Abstract
Bakgrunn
I prostata kreft, tumor uttrykk for cannabinoid CB
1-reseptorer er assosiert med dårlig prognose. En forklaring på denne foreningen kommer fra forsøk med transfekterte astrocytom celler, hvor en høy CB reseptor uttrykk rekrutterer Akt signaliserer overlevelse veien. I denne studien har vi undersøkt sammenhengen mellom CB
1 reseptoren uttrykk og Akt veien i en godt karakterisert prostatakreft vev microarray.
metodikk /hovedfunnene
Fosforylert Akt immunoreaktivitets (Pakt-IR) score var tilgjengelig i databasen. CB
1 reseptoren immunoreaktivitets (CB
1IR) ble rescores fra tidligere publiserte data ved hjelp av samme skala som Pakt-IR. Det var en meget signifikant korrelasjon mellom CB
1IR og Pakt-IR. Videre tilfeller med høye uttrykk nivåer av både biomarkører var mye mer sannsynlig å ha en mer alvorlig form av sykdommen ved diagnose enn de med lave nivåer. De to biomarkører hadde additive effekter, i stedet for en interaksjon, ved sykdomsspesifikk overlevelse.
Konklusjoner /Betydningen
Den foreliggende studien tilveiebringer data som er forenlig med den hypotese at ved en høy CB
1 reseptoren uttrykk, blir Akt signalveien operative
Citation. Cipriano M, Häggström J, Hammarsten P, Fowler CJ (2013) Sammenheng mellom cannabinoidtest CB
1 receptor Expression og Akt signale~~POS=TRUNC i prostata Kreft. PLoS ONE 8 (6): e65798. doi: 10,1371 /journal.pone.0065798
Redaktør: Vinod K. Yaragudri, Nathan Kline Institutt for Psykiatrisk Forskning og New York School of Medicine, USA
mottatt: 20. mars 2013; Godkjent: 02.05.2013; Publisert: 05.06.2013
Copyright: © 2013 Cipriano et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Forfatterne takker Vetenskapsrådet (Grant ingen 12158, medisin.); den svenske Cancer Society (. Grant ingen CAN2010 /437); Løve Cancer Research Foundation, Umeå universitet og forskningsmidlene av Det medisinske fakultet, Universitetet i Umeå for økonomisk støtte. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
endocannabinoid (ECB) system, bestående av G-proteinkoblet CB
1 og CB
2 reseptorer, ligander deres endogene Anandamid og 2-arachidonoylglycerol, og deres syntetiske og katabolske enzymer, har vært vist seg å være involvert i kontrollen av proliferasjon, migrering og invasiv oppførselen til en rekke forskjellige kreftceller [1] – [5]. Det humane prostata uttrykker funksjonelt aktiv CB
1-reseptorer [6], og Anandamid reduserer hastigheten av epidermal vekstfaktor (EGF) og prolaktin-stimulert vekst av human prostatacancercellelinjer på en måte som involverer aktivering av CB
1-reseptorer [7], [8]. I motsetning til dette, både mitogen og, ved høyere konsentrasjoner, antiproliferative virkninger av cannabinoider har blitt sett i ustimulerte prostatakreftceller [9] – [14], så vel som virkninger som ikke er relatert til interaksjoner med CB-reseptorer [2], [14] – [16]. En rekke mekanismer, inkludert produksjon av ceramid, har nedregulering av EGF-reseptorer (EGFR) og prolaktin reseptorer, inhibering av RhoA aktivitet og vedvarende aktivering av ekstracellulære signalregulerte kinaser (Erk) blitt implisert i de inhiberende virkninger av cannabinoider ved prostata kreftcellevekst eller motilitet [7], [8], [12], [17].
manipulering av innholdet av 2-arachidonoylglycerol og beslektede homologer (ved blokkering eller knockdown av den katabolske enzymet monoacylglycerol lipase, som er ansvarlig for hydrolyse av disse lipider) reduserer overlevelse, mobilitet og invasive egenskapene
in vitro
samt vekst
in vivo
av androgen-insensitive PC-3 prostatakreftceller i en måte mediert delvis av CB
1-reseptorer [18], [19]. Omvendt, inhibering av syntesen av 2-arachidonoylglycerol eller transfeksjon av celler med fettsyre (FAAH), enzymet som er ansvarlig for hydrolyse av Anandamid, øker invasivity av PC-3-celler in vitro [18], [20]. Disse dataene er alt i samsvar med forestillingen om at ESB-systemet, i tillegg til å ha et vell av andre regulatoriske egenskaper i kroppen [21], spiller en rolle i den lokale kontrollen av kreft celle spredning.
