Abstract
Molekylære markører i bronkial væsker kan bidra til diagnostisering av lungekreft. Vi har tidligere observert en betydelig økning av C4D holdig komplementdegraderingsfragmenter i bronchoalveolar lavage (BAL) supernatanter fra lungekreftpasienter i en kohort av 50 saker og 22 kontroller (CUN kohort). Denne studien er designet for å bestemme den diagnostiske utførelsen av disse komplement fragmentene (heretter i fellesskap omtalt som C4D) i bronkial væsker. C4D nivåer ble bestemt i BAL supernatantene fra to uavhengige kohorter: CU-kullet (25 saker og 26 kontroller) og HUVR kohort (60 tilfeller og 98 kontroller). En rekke spontane spyttprøver fra 68 pasienter med lungekreft og 10 kontroller ble også brukt (LCCCIO kohort). Totalt proteininnhold, utfylle C4, utfylle C5a, og Cyfra 21-1 ble også målt i alle kohorter. C4D nivåene var signifikant økt i BAL prøver fra lungekreftpasienter. Arealet under ROC kurven var 0,82 (95% CI = 0,71 til 0,94) og 0,67 (95% CI = 0,58 til 0,76) for CU og HUVR kohorter, henholdsvis. I tillegg, i motsetning til andre markører, C4D nivåer i BAL prøvene var svært konsistente på tvers av CUN, CU og HUVR kohorter. Interessant, C4D test markert økt følsomhet av bronkoskopi i de to kohortene som cytologiske data var tilgjengelige (CUN og HUVR kohorter). Til slutt, i LCCCIO kohort, C4D nivåene var høyere i sputum-supernatanter fra pasienter med lungecancer (areal under ROC-kurve: 0.7; 95% CI = 0,56 til 0,83). I konklusjonen, er C4D konsekvent forhøyet i bronkiene væsker fra lungekreftpasienter og kan brukes til å forbedre diagnostisering av sykdommen
Citation. Ajona D, Razquin C, Pastor MD, Pajares MJ, Garcia J, Cardenal F, et al. (2015) forhøyede nivåer av komplementaktivering Produkt C4D i Bronkitt Fluids for diagnostisering av lungekreft. PLoS ONE 10 (3): e0119878. doi: 10,1371 /journal.pone.0119878
Academic Redaktør: Cordula M. Stover, University of Leicester, Storbritannia
mottatt: 20 november 2014; Godkjent: 02.02.2015; Publisert: 23 mars 2015
Copyright: © 2015 Ajona et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er innenfor papir filer
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av «UTE prosjekt CIMA», den spanske regjeringen (Red Tematica de INVESTIGACION Cooperativa no Cancer RD12 /0036/0028, RD12 /0036/0040, RD12 /0036/0045, og RD12 /0036/0062, og Fondo de INVESTIGACION Sanitaria-Fondo Europeo de Desarrollo Regional (FEDER) PI08 /1156, CD09 /00148, PI10 /01652, PI10 /00166, PI11 /00618, PI11 /02688, PI13 /00806, og PI14 /01 686), og det europeiske fellesskap syvende rammeprogram (HELSE-F2-2010-258677-CURELUNG). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser. Jeg har lest journalen politikk og forfatterne av dette manuskriptet har følgende konkurrerende interesser En foreløpig patentsøknad er fylt av Digna Biotech for legene. Ajona, Pajares, Montuenga, og Pio som oppfinnerne av «Nye lungekreft molekylære markører.» (European Union Provisional patentsøknad nr. EP12382113.) Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til PLoS ONE politikk på deling av data og materialer.
Innledning
Lungekreft er den ledende årsak til kreft dødsfall på verdensbasis [1]. Den samlede fem års overlevelse for lungekreft er ca 15-20%, og mindre enn 5% i metastatisk tilfeller [2]. En av årsakene til et slikt sturen resultat er mangelen på effektive teknikker for tidlig diagnose av sykdommen. For tiden omfatter lungekreft diagnose kombinasjonen av radiologiske og histologiske analyser av lesjoner. Fleksibel bronkoskopi representerer en relativt invasiv innledende diagnostisk test hos personer med mistanke om sykdom, og er den primære diagnostiske verktøy hos pasienter med sentral beliggenhet lungekreft. Bronkoskopiske teknikker for diagnose av lungekreft omfatter cytologisk undersøkelse av prøver fra bronkial biopsi, bronkial børste, bronkial vask, og bronkoalveolar lavage (BAL) [3, 4]. Spesifisitet av cytologi av bronkoskopi-materiale er 100%; forblir imidlertid følsomhet lav, spesielt i mer perifere lesjoner, hvor det mer invasive diagnostiske prosedyrer blir rutinemessig trengs [5]. Det er således et klinisk behov for supplement markører som kan forbedre følsomheten av lungekreft diagnostiske prosedyrer.
