Abstract
metastaser-forbundet i tykktarmskreft 1 (MACC1) har nylig blitt identifisert som en roman uavhengig prognostisk indikator for metastase forekomst, total overlevelse og kreft overlevelse for pasienter med tykktarmskreft og andre solide tumorer . I denne studien undersøkte vi rollen MACC1 i utvikling og progresjon av nyrebekken karsinom, en form for øvre veis uroteliale karsinom. MACC1 protein som er funnet i cytoplasma, så vel som i kjernen av overgangs epitelceller de normale nyrebekkenet i immunohistokjemiske (IHC) analyser. Kvantitative IHC undersøkelser avdekket at MACC1 unormal overflod i kreftvevet kan representere en biologisk indikator klinisk forenlig med tumor malignitet i nyrebekken. Videre har etterforskningen av foreningen av MACC1 protein nivåer med clinicopathological parametere i denne studien antydet en sammenheng av MACC1 uttrykk med tumor-node-metastaser scenen og histopatologisk grad av pasienter med nyrebekken karsinom, med forhøyede MACC1 protein nivåer ofte assosiert med høyere aggressivitet av sykdommen. Videre har både sykdomsfri overlevelse og total overlevelse for pasientene i høy MACC1 uttrykket gruppe var signifikant lavere enn de i den lave ekspresjon gruppe. Multivariat analyse med en Cox proporsjonal farer modell antydet at MACC1 er faktisk en uavhengig prognostisk indikator på total overlevelse og kreft overlevelse for pasienter med nyrebekken karsinom. Således kan MACC1 representere en lovende kandidat prognostisk biomarkør, så vel som et potensielt terapeutisk mål for denne sykdommen
relasjon:. Hu H, Tian D, Chen T, Han R, Sun Y, Wu C (2014) metastase-Associated i Colon Cancer 1 er en roman Survival-Related biomarkør for menneske Pasienter med nyrebekken karsinom. PLoS ONE 9 (6): e100161. doi: 10,1371 /journal.pone.0100161
Editor: William B. Coleman, University of North Carolina School of Medicine, USA
mottatt: 04.02.2014; Godkjent: 22 mai 2014; Publisert: 20 juni 2014
Copyright: © 2014 Hu et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av et stipend fra National Natural Science Foundation of China (Grant Nummer: 30700834), og en annen stipend fra Science Foundation of Tianjin Natural (Grant Nummer: 12ZCDZSY16600). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
som en ondartet svulst som oppstår fra overgangs epitelet (høyelastisk epitelvev som består av flere lag av epitelceller som linje den indre overflate av urin-organene), renal overgangs cellekarsinom, eller renal urothelial karsinom (UC ) representerer den fjerde mest vanlige cancer i verden [1]. Forekommer i nyrebekken og ureter, øvre kanalen urothelial karsinom (UTUC) er en sykdom som primært rammer folk mellom 50 og 75. Patologisk er UTUC vanligvis mer invasive enn blære UC (60% vs. 15%) og er ofte assosiert med høyere malignitet [2], [3], [4]. UTUC på nyrebekken, eller nyrebekken karsinom (RPC) utgjør ca 5% til 6% av alle nyre UCS og er vanskeligere å diagnostisere enn blæren UC. Faktisk er det 5-års overlevelse av RPC-pasienter lavere enn det som finnes i blæren UC som metastase står for ca 70% av kreftspesifikk død i RPC [5]. Notorisk vanskelig for klinisk diagnose, representerer UTUC en enorm utfordring for karakterisering på radiologisk bildebehandling, samt for endoskopisk visualisering og biopsi. For tiden er det fem faktorer som er de mest vurderte variabler for urothelial karsinom risikovurderingen før endelig behandling: alder, tumor arkitektur, cytologi, biopsi svulst klasse, og tilstedeværelse av hydronephrosisand. Imidlertid, selv om patologiske prediktive faktorer slik som tumorstadium, karakter, carcinoma in situ, lymphovascular invasjon, og lymfeknute invasjon kan være mer nøyaktige enn de andre kliniske faktorer for å forutsi tilbakefall av sykdommen og pasientens overlevelse [6], er slik informasjon normalt ikke tilgjengelig før pasienten har lidd et betydelig tap av nyrereservat og er mindre sannsynlighet for å være i stand til å tåle aggressive behandlinger.
