Abstract
Levertransplantasjon for leverkreft (HCC) resultater i en bestemt tilstand der immunresponsen er potensielt rettet mot både allogene og kreft antigener . Vi har undersøkt nivået av anti-kreft immunitet i løpet av allogene immunrespons. Mørk Agouti-til-Lewis og Lewis-til-Lewis rottelevertransplantasjoner ble utført og immunitet mottakerne anti-cancer ble analysert ved alloimmun aktivering. Forekomsten av avvisning i allogene mottakere ble bekreftet av en kortere overlevelse (
p
0,01), økte leverfunksjonstester (
p
0,01), tilstedeværelse av tegn på avvisning på histologi, og en donor-spesifikk
ex vivo
blandet lymfocytt-reaksjon. På tidspunktet for alloimmun aktivering, blodmononukleære celler av allogene gruppen vist økte anti-kreft cytotoksisitet (
p
0,005), som ble knyttet til en økt naturlige dreper (NK) celle frekvens (
p
0,05) og en høyere monocytt /makrofag aktiveringsnivå (
p
0,01). Tilsvarende lever NK celle anti-kreft cytotoksisitet (
p
0,005), og lever monocytt /makrofag aktiveringsnivå (
p
0,01) ble også økt. Den alloimmun-forbundet cytotoksisitet ble formidlet gjennom NKG2D reseptoren, som uttrykk ble økt i den avviste pode (
p
0,05) og på NK-celler og monocytter /makrofager. NKG2D ligander ble uttrykt på rotte HCC celler, og dens hemming hindret alloimmun-assosiert cytotoksisitet. Selv om det venter på
in vivo
validering, vises alloimmun-assosiert cytotoksisitet etter at rottelevertransplantasjon for å være knyttet til økt frekvenser og nivåer av aktivering av NK-celler og monocytter /makrofager, og er i det minste delvis formidles gjennom NKG2D reseptor
Citation. Lacotte S, Oldani G, Slits F, Orci LA, Rubbia-Brandt L, Morel P, et al. (2014) alloimmun Aktivering Fremmer Anti-Cancer Cytotoksisitet etter Rat levertransplantasjon. PLoS ONE 9 (3): e91515. doi: 10,1371 /journal.pone.0091515
Redaktør: Jacques Zimmer, Centre de Recherche Public de la Santé (CRP-Santé), Luxembourg
mottatt: 06.12.2013; Godkjent: 11 februar 2014; Publisert: 20 mars 2014
Copyright: © 2014 Lacotte et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet med tilskudd fra den sveitsiske National Science Foundation (PP00P3_139021), den Artères Foundation, Astellas European Foundation, og Boninchi Foundation, Elsie og Carlos de Reuter, og Marie-France og Francis Minkoff Foundation. Christian Toso ble støttet av en professoratet fra den sveitsiske National Science Foundation (PP00P3_139021). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Levertransplantasjon transplantasjon~~POS=HEADCOMP er den mest effektive behandlingen for pasienter med tidlig unresectable hepatocellulært karsinom (HCC) [1], [2]. Men 15% av mottakerne opplever etter transplantasjon HCC tilbakefall, som raskt fører til død hos nesten alle pasienter [3]. Ulike strategier har vært foreslått å redusere denne risikoen, inkludert en forbedret transplantasjon utvalgskriteriene, målretting av sirkulerende HCC celler, bruk av adjuvant anti-kreft narkotika og fremmet anti-kreft immunitet [4].
Transplantasjon for HCC er en unik tilstand, med aktivering av immunsystemet rettet mot både allogene donor og kreft antigener. Denne doble aktivering har sjelden vært utforsket. En alloimmun aktivering kan bare være rettet mot spesifikke antigener allogeneiske eller knyttes til et bredere aktiverings også fremme en ikke-spesifikt anti-kreft-immunrespons. Sistnevnte hypotese har blitt foreslått av en rekke studier som viser en høyere risiko for post-transplantasjon HCC tilbakefall hos pasienter med mer dyptgående immun hemming; for eksempel, etter bruk av anti-lymfocytt antistoffer eller manglende overeksponering for kalsineurinhemmere [5] – [8]. I tillegg har en redusert uttrykk for en NKG2D ligand på HCC svulster, lavt antall nøytrofile-lymfocytt blodforhold og tumor-assosiert makrotall også vært forbundet med HCC tilbakefall [9] -. [12]
Ideelt sett allogene immunitet bør forhindres og immunitet anti-kreft fremmes. En bedre forståelse av krysstale mellom de to er derfor ønskelig, for bedre å kunne definere mediatorer og mekanismene som er involvert i hver type av immunitet. Til syvende og sist, vil slike data bidra til å definere den ideelle immunsuppresjon kombinasjon etter levertransplantasjon for HCC.
