Abstract
Bakgrunn
Oral plateepitelkarsinom (OSCC) er den fjerde største årsaken til mannlig kreftdødsfall i Taiwan . Eksponering for miljømessige carcinogener er den viktigste risikofaktor for å utvikle OSCC. CD44, et velkjent svulst markør, spiller en avgjørende rolle i tumorcelledifferensiering, invasjon og metastasering. Denne studien undersøkte CD44 single-nukleotid polymorfismer (SNPs) med miljømessige risikofaktorer for å bestemme OSCC mottakelighet og clinicopathological egenskaper.
Metodikk /hovedfunnene
Sanntids polymerase chain reaction (PCR) ble benyttet å analysere 6 SNPs av CD44 i 599 pasienter med kreft i munnhulen og 561 kreftfrie kontroller. Vi fastslått at CD44 rs187115 polymorfi bærere med genotype AG, GG, eller AG + GG var assosiert med kreft i munnhulen mottakelighet. Blant 731 røykere, CD44 polymorfismer bærere med betel-nøtt å tygge vane hadde en 10,30 til 37,63 ganger større risiko for å få kreft i munnhulen i forhold til CD44 villtype (WT) bærere uten betel-nøtt å tygge vane. Blant 552 betel-nøtt chewers, CD44 polymorfismer bærere som røykte hadde en 4,23 til 16,11 ganger større risiko for å få kreft i munnhulen i forhold til dem som bar WT men ikke røykte. Til slutt har vi også observert at fasen III og oral kreftpasienter IV hadde høyere frekvens av CD44 rs187115 polymorfismer med varianten genotype (AG + GG) sammenlignet med villtype (WT) bærere.
Konklusjon
Våre resultater tyder på at gen-miljø interaksjoner mellom CD44 polymorfismer og betel pund tygging og tobakksrøyking øker mottakelighet for kreft i munnhulen utvikling. Pasienter med CD44 rs187115 variant genotyper (AG + GG) ble korrelert med en høyere risiko for kreft i munnhulen utvikling, og disse pasientene kan ha større chemoresistance til Avansert- til sent stadium kreft i munnhulen enn WT bærere gjør. Den CD44 rs187115 polymorfisme har potensial prediktiv betydning i oral karsinogenese og kan også brukes som faktorer for å forutsi den kliniske fasen i OSCC pasienter
Citation. Chou YE, Hsieh MJ, Hsin CH, Chiang WL, Lai YC, Lee YH, et al. (2014) CD44 Gene Polymorfisme og miljøfaktorer på Oral Cancer Følsomhet i Taiwan. PLoS ONE 9 (4): e93692. doi: 10,1371 /journal.pone.0093692
Redaktør: Patrick A. Singleton, University of Chicago, Department of Medicine, USA
mottatt: 9. desember 2013, Godkjent: 09.03.2014; Publisert: 03.04.2014
Copyright: © 2014 Chou et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble finansiert med tilskudd fra National Science Council, Taiwan (NSC-100-2632-B-040-001-My3). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
introduksjon til
Oral plateepitelkarsinom (OSCC) er en vanlig ondartet kreft i hode og nakkeregionen. Det er ikke bare den sjette vanligste kreftformen i verden, men også den fjerde største årsaken til mannlig kreftdød i Taiwan [1], [2]. Til tross for utvikling avbildningsteknikker som gir mer presis deteksjon og iscenesettelse, kombinert med fremskritt innen kirurgi, cellegift og stråling, har prognose og dødelighet av OSCC holdt seg stabilt [3], [4]. Kreftfremkallende eksponering er den primære risikofaktor for å utvikle OSCC; spesielt, har tidligere studier antydet at betel-pund tygging, tobakksrøyking, og alkoholbruk er de viktigste risikofaktorer knyttet til OSCC utvikling [5] -. [7]
CD44 glykoproteiner er medlemmer av hyaluronat reseptoren og er forbundet med en rekke fundamentale biologiske prosesser, slik som lymfocytt- homing, cellemigrering, inflammasjon, hematopoiesen, sårheling, apoptose, og embryonal utvikling [8]. Til tross for sin regulering i mange cellulære prosesser, spiller en avgjørende rolle CD44 i tumorcelledifferensiering, invasjon og metastase [9], [10]. CD44