i de siste 5 årene, forskere har fått god innsikt i biologi og klinisk atferd UTUC. Betydelig fremgang har blitt gjort i identifisering av molekylære prognostiske indikatorer for pasienter med urothelial karsinom og kan øke risikoen prediksjon nøyaktighet. Signaliseringsmolekyler som er relatert til cellulære prosesser som angiogenese, celledød, celleadhesjon og celle-proliferasjon er blitt undersøkt i stor utstrekning som potensielle prognostiske indikatorer i utvikling og progresjon av sykdommen, slik som p53, EGFR, Survivin, Bcl-2- Ki-67, E-cadherin, hypoksi-induserbar faktor 1a (HIF1a), telomerase mRNA-komponent, matriks-metalloproteinaser (MMP-2, MMP-9, TIMP1 og TIMP-2), og mer (oversikt i [7], [ ,,,0],8]). Identifisert i et genom-bred analyse som et differensielt uttrykt gen i humane tarmkreft vev og metastaser, metastase-assosierte i tykktarmskreft 1 (MACC1) har blitt foreslått som en selvstendig prognostisk indikator for metastasedannelse og metastase-overlevelse for colon carcinoma pasientene [9]. Påvist i en rekke normale vev, slik som tarm, mage, hypofysen, nyre, luftrøret, bukspyttkjertel, brystkjertel, benmarg, ovarie, lunge, hjerte, lever, og B-lymfoblaster, er mer rikelig i vevene som oppstår MACC1 fra endoderm (for eksempel tarm og mage) enn vev stammer fra mesoderm (for eksempel nyre, hjerte) eller ektoderm (f.eks hypofysen og brystkjertel). Muligens MACC1 kan spille en rolle i endoderm-avledet organogeneseperioden under embryonal utvikling. Opprinnelig oppdaget i tykktarmskreft, har MACC1 overekspresjon blitt vist å fremme tumor proliferasjon, invasjon og metastase i et bredt spekter av faste tumorer inkludert gastrointestinal kreft (for eksempel kreft i tykktarmen [9], [10], gastrisk karsinom [11]), hepatocellulær karsinom [12], [13], osteosarkom [14], gliom [15], [16], lunge [17], [18], [19], øsofageal [20], bukspyttkjertel [21], eggstokk [22] , livmorhalskreft og brystkreft [23] (anmeldt i [24]). Videre har undersøkelsen av MACC1 uttrykk nivåer i tumorvev av ulike kliniske faser viste at den høyeste MACC1 uttrykket nivået har blitt observert oftere i ondartede kreft vev av pasienter, som ofte viser mer ugunstige clinicopathological funksjoner, inkludert forbedret lymfeknute metastaser og metachronously utviklet fjernmetastaser . I andre tilfeller, slik som i sjelden metastatisk human glioma, er MACC1 genekspresjon mer dramatisk oppregulert i vev av høyere malignitet, noe som reflekterer symptomatisk forverring av sykdommen [15]. Forhøyet MACC1 uttrykk har derfor blitt foreslått for å tjene som en uavhengig prognostisk indikator for kreft tilbakefall, potensiell forverring fra godartet til ondartede svulster, eller under visse omstendigheter, utbruddet av metastasering. I tillegg har MACC1 også dukket opp som en prediktiv indikator for tilbakefall overlevelse og total overlevelse (OS) for kreftpasienter i flere kvantitative studier utført i ulike solide svulster (anmeldt i [24]). Etablert som en roman prognostisk indikator for metastaser i et bredt spekter av solide svulster har MACC1 også blitt foreslått å være et mål kandidat for utvikling av terapeutiske strategier for intervensjon med tumorprogresjon og metastasering.