Den foreliggende studien evaluerer nivået av anti-kreft-cytotoksisitet i leveren, milten og blod etter allogen rottelevertransplantasjon. Den definerer rollen til spesifikke immuncelletyper, inkludert natural killer (NK) celler og monocytter /makrofager, og virkningen av nøkkel NK celle reseptorer.
Materiale og metode
Dyr, levertransplantasjon og etikk Statement
Forsøkene ble utført på mannlige Lewis og Mørk Agouti (DA) rotter som veide 200-250 g (7 til 8 uker gammel, Janvier). De gjennomgikk ortotopisk levertransplantasjon i henhold til en protokoll som tidligere beskrevet [13]. DA-til-Lewis transplantasjoner (allogen modell) ble ansett som studiegruppen, og Lewis-til-Lewis transplantasjoner ble brukt som syngene kontroller (seks dyr i hver gruppe for overlevelsen vurdering). Alle dyr var ivaretatt i henhold til internasjonale retningslinjer for Animal Care og etisk godkjenning ble innhentet fra etisk komité ved Universitetet i Genève og fra Genève veterinærmyndighetene (N ° 1052/3653 /3).
Rat HCC cellelinjer
JM-1 celler ble vennlig levert av George Michalopoulos (University of Pittsburg) [14]. MCA-RH7777 celler ble kjøpt fra ATCC (Molsheim, Frankrike). Begge cellelinjer ble dyrket i DMEM medium med høyt glukosenivå (Gibco).
leverfunksjonstest Assessment, leverhistologi og immunomerking
For å oppdage tegn på lever avvisning, serumleverfunksjonstester, inkludert aspartataminotransferase (AST), alaninaminotransferase (ALAT) og bilirubin ble vurdert på dag én, tre og ti etter transplantasjon. Serumnivåer ble målt i samarbeid med den sentrale kliniske sykehuslaboratorium (Synkron LX20). Prøver fra ni dyr i hver gruppe ble analysert.
Forekomst av avvisning ble også vurdert på histologi etter hematoxin /eosin farging av leverprøver hentet på dag ti etter transplantasjon. Nivået for avvisning ble blindt gradert av en ekspert leveren patolog henhold til Banff klassifiseringen [15]. NK-celler ble merket på frysesnitt med anti-NKRP1 (CD161, 10/78, Biolegend) etterfulgt av Alexa Fluor®555 esel-anti-muse-IgG (Invitrogen). Makrofager ble merket på parafin-embedded seksjoner med polyklonale kanin anti-Iba1 (Wako) etterfulgt av Alexa Fluor®555 esel anti-kanin IgG (Invitrogen).
perifert blod, milt og lever mononukleære celle Isolation
Tail vene blodprøver (500 pl) ble samlet i 150 ul syresitratdekstrose. Lever og milt ble hentet gjennom en midtlinjen abdominal snitt etter 10 U IV heparin injeksjon. Leveren ble perfundert med HBSS inneholdende 0,5 mg /ml kollagenase D (Sigma). Det ble skåret i små stykker, resuspendert i HBSS /kollagenaseoppløsning, spaltet ved 37 ° C i 20 min. Cellesuspensjonen ble vasket og filtrert gjennom et nylonnett. Milten ble kuttet i stykker, knuses og filtrert gjennom et nylonnett. Perifert blod, lever og milt celler ble renset i en tettshetsgradient Ficoll Paque (GE Healthcare). Isolerte mononukleære cellene ble vasket og talt.