+ celler er foreslått å være kreft stamceller (cscs) fordi CD44 er et velkjent markør for bryst-kreft initiere celler (BCICs) [10], [11]. CD44
+ celler i mus innpode ved høyere frekvenser, og har forbedret chemoresistance [11] – [13]. Videre er CD44
+ -celler også involvert i epiteliale til mesenchymal overgang (EMT), som er en genetisk program assosiert med metastase [14]. Selv om regulering av CD44 uttrykk i hode og nakke kreft forblir ufullstendig forstått, har nyere studier vist og foreslo at den økte CD44 uttrykk i OSCC er korrelert med økt metastaser, gjentakelse, motstand mot kjemoterapi og strålebehandling, og redusert overlevelse [13], [15] -. [17]
enkeltnukleotidpolymorfi (SNPs) er den vanligste typen av DNA-sekvensvariasjon, og ekspresjonen av bestemte gener kan påvirkes av deres genetiske variasjoner [18], [19] . Tidligere studier har dokumentert effekten av CD44 polymorfismer på menneskelig kreft mottakelighet [20] – [24]. CD44 genetiske varianter har blitt identifisert som spiller en betydelig regulerende rolle i cellulære stressresponser til kjemoterapeutika og videre påvirker sarkom forekomst og overlevelse [20]. Germline polymorfismer i tykktarm CSC gener har vist at CD44 er involvert i å forutsi tumor tilbakefall hos pasienter med kolorektal kreft [21]. I brystkreft, er det SNPs av CD44 foreslått å påvirke brystkreft utvikling og prognose ved å øke CD44 uttrykk [22], [23]. Videre kan CD44 polymorfismer, alene eller i kombinasjon, å fungere som markører for å identifisere lokaliserte gastrisk adenokarsinom pasienter med en høy risiko for tumorresidiv [24]. Dermed hypotese vi at CD44 polymorfismer spille en avgjørende rolle i oral cancer utvikling.
Effektene av CD44 på menneskelig kreft metastasering og prognose er godt dokumentert, men effektene av CD44 genet SNPs og miljø karsinogener på kreft i munnhulen mottakelighet og kliniske funksjoner forblir dårlig undersøkt. I denne studien ble en case-kontroll undersøkelse utført for 6 SNPs ligger i promoter region eller 3’UTR av CD44 å analysere deres bidrag og assosiasjoner mellom miljøfaktorer og oral cancer clinicopathologic egenskaper.
Materialer og metoder
fag og Prøvetaking
i 2007-2012, rekrutterte vi 599 pasienter (577 menn og 22 kvinner med en gjennomsnittsalder på 54,34 ± 11,28 år) på Chung Shan Medical University Hospital i Taichung og Changhua Christian Hospital og Show Chwan Memorial Hospital i Changhua, Taiwan som tilfellet gruppen. For kontrollgruppen, tilfeldig valgte vi 561 ikke-kreft personer (457 menn og 104 kvinner med en gjennomsnittsalder på 51,81 ± 14,71 år) som besøkte de samme sykehusene og dermed var fra samme geografiske område. For begge tilfeller og kontroller, brukte vi et spørreskjema for å få eksponering informasjon om betel-pund tygging, tobakksbruk og alkoholforbruk. Medisinsk informasjon av tilfellene, inkludert TNM klinisk staging, primærtumor størrelse, spredning til lymfeknuter, og histologisk klasse, ble hentet fra deres journaler. Oral-kreftpasienter ble klinisk iscenesatt på tidspunktet for sin diagnose i henhold til TNM staging system av amerikanske Joint Committee on Cancer (AJCC) Staging Manual (7th ed.). Stage I = T1N0M0; Stage II = T2N0M0; Stage III = T3N0M0, eller T1, T2 eller T3N1M0; Stage IV = noen T4 lesjon, noen N2 eller N3 lesjon, eller noen M1 lesjon. Tumor differensiering ble undersøkt av en patolog henhold til AJCC klassifisering. Fullblodsprøver innsamlet fra kontroller og OSCC pasienter ble plassert i rør inneholdende etylendiamintetraeddiksyre (EDTA), ble umiddelbart sentrifugert, og deretter lagret ved -80 ° C. Denne studien ble godkjent av Institutional Review Boards of Show Chwan Memorial Hospital, og informert skriftlig samtykke til å delta i studien ble innhentet fra hver enkelt.
