Abstract
Innledning
Overdreven aggregering av blodplater på stedet av plakk ruptur på koronar førte til dannelsen av trombe som er rapportert å utfelle akutt myokardinfarkt (AMI). Nitrogenoksid (NO) har blitt rapportert å hemme blodplateaggregasjon og indusere trombolyse gjennom
in situ
dannelse av plasmin. Som plasma NO nivå i pasienter med akutt hjerteinfarkt fra to forskjellige etniske grupper ble redusert til 0 um (median) sammenlignet med 4,0 mikrometer (median) i normale kontroller, effekten av restaureringen av NO nivå til normalverdier på frekvensen av dødsfall på grunn av AMI ble bestemt.
Metoder og resultater
Restaureringen av plasma NO nivået ble oppnådd ved en stikker liten bomullsdott (10 × 25 mm) som inneholder 0,28 mmol natriumnitroferricyanid (SNP) i 0,9% NaCl til den abdominale hud av deltakerne ved hjelp av ikke-toksiske klebebånd som ble rapportert å normalisere plasma NO nivå. Deltakerne (8283) var frivillige i en uavhengig studie som hadde forskjellige typer kreft, og ikke ønsker å bruke noen konvensjonell behandling for sin tilstand, men valgt å motta SNP «pad» for deres tilstand i 3 år.
bruk av SNP «pad» som normalisert (≈4.0 mm) plasma NO nivå som i følge reduserte dødeligheten på grunn av AMI, blant deltakerne, ble funnet å være betydelig redusert i forhold til død på grunn av AMI i normalbefolkningen.
Konklusjon
Våre data antyder at bruk av SNP «pad» betydelig redusert død på grunn av AMI.
Trial Registrering
www.ctri. nic.in 004236
Citation: Ghosh R, Ray U, Jana P, Bhattacharya R, Banerjee D, Sinha A (2014) Reduksjon av dødeligheten på grunn av akutt hjerteinfarkt hos pasienter med kreft gjennom Systemisk Restaurering av Svekket Nitrogenoksid. PLoS ONE 9 (2): e88639. doi: 10,1371 /journal.pone.0088639
Redaktør: Carlo Gaetano, Goethe-universitetet, Tyskland
mottatt: 09.08.2013; Godkjent: 06.01.2014; Publisert: 18 februar 2014
Copyright: © 2014 Ghosh et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet delvis av Forsvarets Research and Development Organization, Govt. av India (DLS /81/48222 /LSRB-247 /EPB /2012 finansieringskilder ikke hadde noen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser..: forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer.
Innledning
aggregering av blodplater ved å samle midler som ADP,
l
-epinephrine, er en kritisk viktig kollagen eller trombin physiologic hendelse i livrednings blodkoagulasjon prosessen [1]. i motsetning til dannelsen av trombe (microaggregate av blodplate innleiret i fibrin masse) på grunn av overdreven blodplate-aggregering, spesielt av ADP [2], i større eller mellomstor koronararterie , på stedet av aterosklerotisk plakk ruptur eller fissuring har blitt rapportert å føre til akutte koronare syndromer som fører til ustabil angina eller akutt hjerteinfarkt [3]. i akutte tilfeller tromben induserte blokade av normal blodsirkulasjon ville ikke bare hindre tilgjengeligheten av oksygenrikt blod, men vil også avbryte tilførselen av næringsstoffer, mineraler og vann som er avgjørende for de vanlige aktivitetene i hjertemuskulaturen som fører til akutt iskemisk hjertesykdom (AIHD) inkludert akutt hjerteinfarkt (AMI). Og, som sådan, dannelsen av tromben på den koronare arterielle veggen spiller en kritisk viktig rolle i patogenisiteten av koronar arteriesykdom (CAD). På den annen side oppløsningen av det dannede trombe kan bidra til å løse tilstand gjennom restaurering av normal blodsirkulasjon i hjertemuskulaturen. Forskjellige trombolytiske midler anvendes for å oppnå oppløsning av den dannede trombe [4] -. [8]
dreven aggregering av blodplater blir påvirket av forskjellige blodplate-aggregerende midler som fører til trombedannelse. Imidlertid er det overdreven blodplateaggregering motvirkes av virkningen av flere humorale inhibitorer av blodplateaggregasjon, inkludert prostacyklin [9], interferon-α [10], og insulin [11]. Mens prostacylin (PGI
2) er rapportert å inhibere blodplateaggregering via mobil økning av syklisk AMP-nivå [12], insulin og interferon-α er rapportert å inhibere blodplateaggregering ved å øke den cellulære syntese av nitrogenoksid (NO) [ ,,,0],13], [10]. Nitrogenoksid er blitt rapportert å inhibere blodplate-aggregering ikke bare gjennom den cellulære økning av både cyklisk AMP og GMP-nivå [14] – [16], NO kan også hemme blodplateaggregasjon ved direkte aktivering av plasminogen til plasmin [10], som i sin tur inhiberte blodplateaggregering gjennom oppløsningen av blodplater inter «fibrinogen broer selv i fravær av både syklisk AMP og syklisk GMP synteser i blodplater [17], [18].