Mixed lymfocyttkontroll Reaction og ELISA
Perifere og milt allogene immunaktiveringer ble testet ved hjelp av blandede lymfocytt reaksjoner. Celle inkubasjoner ble utført i 96 brønnplater i 200 pl RPMI 1640 (Gibco), 10% FCS (Invitrogen), 1 M HEPES (Invitrogen) og 1 U /ml /1 ug /ml penicillin-streptomycin og 0,29 mg /ml L -glutamine (Gibco). Responder Lewis-celler (2,5 x 10
5) fra fire allogene og fire syngeniske mottakerne ble inkubert med 2,5 x 10
5 bestrålte stimulator DA (eller tredje del) splenocytter (5000 rad) ved 37 ° C /5% CO
2 i 24 timer.
nivået av interferon gamma (IFNy) ble kvantifisert ved hjelp av ELISA. Polystyren plater (Costar) ble belagt over natten ved 4 ° C med renset anti-rotte ylFN (1:500, klon DB-1, Biolegend) i karbonatbuffer. Platene ble vasket og mettet i 30 minutter med supplementert RPMI 1640 medium. Cellekultursupernatanter ble tilsatt i to timer, etterfulgt av biotin anti-rotte IFNy (1:1000, Poly5109, Biolegend), streptavidin-pepperrot peroksydase (1:1000, Biolegend) og substratet løsning (TMB-reagens, R 0,05
Resultater
Vurdering av Alloimmunity og avvisning
Tilstedeværelsen av en alloreactivity ble spesielt sett på fordi noen allogen rotte-til-rotte levertransplantasjon modeller indusere bare lave nivåer av alloimmunity uten akutt celle avvisning [16]. Som beskrevet i litteraturen, ble de undersøkte DA-til-Lewis ortotopisk rottelevertransplantasjoner bundet til kortere overlevelse sammenlignet med de syngene transplantasjoner (median overlevelse: 13 vs 60 dager, p = 0,0037, data ikke vist). Serum leverfunksjonsprøver (ASAT og ALAT) ble økt etter dag tre i allogene mottakere (alle p 0,01 vs. syngene kontroller, Fig 1A.). Bilirubin ble økt etter 10 dager i allogene mottakere (p = 0,026 vs. syngene kontroller, Fig. 1B).
(A) Serum aspartataminotransferase (ASAT) og alaninaminotransferase (ALAT) nivå etter allogen Mørke agouti-til-Lewis (svart) og syngene Lewis-til-Lewis (hvit) rottelevertransplantasjoner. (B) bilirubin nivåer etter allogen (svart) og syngene (hvit) transplantasjon. (C) Representant hematoksylin-eosin farget biopsier på dag 10 etter allogen (til høyre) og syngene (venstre) rottelevertransplantasjon. (D) Post-transplantasjon blod CD4 /CD8 ratio på dag 7 (D7) og 11 (D11). (E) IFNy-sekresjon etter perifere mononukleære blodceller (PBMC) blandet lymfocyttreaksjon på dag ti etter transplantasjon med donor (DA) og tredje del stimulering. * P 0,05, **. 0,01
Tilstedeværelsen av celle avvisning ble bekreftet på dagen 10 histologi og ble gradert Banff 8 i alle undersøkte allogene mottakere. Syngene kontroll mottakerne ble gradert Banff 0 (Fig. 1C). I tillegg er det perifere CD4 /CD8-forhold på dag 11 var signifikant lavere i de allogene mottakerne i forhold til syngeniske resipienter (2,9
vs
. 3,6, p = 0,0051, fig. 1 D). Til slutt, alloimmunity ble spesielt rettet mot donorantigener som demonstrert ved dag 10 blandede lymfocytt-reaksjoner mot DA splenocytter (supernatant IFNy konsentrasjon: 410 pg /ml
vs
umulig å oppdage.), Og fraværet av respons mot tredjemann Fisher rotte antigener (fig. 1E).
Alloimmunity-Associated Peripheral Cytotoksisitet
i et forsøk på å vurdere effekten av avvisning på anti-kreft immunitet, den cytotoksiske aktiviteten av perifere immunceller ble testet
ex vivo
mot kreft Yac-1 celler. På tidspunktet for alloimmun aktivering (dag 10), ble graden av perifere cytotoksisitet økt i de allogene mottakerne i forhold til de syngene kontrollene og naive rotter (effektor /target 40/1: 25,2%
vs
14,7%. og henholdsvis 9,4%, p = 0,0025, fig. 2A). Dette mønsteret ble observert ved alle testede fortynninger (4/1, 10/1, 40/1).