Den omvendte av regelverket rolle ECB systemet beskrevet ovenfor, er muligheten for at ESB systemet er dysfunksjonell i svulster og at dette bidrar til sykdom patogenesen. Flere studier har rapportert at markører for ECB systemet viser et endret uttrykk i krefttyper som mantelcellelymfom og endetarmskreft [22] – [24], selv om retningen på endringen er ikke alltid det samme. I en liten kohort av tilfeller med hepatocellulær kreft, for eksempel en lav ekspresjon av CB
1-reseptorer er forbundet med et dårligere resultat enn i tilfelle med en høy ekspresjon av CB
1-reseptorer [25], mens det omvendte gjelder for kreft i bukspyttkjertelen [26] og stadium II mikro-stabil kolorektal kreft [24]. I tilfelle av prostatakreft, både CB
1-reseptorer og FAAH er overuttrykt i tumorvevet sammenlignet med ikke-ondartet luminal epiteliale vev eller celler [20], [27] – [29] og i et stort velkarakterisert kohort av pasienter med en lang oppfølging, bemerket vi en høyere frekvens av alvorlige tilfeller (Gleason score 8-10) blant de tilfeller med høy tumor CB
1 reseptoren og /eller FAAH immunoreaktivitets [27], [29] . Videre for tilfeller fulgt av forventning etter diagnose, tumor CB
1 reseptoren immunoreaktivitets (CB
1IR) gir robust prognostisk informasjon med hensyn til sykdomsspesifikk overlevelse som er additiv til det som tilbys av Gleason score [27]. Derfor, for eksempel, for tilfeller med Gleason score 6-7 ved diagnose, de 15-års sannsynligheten for overlevelse for CB1IR score
vs.
≥ median score, henholdsvis var 85 ± 9% vs. 44 ± 9% [27].
Mens studien ovenfor klart knytter en høy CB
1 reseptoren uttrykk med sykdommens alvorlighetsgrad og utfall i prostatakreft, gir det ingen mekanistisk informasjon om hvorfor dette er tilfelle. En mulig mekanisme er at ESB systemet «brytere» fra å være skadelig for prostata kreft celler med lav til moderat CB
1 reseptor uttrykk nivåer for å fremme deres overlevelse ved høye uttrykk nivåer. Det teoretiske grunnlaget for dette forslaget kommer fra en studie med mus astrocytom celler [30]. I denne studien ble celler transfektert med plasmider inneholdende et reportergen (EGFP, et grønt fluorescerende protein) og heller ingen, CB
en eller CB
2-reseptorer. Kloner med lav til moderat eller høy-reseptor-nivåer ble deretter valgt og behandlet med CB reseptor-agonist CP55,940. Ved lave til moderate nivåer reseptor, agonisten forårsaket apoptose delvis skyldes en forlenget stimulering av Erk signalveien. Imidlertid klonene med høy reseptor ekspresjonsnivåer viste dessuten en aktivering av Akt signalveien i respons til CB reseptor agonist. Denne reaksjonsvei er en «overlevelse» -veien regulere celleproliferasjon og apoptose, og cellene med høy CB reseptor ekspresjonsnivåer ikke apoptose i nærvær av CB reseptor-agonist, med mindre Akt ble samtidig hemmet [30].
selv om ovennevnte studien gir en elegant forklaring på hvorfor en høy CB reseptor uttrykk kan være skadelig, er det basert på utvalgte transfekterte astrocytom kloner snarere enn prostatakreft. Imidlertid rapporterer at cannabinoid reseptoragonister Δ
9-tetrahydrocannabinol og
R
– (+) – methananandamide øke produksjonen av fosforylert Akt (pakt) i PC-3-celler på en måte som er blokkert av CB
1-reseptor-invers agonist rimonabant, og at konsentrasjonen av Δ
9-tetrahydrocannabinol anvendt (100 nM) øker PC-3-celle proliferasjon [10] angir en «Akt-switch» (dvs. en kobling av CB
1 reseptorer til Akt signalveien) er operativ i denne cellelinjen under de betingelser som brukes av disse forfatterne.