I vår nåværende studien undersøkte vi rolle MACC1 i utvikling og progresjon av human nyrebekken karsinom. Vi har vist i immunhistokjemiske analyser uttrykket mønster av MACC1 protein i humane nyrebekken carcinom vevsprøver, så vel som i de normale nyrebekken. I tillegg undersøkte vi sammenhengen mellom MACC1 overekspresjon og clinicopathological parametere (inkludert alder, kjønn, tumor-node-metastaser (TNM) stadium og patologisk klasse), samt sykdomsfri overlevelse (DFS) og total overlevelse (OS) i pasienter med nyrebekken karsinom. Til slutt har vi også undersøkt ved hjelp univariate og multivariate analyser berettigelse av MACC1 som en roman uavhengig prognostisk indikator for nyrebekken karsinom.
Materialer og metoder
Etikk uttalelse, pasienter og prøver vev
i alt 73 RPC pasienter ble rekruttert til studien i løpet av januar 2002 og januar 2005. RPC pasienter deltok i denne studien inkluderte 52 menn og 21 kvinner. Gjennomsnittsalderen var 61,2 år med en rekke 48-79 år. Pasientene gjennomgikk radikal nephroureterectomy med komplett kliniske historie poster ved Institutt for urologisk kirurgi, Second Hospital of Tianjin Medical University. Pasienter som hadde utviklet metastaser og fikk postoperativ kjemoterapi eller strålebehandling ble ekskludert fra denne studien. Normale vevssnitt i denne studien ble hentet fra 32 tilstøtende ikke-tumornyrebekken epitelvev (ANRPETs, minst 2 cm avstand fra tumor kant) og 34 normale nyrebekken epitelvev (NRPETs, uroteliale vev fra nyrekreftpasienter, som er mindre enn 3 cm i diameter med intakt vev celle polaritet og anses å være normale epitelvev).
Alle diagnoser av flerbrukskasser ble bekreftet og ytterligere klassifisert av postoperative histopatologisk undersøkelse etter kriteriene for 2004 World Health Organization klassifisering. Tumor cellulær differensiering karakterer ble klassifisert i henhold til kriteriene i 1997 World Health Organization klassifisering. Tumor klinisk stadium ble bestemt i henhold til den syvende utgaven av TNM klassifikasjon av amerikanske Joint Committee on Cancer. Hver prøve hadde blitt fikset i formalin, rutinemessig behandlet, og i parafin. Postoperative oppfølgingsdata ble innhentet fra alle pasienter, med en median oppfølgingstid på 41,5 måneder (fra 8 til 54 måneder). Denne studien ble godkjent av etikkomiteen Second Hospital, Tianjin Medical University, og skriftlig informert samtykke til bruk av prøvene fra hver pasient ble inkludert hadde oppnådd tilsvarende.
Klinisk datainnsamling
All kliniske data ble prospektivt samlet, behandlet og lagret i henhold til de kriterier /reglene som er beskrevet ovenfor. De kliniske variabler registrert inkludert kjønn, alder, histologisk type TNM stadium og kjernekraft Karakter (tabell 1). Oppfølgingsdata ble samlet ved kvartals fysiske undersøkelser av pasientene. For hver pasient, er sykdomsfri overlevelse (DFS) i denne studien definert som tidsintervallet mellom diagnosedato til første gjentakelse (inkludert lokalt eller regionalt tilbakefall og systemisk metastaser). Total overlevelse (OS) er definert som intervallet mellom datoen for kirurgi og dødsdato. Pasienter som var i live i siste oppfølging ble sensurert på datoen for deres siste besøk til klinikken, og pasientene, som døde av andre enn RPC årsaker ble sensurert på tidspunktet for deres død.