(A)
Ex vivo
PBMC anti-kreft cytotoksisitet på dag ti etter allogen og syngene transplantasjoner og hos naive kontroll rotter ved forskjellige effektor /target ratio (E /T). (B) Frekvens av NKRP1
høye celler (NK-celler) blant PBMC på dag 7 (D7) og 10 (D10) etter transplantasjon. Flowcytometri dot-plot vurdert gating strategien. (C) Flowcytometri dot-plot og histogram vurdere gating strategien for monocytter /makrofager (CD172 +) og NKRP1 uttrykk nivå på CD172 + celler. (D) Frekvens av monocytt /makrofag (CD172 + celler) blant PBMC. (E) Aktivering nivået av monocytter /makrofager (NKRP1 ekspresjonsnivået (gjennomsnittlig fluorescensintensitet (MFI)) blant CD172a + -celler). * P 0,05, **. 0,01
For å kunne vurdere om det endrede cytotoksisitet var knyttet til en variasjon i celle undergrupper, flowcytometri analyser ble utført på PBMC. NKRP1 (CD161), en C-type lektin membran-glykoprotein er sterkt uttrykt på NK-celler, og ble anvendt som en markør for rotte-NK-celler [17]. På dag syv, NK-celle frekvens. – Ble (CD3
NKRP1
høy) signifikant redusert i de allogene mottakerne i forhold til de syngene kontroller (2,1%
vs
3,4%, p = 0,028, fig. 2B). Dette reduserte hyppigheten av perifere NK-celler er i tråd med den tidligere observerte migrering av NK-celler i leveren tidlig etter allogen transplantasjon [18]. På dag 10 ble det observert økt perifer cytotoksisitet knyttet til en økt blod NK celle frekvens (10,79% i allogen
vs
. 4,9% i syngene, p = 0,048).
monocytter /makrofager kan også være involvert i de cytotoksiske hendelser mot kreftceller. Dagen 10 monocytt populasjon (CD172a
+) ble øket i både allogene og syngene mottakerne i forhold til de ubehandlede ikke-transplanterte kontroller, som sannsynligvis gjenspeiler en viss grad av ikke-spesifikk perioperativ aktivering av immunsystemet (16,6%
vs
10,7%
vs
5,58%, henholdsvis; p = 0,1 for allogen
vs
naiv,.. p = 0,023 for syngene
vs
naive, fig. 2D). Dette er sagt, ble den høyeste frekvensen i de allogene mottakere (ennå ikke nådde statistisk signifikans, p = 0,455 for allogen
vs
. Syngene). I tillegg er frekvensen av aktiverte monocytter uttrykker NKRP1 (CD161) var høyere i allogene mottakere i forhold til de syngene kontrollene og de naive ikke-transplanterte dyr (gjennomsnittlig fluorescens intensitet 1282
vs
. 568
vs
. 438, p = 0,0004, fig. 2E) [19].
Fravær av Alloimmunity-Associated Spleen cytotoksisitet
for å bedre karakterisere den observerte perifere cytotoksisitet, vurderte vi de allogene og anti-kreft immun hendelser i milten. Dagen 10 splenocytter fra allogene rotter stimulert med donorceller (DA) som skilles ut flere IFNy enn splenocytter fra syngeniske rotter, noe som bekrefter nærvær av en donor-spesifikk allogen respons i milten (684
vs
. 99 pg /ml, p = 0,028, fig. 3A). Omvendt, sortert milt NK-celler viste ingen forskjell i cytotoksisitet mellom allogene og syngene mottakere (effektor /target-forhold 10/1: 42,2 vs. 48,3%, p = 0,30, figur 3B.). På samme måte kan noen endring i antall og fenotypen av miltceller bli påvist (data ikke vist).
(A) IFNy-sekresjon etter splenocytt blandet lymfocyttreaksjon på dag ti etter transplantasjon med donor og tredje del stimulering . (B)
Ex vivo
milt NK celle anti-kreft cytotoksisitet på dag ti etter allogen og syngene transplantasjon.