Hvis foreningen av en høy CB
1 reseptoren uttrykk med prostatakreft sykdommens alvorlighetsgrad og utfall er resultatet av en bryter for å Akt-mediert signalisering, kan visse forutsigelser gjøres: for det første tilfeller med høy tumor CB
1 reseptor ekspresjon ville forventes å ha høyere aktivitet i Akt reaksjonsveien, og derfor bør det være en positiv korrelasjon mellom CB
1IR score og Pakt-IR score i svulstvev. For det andre tumorsprednings priser bør være høyere i tilfeller med høy CB
1IR og pakt-IR (det vil si hvor en «bryter» kan være operative) enn i de tilfeller hvor enten en eller begge av disse to variablene er lav. Følgelig i denne studien har vi brukt data fra vår prostatakreft vev microarray for å utforske samspillet mellom CB
1 reseptorer og Akt signalveien.
Metoder
Pasientmateriale og immunkjemi
svulsten pEGFR-IR og Pakt score brukt i denne studien er hentet fra vår database og har vært publisert tidligere [31], [32]. Vevet materiale (formalinfikserte, parafininnstøpte prøvene) ble samlet ved Regionsykehuset, Västerås, Sverige, mellom 1975 og 1991 fra totalt 419 pasienter diagnostisert med prostatakreft ved transurethral reseksjon for nedre urinveissymptomer [33]. Pasientene ble fulgt inntil 2003. Tissue microarrays ble konstruert og generelt mellom 1 og 8 kjerner (vanligvis fem, inkludert både primære og sekundære Gleason grad områder; svulst vev) og 1-4 kjerner (ikke-ondartet vev) kunne scoret for det enkelte parameter. Kjernene ble bedømt på basis av intensiteten og fordeling for å gi en sammensatt verdi i området mellom 0-4 for pakt-IR og 0-5 for pEGFR-IR-0-5 [31], [32]. Hittil upubliserte data for svulst ErbB2-IR (range 0-4) var også tilgjengelig i databasen. I alle tilfeller ble kjernene scoret av etterforskere som var blind for pasientdata. Kliniske data (Gleason score, den lokale svulsten score, tilstedeværelse av metastaser ved diagnose som vurderes av et bein scan, og andelen av prøven som inneholdt tumor (% ca)) og Ki67 indeksen, et mål på celleproliferasjon var alle tilgjengelige i databasen (se [33], [34] i publiserte rapporter om noe av dette materialet). Den forskningsetiske komité ved Umeå universitet sykehus (Regional Etisk Review Board i Umeå, Sverige) som er godkjent av studien og fravikes behovet for informert samtykke.
