MrgC, Gi, og NR2B i ryggmargen av BCP mus, disse dyremodeller ble først administrert med BAM8-22 eller anti-MrgC, og deretter uttrykket nivåer av MrgC, Gi, og NR2B i ryggmargen ble påvist med Western blot-analyse og immunhistokjemi. Våre resultater fra Western blot-analyse viste at, sammenlignet med kontrollgruppen (musemodeller som mottar kjøretøy), den MrgC agonisten BAM8-22 signifikant oppregulert uttrykket nivåer av MrgC og Gi, mens signifikant nedregulert den NR2B ekspresjonsnivået, i ryggmargen av BCP mus, i en tidsavhengig måte (
P
0,05) (figur 3A-3D). På den annen side, sammenlignet med kontrollen (bærer) gruppe, anti-MrgC signifikant nedregulert uttrykket nivåer av MrgC og Gi, mens dramatisk oppregulert den NR2B ekspresjonsnivået i ryggmargen av BCP mus, i en tidsavhengig måte (
P
0,05) (figur 3A-3D). Lignende resultater ble oppnådd for immunohistokjemisk påvisning av MrgC og NR2B i ryggmargen av BCP mus. Sammenlignet med kontrollgruppen (kjøretøy) gruppe, ble uttrykket nivåer av NR2B i ryggmargen betydelig redusert med BAM8-22 og betydelig forhøyet ved anti-MrgC, i BCP mus (både
P
0,05) (fig 3E-3G). Samlet utgjør disse resultatene tyder på at manipulering av MrgC vil kunne påvirke uttrykk nivåer av Gi og NR2B i ryggmargen av BCP mus.
(A) Uttrykket nivåer av MrgC, Gi, og NR2B i ryggmargen ble detektert med Western blot-analyse, i narre mus, modell kontroll (Veh) mus, og modell mus administrert med BAM8-22 eller anti-MrgC, på dag 1, 3 og 7 etter legemiddeladministrering. (B-D) Statistiske analyser av MrgC (B), Gi (C), og NR2B (D) ekspresjonsnivåer etter legemiddeladministrering som antydet ved Western blot-analyse (n = 6). (E) Uttrykk for MrgC (rød) og NR2B (grønn) i ryggmargen ble påvist med immunhistokjemi i humbug mus, modell kontroll (kjøretøy) mus, og modell mus behandlet med BAM8-22 eller anti-MrgC (× 200) . (F-G) Statistiske analyser av MrgC (F) og NR2B (G) ekspresjonsnivåer etter legemiddeladministrering som antydet ved immunhistokjemi (n = 6). Sammenlignet med kjøretøygruppe,
P
0,05; sammenlignet med den tidligere tidspunkt,
$
P
0,05.
MrgC agonist demper nociceptive atferd i BCP mus
For å vurdere om MrgC aktivering kan utøve analgetiske effekter i BCP mus, ble disse dyremodeller gis med BAM8-22 for 7 påfølgende dager (fra dag 14 etter operasjon), og deretter nociceptive atferd ble vurdert på dag 1, 3 og 7 etter Drug Administration. Anti-MrgC ble anvendt som negativ kontroll. Våre resultater viste at sammenlignet med kontrollgruppen (musemodeller behandlet med bærer), BAM8-22 betydelig redusert NSF og økt PWMT i den ipsilaterale bakpoten av BCP mus (
P
0,05), i en tidsavhengig måte (figur 4). På den annen side, ved behandling av anti-MrgC ytterligere dramatisk økt NSF og redusert PWMT i disse BCP mus (
P
0,05), i en tidsavhengig måte (figur 4). Disse resultater antyder at, kunne ved behandling av MrgC agonist vesentlig dempe nociceptive atferd hos disse BCP mus.
BCP-mus ble administrert med BAM8-22 eller anti-MrgC i 7 påfølgende dager (fra dag 14 etter operasjon ), og deretter nociceptive atferd ble vurdert på dag 0, 1, 3 og 7 (dag 0-dag 7) etter legemiddeladministrasjon. Statistiske analyser av NSF (A) og PWMT (B) i BCP mus behandlet med BAM8-22 eller anti-MrgC. Sammenlignet med BCP modell kontroller ved tilsvarende tidspunkt,
P
0,05.
Diskusjoner
I denne studien, resultatene viste at BCP patogenesen ble assosiert med oppregulert uttrykk for MrgC, Gi, og NR2B i ryggmargen. Videre er MrgC agonist BAM8-22, men ikke anti-MrgC, kunne gi en betydelig lindre unormale smerterelatert adferd, gjennom regulerings GI og NR2B ekspresjonsnivåene. Disse resultatene kan gi en potensiell smertestillende strategi for BCP i klinikken.