å hemme blodplateaggregasjon av acetylsalisylsyre (aspirin) er ikke bare rapportert å inhibere blodplate-aggregering ved inhibering av blodplate-cyklooksygenase [19], men forbindelsen er også rapportert å indusere NO-syntese i blodplater og i andre celler [20]. Nitrogenoksid fremstilt på denne måten er rapportert å utsvevende inter blodplater «fibrinogen bindinger av dannelsen av plasmin fra plasminogen [10], [20]. Omfattende undersøkelser har vist at bruken av aspirin betydelig redusert forekomst av CAD [21], [22], og det har blitt foreslått at virkningen av aspirin for å redusere forekomsten av CAD var relatert ikke bare til evnen til forbindelsen til hemme blodplate-cyklooksygenase [23], [24], men også til den trombolytiske effekt av forbindelsen på grunn av NO syntese fører til plasmin formasjon [25]. I denne sammenheng kan det nevnes at enten direkte injeksjon av NO i 0,9% NaCl eller injeksjon av insulin som stimulerte systemisk NO-syntese hos mus ble funnet å effektivt beskytte dyret fra død på grunn av koronar trombose fremkalt ved injeksjon av ADP i sirkulasjonen selv i fravær av aterosklerotisk plakk ruptur i de «normale» dyr [26].
i en innledende studie for å bestemme den mulige rolle av systemisk NO i CAD, om noen, når plasma NO nivå ble bestemt i pasienter som lider av akutt hjerteinfarkt, ble det funnet at plasma NO-nivå hos disse pasienter (n = 125, M = 101, F = 24) var sterkt redusert (0 nmol /ml; (median) resultatene av foreløpige. studien og den rolle av NO som et antiblodplate og et trombolytisk middel som angitt ovenfor, førte oss til å vurdere muligheten for å forhindre AMI, gjennom den systemiske økning av plasma NO nivå ved hjelp av natriumnitroprussid (SNP) «pad» som beskrevet tidligere i dyremodell så vel som hos mennesker [27], [28]. Som det var hverken praktisk eller mulig å bruke SNP «pad» på ubestemt tid for den systemiske økning av NO-nivå i normale frivillige, for å bestemme virkningen av øket plasma NO nivå for å redusere forekomsten av AMI, effekten av økningen av plasma NO nivåer i forebygging av AMI i pasienter med kreft ble utført for to forskjellige grunner: 1) kreftpasienter er rapportert å være på et høyere risiko for å dø på grunn av AMI sammenlignet med normal befolkning [29] – [33], og 2) studien (deltakelse av kreftpasienter) er ikke spesielt initiert for å bestemme virkningen av øket systemisk NO nivå ved hjelp av SNP «pad» (se nedenfor) på forekomst av AMI i kreftpasienter. Disse kreftpasienter deltok i en uavhengig studie og deres inkludering var knyttet bare til en serendipitous observasjon da personene som fikk SNP «pad» hadde bemerkelsesverdig lavere dødelighet på grunn av AMI sammenlignet med normalbefolkningen. Det skal her bemerkes at resultatene evaluert i dette papiret ikke var en del av den opprinnelige kliniske studien, og dette var i stedet en sekundær analyse av resultatene oppnådd for [28]. Disse fagene med ulike typer kreft, som deltok i vår studie hadde satset på sitt eget ønske om å ikke motta noen kjemoterapi, stråling eller kirurgi for tilstanden, men ønsket å