Gitt at den opprinnelige CB
1IR score ble returnert av en enkelt etterforsker ved hjelp av en 0-3 skala [27], har vi valgt å rescore de immunkreft kjerner ( «NCB
1IR»), men denne gangen ved hjelp av digitaliserte bilder, to uavhengige etterforskere (MC, CJF) og den samme intensiteten som anvendes for pakt-IR [32]. Fordelingene på hvert intensitet ble scoret som 0, 25, 50, 75 eller 100%. Således, for eksempel, en kjerne som scoret på 25% intensitet 1, 25% intensitet 2 og 50% intensitet 3 for den biomarkør aktuelle ville resultat 0,25 x 1 + 0,25 x + 0,5 x 3 = 2,25. En etterforsker (MC) scoret også de ikke-maligne kjerner. For de 2594 kjerner scoret av både forskere (inkludert noen få ikke-maligne kjerner utilsiktet scoret av CJF), en intra-klasse korrelasjonsanalyse ved hjelp av en blandet modell og testing for konsistens ga en Chronbach alfa på 0,94, og 1837 (71%) av kjernene ble bedømt ≤0.5 enheter av hverandre. Gitt at kjerner med beising et sted mellom intensitets enhetene (0, 1, 2, 3 og 4) og fordelingstransjer (0, 25, 50, 75 og 100%) som benyttes er ikke uvanlig, en forskjell i score på opp til 1 kan aksepteres. Totalt 95 (3,7%) av kjernene hadde forskjeller i skårer høyere enn 1. Forskjellene i disse tilfellene kan skyldes, for eksempel på grunn av typografiske feil eller mønstre av immunoreaktivitets som var vanskelige å score. I følge disse ble rescores, igjen uavhengig og uten tilgang til tidligere score. Etter den rescoring, ble 6 kjerner kassert på grunn av dårlig kvalitet (dvs. ikke ansett score-stand av begge forskere), 88 kjerner hadde nå Stillingen innenfor en enhet av hverandre, og bare en kjerne med en poengsum forskjell større enn 1 forble. Denne kjernen ble derfor ekskludert. Det store antall kjerner analysert gjenspeilte det faktum at flere sider ble farget mer enn en gang, siden teknisk feil (mangel på farging) var mistenkt i de første tre-fire rader av det første settet med kjerner på hvert lysbilde. Dette ble bekreftet da de individuelle poengsummer ble analysert: fordelingen av skårer for posisjoner 1-4 i første sett av kjernene ble betydelig venstre-skiftet (dvs. mange score til 0-1 returnert) i første løp i forhold til de påfølgende løper, mens fordelingen av resultatet for stillinger 5-end (enten 7 eller 8, avhengig av lysbilde) var svært like de første og påfølgende kjøringer. Følgelig ble resultatet for alle posisjoner i første løp og første sett skårer forkastet. Medianverdier ble deretter bestemt for resultatet for hver etterforsker (kun kjerner blir scoret av både etterforskere ble betraktet), og resultatet ble deretter gjennomsnitt før de blir lagt til i databasen. Korrelasjonen mellom den opprinnelige CB
1IR kreft score (skala 0-3) og NCB
1IR kreft score (skala 0-4) var svært høy (Spearmans rho = 0,81, P 0,0001, n = 364) , og den optimale (Youden) score identifisert av en reporter Operated Karakteristisk (ROC) kurve av NCB
1IR data for pasienter behandlet med forventet etter diagnose med en 15 år cut-off var på en delt på scorene til ≤2.75 og . 2,75
statistikker
Tre statistiske programmer ble brukt. De intra korrelasjonskoeffisienter, Cox proporsjonal farer regresjon og to-trinns klase analysene ble utført ved bruk av IBM SPSS programvareversjoner 20 og 21. De ordens regresjonsanalyser ble gjennomført ved hjelp av programvare som er utviklet innenfor R prosjektet for statistisk databehandling (versjon 2.15.2) [ ,,,0],35]. Alle andre statistiske beregninger ble foretatt ved hjelp av statistikkpakke innebygd i GraphPad Prism 5 og 6 dataprogrammer for Macintosh (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). For å overleve analyser, ble en hendelse definert som dødsfall på grunn av prostatakreft og lagt inn i databasen som «event = 1», og dermed lar fastsettelse av sykdomsspesifikk overlevelse. Død av andre årsaker ble sensurert, som var tilfeller der pasienten var i live på datoen for siste oppfølging. Tre tilfeller der sykdommen utfallet var ukjent ble ekskludert fra overlevelsesanalyser.
