Abstract
Uttrykk av p53 ser ut til å være korrelert til prognose hos pasienter med malignitet, men dens rolle i magekreft har vært kontroversiell . Nylig har vi rapportert at JWA, en ADP-ribosylering-lignende faktor 6 samspill protein 5 (ARL6ip5), var både prognostisk for total overlevelse og prediktiv for platinabasert behandling av magekreft. I denne studien ønsket vi å undersøke p53 uttrykk som en prognostisk og prediktiv markør i resectable magekreft, alene og i kombinasjon med JWA. Uttrykk av p53 ble undersøkt i tre store pasient kohorter (total n = 1155) av magekreft. Høy uttrykk av p53 var signifikant korrelert med ugunstige clinicopathologic parametere og redusert samlet pasient overlevelse. Videre pasienter med høy p53 uttrykk i svulster kjøpt bemerkelsesverdig overlevelsesgevinst av adjuvant førstelinje platinumbasert kjemoterapi. Synergien mellom p53 og JWA forutsi pasientens utfall ble demonstrert, mens ingen signifikant forhøyet prediktiv verdi vedrørende kjemoterapi ble observert. Dermed er p53 uttrykk en potent prognostisk og prediktiv faktor for resectable magekreft med adjuvans platina-basert kjemoterapi. En kombinerte effekten av p53 med JWA som effektive prognostiske indikatorer ble funnet for første gang
Citation. Liu X, Wang S, Xia X, Chen Y, Zhou Y, Wu X, et al. (2012) Synergistic Rolle mellom p53 og JWA: Prognostic og Prediktiv Biomarkører i magekreft. PLoS ONE 7 (12): e52348. doi: 10,1371 /journal.pone.0052348
Redaktør: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, USA
mottatt: 03.08.2012; Godkjent: 12 november 2012; Publisert: 21.12.2012
Copyright: © 2012 Liu et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet delvis av prosjektet finansiert av Priority Academic Program Development (PAPD) av Jiangsu høyere utdanningsinstitusjoner (https://jsycw.ec.js.edu.cn); Foundation National Natural Science of China (30930080 og 81110027) (https://www.nsfc.gov.cn); Foundation of Cancer Center of Nanjing Medical University (08ZLKF08) (https://202.195.178.127/zlsys). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP rammer om lag én million mennesker i året, som er den nest største årsaken til kreft-relaterte dødelighet over hele verden med en samlet fem års overlevelse på mindre enn 30% [1]. Den dårlige resultatet har holdt seg stort sett uendret i løpet av de siste tiårene til tross for forbedringer i kirurgisk, kjemo- og stråleterapi [2]. Slående forskjeller i prognose blant pasienter etter standard kirurgi eksisterer, noe som indikerer spesifikke biomarkører er sterkt behov [3]. Videre utvalg av pasienter som vil ha nytte av kjemoterapi er et stort problem som en stor andel er unnessesarily behandlet og kun få alvorlige bivirkninger [4]. Dermed er effektive molekylære markører sterkt behov for å unngå over- eller underbehandling.
p53 protein (kodet av det menneskelige genet
TP53
) er muligens den mest kjente av alle kreftdempere, og kjennetegnes ved evnen til å indusere cellesyklusstans, DNA-reparasjon, begynnende alderdom, og apoptose [5]. Mutasjon eller funksjonell inaktivering av p53 er en nesten universell funksjon av menneskelig kreft, spiller en avgjørende rolle i tumorigenesis siden mutant p53 kan skaffe nye onkogene egenskaper [6] – [9]. Videre, i motsetning til vill-type p53-proteinet som degraderes raskt, mutante former har en forlenget halveringstid, som begunstiger intranuclear lagring, å bli påvisbar immunhistokjemisk [10] – [12]. Akkumuleringen av p53-proteinet i tilfellet av magekreft har vært knyttet til prognose og forutsigelse av behandlingen [13], [14]. Men dens tilhørende rolle og mekanisme hittil forbli kontroversielle [15], [16].