motta bare dermal «antineoplastin» terapi som egentlig er en SNP «pad» [ ,,,0],28]. Det bør nevnes her at disse frivillige ble allerede mottar dermal SNP «pad» for de siste 3 år for deres neoplastiske tilstander når dødeligheten blant disse pasientene ble sammenlignet med friske frivillige og analysert bare for statistisk formål. Virkningene av den systemiske økning av plasma NO nivå i forebygging av AMI i dyremodellen, så vel som hos mennesker med kreft som ble rapportert å være predisponert for økt forekomst av AMI sammenlignet med det i normale populasjonen [29] – [33 ] presenteres her
Materialer og metoder
protokollen for denne rettssaken og støtte sjekkliste er tilgjengelig som tilleggsinformasjon.; se Sjekkliste S1 og protokoll S1.
Etikk erklæringen
Denne studien bedt om deltakelse av både normale frivillige og alder og kjønns matchet personer med forskjellige typer kreft. Disse kreftpasienter på tidspunktet for presentasjonen mottok bare «antineoplastin» dermal pad, en roman kreftbehandling som beskrevet tidligere [28]. I korthet, «antineoplastin» pad ved påføring på huden til mottakeren er rapportert å øke plasma NO nivå, gjennom «feedback» aktivering av insulin aktivert nitrogenoksydsyntase (Ianos) i de dannede elementer av blod, så vel som i endotelcellene i karene [34]. Disse pasientene etter eget ønske fikk ikke velge å motta noen annen behandling samtidig. Den passende godkjenning for bruk av dermal «antineoplastin» (SNP «pad») av disse frivillige med ulike former for kreft ble hentet fra Institutional Review Board for menneskelig Research, Sinha Institute of Medical Science and Technology, Kolkata, India, og fra Calcutta High Court of Law bare etter juridisk rådgivning ble gjort tilgjengelig for hver av disse frivillige i nærvær av deres familiemedlemmer som rapportert før (Protocol S1) [28]. Hver deltaker fikk fri tilgang til prosessfullmektig advokat og et familiemedlem for å innhente tillatelse. Ingen frivillige med kreft fikk lov til å delta i studien uten skriftlig samtykke (rettslig erklæring) som er signert av en magistrat og når deltakerne ble valgt, ble de bedt om å signere et informert samtykkeskjema i nærvær av et vitne. Alle deltakerne ble grundig informert om både fordeler og risiko i nærvær av en juridisk rådgiver med den forståelse at deltakeren kan avslutte forskningen uten tillatelse fra etterforskerne. Ingen økonomisk kompensasjon ble spurt enten av deltakerne eller av etterforskere i noen fase av arbeidet. Dommen for å forfølge forskningsaktiviteten på kreft som beskrevet ovenfor ved hjelp av «antineoplastin» ble godkjent av den høyeste domstol av staten dvs. The Calcutta høyesterett. Også oppmerksom på at omfattende eksperimenter ble utført i tre typer dyr som blir spurt av Calcutta High Court. Resultatene av undersøkelsen og godkjenning av lagmannsretten er tilgjengelig i public domain for inspeksjon av enhver vedkommende.
Plasmaprøver fra AMI som var fra Australia ble også brukt i studien og nødvendige tillatelser er innhentet fra human forskningsetikk, University of Tasmania, Australia.