Valg av CD44 Polymorfisme
Totalt seks SNPs i CD44 ble valgt ut fra de internasjonale HapMap Prosjekt data for denne studien. Vi inkluderte SNP rs1425802 i promoter regionen. Tre SNPs (rs11821102, rs10836347 og rs13347) som finne i den 3’UTR av CD44 ble valgt i denne studien siden disse SNPs ble funnet å påvirke binding evne viss mikroRNA i en kinesisk befolkning [23]. Videre ble den andre SNPs (rs187115 og rs713330) er valgt i denne studien fordi genet polymorfismer av disse SNPs har blitt funnet å assosiere med mage og bryst kreft [23], [24].
Genomisk DNA Extraction
Genomisk DNA ble ekstrahert ved hjelp QIAamp DNA blod mini-sett (Qiagen, Valencia, CA, USA) etter produsentens anvisninger. Vi oppløste DNA i TE-buffer (10 mM Tris og 1 mM EDTA; pH 7,8) og deretter kvantifisert ved å måle den optiske tetthet ved 260 nm. Sluttpreparatet ble lagret ved -20 ° C og brukt til å lage maler for polymerase-kjedereaksjon (PCR) [25].
real-time PCR
Allelic diskriminering av den rs1425802, rs187115 , rs713330, rs11821102, rs10836347 og rs13347 polymorfismer av CD44-genet ble vurdert med ABI StepOne real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA), og analysert med SDS vers. 3.0 programvare (Applied Biosystems) under anvendelse av TaqMan analysen. Sluttvolumet for hver reaksjon ble 5 ul, inneholdende 2,5 ul TaqMan genotyping Master Mix, 0,125 mL TaqMan probe blanding, og 10 ng genomisk DNA. Den real-time PCR inkludert et innledende denatureringstrinn ved 95 ° C i 10 minutter, etterfulgt av 40 sykluser ved 95 ° C i 15 s og deretter ved 60 ° C i 1 min [26], [27].
Statistical Analysis
Forskjeller mellom de 2 gruppene ble betraktet som signifikant hvis
p
verdier var 0,05. Hardy-Weinberg likevekt (HWE) ble vurdert ved hjelp av en godhet-of-fit
Χ
2
-test for biallelic markører. Mann-Whitney
U
-test og Fishers eksakte test ble brukt for å sammenligne forskjeller i fordelingene av pasientens demografiske kjennetegn mellom de ikke-kreft (kontroll) og oral-kreft grupper. De justerte odds ratio (ORS) og 95% konfidensintervall (CIS) av sammenhengen mellom genotypefrekvensene og risiko pluss clinicopathological karakteristika ble beregnet ved hjelp av flere logistikk regresjonsmodeller, etter kontroll for andre kovariatene. Vi analyserte alle data med Statistiske Analytic System (SAS Institute, Cary, NC, USA) for Windows.
Resultater
Den statistiske analyser av demografiske kjennetegn er vist i tabell 1. Vi fant signifikant forskjellig fordelinger av alder (kontroll: 51,81 ± 14,71; oral cancer: 54,34 ± 11,28;
p
= 0,001) og kjønn (kontroll: 457 menn og 104 kvinner, oral cancer: 577 hanner og 22 hunner;
p
0,0001) mellom de to gruppene. Det ble ikke observert signifikante forskjeller i fordelingen av betel-pund tygging (
p
0,0001), alkoholforbruk (
p
0,0001), og tobakksrøyking (
p
. 0,0001) mellom kontroller og OSCC pasienter
genotype fordelinger og sammenhenger mellom kreft i munnhulen og CD44 gen polymorfismer er vist i tabell 2. Alleler med høyest fordeling frekvens for rs1425802, rs187115, rs713330 , rs11821102, rs10836347, og rs13347 gener av CD44 både i frisk kontroll og orale kreftpasienter som henholdsvis var heterozygote for A /G, homozygot for AA, homozygot for T /T, homozygote for G /G, homozygote for C /C, og homozygot for C /C. Korrigert for flere variabler, ble ingen signifikante forskjeller observert i OSCC pasienter med rs1425802, rs713330, rs11821102, rs10836347, og rs13347 polymorfismer av CD44-genet sammenlignet med de med villtype (WT). Men pasienter med CD44 polymorfe rs187115 AG og GG genotyper viste en signifikant (
p
0,05) høyere risiko for 2.098- (95% konfidensintervall (KI) = 1,448 til 3,039) og 2.988- (95 % CI = 1,280 til 6,973), for å ha OSCC sammenlignet med tilsvarende WT homozygote pasienter. Videre et lignende resultat ble også observert hos pasienter med CD44 polymorfe rs187115 AG + GG genotyper. Videre i hanner gruppen pasienter med CD44 polymorfe rs187115 AG og GG genotyper viste en signifikant (
p
0,01) høyere risiko for 1.810- (95% konfidensintervall (KI) = 1,217 til 2,693) og 3.215- (95% KI = 1,348 til 7,664), for å ha OSCC sammenlignet med tilsvarende WT homozygote pasienter.