flere biomarkører detekterbare i bronkiene fluider fra lungekreftpasienter har blitt foreslått [6, 7, 8, 9, 10 , 11, 12]. Nylig har vi vist at lungekreftceller effektivt aktivere den klassiske veien for komplement. Som en konsekvens, C4D, et stabilt split produkt av denne reaksjonsveien, er funnet forhøyet i plasma og BAL prøver fra lungekreftpasienter [13]. Hensikten med denne studien var å validere vår forrige observasjon i uavhengige case-control kohorter. Vi har også som mål å sammenligne den diagnostiske utførelsen av C4D med andre potensielle diagnostiske biomarkører: Cyfra 21-1, total protein, C4, og C5a. Cyfra 21-1 har lenge vært foreslått som en lungekreft biomarkør i bronkiene fluider [7, 14], er plasmaproteiner økes i BAL væsker fra lungekreftpasienter [15], er en rikelig C4 plasmaprotein hvorfra C4D genereres etter komplement aktiverings~~POS=TRUNC [16], og C5a er en aktiv komplement fragment økning i plasmaprøver fra pasienter med ikke-småcellet lungekreft [17]. Våre resultater tyder på at fastsettelsen av C4D i luftveis væsker utkonkurrerer de andre markører og kan være nyttig i den diagnostiske workup av pasienter med lungekreft.
Materialer og metoder
Kliniske prøver
studien inkluderte tre kohorter av BAL prøver og en av spyttprøver. BAL væsker ble erholdt fra individer som gjennomgår diagnostisk bronkoskopi og lagret ved -80 ° C. Fremgangsmåten for BAL samling er tidligere beskrevet [15]. Kohorten fra Clinica Universidad de Navarra (CUN) inkludert BAL prøver fra 50 pasienter med lunge maligniteter og 22 pasienter med ikke-ondartede lungesykdommer. Flere detaljer om dette kullet har tidligere blitt rapportert [15]. Kohorten fra Charité-Universitätsmedizin (CU) inkludert BAL prøver fra 25 lungekreftpasienter og 26 kontrollpersoner. Disse kontrollpersoner gikk bronkoskopi for ikke-maligne luftveissykdommer slik som infeksjon, godartet luftvei stenose eller sarkoidose. Ingen flere data var tilgjengelige fra dette kullet. Den tredje kullet ble hentet på sykehuset Universitario Virgen del Rocio (HUVR) og inkludert BAL væsker fra 60 lungekreftpasienter og 98 kontrollpasienter. Karakteristikkene for disse pasientene er vist i tabell 1. bronchoscopy var nødvendig i kontrollpasienter på grunn av tilstedeværelsen av hemoptysis eller en pulmonal lesjon i brystet x-ray eller CT-skanning. Endelig Lung Cancer Clinic of Catalan Institute of Oncology (LCCCIO) kohort av spyttprøver tatt 68 prøver fra lungekreftpasienter og 10 prøver fra friske individer. Prøver ble samlet etter spontan oppspytt, fortynnet i 10 ml saltløsning, omfattende vortex-blandet og lagret ved -80 ° C. Alle studieprotokoller ble utført i henhold til Helsinkideklarasjonen, ble godkjent av forskningsetiske komité ved Universitetet i Navarra (Institutional Review Board # 015-2014), og alle pasientene gav skriftlig informert samtykke. Lungesvulster ble klassifisert ved bruk av WHO 2004 klassifisering og det internasjonale systemet for Staging Lung Cancer [18, 19].