Immunohistokjemi (IHC)
de representative parafinblokker viser typiske tumor RPC vev og normalt vev inkludert ANRPETs og NRPETs ble valgt for immunhistokjemisk farging etter at vi nøye undersøkt hematoxylin-eosin flekker lysbilder av alle kirurgiske prøver. Vi utførte IHC farging for MACC1 av en to-trinns konjugert polymer metode med Chemmate Envision Detection kit. Kort fortalt delene ble de-vokset med xylen og rehydrert gjennom en gradert serie av etanol. Platene ble deretter underkastet varme-induserte epitop hentes ved hjelp av mikrobølgeovnen i 0,01 M citratbuffer (pH 6,0) i 18 min og ble avkjølt i 30 minutter ved romtemperatur. Platene ble inkubert i 3% hydrogenperoksid i 10 minutter for å inaktivere endogen peroksidase. Snittene ble deretter inkubert med anti-MACC1 antistoff (mus polyklonalt, Ig G, ab106579; 1:50 fortynnet, Abcam, Cambridge, UK) som primære antistoffer over natten ved 4 ° C i et fuktet kammer. Etter å ha vasket i PBS, ble seksjonene inkubert med biotinylert kanin-anti-muse-immunoglobulin (Dakopatts, Glostrup, Danmark) fortynnet ved 1:200 i 30 minutter etterfulgt av ytterligere 30 minutters inkubering med peroksidase-konjugert streptavidin (Dakopatts) fortynnet ved 1: 300. Deretter ble seksjonene kastet diaminobenzidin og deretter motfarget med hematoxylin. Seksjoner fra humane tarmkreft vev ble inkludert som positive kontroller i hvert løp. De positive kontrollene viste tydelig positiv farging og intensiteten var svært lik mellom forskjellige løyper. Den negative kontrollen ble utført med ikke-immun bovint serumalbumin som en erstatning for det primære antistoff i samme konsentrasjon i hver enkelt fargekjøring. Seksjonene ble vasket tre ganger med PBS mellom hvert trinn.
Kvantitativ evaluering av immunhistokjemisk farging
immunhistokjemisk farging av MACC1 ble analysert kvantitativt ved visuell vurdering og Image Pro-Plus i denne studien. Visuell vurdering scoring av MACC1 uttrykk nivåer ble utført av en patolog fulgt av reexamination /bekreftelsen fra en annen patolog. Andelen av tumorceller ble bedømt som følger: 0 (ingen positive tumorceller), 1 ( 10% positive tumorceller), 2 (10-50% positive tumorceller), og 3 (mer enn 50% positive tumorceller ). Intensiteten av fargingen ble gradert i henhold til følgende kriterier: 0 (ingen farging), 1 (svak farging = lys gul), 2 (moderat farving = gul brun), og 3 (sterk farging = brun). Fargingen indeksen ble beregnet ved å multiplisere fargingsintensitet og andelen av positive tumorceller. Ved hjelp av denne metoden for vurdering, vi evaluert MACC1 protein uttrykk nivåer i benign nyrebekken epitel og maligne lesjoner ved å bestemme farging indeksen, noe som resulterer i score som 0, 1, 2, 3, 4, 6 eller 9. For statistiske formål, IHC score ble gruppert i to grupper, lav uttrykk gruppe (≤4) og høy uttrykk gruppe (≥6).
Som for Image Pro-Plus scoring system, ble MACC1 uttrykk evalueres kvantitativt ved hjelp av Image Pro Plus 6.0 analyse system (Media Cybernetics, Silver Spring, MD) introdusert av Xavier og resultatene ble reexamined av ytterligere to patologer uavhengig etter første runde av analysen. Kort fortalt ble 10 digitale bilder på 1360 x 1024 pikslers oppløsning og 400 × forstørrelse fanget av DP 70 CCD-kamera (Olympus, Japan) koblet til en Olympus AX-70 mikroskop (Olympus). Kvantifisering av området farget og integrert optisk tetthet (IOD) av MACC1 i hvert bilde ble bestemt etterpå og underkastes for videre analyse. Gjennomsnittlig optisk tetthet (AOD = IOD /Area) ble brukt i denne studien for statistisk analyse.
For å lette statistisk analyse for overlevelsesdata, ble hele kullet av pasientene delt inn i to grupper, høy MACC1 uttrykk gruppe (60,6 %) og lav MACC1 uttrykk gruppe (39,4%), ble respektivt.