Interaktive effekter mellom miljørisikofaktorer og genetisk polymorfisme av CD44 er vist i tabell 3 og 4. Blant 731 røykere, personer med enten minst 1 G allel av rs1425802 eller rs187115, en C-allelet av rs713330, en A-allelet av rs11821102, en T-allelet av rs10836347 eller rs13347 eller betel-nøtt-chewing vane hadde henholdsvis 5,443 – (95% KI: 2,919 til 10,148), 10.519- (95% KI: 6,15 til 17,979), 11.144- (95% KI: 6,923 til 17,937), 13.055- (95% KI: 7,984 til 21,348), 13.455- ( 95% KI: 8,292 til 21,832), og 5.703 ganger (95% KI: 3,203 til 10,156) høyere risiko for å ha kreft i munnhulen. Personer med minst 1 G allel av rs1425802 eller rs187115, en C-allelet av rs713330, en A-allelet av rs11821102, en T-allelet av rs10836347 eller rs13347, og som tygger betelnøtter hadde respektive 21.205- (95% KI: 10,901 til 41,248) , 37.631- (95% KI: 18,366 til 77,106), 23.333- (95% KI: 9,461 til 57,544), 10.295- (95% KI: 4,400 til 24,087), 16.160- (95% KI: 6,354 til 41,097), og 24,714 ganger (95% KI: 12,331 til 49,531) høyere risiko for å ha kreft i munnhulen i forhold til personer med WT homozygote som ikke tygge betelnøtter (tabell 3)
Blant betel-. mutter forbrukere i vår årsklasse, pasienter med CD44 polymorfe rs1425802, rs187115, rs713330, rs11821102, rs10836347 og rs13347 gener og som røykte hadde tilsvar 8.004- (95% KI: 1,530 til 41,854), 13.497- (95% KI: 4,554 til 40,002) , 16.111- (95% KI: 4,359 til 59,541), 4.228- (95% KI: 1,328 til 13,463), 4.899- (95% KI: 1,425 til 16,850), og 14,468 ganger (95% KI: 3,778 til 55,411) høyere risiko for å ha kreft i munnhulen i forhold til betel-pund chewers med WT-genet som ikke røyker (tabell 4). Dessuten, folk som enten var polymorfe for CD44 i seks loci (rs1425802, rs187115, rs713330, rs11821102, rs10836347 og rs13347) eller som røykte var på et 5,070 til 9,313 ganger risiko (
p
0,05) av utvikle kreft i munnhulen, sammenlignet med personer med WT-genet som ikke røyker (tabell 4). I lys av de ovennevnte resultatene, foreslår vi at CD44 genet polymorfismer har sterke virkninger på oral-kreft mottakelighet i betelnøtt og /eller røyking forbrukere.
For å klargjøre hvilken rolle CD44 genet polymorfismer i muntlig kreft clinicopathologic statuser , slik som tumormetastaser klinisk stadium, tumorstørrelse, lymfeknutemetastase, fjern metastase, og celledifferensiering, fordelingen hyppigheten av kliniske status og CD44 genotypefrekvensene i orale kreftpasienter ble estimert. Ingen signifikant sammenheng mellom rs1425802, rs713330, rs11821102, rs1836347, og rs13347 genet polymorfismer og clinicopathologic statusene ble observert. Men blant de 599 orale kreftpasienter, de med det polymorfe rs187115 genet hadde en høyere risiko for å utvikle stadium III eller IV OSCC (justert odds ratio (OR) = 1,619; 95% CI = 1,124 til 2,333) sammenlignet med pasienter med rs187115 WT, men ingen forskjell i tumorstørrelse, lymfeknutemetastase, fjernmetastaser, eller celledifferensiering ble observert (tabell 5).
Diskusjoner
i denne studien har vi gitt roman informasjon om effektene av CD44 på kreft i munnhulen mottakelighet, og belyst interaksjoner av miljømessige risikofaktorer og clinicopathologic statuser.