Vårt nylige funn implisert som JWA, også kjent som ARL6ip5, lik med p53 i noen aspekter, er viktig for celleoverlevelse og effektiv DNA-reparasjon etter oksidativ DNA-skade, så vel som kjemisk induserte kreftcelle apoptose [17], [18]. Videre JWA og XRCC1, en annen DNA-reparasjon protein, kan være kandidat prognostisk og prediktiv biomarkører for pasienter med magekreft [19]. I tillegg SNPs av
JWA
genet er assosiert med økt disposisjon for magekreft i en kinesisk befolkning [20]. Dermed er vi betydelig interessert hvis JWA ville fungere som en samarbeidspartner med p53 å forbedre prediktiv styrke i magekreft.
Heri, vi forsøkte å belyse translasjonsforskning betydning og identifisere uttrykk mønstre av p53 i tre store uavhengige kohorter av mage kreftpasienter og for å undersøke mulig prognostisk og prediktiv rolle denne markøren. Mer intrigere, ville en hypotese valideres om p53 og JWA kan kombineres som en roman prediktor med mer nøyaktighet i overlevelse evaluering.
Materialer og Metoder
Pasienter og Prøver
Tre uavhengige retrospektive pasient kohorter ble studert. Treningen kohort og testing kohort ble samlet inn i Nantong Cancer Hospital, Nantong City, i den østlige delen av Jiangsu-provinsen og validering kohorten ble rekruttert i Yixing Folkets sykehus, Yixing City, i den sørlige delen av Jiangsu-provinsen i Kina. Vevene ble oppnådd fra de respektive patologi divisjoner. Inklusjonskriteriene var magekreft behandlet med radikal gastrektomi med eller uten adjuvant kjemoterapi. Eksklusjonskriterier var pasienter med tidligere magekreft eller aktive ikke-magekreft. Også var de som fikk pre-kirurgisk kjemo- eller strålebehandling ekskludert. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra hver pasient før vev oppkjøp og før operasjonen ble utført. Institusjonelle godkjenning ble kjøpt fra Ethical Review Board of Nanjing Medical University før denne studien.
Pasienter som behandles med kirurgi alene
Treningen kohorten inkluderte 103 pasienter som kun gjennomgikk radikal gastrektomi ved Nantong Cancer Hospital fra 1
st mai 1990-1
st juni 1995. Men 20 prøver ble utelatt på grunn av manglende data og en prøve ble tapt under antigen henting eller uten tumorceller til stede i kjernen, så 82 sammenkoblede pasient vev var endelig evaluert for p53 uttrykk.
testing kohorten besto av alle 640 kirurgiske saker fra Nantong Cancer Hospital fra en
st desember 2000-1
st april 2005, og valideringen kohorten inkluderte alle 1022 kirurgisk tilfeller i Yixing Folkets sykehus fra en
st januar 1999-31
st desember 2006. Disse pasientene ble behandlet med kirurgi eller bare med postoperativ adjuvant kjemoterapi (for detaljer, se fig. S1). Fordelinger av demografiske karakteristika og de utvalgte clinicopathologic variabler av pasienter mellom de to distriktene (Nantong og Yixing) ble beskrevet tidligere [19]. På grunn av manglende overlevelsesdata, bare 578 og 998 av disse pasientene ble inkludert. Videre, på grunn tapte kjerner eller utilstrekkelige tumorceller i vevet, ble 485 og 588 kreft kjerner analysert for p53 uttrykk i testing og validering årsklasse, henholdsvis.