Statistisk analyse
Resultatene uttrykkes som gjennomsnitt ± standardavvik. Sammenligning mellom to grupper ble utført ved hjelp av en uavhengig prøve
t
test eller nonparametric 2-tailed
t
test (Mann-Whitney test). Enveis ANOVA (F-test) ble utført for å sammenligne parametrene for flere grupper. Sammenhengen mellom uttrykket nivåer av MACC1 (kvantitativt målt i henhold til MACC1 immunhistokjemisk farging styrke) og clinicopathological funksjoner i RPC-pasienter ble vurdert ved hjelp av Pearsons korrelasjonskoeffisient test. Alle statistiske analyser ble utført ved hjelp av SPSS programvarepakke (versjon 17.0, SPSS, Inc., Chicago, IL). 2-sidig test ble vedtatt i denne studien, og
p
0,05 er regnet som statistisk signifikant. Overlevelsesraten ble beregnet ved hjelp av Kaplan-Meier metoden. Univariate og multivariate analyser ble utført med Cox regresjonsmodeller.
Resultater
Undersøkelse av MACC1 protein uttrykk i nyrebekken karsinom (RPC) vev, tilstøtende ikke-tumornyrebekken epitelvev (ANRPET ) og normale nyrebekken epitelvev (NRPET) eksemplarer
Immunhistokjemisk (IHC) undersøkelse av MACC1 protein uttrykk ble utført i 73 RPC vevsprøver, 32 ANRPET (minst ca. 2 cm avstand fra svulsten kant) og 41 NRPET (uroteliale vev fra nyrekreftpasienter, som er mindre enn 3 cm i diameter med intakt vev celle polaritet og anses å være normalt epitelvev). Som åpenbart i de normale, ikke-neoplastiske nyrebekken vevssnitt avledet fra pasienter med nyrecellekarsinom, ble MACC1 farget i cytoplasma og i kjernen i epitelceller bosatt i stratifisert og overgangs epitel (fig 1B B «). I motsetning til dette ble MACC1 farging betydelig redusert i det stromale vev. Bilder i fig. 1A A «er negative kontroll IHC stainings for MACC1
(A) negtive kontroll flekker.; (B) MACC1 positiv farging; (C-E) representative bilder av negtive, lav, høy MACC1 uttrykk i RPC vev, henholdsvis. (A»-E «) en høyere forstørrelse av det valgte området (A-E), respektivt. Forstørrelse: x 100 i (A-E); X 200 i (A»-E «).
Positive MACC1 signaler ble påvist i 66 av de 73 RPC kreft lesjon prøver (~90.4%), så vel som i 24 til 32 ANRPET ( ~75.0%) og 29 av de 41 NRPET (~70.7%) prøver vi undersøkt i denne studien. Bilder i fig. 1C-E, 1C»-E «er de representative MACC1 IHC flekker bildene i RPC-vev med MACC1 oppdaget på negativ (fig 1C . C), lav (figur 1D . D «). Og høy (Fig 1E E «) ekspresjonsnivåer, respektivt. Selv om MACC1 uttrykk er hovedsakelig til stede i cytoplasma i RPC vevssnitt, den nukleære lokalisering av MACC1 er lett synlige som vist i fig. 1. Interessant, til tross for den preferensielle cytoplasmisk farging i de fleste av epitelceller i den RPC kreftvev seksjoner, er det faktisk små populasjoner av celler som viser vesentlig sterkere nukleær farging enn cytoplasmisk farging. I NRPETs ble MACC1 fordelt mer eller mindre jevnt i cytoplasma og kjernen av epitelceller (fig 1B . B «). På dette stadiet, er vi ikke klart om de biologiske konsekvensene av svakere kjernefysiske farging av MACC1 forhold til cytoplasma farging utstilt i de ondartede RPC vev.
Neste, immunhistokjemisk farging styrke MACC1 ble målt kvantitativt av Image Pro Plus evaluering. Kvantifisering av det fargede området, ble den integrerte optiske tetthet (IOD) og den gjennomsnittlige optiske tetthet (AOD = IOD /område) av MACC1 i hvert bilde gjennomført og utsettes for videre analyse. Som vist i tabell 1, ble AOD lesningen av MACC1 vist som 0,0648 ± 0,0312 i RPC vev, 0,0218 ± 0,0144 i ANRPETs, og 0,0210 ± 0,0151 i NRPETs, respektivt. Siden det ikke var noen vesentlig forskjell mellom ANRPETs og NRPETs (
p
0,05), disse to gruppene ble kombinert som en enkelt gruppe, «normal epitel», som vist i den etterfølgende statistiske analysen vi rives nedenfor. Som et resultat av AOD stillingen av den normale epitel var 0,0213 ± 0,0147. Kollektivt, sammenlignet med RPC vev, AOD-stillingen av immunhistokjemisk farget normale epitelvev var betydelig lavere, som er tilnærmet en tredjedel av fargingsstyrken identifisert i RPC (
p
0,05) (tabell 1). Disse resultatene tyder på at MACC1 unormal overflod kan representere en biologisk indikator klinisk forenlig med tumor malignitet i nyrebekken vev.