Marker målinger
C4D holdig ble målt fragmenter av et enzym bundet immunosorbent assay (Quidel). Denne analysen gjenkjenner alle C4D-inneholdende fragmenter av aktivert C4 (C4b, iC4b og /eller C4D), som sammen er henvist til i dette dokumentet som C4D. Kvantitative enzymbundet immunosorbent analyser ble også brukt til bestemmelse av C4 (Assaypro), C5a (R 0,001). Arealet under ROC-kurven var 0,73 (95% CI = 0,61 til 0,84; p = 0,002). Denne analysen ble utført på BAL prøver fra en kohort av pasienter her betegnet som CUN kohort. Det som kjennetegner disse pasientene har allerede blitt publisert [15]. I denne studien, forsøkte vi å validere dette resultatet ved bruk av to uavhengige kohorter av BAL prøver: den HUVR og CU kohorter. I denne sistnevnte kohort, C4D nivåer i lungekreft prøver og kontroller var 0,19 (0,11 til 0,84) og 0,11 (0,11 til 0,13) ig /ml, henholdsvis (P 0,001; Fig. 1 A). Arealet under ROC kurven var 0,82 (95% CI = 0,71 til 0,94; P 0,001). I HUVR kohort, C4D nivåer i kreft gruppen var 0,18 (0,15 til 0,26) ug /ml, og i kontrollgruppen var 0,16 (0,14 til 0,18) ig /ml (P 0,001 Fig. 1B). Arealet under ROC kurven var 0,67 (95% CI = 0,58 til 0,76; P 0,001). I dette kullet, C4D nivåer tendens til å være høyere i BAL væske fra småcellet lungekreft (SCLC) pasienter eller tidligere røykere, selv om forskjellene ikke statistisk signifikant (tabell 1). I samsvar med denne observasjonen, i vår forrige undersøkelse (CUN kohort) fant vi en betydelig økning av C4D i tidligere røykere i kreft gruppe, og en trend mot høyere C4D nivåer hos pasienter med SCLC [13].
A) C4D nivåer og ROC kurve fra BAL supernatanter av CU kohort. B) C4D nivåer og ROC kurve fra BAL prøver av HUVR kohort. Forskjeller mellom grupper ble evaluert med Mann-Whitney U test. Arealene under ROC-kurven (AUC) og tilhørende P-verdiene er angitt.
Ytelse sammenligning av C4D med andre molekylære markører
For å vurdere nytten av C4D som en diagnostisk biomarkør i BAL væsker, sammenlignet vi ytelsen med andre potensielle diagnostiske molekylære markører. For dette formål vi målte nivåene av Cyfra 21-1, C4 og C5a i CUN, CU, og HUVR kullene. Bortsett Cyfra 21-1 og C5a i CUN årsklasse, og for C5a i HUVR kohorten ble nivåene av alle markørene betydelig økt i lungekreftpasienter (tabell 2).
Oppbyggingen av plasmaproteiner i tumoren interstitium er et felles trekk ved faste tumorer [20]. Faktisk kan plasmaproteiner bli funnet i BAL væsker fra lungekreftpasienter [15]. Etter avtale med denne observasjonen, i de tre kohortene, nivåene av total proteiner ble funnet økt i BAL væske fra lungekreftpasienter sammenlignet med kontroller (tabell 2). For å vurdere muligheten for at C4D, Cyfra 21-1, ble C4, og C5a funnet i BAL prøver som en ren konsekvens av deres ekstravasasjon fra blod, analyserte vi berikelse av disse markørene i BAL prøver fra lungekreftpasienter med hensyn til blod ved hjelp totalt proteininnhold som referanse (tabell 3). Svært like mengder av C4 ble funnet i BAL prøver og blod, noe som tyder på at tilstedeværelsen av denne komplementprotein i tumoren mikromiljøet er hovedsakelig på grunn av sin ekstravasasjon. Men Cyfra 21-1, C4D, og C5a viste en markert høyere andel i BAL væsker, noe som tyder på en lokal produksjon av disse molekylene i svulsten mikromiljøet.
En faktor som sterkt påvirker resultatene og nytten av en diagnostisk markør er dens konsistens på tvers av ulike pasientgrupper. Vi sammenlignet derfor nivåene av de fire molekylære markører på tvers av de tre uavhengige kullene. Som vist på fig. 2, ble det ikke observert signifikante forskjeller mellom lungekreftpasienter i CUN, CU, og HUVR kohorter for Cyfra 21-1, C5a, C4, og total protein (P 0,001, P 0,001, P 0,001 og p = 0,029, henholdsvis). Vi har observert høyere nivåer av disse markørene i CUN kullet, selv om årsaken til denne forskjellen er uklar. Likevel nivåene av C4D var bemerkelsesverdig lik på tvers av de tre serier med ingen signifikante forskjeller mellom dem (P = 0,922). Konsistensen av C4D nivåer tillatt oss å foreslå C4D cut-off-verdier med tilfredsstillende sensitivitet og spesifisitet på tvers av de tre kohortene. For eksempel, med en cut-off-verdi på 0,18 ug /ml, følsomheten ved diagnose av lungekreft var 62%, 52% og 53%, med en spesifisitet på 73% (odds-ratio (OR) = 4,35, 95 % CI = 1,45 til 13,05, P = 0,009), 100%, og 80% (OR = 4,46, 95% CI = 02.20 til 09.03, P 0,001) i CUN, CU, og HUVR kohorter, henholdsvis. Når pooling de tre studiene sammen, var sensitiviteten 56% og spesifisiteten var 82% (OR = 5,94, 95% CI = 3,45 til 10,24, P 0,001). Oppsummert konkluderer vi med at C4D er produsert i lungene svulstens mikromiljø, noe som resulterer i en konsekvent økning av dette molekylet i BAL væske fra lungekreftpasienter.