pasienter behandlet med adjuvant kjemoterapi
i opplæringen kohort, ingen av pasientene fikk en hvilken som helst form for adjuvant terapi. Av de 485 pasienter som benyttes for analyse i test kullet, ble 111 pasienter (22,9%) som ble behandlet med adjuvant kjemoterapi etter kurativ reseksjon. De regimer inkludert kombinert kjemoterapi med fluorouracil, folinsyre, og oksaliplatin (FLO) (6 tilfeller); monoterapi med mitomycin C (46 tilfeller); fluorouracil derivater (47 tilfeller); og andre behandlinger (12 tilfeller). Av de 588 pasientene i valideringen årsklasse, regimet for 223 pasienter (37,9%) med postoperativ kjemoterapi inkluderte kombinert kjemoterapi med FLO (87 tilfeller); kombinert kjemoterapi med fluorouracil, folinsyre, og Platinol (FLP) (79 tilfeller); kombinert kjemoterapi med fluorouracil og paclitaxel (FP) (11 tilfeller); kombinert kjemoterapi med etoposid, folinsyre, fluorouracil og Platinol (ELFP) (28 tilfeller); og andre behandlinger (18cases). Angående resektable mage kreftpasienter med kjemoterapi, fordelinger av demografiske karakteristika og de utvalgte clinicopathologic variabler av pasienter mellom FLO gruppen og FLP gruppe var lik (alle
P
0,05), bortsett fra histologisk type (
P
= 0,001, Tabell S1). I tillegg 7 patologisk bekreftet magekreft og respektive ikke-kreft Dypfryst mageslimhinnen vev fra siste pasienter i Nantong Cancer Hospital ble oppnådd for Western blot analyse.
Total overlevelse (OS) var det primære endepunktet av denne analysen. Overlevelsestid ble konstatert fra dato for operasjonen til dødsdato eller siste oppfølging. Dødsdato for hvert tilfelle ble hentet fra pasientjournaler eller pasientenes familier gjennom oppfølgingstelefonsamtaler og ytterligere dobbelt-verifisert av lokale sivile saker avdelingen og offentlig sikkerhet avdeling. Detaljert clinicopathologic informasjonen ble innhentet. Lauren kriterier ble brukt til å klassifisere svulster i tarm type eller diffuse typen [21] og iscenesatt henhold til svulsten, Node, metastaser (TNM) retningslinjer [22].
Bygging av Tissue microarray (TMA) og Immunohistochemistry
Parafin-embedded arkivert vev materiale av svulsten og omkringliggende normale mage vev ble brukt for TMA bygging. TMA ble fremstilt som tidligere er publisert [19]. I korte trekk, duplisere 1,0 mm diameter kjerner av vev fra hver prøve ble stanset av parafin svulst blokk og tilsvarende ikke-tumorvevet i opplæringen kohort eller fra kjerner av primære tumor biopsier i testing og validering kohorter. Som et vev kontroll, ble biopsier av normale gastriske epitel vev inn i de fire vinkler og midten av hvert lysbilde.
En standard protokoll ble anvendt for farging av TMA. Den detaljerte fremgangsmåte er beskrevet tidligere [19]. IHC ble utført ved anvendelse DO7 monoklonalt antistoff (1:80; Dako, Carpinteria, CA), som detekterer villtype og mutante former av p53-proteinet, sammen med Elivision ™ super HRP Kits (Maixin-Bio, Fujian, Kina) , bruke varierende gjenkjenning og antigen gjeninnhentingsmetodene. Utelatelsen av det primære antistoff tjente som negativ kontroll. De farge score til vevet kontroller i hver microarray lysbilde ble pre-evaluert som en kvalitetskontroll av farging.
Evaluering av Immunohistochemistry
Ved første, farging av p53 i vevet ble scoret uavhengig ved to patologer blindet til de kliniske data, ved anvendelse av en semi-kvantitativ immunoreaktivitet score (IRS) i trenings kohort. De scoring kriterier for IRS ble rapportert andre steder [23]. Intensiteten av immunfarging ble vist i fig. S2. Den konkordans for IRS farging score på p53 mellom de to patologer var 74 (90%) i 82 svulster i treningssettet; og de få avvik ble løst ved konsensus hjelp av en multihode mikroskop. Variabiliteten i p53-farging var 4 (5%) i de like kjerner av 82 tumorer. Disse sakene ble farget av hel-lysbilde IHC og videre scoret.