Sammenhengen mellom MACC1 protein uttrykk nivåer og prognostiske faktorer hos pasienter med nyrebekken karsinom
for å bestemme den kliniske betydningen av MACC1 overekspresjon i utvikling og progresjon av RPC, ble sammenhengen mellom MACC1 protein uttrykk nivåer og prognostiske faktorer (inkludert alder, kjønn, TNM stadium og kjernekraft grade) i RPC pasienter videre undersøkt (tabell 2) . Kvantitativ analyse av IHC-farging av Image Pro Plus-analyse ble utført. Som vist i tabell 2, forhøyede MACC1 protein nivåer syntes å være assosiert med høyere aggressivitet av RPC, med AOD score på MACC1 i TNM stadium Ta, I, II og III-IV avslørt som 0,0355 ± 0,0247, 0,0563 ± 0,0281, 0,0752 ± 0,0264 og 0,0965 ± 0,0185, henholdsvis. Merkbart, MACC1 vist økte overflod i sent stadium tumorvev som TNM stadier III-IV, sammenlignet med det i et tidlig stadium, og forskjellen var statistisk signifikant (
p
0,05). I tillegg AOD stillingen av MACC1 i RPC stadium Ta var også vesentlig høyere enn det som ble målt i den normale epitel (0,0213 ± 0,0147) (
p
0,05). I forhold til tumor atom klasse, det var også en statistisk signifikant forskjell mellom de AOD score til MACC1 målt i lavgradig (G1, G2: 0,0509 ± 0,0281) og resultatet målt i høy grad RPC vev (G3: 0,0729 ± 0,0304) (
p
0,05). Faktisk var det ~43.2% økning oppdaget i tumorvev av grad 3 i forhold til grad 1 eller 2, som tyder på at MACC1 protein overflod kan være sterkt korrelert med utviklingen og progresjon av RPC.
I kontrast, selv om MACC1 viste en økt proteinnivå i gruppen av eldre pasienter ( 61 år) med AOD poengsum målt som 0,0654 ± 0,0298 sammenlignet med gruppen av yngre pasienter ( 61 år) (AOD poengsum: 0,0628 ± 0,0343), ingen statistisk ble observert signifikant forskjell mellom disse to gruppene (
p
0,05). Tilsvarende noen statistisk signifikant forskjell ble observert mellom hanngruppen (AOD Resultat: 0,0662 ± 0,0305) og hunn gruppen (AOD Resultat: 0,0612 ± 0,0335) (
p
0,05) (tabell 2). Videre ble ingen statistisk signifikant korrelasjon avdekket mellom MACC1 protein uttrykk og urin cytologi eller røykeatferd (data ikke vist).
Sammenhengen mellom MACC1 protein uttrykk nivåer og total overlevelse (OS), sykdomsfri overlevelse (DFS ) hos pasienter med nyrebekken karsinom
for å lette statistisk analyse, ble RPC pasientene delt inn i tre grupper etter visuell vurdering av immunhistokjemisk farging styrke i vevssnitt vi undersøkte (negativ, lav MACC1 uttrykk gruppen, og høy MACC1 uttrykk gruppe, henholdsvis). AOD score på MACC1 hentet fra Image Pro Plus analyse ble tydeligvis økt i lav MACC1 uttrykk gruppe i forhold til den negative gruppen, og ble ytterligere forhøyet i høy MACC1 uttrykk gruppe (
p
0,001, fig. 2A). Videre er det i Spearman korrelasjonskoeffisienten analyse som måler styrken på det lineære forhold mellom MACC1 AOD poeng fra Image Pro Plus analyse og visuell vurdering resultater, ble det observert en statistisk signifikant positivt lineært forhold mellom disse to sett av innsnitt hos pasienter med RPC (
r
= 0,669,
p
0,001) (figur 2B).. Dermed konkluderte vi MACC1 uttrykksmønster utledet fra visuell vurdering faktisk trofast ligner som hentet fra analysen ved hjelp av Image Pro Plus AOD scoring system.