Denne studien også brukt friske hvite Swiss Albino mus etter å ha blitt undersøkt av en sertifisert veterinær. En standard pellet kosthold og sterilt vann ble gitt
ad libitum
. Passende tillatelse ble innhentet fra Institutional Review Board for Animal Care, Sinha Institute of Medical Science and Technology, Kolkata, India. Man sørget for å sikre at ingen dyr ble unødvendig skadet eller ble utsatt for smerte i løpet av studien, og studiene ble utført bare i nærvær av et medlem som tilhører den Animal rett gruppe. Etter avslutning av studien, ble dyrene avlivet ved eutanasi hjelp av en CO
2 kammer.
Valg av pasienter med ulike kreftformer
Detaljene for valg av kreftpasienter og bruken av «antineoplastin» pad i de utvalgte pasienter er vist i fig. 1. Studien ble utført i Sinha Institute of Medical Science and Technology, Kolkata, India, fra år 1999 til 2012, og er fortsatt videreføres i henhold til rekkefølgen av Calcutta High Court i lov (Fig. 1). Den «antineoplastin» pad ble levert til pasientene ved møtende teknikere i nærvær av medisinsk personell med M.D. grad. En dobbel-blind metode for å undersøke studien ble utført der verken etterforsker eller de medisinsk personell hadde noen kunnskap om den type kreft. Bare etter en måned, når pasientene viste sammen forbedring relatert til den komplette blodbildet, smerte og andre kreftrelaterte problemer som bekreftes av tynn nål aspirasjon cytologi, ultralyd, hematologiske test og leverfunksjonstest, ble dataene oppført av en uavhengig tabulator som hadde ingen kunnskap om kreftpasienter eller hvorvidt «antineoplastin» pad ble mottatt av disse pasientene [28].
pasienter med ulike krefttyper ble valgt for studien og «antineoplastin» pad bestående av 0,2 ml av oppløsning (0,28 mmol SNP) dynket i et band-hjelp ble brukt dermalt på nedre mage hårfri område som beskrevet tidligere [28]. Vær oppmerksom på at hele prosessen med å levere «pad» inneholder «antineoplastin» tar mindre enn 5 min. Folk fra ulike deler av verden tilhører multietniske og flerkulturell bakgrunn har deltatt i studien, inkludert India, Polen, Papua New Guinea, Sri Lanka og Bangladesh. De hadde brukt denne «antineoplastin» pad for minst et år med en maksimal varighet på 5 år.
Valg av normale frivillige
Alder og kjønn matchet normale frivillige deltok også i studere. Disse personene på tidspunktet for deltakelse i studien ble ikke lider av høyt blodtrykk og heller ikke hadde historie av diabetes mellitus. Ingen av de normale frivillige ble innlagt på sykehus for enhver tilstand i løpet av de siste 6 månedene, og ingen hadde livstruende infeksjon. Passende informert samtykke form ble signert av disse frivillige.
Valg av pasienter med akutt hjerteinfarkt (AMI)
For å minimere påvirkning av etnisk bakgrunn og geografisk plassering på plasma NO nivå i pasienter med akutt hjerteinfarkt , emner fra både Calcutta i India, og fra Hobart, Tasmania i Australia ble bedt om å delta i studien.
Inklusjonskriterier kriterier~~POS=HEADCOMP for all AMI.
i Calcutta, alle pasienter ble innlagt på intensivavdeling av Calcutta medisinske universitet og sykehus, Calcutta, India, (n = 55, M = 45; F = 10; median alder 59 år). I Australia ble pasientene innlagt til Royal Hobart Hospital, Tasmania, Australia (n = 70, M = 56, F = 14; median alder 54 år). Alle deltakerne hadde brystsmerter karakteristikker av myokardiskemi i 30 min eller mer. Den elektro viste typiske ST høyde på minst to ledninger i EKG som indikerer en enkelt myokard regionen. Bekreftelsen av tilstanden ble bestemt av de forhøyede kreatin kinase og kreatin kinase-MB isoenzymer i blodprøvene. Prøvetaking av blod ble gjort innen 6 timer etter utbruddet av angina angrep før oppstart av enhver terapi for tilstanden.
Eksklusjonskriterier.