Den optimale verdien cutoff av IRS er innhentet av mottaker-operatør karakteristisk (ROC) analyse, og arealet under kurven (AUC) på ulike cutoff-verdier av p53 IRS for 1, 3 og 5 år med generell overlevelsestid ble beregnet. Den optimale verdien av cutoff interessante p53 skattemyndighetene i Nantong distrikt kohort (kombinert trening kohort og testing kohorten) var fire på grunn av den prediktive verdien av denne cutoff poeng for døden var den beste (Fig. S3). Under disse betingelser, ble prøver med IRS 0-4 og 5-12 IRS klassifisert som lav og høy ekspresjon av p53 i tumorer, respektivt. Etter fastsettelse av immunhistokjemiske vurderingskriteriene i Nantong distriktet årsklasse, ble uttrykket av p53 i Yixing distriktet kohort (validering kohort) scoret av de samme patologer med nøyaktig samme prosedyre.
Western blotting
Western blotting ble utført som tidligere beskrevet [19]. Monoklonale mus anti-p53-antistoff (1:1000; Dako, Carpinteria, CA), og monoklonalt mus anti-β-aktin-antistoff (1:2000; Beyotime Biotechnology, Nantong, Kina) ble anvendt for det primære antistoff. Immunreaktive bånd ble oppdaget med en Phototope-HRP Western blot deteksjon kit (Cell Signaling Technology Inc, Beverly, MA, USA). For densitometrisk analyse, ble p53 protein band i blotter målt av Image J programvare (versjon 1.44, Wayne Rasband, National Institutes of Health, USA), etter normalisering til den tilsvarende β-aktin nivå.
Statistisk analyse
Sammenhengen mellom p53 uttrykk og clinicopathologic parametre ble evaluert av Fishers eksakte test. Differensial uttrykk av p53 i primærsvulster og tilhørende ikke-svulster ble vurdert av Wilcoxon test (gruppert) og Spearman rank-order korrelasjon (rå score). Sammenhengen mellom uttrykket av p53 og JWA ble etablert av Spearman rank-order korrelasjon (rå score) og Fishers eksakte test (gruppert). Sannsynligheten for forskjeller i OS som en funksjon av tiden ble fastslått ved anvendelse av Kaplan-Meier-metode, med en log-rank testen for signifikans. Univariate eller multivariat Cox regresjonsanalyse ble utført for å estimere de grove hazard ratio (HRS), justert timer, og deres 95% konfidensintervall (CIS), med justering for potensielle confounders. Deretter analyserte vi prediktiv verdi av parameterne ved hjelp av tidsavhengig ROC kurve analyse for sensurerte data og beregnet AUC av ROC kurver. Vi evaluerte forestillinger av forskjellige score ved å plotte (t, AUC [t]) for forskjellige verdier av oppfølgingstiden (t). Alle de statistiske analysene ble utført av Statistisk Analysis System (versjon 9.1.3, SAS Institute, Cary, NC), STATA statistisk programvare (versjon 10.1, StataCorp, College Station, TX) og R (versjon 2.10.1, The R Foundation for Statistiske Computing). En p-verdi på 0,05 ble ansett som statistisk signifikant
Resultater
Økt p53 uttrykk på Gastric Cancer Versus tilstøtende normalt vev
Syv par av menneskelige mage kreftprøver. , inkludert primær mage kreft vev og matchet normal mageslimhinnen ble valgt til å teste p53 protein uttrykk ved Western blot. Forhøyet uttrykk av p53 skjedde i seks av syv mage svulster sammenlignet med den parede normal mageslimhinnen (Fig. 1a). Immunhistokjemisk farging av gastrisk vev microarray (TMA) ble anvendt for å ytterligere bekrefte p53-ekspresjon i 82 magekreftpasienter i opplærings kohort. Det ble vist at p53-farging var hovedsakelig lokalisert i kjernen (fig. 1B). Fordelingen av forskjellene i IRS for p53-ekspresjon i tumorer og passet ikke-tumorer ble vist i fig. 1C. Videre p53 uttrykk ble betydelig økt i 65 av 82 (79,2%) av magekreft sammenlignet med matchede normale mage vev (
P
0,001, Wilcoxon test, Fig. 1C). I alle tre uavhengige kohorter av pasienter behandlet bare med kirurgi bare uttrykket av p53 var negativt korrelert med JWA i kreftvevet (
P
0,001 for alle sammenhenger, tabell 1).