Alloimmunity-Associated Liver mononukleære celleaktivering
immunrespons av lever mononukleære celler ble testet på dag 10 etter transplantasjon. Etter isolering ble antallet lever mononukleære celler økt i de allogene rotter sammenlignet med sine motparter syngene (16 x 10
6
vs
. 5,35 x 10
6 celler /lever, p = 0,004 ).
Denne økningen av mononukleære celler nummeret var knyttet til et økt antall NK-celler i allogene transplantat (19,5
vs
. 3 i syngene pode, p = 0,006, fig. 4A) og til et økt antall makrofager (131
vs
. 34,5 i syngeniske transplantatet, p = 0,0034, fig. 4B). Disse to celler undergrupper ble funnet både i leverparenkym og i celle infiltrater av allogene transplantat. Den observerte endring av celletallet ble knyttet til en økt aktivering. Sortert lever NK-celler viste en økt anti-kreft-cytotoksisitet i allogene mottakerne (effektor /mål-forhold 10/1:.. 58,8%
vs
32%, p = 0,030, figur 4C). Av notatet, allogene rottelevertransplanterte pasienter viste en trend mot en høyere cytotoksisitet i leveren sortert NK forhold til milt-sortert NK-celler (effektor /mål ratio 10/1: 58,8% vs 42,2%, p = 0,101). Denne høyere leveren NK celle aktivitet er sannsynligvis relatert til allogen avvisning hovedsakelig lokalisert i leveren pode [20].
(A) Representative bilder av deler av allogene (til venstre) og syngene (til høyre) lever pode merket med anti-NKRP1 antistoffer (rød). Kjerner ble farget med Hoechst (blå). Antall merkede-NK-celler per bilde telles på flere leversnitt. (B) Representative bilder av deler av allogene (til venstre) og syngene (til høyre) lever pode merket med anti-Iba1 antistoffer (rød). Antall merkede makrofager per bilde telles på flere leversnitt. (C)
Ex vivo
lever NK-celleanticancer-cytotoksisitet på dag ti etter allogen transplantasjon og syngen. To effektor /mål-forhold (E /T) ble testet. (D) Aktivering nivå av lever monocyt /makrofager (NKRP1 ekspresjonsnivået (MFI) blant CD172a + -celler). * P 0,05, ** 0,01
Nivået på leveren monocyttaktiveringsanalysen ble økt i de allogene mottakere (MFI:.. 1232
vs
590, p = 0,005, fig. 4D).
Alloimmunity-Associated cytotoksisitet gjennom NKG2D reseptoren
for å definere potensielle reseptor /ligand trasé som er involvert i påvises cytotoksisitet, ble qPCR utført på dag ni leverbiopsier. I likhet med en tidligere rapport, et uttrykk for
nkg2d
, en av de beste karakterisert tumor-relatert NK-reseptor, var 6,9 ganger høyere i leveren allogene transplantater i forhold til de syngene kontroller (p = 0,028, fig. 5A ) [21]. Som NKG2D reseptoren konstitutivt uttrykt på NK-celler, kunne dette resultatet har vært knyttet til høyere antall NK-celler i allogene leveren. Men nivåene av uttrykk for NKG2D i blodet NK-celler (median MFI. 7694 vs 4636, figur 5B, venstre) og monocytter (median MFI. 1180 vs 666, figur 4B, til høyre) var også høyere i allogen mottakere.
(A) Liver uttrykk for
nkg2d
på dag ti etter levertransplantasjon. (B) Representative NKG2D uttrykk nivåer i blodet NK-celler (til venstre) og monocytter (høyre) av allogene (svart) og syngene (grå) mottakere. Isotype ble anvendt som kontroll (stiplede linjer). (C) Ordnet blod NK-celle-cytotoksisitet inhibering med anti-NKG2D-antistoff eller med anti-NKp30 antistoff. (D) Nivåer av NKG2D ligand (
rae1l, rrlt Hotell og
irp94
) uttrykk i leveren på dag ti etter transplantasjon. (E) Nivåer av NKG2D ligand (
rae1l
,
rrlt Hotell og
irp94
) uttrykk i rotte HCC cellelinjer. (F) Representative nivå av rekombinant NKG2D-Fc-binding til rotte HCC cellelinjer. * P 0,05, **. 0,01
Implikasjonen av NKG2D reseptor i cytotoksisitet ble testet med bruk av anti-NKG2D antistoff. Dårlig blod NK-celler viste høyere cytotoksiske nivåer i allogene dyr, og denne effekten ble forhindret ved tilsetning av anti-NKG2D-antistoff (30,1
vs
. 10.1, fig. 5C). Denne inhibering var reseptor-spesifikk som uten reduksjon kunne observeres ved bruk av anti-NKp30 antistoff.