(A), Pasienter med RPC ble manuelt delt inn i tre grupper etter sine visuelle vurdering score i IHC farget vevssnitt (negativ, lav MACC1 uttrykk gruppen, og høy MACC1 uttrykk gruppe, henholdsvis). AOD verdien av MACC1 hentet fra Image Pro Plus analyse ble tydeligvis økt i lav MACC1 uttrykk gruppe i forhold til den negative gruppen, og ble ytterligere forhøyet i høy MACC1 uttrykk gruppe (
p
0,001). AOD = den integrert optisk tetthet (IOD) /Area of positive MACC1 flekker i hvert IHC flekker bilde; B, Spearman korrelasjonskoeffisienten analyse som måler styrken på det lineære forhold mellom MACC1 AOD Image Pro Plus score og visuelle vurdering score. En statistisk signifikant positiv lineær sammenheng ble observert mellom disse to sett med score i RPC (
r
= 0,669,
p
0,001).
Neste, vi undersøkt den prognostiske betydningen av MACC1 overekspresjon i total overlevelse (OS) og sykdomsfri overlevelse (DFS) blant RPC pasienter. 28 pasienter døde i 5-års oppfølging, og blant de 28 døde, 18 døde av kreft metastaser eller lokalt residiv. Som vist på fig. 3A B, pasienter med høyt MACC1 uttrykk nivå bestemt av visuell vurdering poengsystem viste en betydelig kortere OS (
p
0,001) og DFS (
p
0,001) enn gruppen av pasienter med lav MACC1 uttrykk nivå. Som illustrert i fig. 3A, i høy MACC1 uttrykk gruppen var gjennomsnittlig OS hastigheten var 29,9 måneder med 5-års OS hastighet tilnærmet 70%. For pasienter i lav MACC1 uttrykk gruppen var gjennomsnittlig OS hastigheten var 45,6 måneder, -50% høyere enn den høye MACC1 gruppen. I tillegg DFS hastigheten var ~22 måneder som avdekket i høy MACC1 gruppen, mens kursen nesten doblet i lav MACC1 gruppen (~42 måneder) (Fig. 3B). Tilsvarende 5-års DFS hastighet i lav MACC1 gruppen var tydeligvis høyere enn prisen i høy MACC1 gruppen (57,5% versus 42,3%). Sikkert er høyt MACC1 uttrykk nivå signifikant korrelert med redusert total overlevelse og sykdomsfri overlevelse i RPC-pasienter som åpenbart i den kvantitative immunhistokjemiske analyser.
Kaplan-Meier overlevelseskurver viste at pasientene i høy MACC1 uttrykk gruppe viste signifikant kortere total overlevelse (OS) (
p
0,001) (A) og sykdomsfri overlevelse (DFS) (
p
0,001) (B) priser enn de i den lave MACC1 uttrykk gruppe.