Resultater
Korrelasjonen av CB
1IR og Pakt-IR i prostata kreft vev microarray prøver
i tabell 1 er Spearmans rho verdier gitt for sammenhengen mellom NCB
1IR og Pakt-IR score i tumorprøver. Hvis høy tumor CB
1 reseptor uttrykk gir en bryter til en Akt vei [30], en positiv korrelasjon mellom NCB
1IR og Pakt-IR forventes. Dette ble faktisk funnet (Spearmans rho = 0,29, P 0,0001, n = 274) for svulster. En meget lignende verdi ble sett (Spearmans rho = 0,27) når den opprinnelige CB
1IR Stillingen [27] ble benyttet i stedet for NCB
1IR. I teorien er denne korrelasjon, men signifikant, kan induseres mellom to uavhengige variabler ved en tredje faktor: Hvis parameteren A, for eksempel, induserte både pakt (ved å benytte det som en nedstrøms signalmolekyl), og på samme tid øket syntese av CB
1-reseptorer, en sammenheng mellom Pakt-IR og NCB
1IR ville bli sett. En åpenbar kandidat i denne sammenheng vil være EGF-reseptorer og nært beslektede ErbB2 reseptorer, gitt at de par til Akt signalering i prostatakreftceller [36], [37]. Faktisk, i vevet microarray, ble pEGFR-IR og ErbB2-IR-score korrelert med pakt-IR i tumorvevet (tabell 1 og [32]). Men første- og andre-ordens korrelasjonskoeffisienter for Pakt-IR og CB
1IR, beregnet som beskrevet i [38], forble signifikant når kontrollert for pEGFR-IR og ErbB2-IR (tabell 1). Det var ingen signifikant sammenheng mellom ikke-maligne Pakt-IR og NCB
1IR score (Spearmans rho = 0,066, n = 232, p = 0,32).
De individuelle score brukes i denne korrelasjon ble oppnådd fra 1-8 tumor kjerner per sak (se Methods). Imidlertid, gitt at kjernene omfatter en svulst tilfelle bestå av både primære og sekundære Gleason grad områder [33], er det mulig at en korrelasjon kan ses på nivået av kjernen, dvs. at en kjerne fra et gitt tilfelle med en lav CB
1IR vil ha en lavere Pakt-IR enn en annen kjerne fra det samme tilfelle med en høy CB
1IR (se fig. 1A for eksempler på to kjerner fra samme tilfelle med dramatisk annerledes CB
1IR) . Som følge undersøkte vi korrelasjonen mellom NCB
1IR og pakt-IR i de enkelte kjerner. I lys av det store antall kjerner skåret for begge parametere (n = 892), kan vi dele dataene tilfeldig inn i et testsett (n = 594) og valideringssettet (n = 298) av kjerner. I begge settene, var en signifikant korrelasjon sett, med kjerner i øvre kvartil av CB
1IR har en betydelig større Pakt-IR enn de i de to nederste kvartil (Fig. 1B, C).
Panel A viser to kreft kjerner fra samme sak (Gleason score 7) viser en stor variasjon i CB
1IR intensitet. De hadde posisjonene 1 og 5 av tumoren serie pilmerkede. Den venstre Kjernen ble scoret 0,75 (50% scorer 0, 25% scorer 1, 25% poengsum 2) med en etterforsker, og en (25% scorer 0, 50% scorer 1, 25% poengsum 2) av den andre. Retten Kjernen ble scoret 2,75 av både etterforskere (50% scorer 2, 25% scorer 3, 25% scorer fire av en etterforsker, 25% scorer 2, 75% scorer tre av de andre etterforsker). Panel B og C viser Pakt score for individuelle kjerner i testen (n = 595, Panel B) og validering (n = 297, panel C) datasett, fordelt på ca. NCB
1IR kvadranter. Antallet tilfeller i hver kvadrant er vist i grafen, sammen med median og interkvartilt områder. * P 0,05, ** P 0,01, *** P 0,001 for sammenligninger vist, ellers ikke signifikant (Dunn multippel sammenligningstest følgende signifikant (P . 0,0001) Kruskal-Wallis test Spearmans rho for sammenhenger mellom kjerne NCB
1IR og kjernen Pakt-IR var 0,29 og 0,28 (både P 0,0001). for test- og valideringssett, henholdsvis
Foreningen studier~~POS=HEADCOMP indikerer kausalitet, men informasjon om dette kan merkes fra dataene ved bruk av ikke-parametriske regresjonsteknikker. en prøve (80%) av datasettet ble valgt tilfeldig og en ikke-lineær multippel regresjon (npreg i R statistisk pakke) ble deretter kjørt for å se hvilke variabler var relevante og som ikke var. Denne prosessen ble gjentatt 1000 ganger, for å identifisere robust tilhørende variabler. Når Pakt-IR var den avhengige variabelen som svar på NCB