A) C4D (data fra CUN kohorten ble publisert tidligere [ ,,,0],1. 3]). B) Cyfra 21-1. C) C5a. D) C4. E) Totalt protein. P-verdier ble beregnet ved hjelp av Kruskal-Wallis test.
Fastsettelse av C4D i BAL supernatanter som et supplement til cytologi for lungekreft diagnose
Vi neste vurdert kapasiteten C4D vilje til å forbedre den diagnostiske resultatene for cytologisk undersøkelse av bronkoskopi-materiale, en teknikk med høy spesifisitet, men lav sensitivitet. For dette formålet brukte vi de to kohortene som vi hadde cytologi data: CUN og HUVR kohorter. I CUN årsklasse, cytologisk undersøkelse av BAL prøvene ga en spesifisitet på 100% og en sensitivitet på 32%. Undersøke den diagnostiske verdien av informasjon fra C4D, fant vi at denne markøren ble betydelig økt i både cytologisk positive og negative BAL supernatanter fra lungekreftpasienter (Fig. 3). Nivåene av C4D i kontrollgruppen var 0,11 (0,11 til 0,23) ig /ml og økte til 0,33 (0,23 til 0,5) ug /ml i cytologisk positive prøver (P 0,001), og 0,24 (0,11 til 0,62) ig /ml i cytologisk negative prøver (P = 0,018). Arealene under ROC-kurver var 0,85 (95% CI = 0,71 til 0,98; P 0,001) og 0,67 (95% CI = 0,53 til 0,81; P = 0,033), henholdsvis. Den diagnostiske ytelsen C4D var bedre i cytologisk positive BAL prøver, selv om ingen signifikante forskjeller ble funnet mellom disse to gruppene (p = 0,187). Dette resultat antyder at bestemmelse av C4D nivåer kan være nyttig selv i tilfeller der cytologisk undersøkelse av BAL væsker er rapportert som negativ. Faktisk ble ved hjelp av cut-off-verdien som tidligere er etablert (0,18 ug /ml), 18 ut av 34 lungekreft rapportert som negativ ved cytologisk undersøkelse klassifisert som positive ved C4D bestemmelse, å øke følsomheten i diagnose av lungekreft fra 32% til 68%, med en spesifisitet på 73%. Denne observasjonen ble validert med analysen av HUVR kullet. Cytologisk undersøkelse i denne kohort ga en følsomhet på 32% og en spesifisitet på 100%. Innholdet av C4D i BAL supernatanter signifikant økning i både cytologisk positive og negative lungekreft BAL supernatanter når sammenlignet med kontrollpersonene (fig. 4). C4D nivåene i kontrollgruppen var 0,16 (0,14 til 0,18) ug /ml, og økte til 0,22 (0,16 til 0,40) ig /ml i cytologisk positive prøver (P 0,001), og til 0,18 (0,15 til 0,23) ig /ml i cytologisk negative prøver (P = 0,017). Arealene under ROC-kurver var 0,76 (95% CI = 0,63 til 0,88; P 0,001) og 0,63 (95% CI = 0,52 til 0,74; P = 0,011), henholdsvis. Det ble ikke observert noen signifikante forskjeller i C4D nivåer mellom cytologisk positive og negative BAL prøver (P = 0,123). Med en cut-off verdi på 0,18 mikrogram /ml, 19 av 41 krefttilfeller rapportert negativ med cytologi ble klassifisert som positive ved C4D, øker følsomheten i diagnostisering av lungekreft fra 32% til 63%, med en spesifisitet på 80 %.
p-verdiene ble beregnet ved hjelp av Mann-Whitney U test. Arealene under ROC-kurven (AUC) og tilhørende P-verdiene er angitt.
P-verdiene ble beregnet ved hjelp av Mann-Whitney U test. Arealene under ROC-kurven (AUC) og tilhørende P-verdiene er angitt.