Univariat og multivariat analyser etablert MACC1 som en roman uavhengig prognostisk indikator for RPC
i denne studien univariate og multivariate analyser ble utført for evalueringen av prognostisk effekt av MACC1 overekspresjon (tabell 3 4). Som vist i tabell 4, multivariat Cox regresjonsanalyse viste at MACC1 ekspresjonsnivåer og kjerne klasse er faktisk uavhengige prognostiske indikatorer for total overlevelse av pasienter med RPC etter justering for alder, kjønn og TNM trinn (Grade,
p
= 0,001, Hazard ratio: 0,086, 95% KI: 0,019 til 0,387; MACC1,
p
= 0,024, Hazard ratio: 0,282, 95% KI: 0,094 til 0,844 Tabell 4).. I tillegg ble MACC1 uttrykk nivåer og kjernekraft grade også identifisert som uavhengige prognostiske faktorer for kreft overlevelse hos pasienter med RPC (Grade,
p
= 0,001, Hazard ratio: 5,444, 95% KI: 1,964 til 15,093 ; MACC1,
p
= 0,002, Hazard ratio:.. 4,207, 95% KI: 1,668 til 10,613 tabell 4)
Diskusjoner
Selv om nyrebekken karsinom er relativt mindre vanlig, det er vanskeligere å diagnostisere enn blære urothelial karsinom, og representerer en aggressiv sykdom med høy tilbakefall og progresjon. I tillegg til tobakksrøyking, har undersøkelsen av andre miljømessige risikofaktorer antydet at yrkesmessig eksponering for industrielle kjemiske stoffer kan også bidra til utvikling av urothelial karsinom, f.eks kjemoterapi (særlig, cyklofosfamid) og strålebehandling, kronisk blære irritasjon og infeksjoner, samt arsen eksponering [25]. Kina har verdens største røyking befolkningen – ~350 millioner, omtrent en fjerdedel til en tredjedel av verdens befolkning av røykere. I tillegg, som et resultat av rask, enestående industriell vekst, industrielle kjemiske forurensningen har også blitt en alarmerende økende trussel for helsen til mange mennesker i Kina i de siste 2-3 tiårene. Kjemikalier som er foreslått for å fremme overveier uretrale carcinoma innbefatter aromatiske aminer, slik som benzidin (skrivere), 2-napthylamine (gummi og fargestoff arbeidere), 4-aminobifenyl (frisører), polysykliske aromatiske hydrokarboner, slik som Benzo (a) pyren (aluminium arbeidere) og diesel røyk [26]. Videre med forbedret kreft screening nøyaktighet i Kina de siste årene, har den dramatiske økningen i forekomsten kreft i befolkningen representerte en stor utfordring i de siste 5-10 årene. Faktisk har en høyere frekvens av nyrebekken karsinom blitt identifisert i de siste 2-3 tiårene i Kina. Det er derfor viktig å utvikle mer effektive prognostiske indikatorer, og identifisere høyrisikopasienter for riktig og rettidig intervensjon.
fremstår som en potensielt mindre invasiv måling, vurdering av status for vevsspesifikke biomarkører er foreslått å ha kapasitet til å forbedre diagnostikk og prognostisk nøyaktighet i beslutningsprosessen når de integreres i dagens prognostiske modeller. I de senere år har biomarkører i forbindelse med prognosen for pasienter med øvre veis urothelial karsinomer blitt grundig undersøkt. Faktisk, et bredt spekter av vev-baserte biomarkører er blitt rapportert og evaluert for deres potensielle anvendelse som urothelial karsinomer prognostiske indikatorer, for eksempel molekyler som regulerer cellesyklus (for eksempel p53, p21, pRb, p27, cyklin D1 og cyclin E1), apoptose (f.eks survivin, Bcl-2, osteopontin, Bax, caspase-3), cellevekst og signaloverføring (f.eks HER-2, NF-kB, EGFR, beta-catenin, galectin-3, RAS-MAPK), cellemigrering og invasjon (for eksempel MMP’er) og angiogenese (f.eks vasohibin-1, VEGF, TSP-1) (oversikt i [7], [8]). Som vist i denne studien, viste vi for første gang at et unormalt høyt nivå av MACC1 ekspresjon er assosiert med en dårlig prognose av nyrebekken karsinom, og er faktisk en uavhengig prognostisk indikator for sykdomsfri overlevelse og total overlevelse av pasienter. Da på dette stadiet har vi ingen effektiv behandling for pasienter med metastatisk nyrebekken karsinom, kan påvisning av høye nivåer av MACC1 hjelpe til å forutsi progresjon og utviklingen av sykdommen. Merkbart, i metastatiske faste tumorvev som åpenbart i tidligere studier, i tillegg til økt intensitet av MACC1 farging i cytoplasma, ytterligere nukleær farging har også blitt anerkjent som tyder på forbedret nukleær translokasjon og den etterfølgende heving av MACC1 transkripsjonelle aktivitet [15], [27 ], [28].