BCP er klinisk preget av betennelse, nevropatiske effekter, og tumorigent potensial-[17, 18]. Det er blitt vel akseptert at NMDA-reseptoren (spesielt NR2B-subenheten) -avhengig sentral sensitivisering spiller en viktig rolle i smertefølsomme [19]. I de postsynaptiske tettheter, er NMDA-reseptorer bundet til stillas og signaliseringsproteiner, som regulerer den synaptiske transmisjon [20]. Videre kan NMDA-reseptor binder seg til Ca
2 + /calmodulin-avhengig protein-kinase II (CaMKII) og medlemmer av Maguk familien (for eksempel PSD-95). Denne interaksjon par NMDA-reseptor-mediert Ca
2+ tilstrømning til å påvirke de intracellulære effektorene og signal enzymer, noe som bidrar til NMDA-reseptor-avhengig sentral sensitivisering [21]. Vår tidligere studie har vist at fosforylering av NR2B i rygg dorsal horn i BCP modellene var signifikant oppregulert etter fibrosarkom celle infusjon, som er ledsaget av åpenbare smerterelatert atferd [11]. Videre kan oppregulering av NR2B fosforylering bli betydelig redusert ved intratekal injeksjon av MrgC agonist BAM8-22. Våre resultater i denne studien viste at BAM8-22 trykt BCP-indusert hyperalgesi, oppregulert Gi og nedregulert NR2B uttrykk i ryggmargen, noe som indikerer at MrgC kunne være sammen med Gi, indusere analgesi.
funksjonelle betydningen av Gi-aktivering i den DRG-nevroner er tidligere blitt rapportert [22, 23]. Basert på disse funnene og vår, er det mulighet for at MrgC kunne regulere smerte følsomhet gjennom å aktivere Gi signalveien. Selvfølgelig er videre studier fortsatt nødvendig for å bekrefte denne hypotesen. På den annen side, har andre studier vist at BAM8-22 kunne hemme vedvarende inflammatorisk og kjemisk smerte, og ned-regulere ekspresjonen nivået av c-fos i ryggmargen [5, 6, 24]. Disse funnene tyder på at de MrgC ligander kan fungere som anti-hyperalgesibestemmelsen midler. Gi protein er involvert i spenning og /eller inflammasjon indusert grunnings [25], så vel som opioid-indusert hyperalgesibestemmelsen grunnings [26]. Gi aktivering kan bidra til antinocisepsjon av BAM8-22. BAM8-22 kunne doseavhengig redusere NMDA-fremkalt smerte atferd hos rotter [27], noe som tyder på at det kan indusere spinal analgesi ved å undertrykke NMDA reseptor-relaterte eksitasjon. Det har nylig blitt rapportert at aktivert MrgC kunne undertrykke den opp-regulering av pro-nociceptive mediatorer (f.eks, nNOS og CGRP) og hemmer c-fos ekspresjonen henhold inflammatoriske smertetilstander [5, 7].
I denne studien, resultatene indikerte at MrgC aktivering lindres BCP relatert atferd, som var i tråd med tidligere funn [11, 12, 28, 29]. Implantasjon av tumorceller inn i det høyre femur induserte progressive endringer i NSF og PWMT, noe som indikerer vellykket etablering av BCP modell. I mellomtiden ble disse BCP mus ledsaget av bemerkelsesverdige økt uttrykk nivåer av Gi og NR2B i ryggmargen, som kan være involvert i utvikling og vedlikehold av BCP. Videre våre funn videre avdekket at intratekal administrasjon av MrgC agonist BAM8-22 dempes den taktile overfølsomhet og smerterelatert atferd i den skadde pote av disse musemodeller, og modulert uttrykket nivåer av Gi og NR2B i ryggmargen. Men motsatt effekt ble observert for anti-MrgC. Disse resultatene viser at MrgC, Gi, og NR2B kan delta i reguleringen av smerterelatert atferd i disse BCP mus. Ytterligere i dybden studier er fortsatt nødvendig for å utforske de detaljerte mekanismer.
Våre resultater viste at NSF ble økt og PWMT ble redusert i den ipsilaterale hind lem av disse BCP mus, på dag 7 etter operasjonen. Imidlertid kan den reduserte PWMT på dag 3 og gjenvunnet atferd på dag 5 etter modellering tilskrives de operasjonelle påvirkninger. Ved dag 14 etter operasjonen, er BCP-relaterte handlingene var åpenbar og tendens til å være stabil. Følgelig, dag 14 etter operasjonen ble valgt som tidspunkt for narkotika intervensjon i disse BCP mus. Med tanke på kompleksiteten og kontinuitet i BCP, ble repeterende medikament administrasjon brukes til omtrent utøve den terapeutiske effekten og undersøke optimal dosering varighet.
I konklusjonen, våre resultater viste at uttrykket nivåer av MrgC, Gi, og NR2B ble dramatisk forhøyet i ryggmargen av BCP mus. Videre MrgC agonist BAM8-22 betydelig oppregulert Gi og nedregulert NR2B uttrykk nivåer. Viktigere, BAM8-22 kunne dempe nociceptive atferd i disse BCP mus. Våre resultater indikerte MrgC-mediert Gi /NR2B uttrykk endringer i BCP mus, noe som kan bidra til modulering av smerte overfølsomhet. Disse funnene kan gi en ny strategi for behandling av BCP i klinikken.
Takk
Denne studien ble støttet av National Natural Foundation of China (81400914, 81500954, 81371207, 81300950 den, og 81500955 ), National Natural Foundation i Jiangsu-provinsen, Kina (RC2011006 og XK201140), og medisinsk teknologi Development Project i Nanjing (YKK13068) den.