Pasienter med diabetes mellitus i anamnesen, cerebrovaskulær ulykkes eller viser tilstedeværelse av grenblokk eller venstre ventrikkel hypertrofi i EKG som ikke tillater diagnosen ischemi /infarkt eller hadde livstruende infeksjon ble ekskludert fra studien.
men selv om de deltakende pasienter ved presentasjon var noen historie med sykelig betingelser som er nevnt ovenfor, noen av pasientene i løpet av studien fikk utvikle de kardiovaskulære risikofaktorer viz., hypertensjon og diabetes mellitus. Disse pasientene ble riktig behandlet ved hjelp av anti-hypertensive og hypoglykemiske legemidler som vurderes av behandlende lege uavhengig av studien (tabell 1).
Kjemi
ADP ble kjøpt fra Sigma Chem . Co Natriumnitroprussid var et produkt av Abraxis Pharm. Alle andre kjemikalier som anvendes i studiet var av analytisk kvalitet.
Utvikling av koronar trombose i mus
hvite Swiss albino-mus ble brukt til å utvikle koronar trombose ved å injisere ADP i halevenen som beskrevet tidligere [26]. Disse dyrene ble innavlet i våre dyr anlegget fra fødselen og opp til bruken av 2 måneder. De ble matet standard laboratorium chow, og sterilt vann ble gitt
ad libitum
. Dyrene ble dyrket i 12 h sykluser av lys og mørke. Før bruk disse musene ble sjekket av en lisensiert veterinær for å finne ut at de var fri for sykdommer.
Stimulering av plasma INGEN nivåer i dyre og frivillige mennesker in vivo
Økningen av plasma NO nivå var oppnås ved å stikke en steril bomullspute (25 mm x 10 mm) fuktet med 1,6 M natrium-nitroprussid dehydrate (SNP) i 0,9% NaCl inneholdende 0,28 mmol av SNP til håret fritt område av magen ved hjelp av ikke giftig limbånd som beskrevet før [27], [28]. Ved behov SNP «pad» ble skiftet hver 24 timer. Detaljene i mekanismen for økt syntese av NO, ved dermal anvendelse av SNP «pad» er blitt rapportert før [28].
Bestemmelse av plasma NO nivå
Plasma NO nivå var bestemt ved methemoglobin assay som tidligere beskrevet [20]. Typisk omdanner tilstedeværelse av NO i prøven oksyhemoglobin til methemoglobin med karakteristiske forandringer i absorbsjonsmaksima ved 575 nm og 600 nm. Dannelsen av methemoglobin ble bestemt ved å måle den optiske tettheten ved disse absorpsjonsmaksima etter N
2 ved hjelp av et Beckman spektrofotometer (modell DU) som tidligere beskrevet [20]. Kvantifisering av NO ble validert av en uavhengig chemiluminescence metode [35].
Innsamling av blodprøver
Tilleggs blod ble samlet ved venepunksjon ved hjelp av 19 sporvidde silikonisert nål fra deltakerne i plastampuller og anti koagulert ved å blande 9 vol av blod med 1vol av 0,013 M natriumsitrat som antikoagulant, og blandes ved forsiktig vending. Cell gratis plasma (CFP) ble utarbeidet av sentrifugering av blodprøver på 10 000 g for 30 min ved 0 ° C.
Fastsettelse av plasma dermcidin isoform 2 nivåer
Dermcidin isoform to, en 11 kDa protein som er rapportert til å vises i plasma fra pasienter som lider av akutt hjerteinfarkt, ble bestemt til å være en potent inhibitor av alle kjente former for nitrogenoksidsyntase [36]. Dermcidin ble målt ved hjelp av enzymbundet immunosorbent assay (ELISA) ved bruk av elektroforetisk ren dermcidin isoform 2 som antigen, som rapportert før [36].
Fremstilling av geit Arteria carotis endotelcelle Homogenat
Endotelceller fra halspulsåren av nyslaktet geit ble fremstilt i Tyrod buffer pH 7,4 som beskrevet tidligere [37]. Den forstyrret cellemasse ble sentrifugert ved 60 000 g i 30 minutter ved 0 ° C. Supernatanten ble brukt som kilde for endotelial nitrogenoksid syntase (eNOS).