(A) p53 protein nivå i 7 kreftvev og parvise ikke-kreft normale vev i mage kreftpasienter ble analysert ved Western blotting. Nivået av hvert protein ble normalisert mot β-aktin, og proteinnivåer i kreftvev er angitt som et forhold til sammenkoblede ikke-kreft normale vev. Merk: N, ikke-kreft normalt vev; T, Tumor vev. (B) Representant immunhistokjemisk farging for p53 i TMA. T, mage kreftvev; N, paret ikke-kreft mage vev. Topplate: skala bar, 250 mikrometer; Bunnplate: skala bar, 50 mikrometer. (C) Fordelingen av differansen av p53 farging (Δ IRS = IRS T-IRS N).
P
verdiene ble beregnet med Wilcoxon test. IRS, immunoreaktivitets poengsum.
Sammenheng mellom p53 uttrykk og Clinicopathological funksjoner hos pasienter behandlet med kirurgi alene
I alle tre kohortene, vi forklarte at p53 uttrykk i kreftvevet var signifikant korrelert med lymfeknutemetastase (N-kategori). Økt uttrykk av p53 var nært forbundet med høyere TNM stadium i trening og testing kohorter, men uten betydning i valideringen kohort. Videre er økt ekspresjon av p53 er særlig relatert til andre clinicopathological egenskaper, slik som dybden av invasjon (T-category), fjernmetastaser (M-category), tumordiameter og histologisk type i respektive kohort. Interessant, i alle pasienter behandles med kirurgi alene (n = 817), fant vi flere intestinal-type pasienter viste lavt mens mer diffuse-type pasienter viste høy p53 uttrykk (
P
0,001, data ikke vist ). Uttrykk av p53 hadde ingen sammenheng med alder og kjønn (tabell 1).
Korrelasjon av p53 uttrykk og OS hos pasienter behandlet med kirurgi alene
I opplæringen årsklasse, 82 primærtumorprøver egnet for analysen viste en statistisk signifikant negativ korrelasjon mellom p53 uttrykk og samlet 5-års overlevelse ved hjelp av Kaplan-Meier overlevelseskurver (
P
0,001). Disse funnene ble validert i to uavhengige og større kohorter av magekreftpasienter med minimum fem års oppfølging (n = 374 og n = 365, henholdsvis) (Fig. 2A-C). Andre betydelige negative prediktorer for overlevelse av univariat analyse i de tre uavhengige kohorter var lymfeknutemetastase (N-kategorien,
P
0,01 for alle, Tabell S2) og klinisk TNM stadium (
P
≤.001 for alle, Tabell S2).
(A-C) Kaplan-Meier-kurver som viser total overlevelse i henhold til ekspresjon mønster av p53. (D-F) Kaplan-Meier-kurver som viser total overlevelse i henhold til uttrykk mønster av p53 /JWA.
P
verdier ble beregnet ved log-rank test.
multivariat Cox regresjonsanalyse viste at lav p53 uttrykk var en selvstendig positiv prognostisk faktor for magekreft i alle tre kohorter (
P
0,001 for alle, tabell 2). For ytterligere å evaluere den prognostiske verdi av p53-ekspresjon, gjennomførte vi en tidsavhengig ROC analyse for sensurert data, noe som indikerte at kombinasjonen av klinisk poengsum risiko (TNM stadium, histologisk type og tumordiameter) og p53 bidratt mye mer enn kliniske parametre alene i både trening og testing kohorter (fig. 3). For eksempel i testing årsklasse, AUC ved årets fem var 0.707 (95% KI = 0,653 til 0,761) for klinisk risikoscore, mens det var signifikant økt til 0,856 (95% KI = 0,818 til 0,894) når den kombineres med p53 risiko poengsum. Men var denne effekten ikke signifikant i valideringen kohorten grunn av den relativt høyere AUC (ca. 0,8) av kliniske prediktorer (Fig. S4).
(A) Tidsavhengig ROC-analyser i opplæringen kohort. (B) Tidsavhengig ROC-analyser i testing kohort. AUC = areal under kurven.