Ekspresjon av NKG2D ligander ble videre undersøkt ved qPCR på dag ni leverbiopsier. I rotte ble tre NKG2D ligander beskrevet: Rae1l, Rrlt (retinsyre tidlig transkripsjon familie) og Irp94 (iskemi responsive 94 kDa protein, heat shock protein familie) [21], [22].
rrlt
genekspresjon ble betydelig økt i de allogene lever grafts forhold til syngene lever grafts (2,93 ganger økning, p = 0,028, fig. 5D).
I et forsøk på å finne ut hvordan økt NKG2D-mediert cytotoksisitet bidratt til HCC celle klaring, uttrykk for NKG2D ligander ble også vurdert på to rotte HCC cellelinjer, JM-1 og MCA.
Rrlt
ble uttrykt i JM-1-cellelinje (21,4 gangers økning i forhold til primær splenocytter), men ikke i MCA-celler.
Rae1l
ble ikke uttrykt i HCC celler og
irp94
ble uttrykt på ulike nivåer i de to cellelinjer (JM-1: 2,63, MCA. 3,68 ganger økning, Fig 5E). Endelig nærvær av NKG2D ligander på overflaten av HCC cellelinjer ble bekreftet ved anvendelse av et kimært rekombinant NKG2D-Fc. Både JM-1 og MCA uttrykte høye nivåer av kjente og potensielt fortsatt ukjente NKG2D ligander (MFI, JM1. 3.53.10
4
vs
1.02.10
4, MCA: 9.4.10
4
vs
1.83.10
4, fig. 5F).
Totalt NKG2D-ligander ble uttrykt i alle HCC cellelinjer som støtter ideen om at aktivert NKG2D-uttrykke NK-celler og monocytter bidra til HCC cellebehandling.
Diskusjoner
Denne studien gir ny innsikt i spørsmålet om balanserte aktivering av immunsystemet etter allogen levertransplantasjon i nærvær av HCC, ved å demonstrere tilstedeværelse av en alloimmun-avhengig anti-kreft cytotoksisk aktivitet etter rottelevertransplantasjon. Denne cytotoksisitet er knyttet til økt frekvenser og nivåer av aktivering av NK-celler og monocytter /makrofager, og er i det minste delvis formidles gjennom NKG2D-reseptoren.
studert Mørk Agouti-til-Lewis rottelevertransplantasjon modell indusert en sterk alloimmun aktivering spesifikt rettet mot donor antigener [23]. Denne immun profilen var forbundet med en økt fenotype og graden av aktivering av NK-celler og monocytter /makrofager. Dette er i samsvar med tidligere studier som viser skadelig effekt av makrofager i løpet av en rotte nyre allograft avvisning og den beskyttende effekten av NK celle uttømming etter allogen rottelevertransplantasjon [18], [24].
cross-talk mellom de allogene og anti-kreft immunitet har vært dårlig studert så langt, og de foreliggende data viser en forbedret leveren og perifer (men ikke milt) anti-kreft cytotoksisitet ved tidspunktet for leveren transplantat avvisning. I menneskelige organtransplantasjon, NK-celler var til stede i endomyokardiale celleinfiltrater men disse cellene d, men o ikke vises som store aktører i leveren pode avvisning [25], [26]. Faktisk har økt alloreactivity av NK-celler etter levertransplantasjon er rapportert, og denne aktiviteten var ikke korrelert med avstøtningsepisoder [26]. Imidlertid har menneskelige leveren og sekundære lymfevev NK-celler vist sterke nivåer av cytotoksisitet etter stimulering av IL-2 eller i nærvær av aktiverte APC [27], [28].