Lineweaver-Burk Plot av insulin-Aktivert eNOS i endotelcelle Homogenate i nærvær eller fravær av Dermcidin
En totalvolum på 1,0 ml av reaksjonsblandingen inneholdt forskjellige konsentrasjoner av
l
-arginin i nærvær av 2 mM CaCl
2 med 100 μunits av insulin /ml og i nærvær eller fravær av 0,1 pM dermcidin i Tyrod buffer, pH 7,4. Produktet NO ble bestemt etter 20 min inkubering ved 37 ° C under N
2, (i stabil tilstand for dannelse av NO (1-30 min) som beskrevet tidligere [38].
Statistisk analyse
betydningen av forhindring av død på grunn av ADP-indusert koronar trombose ved hjelp av SNP «pad» i dyremodellen ble bestemt ved Students «t» test. betydningen av overlevelsesraten hos disse dyrene ble bestemt av Kaplan-Meir overlevelsesanalyse. i tilfelle av frivillige, betydningen av reduksjon av plasma INGEN nivåer i både de indiske og australske pasienter med akutt hjerteinfarkt ble analysert av en regresjonsmodell. betydningen av forebygging av dødsfall på grunn av AMI i personene med forskjellige typer kreft som deltok og fikk SNP «pad» i studien ble analysert ved hjelp av den Z-testen. resultatene ble ansett som signifikant når null-hypotesen ble forkastet med den beregnede z-verdi som er større enn den kritiske tosidige z-verdien og P . alpha 0.5 de statistiske analysene ble utført ved Graphpad Prism programvare
Resultater
plasma~~POS=TRUNC nivåene~~POS=HEADCOMP av NO og plasma dermcidin nivå i pasienter med akutt hjerteinfarkt i Australia og i India og i kjønn. og alderen matchet normale frivillige
Som beskrevet ovenfor, for å minimere påvirkning av etniske og geografiske plasseringen av deltakerne i plasma INGEN nivåer i AMI, plasma NO nivå i denne tilstanden ble bestemt både i Calcutta, India og i Hobart, Australia.
det ble funnet at plasma NO nivå i de australske pasienter (n = 70) var 0 nmol /ml (median) (som varierer fra 0,07 nmol /ml til 0 nmol /ml) ( fig. 2A), og plasma NO nivå i den indiske motstykker (n = 55) hadde også en medianverdi på 0 nmol /ml (som varierer mellom 0,05 nmol /ml til 0 nmol /ml) (fig. 2B). Disse resultatene antydet at verken etnisk bakgrunn eller den geografiske plasseringen av pasienter med akutt hjerteinfarkt påvirket plasma NO nivåene i AMI og plasma NO nivåene var i hovedsak lik i begge tilfellene. Det ble videre bemerket at plasma ingen nivåer i både menn og kvinner var like i serier.
NO-nivå ble bestemt ved methemoglobin fremgangsmåte som beskrevet i avsnittet Materialer og metoder i begge tilfellene. Panel A representerer medianverdiene for plasma NO nivå i pasienter med akutt hjerteinfarkt og i like mange alders- og kjønns matchet normale frivillige i Australia. Panel B viser medianverdiene for plasma NO nivå i pasienter med akutt hjerteinfarkt og i alder og kjønn matchet normale frivillige i India.
Regresjon kurven for plasma NO nivå og aldersgruppen vist at forekomsten av AMI var utbredt i lignende områder av aldersgruppe og plasma NO nivået ble funnet å sveve rundt 0 nmol /t på begge gruppene av pasient (fig. 3). Det kan konkluderes med at både indiske og australske pasienter aldersgruppen og NO nivå er betydelig med r
2 = 0,8021.