1IR og pEGFR-IR, de to uavhengige variablene ble aldri utelukket. den samme gjaldt når Pakt-IR var den avhengige variabelen som svar på NCB
1IR og ErbB2-IR, og når NCB
1IR var avhengig variabel og Pakt-IR og enten pEGFR-IR eller ErbB2-IR var uavhengige variabler. Disse dataene ikke legge til informasjon om kausalitet. Men når NCB
1IR var avhengig variabel og Pakt-IR, pEGFR-IR og ErbB2-IR var uavhengige variabler, ble Pakt-IR ekskludert i 100% av tilfellene (de to andre variablene ble aldri utelukket). I motsatt analyse (når Pakt-IR var den avhengige variabelen og NCB
1IR, pEGFR-IR og ErbB2-IR uavhengige variabler), NCB
1IR ble utelukket i 80% av tilfellene, mens de to andre variabler ble aldri utelukket. Siden utelukkelse raten høyere for Pakt-IR med NCB
1IR som avhengig variabel enn for NCB
1IR med Pakt-IR som avhengig variabel, dataene tyder på at det scenariet der aktiveringen av Akt er nedstrøms CB
1 reseptorer er mer sannsynlig enn motsatt retning.
Association of svulst NCB
1IR og Pakt-IR med sykdommens alvorlighetsgrad ved diagnose
Vi har tidligere rapportert at både svulst CB
1IR og pakt-IR-score i denne pasientmaterialet er forbundet med alvorlighetsgraden av sykdommen ved diagnose [27], [32]. Kombinasjonen av de to parametrene har imidlertid ikke blitt studert. På fig. 2, de enkelte verdier for tilfeller scoret for både CB
1IR og Pakt-IR er fargekodet på grunnlag av deres kliniske /histopatologiske data (Gleason score, forekomst av metastaser ved diagnose, tumorstadium og Ki67-indeksen [et mål av celleproliferasjon]). Grafene er delt inn i kvadranter basert på median skår for de to parametrene. De spredningsplott tjene ekstra formål å vise at selv om korrelasjonskoeffisienten mellom CB
1IR og Pakt-IR er svært signifikant (se ovenfor), er det en lang vei faktisk fra å forklare den biologiske variansen av datasettet. For de tilfeller gruppert som Gleason score 4-5, 6 eller 7, var det ingen åpenbar sammenheng mellom Gleason score og posisjonen på grafen. Men tilfeller med Gleason score 8-10 vuvuzelaer i øvre høyre kvadrant av grafen (Fig. 3A). Tilsvarende tilfeller der metastaser ble funnet ved diagnose også en tendens til å samles på øverst i høyre del av grafen (Fig. 2B), som gjorde tilfeller med en høyere rate av celleproliferasjon (Fig. 2C) og svulsten Karakter (Fig . 2D).
Ki67-indeksen er en kontinuerlig variabel som spenner 0-48% i datasettet [34]. Transjene ble valgt her for illustrasjonsformål, men representerer den nederste 50% ( «Ki67 Low»), er 50-75% ( «Ki67-mellomliggende») og den øvre 25% ( «Ki67 høy»). De stiplede linjene i figurene viser median score for NCB
1IR og Pakt-IR for datasettet.
Panel A viser et punktplott av enkeltsaker, slik at gruppenavnene i de andre paneler er lettere å følge. I Kaplan-Meier plott er vist i paneler B til D,
† Pca refererer til antall pasienter som døde som et resultat av deres prostatakreft i løpet av oppfølgingsperioden. De
2 verdier er for log-rank (Mantel-Cox) tester, med P-verdiene som vises. Panel B, alle tilfeller; Panel C, Gleason scorer 4-6 tilfeller; Panel D, Gleason score 7-10 tilfeller.
kvadrantene i tallene er basert på median splittelse av de to parametrene, og beredskapsanalyser av dataene viste at fordelingen av de kliniske parametere var signifikant forskjellig i kvadrantene (tabell 2). Således, for eksempel,% av tilfellene med Gleason score 8-10 varierte fra 19% (nederst til venstre kvadrant) til 59% (kvadranten øverst til høyre), og lignende mønster ble sett for forekomsten av metastaser ved diagnose, tumorstadiet, prosentandelen av prøvene som inneholdt tumoren (% CA) og den Ki67-indeks (tabell 2).