Alkoholforbruket forbruket~~POS=HEADCOMP, betel-pund tygging, og tobakksrøyking er de viktigste miljørisikofaktorer for kreft i munnhulen. I denne studien høyere forhold mellom personer som hadde tygget betel pund, konsumert alkohol og røykte tobakk, ble observert i gruppen av OSCC pasienter (76,6%, 59,4% og 85,3%, henholdsvis) sammenlignet med kontrollene (16,6%, 38,1% og 39,2%, henholdsvis). Dermed er Betel-pund tygging, alkoholforbruk og tobakksrøyking er angitt å være sterkt korrelert med økt risiko for kreft i munnhulen. Videre rapporterer Lu et al at flere mannlige gruppe tygget areca mutter enn kvinnelige gruppen (9,2% vs 0,9%) i Taiwan studier, som bør være en stor bidragsyter til høyere munnhulekreft forekomst av menn siden areca mutter tygging er et godt anerkjent risikofaktor for kreft i munnhulen [28].
i munnhulekreft, har CD44 uttrykk blitt observert å ha en signifikant sammenheng med tung røyking og /eller alkoholforbruk, og dermed forutsi dårlige prognoser. En statistisk signifikant sammenheng mellom røyking og CD44 uttrykk har blitt observert i SCCS ligger i orolarynx, hypopharynx, og strupehodet [29]. Areca pund har vært ansett som et kreftfremkallende for mennesker, og det er en uavhengig risikofaktor i OSCC utvikling blant folk som tygger det i visse regioner i Asia. Den Betel pund brukes i Taiwan inneholder areca mutter, lime, og piper betel blomsterstand eller blad [30]. Men en studie av Kuo et al viste at tap av CD44v7-8 uttrykk kan være en verdifull faktor for å bestemme prognose i OSCC pasienter, mens ingen signifikant korrelasjon ble observert mellom CD44v7-8 uttrykk og den daglige eller totale forbruket av betel quids eller røyking av sigaretter av OSCC pasienter [31].
uttrykk for CD44 og sitt forhold til tumor prognose er fortsatt kontroversielt. Enkelte studier har indikert at overekspresjon av CD44 i tumorer er korrelert med øket motstand mot strålebehandling og en forhøyet risiko for lokalt tilbakefall [32] – [34], mens andre har knyttet dårlig prognose til CD44 nedregulering på tumorceller, særlig i OSCC [35], [36]. Nyere studier har knyttet økt CD44 uttrykk med høyere OSCC aggressivitet [15], [16], [37], [38]. Men så langt, rapporter om CD44 SNP uttrykk i OSCC har vært begrenset. I denne studien, søkte vi å finne de genetiske varianter av CD44 som kan gi risiko for OSCC i 599 pasienter og 561 friske kontroller. Dataene i tabell 2 viser at de med CD44 polymorfi rs187115 variant genotyper (AG + GG) hadde en høyere risiko for OSCC sammenlignet med de med WT genotype. Selv om den funksjonelle betydningen av CD44 SNP rs187115 ikke har blitt testet eksperimentelt, er en forening med risiko for kreft i munnhulen foreslått basert på plasseringen av de analyserte varianter. Men i visse gener, en SNP som oppstår i koding, promoter, eller regulatorisk region kan ha funksjonelle konsekvenser [39].
CD44 SNP rs187115 ligger i første intron av CD44. Selv om ingen regulerende rolle for intron 1 av CD44 har blitt foreslått, Zhou et al rapporterte en lignende intron 1 CD44 SNP i brystkreft og indikerte at det kan spille en rolle i endret spleising av CD44 og tegnet uttrykk nivå [22]. Videre, en tidligere studie funnet ut at CD44 SNP rs187115 besitter den største alleliske forskjell i cellevekst svar på vanlige kjemoterapeutika, uavhengig av p53 mutasjons statuer i alle 59 testede cellelinjer [20]. I vår studie dataene viste at rs187115 er forbundet med økt risiko for stadium III /IV, men ikke med tumorstørrelse, metastasering av fjerntliggende organ og /eller lymfeknuter, som vist i tabell 5. Det viser AJCC klassifisering tilknytningen mellom fasene III /IV med større svulst, fjernmetastaser og spredning til lymfeknuter. Slike uoverensstemmelser kan skyldes at bare 8 individer med fjernmetastaser, som kan dypt påvirke den statistiske analysen. Videre fordeling av saker med spredning til lymfeknuter (N0) mellom stadium II (T2N0M0) stadium III (T3N0M0) kan også bidra til ovennevnte inconsistence.