Sammenheng mellom p53 uttrykk og OS hos pasienter med adjuvant kjemoterapi
I testing og validering kohorter, OS ble analysert mellom de pasientene som fikk adjuvant kjemoterapi versus de som ikke gjorde det. Dataene viste ingen forskjell i OS mellom kirurgi eneste gruppen og eventuell diett av postoperativ adjuvant kjemoterapi (data ikke vist), unntatt i gruppen som fikk fluorouracil- folinsyre-oksaliplatin (FLO) (n = 87, log-rank test,
P
= 0,032, fig. 4). En multivariat Cox regresjonsanalyse inkludert seks variabler (alder, kjønn, TNM stadium, histologiske typer, svulst diameter og kjemoterapi) ble utført for å indikere nytte av kjemoterapi på OS. Det var en statistisk signifikant fordel for de som fikk FLO cellegift etter operasjonen over kirurgi alene (HR = 0,55, 95% CI = 0,37 til 0,82, data ikke vist). Spesielt denne effekten ble bare funnet hos pasienter med høyt p53 uttrykk der adjuvant FLO åpenbart økte OS sammenlignet med kirurgi alene (HR = 0,56, 95% CI = 0,35 til 0,89, tabell S3, Log-rank test,
P
= 0,014, fig. 4).
p
verdier ble beregnet ved log-rank test. Merk: S, kirurgi alene; FLO, fluorouracil-folinsyre-oksaliplatin.
Vi har også analysert betydningen av en annen platinabasert kjemoterapi, fluorouracil-folinsyre-Platinol (FLP) regime (n = 79) i resectable magekreft. Resultatene ikke presentere et betydelig overlevelse forskjell (log-rank test,
P
= 0,134, Fig. S5), mens pasienter med lav p53 uttrykk som fikk FLP diett vises enda en dårligere overlevelse sammenlignet med de som fikk kirurgi bare (
P
= 0,003, fig. S5). Dessuten, pasienter som gjennomgår FLP behandling med høye p53-ekspresjon hadde ingen signifikant overlevelse avvik i forhold til de med kirurgi alene (
P
= 0,648, fig. S5). Videre multivariat analyse klarlagt at høyere risiko for dødelighet ble observert hos pasienter med lav p53 uttrykk som fikk FLP behandling sammenlignet med kirurgi bare (HR = 1,91, 95% CI = 1,08 til 3,36, tabell S4).
synergistiske virkningen av p53 med JWA Expression på OS hos pasienter behandlet med kirurgi eneste eller adjuvant kjemoterapi
pasientene med kirurgi alene ble videre delt i tre forskjellige grupper på grunnlag av farging for p53 og JWA: p53 høy med JWA lav, p53 lav med JWA høy og både høy eller begge lav. Det ble vist at pasienter med p53 lav og JWA høy hadde en beste resultatet for å overleve i disse tre gruppene (
P
0,001, log-rank test, Fig. 2D-F). Den multivariate Cox regresjonsanalyse viste at kombinerte ekspresjon av p53 lav og høy JWA var uavhengig positiv prognostisk faktor for magekreft i alle tre gruppene (
P
0,001 for alle, tabell 2). For ytterligere å evaluere den prognostiske verdien av p53 pluss JWA uttrykk, gjennomførte vi en annen tidsavhengig ROC-analyse, som indikerte at kombinasjonen av den kliniske risiko score og p53 pluss JWA bidratt mer enn i samarbeid med kliniske risikoscore med bare p53 i begge opplæring og testing kohorter (fig. 3). For eksempel, i trening årsklasse, AUC ved årets fem var 0,568 (95% KI = 0,400 til 0,737) for klinisk risikoscore pluss p53 risikoscore, mens det var signifikant økt til 0,865 (95% KI = 0,786 til 0,944) når kombinasjonen av den kliniske risikoscore med p53 pluss JWA risikoscore ble brukt. Men denne effekten var igjen ikke tydelig i valideringen kohort på grunn av årsaken nevnt ovenfor (Fig. S4).