Selv dramatisk, dataene vist i fig. 2 og Tabell 2 indikerer ikke om sammenhengen mellom de to biokjemiske markører og kliniske data er ganske enkelt tilsetningsstoff eller om det er en interaksjon stede. Dette ble undersøkt for tre av parametrene (Gleason score,% ca og Ki67-indeksen) med ordens regresjon (kumulativ logit modell). For regresjoner uten et samspill parameter, bidrag fra Pakt-IR og NCB
1IR var betydelig, som forventet (tabell 3). Men viktige bidrag i samspillet sikt Pakt-IR × NCB
1IR ble også sett for Gleason score og% ca da de ble inkludert i analysen (tabell 3).
Association of NCB
1IR og Pakt-IR med sykdomsspesifikk overlevelse
Om lag to tredjedeler av tilfellene i databasen hadde blitt fulgt av forventning etter diagnose, dette blir standard behandlingsprotokoll på den tiden i Sverige. Disse sakene kan gi nyttig informasjon i forhold til tilknytningen for en gitt biomarkør med sykdomsspesifikk overlevelse. Dette har blitt rapportert tidligere for både Pakt-IR og den opprinnelige CB
1IR score [27], [32]. Samspillet mellom de to variablene har imidlertid ikke blitt undersøkt. For å gjøre dette, har vi brukt de optimale cut-offs for de to parametrene ( 2,75 og ≥2.75 for Pakt-IR [32] og Youdin cut-off verdi for NCB
1IR (≤2.75 og .. 2.75) for alle 196 pasienter fulgt av forventning og skåret for både NCB
1IR og Pakt-IR (fig 3A viser fordelingen av verdier), var det et klart mønster der de tilfeller med score til begge parametrene over cut-off verdiene hadde en dårligere prognose enn de tre andre gruppene (fig. 3B). en bivariat Cox proporsjonal farer regresjonsanalyse indikerte at den prognostiske informasjon fra NCB
1IR var tilsetningsstoff til det som tilbys av Pakt-IR (tabell 4). dette er imidlertid ikke overraskende gitt at gruppene har forskjellige andeler av tilfeller med forskjellige Gleason score (se fig. 2A). Men med Gleason-score (som en median-splitt) ble tatt i betraktning, de to parametrene beholdt sin additivity (Trivariate viktigste effektene analyse, tabell 4), og dette gjenspeiles i Kaplan-Meier plott av Gleason score 7-10 tilfeller (fig. 3D). Samspillet sikt Pakt-IR × NCB
1IR, var imidlertid ikke signifikant verken i bivariate eller trivariate analyser (Tabell 4).
Diskusjoner
I denne undersøkelsen vi har utforsket forholdet mellom Pakt og CB
1 i prostata kreft svulster og cellelinjer for å undersøke muligheten for at det er en «Akt switch» i prostatakreft. I utgangspunktet er det kanskje verdt å kommentere det faktum at aktiveringen av CB
1-reseptorer anses her i form av kreft celle overlevelse, mens mange (men ikke alle) studier i cellelinjer peker på skadelige effekter av cannabinoider ved kreft cellene [1] – [5], [39]. Imidlertid kan effekten av cannabinoider ved tumorceller være mer komplisert. Dette er blitt vist elegant i serum-sultet NCI-H292 lungekreftceller: 300 nM Δ
9-tetrahydrocannabinol (THC) frembringer en robust økning i celleproliferasjon, som vurdert av en tymidin-inkorpore-ringsanalyse, mens høyere konsentrasjoner av THC ( 4-10 pM) produsere en betydelig apoptose [40]. Et mitogen effekt av submicromolar konsentrasjoner på 50 og 100 nM THC ved tymidininkorporering ble sett i PC-3 prostata kreft celler, mens 500 nM THC var uten effekt [10]. Høyere konsentrasjoner av THC produsere apoptose i disse celler, selv om dette ser ut til å være formidlet av en CB reseptor-uavhengig mekanisme [15]. Det er bemerkelsesverdig at studier som undersøker de antiproliferative virkningene av cannabinoider ofte bruke mikro- snarere enn nano-molar konsentrasjoner av ligandene (for diskusjon, se [2], [39]). Til slutt, antiproliferative virkninger av CB
1 reseptorantagonister /inverse agonister slik som rimonabant er også blitt rapportert til cancercellelinjer [41], [42], men det er ikke klart hvorvidt slike effekter skyldes blokkering av CB
1 reseptorer eller off-target handlinger av forbindelsene
det er to hovedfunnene i studien, som er omtalt i sin tur:.