Regresjon modell av alder relatert til plasma NO nivå i både indisk og australske pasienter med akutt hjerteinfarkt ble plottet. Alder og tilsvarende plasma NO nivå av deltakerne kan bli bestemt fra plottet. Solid linje representerer regresjon kurven av aldersgruppen av de indiske pasienter med akutt hjerteinfarkt. Stiplet linje angir regresjon kurven av aldersgruppen av de australske pasienter med akutt hjerteinfarkt. Solid sirkler (•) indikerer variasjoner i aldersgruppen indiske pasienter med akutt hjerteinfarkt. Solid firkanter (▪) indikerer variasjoner i aldersgruppen de australske pasienter med akutt hjerteinfarkt. De hule sirkler (○) og hule firkanter (□) representerer plasma NO nivå i indiske og australske pasienter hhv.
Plasma dermcidin nivåer i AMI fagene og i alder og kjønn matchet normale frivillige
Mens plasma dermcidin nivået i normale frivillige ble funnet å være 9,89 ± 3,9 nM, økte den til 115,5 ± 9,9 nM i pasienter med akutt hjerteinfarkt (p 0,0001; n = 125). Mekanismen for dermcidin indusert hemming av NO ble undersøkt i et separat eksperiment hvor dermcidin ble funnet å hemme insulin aktivert nitrogenoksidsyntase i geit endotelceller, og dermed føre til hemming av NO fra
l
-arginin. Lineweaver-Burk-plotting antydet at dermcidin i området 0,1 um økt Km fra 9.03 uM til 25,45 uM arginin med samtidig reduksjon av det Vmax fra 6,5 nmol NO /h /mg til 4,0 nmol NO /h /mg.
beskyttelse av mus fra død på grunn av ADP-indusert koronar trombose induseres ved en økning av plasma NO nivå ved hjelp av SNP «pad»
koronar trombose ble indusert hos mus som en dyremodell ved å injisere ADP i halevenen som beskrevet i Materialer og metoder. Injeksjon av ADP i halevenen til mus forårsaket død hos disse dyr i løpet av 20 minutter med utvikling av trombose i kransarterien som beskrevet tidligere [26].
For å bestemme effekten av den systemiske økning NO-nivå på ADP-indusert død på grunn av dannelsen av koronar trombose, ble samme konsentrasjon av SNP «pad» som i tilfellet av humane frivillige (0,28 mmol) tilført til håret frigjort område av abdomen i mus som beskrevet. Plasmaet NO nivået ble bestemt ved forskjellige tider etter anvendelsen av «pad». Det ble funnet at plasma NO nivå som var 2,1 ± 0,2 uM på null time (det vil si før påføringen av «pad») øket til 4,1 ± 0,3 uM etter 24 timer av det dermale anvendelsen av SNP «pad» (p 0,0001; n = 10). Ved 24 timer etter påføringen av «pad» ble dyrene utfordret ved å injisere 1,5 umol ADP /g kroppsvekt i halevenen. Det ble funnet at dyrene var beskyttet mot død indusert ved injeksjon av ADP (minst 2 dager). I motsetning til dette, injeksjon av ADP førte til død hos musene i løpet av 20 min hvor dyrene ikke har fått noen SNP «pad» med plasma NO-nivå på 2,0 ± 0,2 uM (p 0,0001; n = 10) som var svært lik til at i kontrolldyret (ubehandlet med «pad»).
endringen av nitro «pad» hver 24 timer som gjenplasma NO nivå til 4,2 ± 0,2 uM ble funnet å beskytte dyrene fra døden på ubestemt tid på grunn av den gjentatte trombogen fallet indusert ved gjentatt injeksjon av ADP hver 24 time i minst 7 dager.
frekvensen av overlevelse av dyrene injisert med ADP behandlet med og uten SNP «pad» var kastet Kaplan-Meir overlevelsestest for å bestemme betydningen av overlevelsesraten hos disse dyrene (fig. 4). En sammenligning av overlevelseskurver som bestemmes av Log-rank (Mantel-Cox) Test antydet at overlevelseskurver var signifikant forskjellig med en P-verdi på 0. 0331. I tillegg Gehan-Breslow-Wilcoxon Test også bestemt overlevelseskurver til være vesentlig annerledes med en P-verdi på 0. 0399.
for å bestemme overlevelse i dyrene fra koronar trombose ved dermal påføring av SNP «pad» indusert av ADP, ble Kaplan-Meier overlevelseskurve plottet. Gruppe 1 representerer de dyrene som fikk den dermale anvendelsen av SNP «pad». Kurven viser overlevelsesperioden som viser overlevelse av dyrene opp til 72 timer etter gjentatt injeksjon av ADP. Gruppe 2 representerer kontrollgruppen uten SNP «pad» behandling. Overlevelsestiden for dyrene var mindre enn en time, som vist ved kurven.