Basert på bidrag av p53 uttrykk nivå til kjemoterapi utfallet, vi stratifisert slike pasienter i samordning med JWA som følger: FLO behandlingsgruppe med høy p53 uttrykk ble delt inn i p53 høy med JWA lav og p53 høy med JWA høy; og FLP behandlingsgruppe med lav p53 uttrykk ble også klassifisert i p53 lav med JWA lav og p53 lav med JWA høy. OS ble revurdert mellom disse undergruppene. Men ingen tydelig overlevelse misforhold ble presentert i synergisk mønster med JWA (Fig. S6).
Diskusjoner
Magekreft er en heterogen sykdom der utfallet varierer selv hos pasienter med tilsvarende klinisk og patologisk egenskaper. Selv med kirurgi i tidlige stadier, kan prognosen være sturen, og adjuvant kjemoterapi er effektivt bare i undergrupper av pasienter. Nye molekylære markører er nødvendig som tradisjonelle staging systemer for magekreft er utilstrekkelige for å forutsi utfall [24]. I denne studien vi registrert og vist at høy ekspresjon av p53 ble signifikant korrelert med ugunstige clinicopathologic parametre og redusert samlet pasientens overlevelse. Videre pasienter med høy p53 uttrykk i svulster kjøpt bemerkelsesverdig overlevelsesgevinst av adjuvant førstelinje platinumbasert kjemoterapi (FLO eller FLP). Synergien mellom p53 og JWA forutsi pasientens utfall ble demonstrert, mens ingen åpenbar forhøyet prediktiv verdi vedrørende kjemoterapi ble observert.
I denne studien fant vi tydeligvis økt uttrykk av p53 protein i magekreft vev versus matchet normal slimhinner, noe som tyder på en potensielt viktig status av p53 i magekreftutvikling. Angivelig,
p53
genet er mutert i nesten 50% av alle humane tumorer inkludert magekreft [25] og det muterte proteinet forblir inne i cellene i lengre tid, slik at påvisning av immunhistokjemi [26], [27 ]. Derfor er det generelt akseptert at positiv farging består vesentlig av de mutante former av p53, mens vill-type p53-proteinet er nedbrutt hurtigere og synes svak eller negativ farging [10], [26]. Våre data var i samsvar med studier fra andre forskere, som avslørte at positiv p53 uttrykk ble assosiert med ugunstige clinicopathologic egenskaper og en dårlig prognose av magekreftpasienter som har gjennomgått kurativ gastrektomi [28] – [30]. Det er verdt å merke seg at noen forskjeller i clinicopathologic funksjoner eksisterer mellom Nantong og Yixing kohorter. Siden Nantong Cancer Hospital er en kreft spesialsykehus mens Yixing Folkets sykehus er en omfattende ett, pasienter i de førstnevnte er ofte på mer avansert stadium i forhold til sistnevnte. Følgelig pasienter i Nantong kohorten viste verre clinicopathologic egenskaper. I tillegg, p53 og JWA ekspresjon ble bare påvist i vev her, men ikke i blod eller serum av magekreftpasienter, på grunn av at de ikke er utskilte proteiner. Interessant nok en tidligere studie viste en sterk korrelasjon mellom høy p53 auto-antistoffer i serum fra pasienter med adenokarsinom og dårlig prognose, lymfeknutemetastase og lav differensierings [31]. Videre ble det vist at p53-ekspresjon i magekreft vev korrelerte med serum p53-antistoff [32]. Vi hadde ikke sera samlet for en tilsvarende analyse, men dette vil være svært interessant som en blodprøve er enklere og trolig mer reproduserbar enn immonohistochemistry. Som for JWA, er et serum test fortsatt venter og trenger å bli demonstrert i fremtiden.