Mens vi venter på
i vivo
og /eller kliniske data understøtter foreliggende observasjon bruken av mildere grad av immunsuppresjon hos pasienter transplantert for HCC, for å bevare anti-kreft cytotoksisitet. Av notatet, mange allogene rotte-til-rottelevertransplantasjon modeller indusere ingen akutt celle avvisning, og den perfekte modellen med syngene -recipient type HCC celler og akutt allogen immunitet for tiden mangler (ingen Lewis HCC cellelinje tilgjengelig), og dermed hindre
in vivo
validering av de presenterte data. Dessuten ble det beskrevet anti-kreft aktivitet observert etter avanserte avvisning hendelser, som er sjelden sett klinisk. Imidlertid hypoteser vi at mildere grad av avvisning også fremme kreftcelle klaring.
I stedet for nedad immunsuppresjon som en helhet, kan en nøye medikamentseleksjon også gjøres forsøk på å skåne NK-celler og monocytter /makrofager med henblikk på en bedre HCC celle klaring. Bruken av nedbrytende anti-lymfocytt antistoff har vært knyttet til økt risiko for post-transplantasjon HCC tilbakefall [8]. Ikke-nedbrytende anti-IL2-R-antistoffer kan også ha en effekt, som de endrer fenotypen og funksjon av nyproduserte NK-celler [29] – [31]. Sirolimus og mykofenolatmofetil har vist seg å endre den NK-celle-fenotype og funksjon
in vitro
, mens cyklosporin ser ikke ut til å ha en effekt [32].
In vivo
, alle vedlikeholds stoffene har en innvirkning på ulike immuncelle undergrupper og ideelle immunsuppresjon kombinasjonen gjenstår å bli definert i innstillingen av levertransplantasjon for HCC [33], [34].
den NKG2D reseptor /NKG2D ligander sti fremstått som en sentral aktør i alloimmun-assosiert cytotoksisitet. Det ble allerede publisert som NKG2D uttrykk nivået heves i leveren allogene transplantat [21]. Her har vi vist at ekspresjon av NKG2D er spesielt økes i perifere NK-celler og makrofager ved tidspunktet for avvisning, og
ex vivo
cytotoksisitet av lever NK-celler forhindres ved å blokkere NKG2D-reseptoren (men ikke den NKp30 reseptor). I tillegg kunne NKG2D ligander bli funnet på rotte HCC celler, noe som bekrefter humandata med ekspresjonen av UL16-bindende protein (ULBP) 1, en human NKG2D ligand, på HCC tumorer [10]. Denne reaksjonsvei er tidligere blitt undersøkt i andre onkologiske innstillinger som kolorektal karsinom, og nivået av tumor NKG2D ligand ekspresjon har vært knyttet til HCC respons og pasientoverlevelse [10], [35]. NKG2D uttrykk på blod NK-celler er økt etter radiofrekvens HCC ablasjon, og er knyttet til høyere sykdomsfrie overlevelse [36]. Denne økningen i NKG2D ekspresjon er også observert etter transarterial chemoembolization og er korrelert med en nedgang i NKG2D-ligand-shedding (løselig MICA) [37]. NKG2D uttrykk etter levertransplantasjon kan hjelpe i HCC klaring celler. Til slutt, NKG2D har nylig blitt involvert i makrofag-NK-cellekrysstale som fører til høyere nivåer av NK-celle-aktivering og anti-tumorcelle-cytotoksisitet [38]. Den observerte øket ekspresjon av NKG2D på makrofager ved tidspunktet for allogene leveren podingsforkastelse kan bidra indirekte til cytotoksisitet ved å fremme NK-celleaktivering og cytotoksisitet.
Utover NKG2D, et stort panel av aktiverende og inhiberende reseptorer uttrykkes på NK celler, som mønsteret av ekspresjon kan modulerer nivået av aktivering av NK-celler [39]. For å illustrere, kan inhibitoriske reseptorer gjenkjenne klasse I store histokompatibilitetskompleks, og hemmer NK-celle-cytotoksisitet [40]. Reseptoren profil skiller mellom organspesifikke NK-celler, som gjør deres funksjon [41], og endringer i balansen mellom aktiverende og inhiberende reseptorer kunne forklare i det minste noen av de her beskrevne fenotypiske og funksjonelle NK-celle forskjeller mellom områder i syngene og allogen mottakere. Videre leting er fortjent.
Den nåværende data viser at forekomsten av en rottelever allotransplantatavvisning fremmer anti-kreft cytotoksisitet gjennom NKG2D reseptoren.