Virkningen av øket plasma NO nivå ved hjelp av SNP «pad» på forekomsten av dødsfall på grunn av AMI hos individer med forskjellige kreftformer
som bruk av SNP «pad» hos de dyrene som ble funnet å beskytte dyrene fra død på grunn av ADP-indusert trombose, ble frekvensen av død på grunn av AMI bestemmes hos kreftpasienter som hadde mottatt SNP «pad» minst i 3 år hver dag for ulike typer kreft som beskrevet tidligere [28]. Det ble rapportert at mens plasma NO nivå var ≈4 uM i normale frivillige, plasmanivået av NO i alle krefttilfeller som ble testet ble funnet å bli redusert til 0 pM [28]. I totalt 8,283 personer med ulike typer kreft (tabell 2) som fikk dermal SNP «pad», i minst 3 år plasma ingen nivåer ble restaurert til ≈4 mikrometer, (p 0.0001) som rapportert før [28 ]. Interessant, den faktiske antallet dødsfall på grunn av AMI seg hos disse pasientene var bare 895. Som beskrevet i tabell 3, ble det funnet at dødeligheten i normalbefolkningen på grunn av AMI var 40%. Men frekvensen av dødsfall på grunn av AMI i kreftpasienter som hadde fått den «pad» for 3 år var 12,265% som kontrast dødsraten i kreftpasienter (29,858%) som ikke fikk noen SNP «pad». Z-test analyse mellom gruppene ble utført der den beregnede z-verdien av dødeligheten på grunn av AMI mellom normalbefolkningen og kreftpasienter som bruker SNP «pad» var 17,239 som var større enn den kritiske tosidige z-verdi 1,159 . Også z-verdien av dødelighet på grunn av AMI mellom kreftpasienter ikke får den SNP «pad» og kreftpasienter med «pad» var 22,3 som var igjen større enn den kritiske tosidige z-verdi 1,959. P-verdien for den tosidige test i alle de tilfeller som ble funnet å være 0, som var mindre enn den alfaverdi på 0,5 (dvs. P 0,5). Z-test analyse derfor etablert at frekvensen av dødsfall på grunn av AMI i deltakerkreftpasienter var betydelig lavere enn selv i normalbefolkningen som kontrasteres en betydelig økning av dødeligheten på grunn av AMI hos kreftpasienter.
diskusjon
Disse resultatene antydet at en kraftig reduksjon av plasma NO nivå kan resultere i verste prognostisk utfallet av AMI, ved at, NO var ikke bare en potent inhibitor av blodplateaggregering [10 ] og en
in situ
trombolytisk middel [20], [25], men det unormale reduksjon av plasma NO nivå kan også spille en kritisk viktig rolle i utviklingen av alvorlige brystsmerter som vanligvis er assosiert med akutt hjerteinfarkt som det ikke akseptabelt mekanisme er tilgjengelig for øyeblikket. Som INGEN genererende forbindelser som organisk «Nitro» forbindelser inkludert isosorbate dinitrate og nitoglycerine
in vivo
ha betydelige anti-angina effekt gjennom den systemiske generasjon av NO i ofrene for AMI [39], kan det konkluderes, som en konsekvens, at kraftig reduksjon av plasma NO nivået til 0 nmol /ml, kan i betydelig grad, og en medvirkende rolle i utviklingen av hjerte-smerte assosiert med akutt hjerteinfarkt. I denne sammenheng kan det også nevnes at mens det mannlige kjønnshormonet, testosteron, er en inhibitor av systemisk NO syntese, østrogen, kvinnelige kjønnshormonet i motsetning til dette var en potent aktivator av nitrogenoksid syntase (upublisert).