En fascinerende og viktig spørsmål å tiltrekke oss mest er hvorfor kunne høyt uttrykk av p53 spill nettopp motsatte roller på prognostisk og prediktiv effekt. Dette fenomen kan tilskrives forskjellige former av p53 og deres distinkte egenskaper i kreft biologi og behandling motstand. Det er allment kjent muterte p53-proteiner er høyt uttrykt i mange kreftformer og bidrar til ondartet transformasjon, proliferasjon og metastase delvis ved å hemme vill-type p53 og andre medlemmer av p53 familien [6], [33]. Mouse modeller peiling knock-in mutasjoner av p53 viste at mutante p53 proteiner kan kjøre tumordannelse, invasjon og metastasering gjennom dominant negativ hemming av vill-type p53 sammen med gain-of-funksjon eller «neomorphic aktiviteter som kan hemme eller aktivere funksjonen for andre proteiner [34], [35]. På samme måte i vår studie, høy p53 uttrykk i mage svulster korrelerte med lymfeknutemetastaser, høyere TNM stadium og andre ugunstige clinicopathologic funksjoner, som fører til en mer aggressiv fenotype med en dårligere prognose når ubehandlet. I motsetning til den positive prediktive effekten av høyt p53-ekspresjon på overlevelse i både platina behandlede pasienter kan peke til en dobbel rolle av p53 i kjemoterapi-motstand. For tiden er en stor hindring i platina kjemoterapi er reparasjon av platina-skadet DNA som resulterer i økt motstand, redusert apoptose, og endelig behandlingssvikt. Wild-type p53 kan delvis spille en slik rolle i denne prosessen via cellesyklus arrest og etter reparasjon av skader forårsaket av kjemiske stoffer [36] – [39]. Omvendt, mutante p53-proteiner er i stand til å fungere i DNA-skade reparasjon og deres villtype motstykke hvor pasientene blir mer følsomme overfor kjemikalier [36], [40], [41]. Imidlertid, den detaljerte mekanisme av mutant p53 i platina behandling må bli undersøkt videre. Det må bemerkes at pasientene som mottok mer overlevelse nytte av FLO enn fra FLP, som kan være delvis på grunn av at FLO reduserer toksisitet sammenlignet med FLP som nevnt før [19].
JWA er en typisk stressrespons -genet, så vel som en tumor suppressor [18], [42]. In vitro og in vivo studier bekreftet at tap av JWA trykkes celledifferensiering og øket cellemigrering og metastase [42] – [44]. Våre siste resultatene manifestert lav JWA uttrykk i mage svulster korrelerte med ugunstige clinicopathologic indikatorer men bedre kjemoterapi utfallet [19]. I denne studien fant vi at JWA forbedret den prognostiske verdien av p53, noe som tyder på at tap av JWA kombinert med p53 mutasjon kan øke tumor aggressivitet og metastasering, som trolig fordi JWA er også medlem av DNA-reparasjon sti og muligens spille en gjensidig rolle i magekreftutvikling. Forbløffende nok selv om begge merkene separat var prediktiv for platina behandling, kombinasjonen ble ikke bedre prediktiv verdi, men dette resultatet er hemmet av liten gruppe pasienter i undergruppene. Et større antall pasienter som får platinabaserte kjemoterapiregimer bør inkluderes i vår fremtidige studier å videre validere våre resultater. Videre ble ingen direkte regulerende effekt demonstrert mellom p53 og JWA (data ikke vist), kanskje virker de i forskjellige reparasjonsbaner [17], [18], [45] – [48] og indirekte forhold eksisterer mellom dem under visse situasjoner. Videre kan p53 og JWA synergi regulere de samme molekyler eller signalveier som må belyses i videre studier.
I sammendraget, avslørte vi en samlet verdi på tumor p53 med JWA som effektive prognostiske faktorer for første gang , så vidt vi vet. Selv om et klart co-handling av disse to proteinene er ennå ikke bevist, kan det gi potensielle prediktorer for adjuvant kjemoterapi med et platinum-basert regime.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
Consort diagram for tissue microarray studien
doi:. 10,1371 /journal.pone.0052348.s001 plakater (TIF)
Figur S2.
Representative bilder av p53 immunhistokjemisk farging i human magekreft. A, negativ farging; B, svak positiv farging; C, moderat positiv farging; D, sterk positiv farging (A-D: skala bar, 25 mikrometer)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0052348.s002 plakater (TIF)
Figur S3.