CB
1 reseptoren uttrykk og Pakt uttrykk er positivt korrelert i prostatakreft
en av spådommene i Pakt bryter modellen er at uttrykket av CB
1 reseptorer bør være positivt korrelert til Pakt i tumorceller. pakt er et nedstrøms effektor-molekyl for et bredt spekter av signalveier. Dette øker risikoen for en falsk negativ, hvor en tilknytning mellom CB
1-reseptorer og Pakt er tapt i støy. Det ble imidlertid en meget signifikant positiv korrelasjon mellom CB
1IR og pAktIR sett og korrelasjonen ble holdt ved nivået for de enkelte kjerner. Videre forble signifikant korrelasjon selv når kontrollert for to andre reseptorer kjent for par å Akt, nemlig pEGFR og ErbB2 [36], [37].
CB
1IR og Pakt-IR forbinder med sykdommens alvorlighetsgrad ved diagnose
Flere studier har undersøkt sammenhengen av Pakt-IR med sykdommens alvorlighetsgrad som vurderes av Gleason score, svulsten scenen og Ki67-indeksen [32], [43] – [46]. Generelt blir en høy pakt-IR forbundet med en mer alvorlig form av sykdommen ved diagnose, selv om det er forskjeller mellom gruppene (for diskusjon, se [32]). Med hensyn til CB
1IR, har to kohorter blitt undersøkt. I vår studie ved hjelp av dagens store kohort av prøver tatt ved diagnose følgende transurethral reseksjon for nedre urinveissymptomer, en klar sammenheng med Gleason score og de andre histopatologiske tiltak ble funnet [27]. I motsetning til dette, i en mye mindre (n = 35) kohort av prøver tatt ved prostatektomi, ingen klar sammenheng mellom CB
1 reseptor ekspresjon (målt i Western blot eksperimenter og med QT-PCR) og den Gleason grad ble sett, selv uttrykket nivåer var høyere enn sett for kontroll vev [28] Hvorvidt eller ikke fikk pasientene andre behandlinger før prostatektomi ikke er indikert.
Gitt at både CB
1IR og pakt-IR er assosiert med sykdommen alvorlighetsgrad i vår årsklasse, ville det være forventet at saker med høy score for begge merkene ville ha en overrepresentasjon av Gleason score 8-10 og de andre histopatologiske parametre av sykdommens alvorlighetsgrad. Dette ble faktisk funnet. Imidlertid, med hensyn til Gleason stillingen og prosentandelen av prøven som var tumorassosiert, en vekselvirkning mellom NCB
1IR og pakt-IR ble sett. Aktivering av Akt produserer en rekke cellulære effekter, inkludert inaktivering av pro-apoptotiske proteiner BAD og økt vekst av prostatakreftceller i en xenograft modell [47], [48]. Våre funn er i overensstemmelse med en modell hvor en høy CB
1 reseptorekspresjon mates inn for å øke Akt signalering [30] utover det som skyldes andre signalveier, og dermed øke den patologiske natur av tumorcellene og dermed sykdomsgrad . Nøyaktig hvordan CB
1 reseptor aktivering feeds i å påvirke Akt signal ville best bli undersøkt i kreftcellelinjer. Men i kinesisk hamsterovarie-celler transfektert med CB
1-reseptorer, CB reseptor agonister som THC (1 uM), CP55,940 (25 nM) og HU-210 (25 nM) fremstille en robust aktivering av Akt.