Flere studier har implisert at cscs spille en sentral rolle i kreft progresjon, invasjon, og tilbakefall av sykdommen etter behandling, og årsaken til høy sykelighet og til slutt død i de fleste pasienter med munnhulekreft er fjernmetastaser [40], [41]. Cscs i OSCCs har blitt observert og definert ved hjelp av flere metoder, for eksempel cellelinjer, pasient avledet xenograftene og primær vevsprøver [42]. CD44 er et CSC-genet og har blitt observert å være sterkt uttrykt i dårlig differensierte metastatiske forstadier til munnhulekreftpasienter, som fører til invasjon, malignitet, og dårlig prognose [43]. Videre er orale cscs vært ansett for å ha iboende medikament og stråling motstand som motvirker effekten av konvensjonell terapi, noe som fører til tumorresidiv [42], [44]. En tidligere studie viste at CD44
høy undergruppe fra orale kreftceller representerer økt levedyktighet og overlevelse sammenlignet med CD44
lave celler etter behandling med et panel av cytotoksiske legemidler, inkludert 5-FU, cisplatin, docetaxel, paclitaxel, og carboplatin, så vel som strålings [45]. I vår studie, fordi vi observert signifikant sammenheng av CD44 SNP rs187115 funksjonell variant G med oral cancer mottakelighet i stadium III og IV OSCC pasienter, og CD44 SNP rs187115 ble observert å være assosiert med chemoresistance [20], foreslo vi at den muntlige CSC karakteristikker av CD44 bidratt til chemoresistance av rs187115 polymorfisme i kreft i munnhulen, og CD44 SNP rs187115 polymorfisme kan fungere som en markør for å forutsi dårlig prognose i OSCC pasienter. Vi observerte også at uttrykket av CD44 rs13347 polymorfisme i brystkreftpasienter i en tidligere studie [23] skilte seg fra den i OSCC pasientene i vår studie. Det er blitt foreslått at det er ikke mutasjon av CD44, men de faktorer som fremmer karsinogenese, som styrer mønstre av misregulated CD44 i de fleste kreft [46]. Disse faktorene omfatter mitogene signaler, slik som Ras-MAP kaskade, som kontrollerer alternativ spleising av CD44, [47], [48] og tap av forskjellige subenheter av SWI /SNF kromatin remodelle kompleks som fører til tap av CD44 transkripsjon [49], [50]. Selv om den eksakte mekanismen er uklar, er det mulig at selv CD44 uttrykkes på tumorer så som bryst og oral cancer oppviser de samme CSC egenskaper, fordi forskjellige detaljmekanismer og signalveier er involvert i regulering av CD44. Men er godt designede studier er nødvendig for å avgjøre hvilken rolle den signalveien av CD44 regulering i tumor aggressivitet og cscs.
En av begrensningene til vår studie er at vi kategorisert pasienter som «ever-brukere» og «aldri-brukere» for informasjon om visse miljømessige risikofaktorer som alkoholbruk, betelnøtter tygge, og tobakksrøyking. Derfor mengden, lengden, og tidligere historie med mutter, tobakk og alkohol var ikke tilgjengelig, og en detaljert analyse kunne ikke utføres. I tillegg er våre datainnsamling støttet seg på selvrapportering og pasientene kan skjule eller være tilbakeholdne med å rapportere sine faktiske bruken av slike stoffer. Dermed gjenværende konfunderende effekter kan ha blitt forårsaket av feilklassifisering av alkohol, betelnøtter, og tobakksbruk. Annen informasjon, som for eksempel medisinsk nikotin bruk og familiære og arvelighet risiko var heller ikke tilgjengelig, og disse begrensningene kan ha begrenset justering for mulige konfunderende faktorer. Øke prøvenummeret og regnskap for flere OSCC risikofaktorer i analysen kan nøyaktig validere disse funnene i en fremtidig studie.
I konklusjonen, våre resultater antydet at gen-miljø interaksjoner mellom CD44 polymorfisme og betel pund tygging og tobakksrøyking endre mottakelighet for kreft i munnhulen utvikling. Basert på en gjennomgang av relevant litteratur, er vår studie den første til å demonstrere en signifikant sammenheng mellom CD44 rs187115 A /G polymorfisme og risiko for kreft i munnhulen. Pasienter som bar funksjonell CD44 variant rs187115 G kan ha større chemoresistance til Avansert- til sent stadium kreft i munnhulen enn WT bærere gjør, og CD44 rs187115 kan fungere som en markør for å forutsi dårlige prognoser i OSCC pasienter.