C4D nivåer i spytt supernatanter fra lungekreftpasienter
Diagnostisering av lungekreft ved undersøkelse av sputum er et attraktivt alternativ til bronkoskopi. For foreløpige vurdere nytten av C4D som en diagnostisk markør i denne biologiske prøven, ble C4D nivåer bestemt i spontane spyttprøver fra lungekreftpasienter (n = 68) fra LCCCIO kohort. C4D nivåene varierte fra 0,04 til 0,56 ug /ml med en median (IQR) på 0,06 (0,06 til 0,07) ug /ml. Ingen signifikante sammenhenger ble funnet mellom nivåene av markøren og clinicopathological data, for eksempel kjønn, røykestatus, histologi (NSCLC vs. SCLC) eller trinn (I-III vs. IV). Til slutt har vi sammenlignet med nivåene av C4D i disse sputum prøver med nivåene i 10 friske kontroller. Som vist på fig. 5, C4D nivåene var noe høyere i spytt supernatanter fra pasienter med lungekreft enn i de fra kontrollpersoner (P = 0,047). Arealet under ROC-kurven var 0,7 (95% CI = 0,56 til 0,83, p = 0,047). Med en 0,06 ug /ml cut-off, sensitivitet og spesifisitet var 54% og 80%, respektivt. I konklusjonen, C4D nivåene er betydelig høyere i spontane spyttprøver fra lungekreftpasienter enn i de prøver fra kreftfrie fag.
P-verdiene ble beregnet ved hjelp av Mann-Whitney U test. Arealet under ROC-kurven (AUC) og tilhørende P-verdi er angitt.
Diskusjoner
I denne studien, viser vi at C4D holdig komplement nedbrytningsfragmenter (i fellesskap omtalt som C4D) er forhøyet i bronkiene væsker fra lungekreftpasienter og deres vilje utfører bedre enn tidligere foreslått protein biomarkører for lungekreft diagnose. Konklusjonene er støttet av fire viktige observasjoner: i) vi har validert, i to uavhengige gruppene var økningen i C4D tidligere observert i en kohort av BAL prøver fra lungekreftpasienter [13]; ii) ble ikke observert noen forskjeller i nivåene av markør fra lungekreftpasienter av tre uavhengige kohorter over BAL prøver; iii) C4D kvantifisering forbedret følsomheten cytologic undersøkelse av BAL væske; og iv) C4D nivåene ble noe økt i spytt supernatanter fra lungekreftpasienter.
Så langt i arbeidet med å identifisere klinisk verdifulle diagnostiske markører for lungekreft har enten feilet eller hatt begrenset suksess. Dette kan forklares delvis av den lave grad av reproduserbarhet på tvers av uavhengige studier på grunn av den høye genetiske og fenotypiske heterogenitet av lungesvulster [21]. For å overvinne denne begrensningen er det blitt foreslått at immunrelaterte markører kan være mer homogen og følsom enn kreft-avledede markører [22]. I denne forstand, under neoplastisk transformasjon, lunge kreftceller fra ulike histologiske subtyper kan bli gjenkjent av komplementsystemet [17], [23, 24]. Komplement er en viktig del av det medfødte immunrespons som forsvarer vert mot ikke-selv elementer. Det er interessant på grunn av forhøyet ekspresjon av komplement inhibitorer, lungekreftceller kontroll komplementaktivering og er motstandsdyktig mot komplementformidlet cytotoksisitet [23, 24, 25, 26, 27]. Denne kontrollerte immunrespons, kan resultere i en permanent frigivelse av komplement-fragmenter til svulsten mikromiljøet, noe som ville forklare hvorfor C4D, et fragment stammer fra komplement C4, økes i biologiske væsker fra pasienter med lungekreft [13]. Interessant, observerte vi bemerkelsesverdig tilsvarende konsentrasjoner av C4D over BAL prøver fra de tre undersøkte kohorter. Dette er en relevant punkt, siden standardisering av målinger mellom ulike studier er et stort problem i biomarkører [28, 29]. I forhold til den primære kilde til C4D, er dette molekyl et proteolytisk fragment av komplement C4 generert etter aktivering av den klassiske komplementreaksjonsveien [16]. Derfor ville det mest sannsynlige forklaring for dets tilstedeværelse i svulsten mikromiljøet være sin lokal produksjon etter aktivering av denne kanoniske veien. Men vi kan ikke utelukke andre mekanismer. For eksempel kan exoproteases som er tilstede i biologiske fluider fra kreftpasienter som genererer peptider fra komplement-proteiner [30]. På den annen side, selv om C4D nivåer er også økt i plasma fra lungekreftpasienter [13], nivåene av markør i bronkial væsker er merkbart høyere enn forventet av bloduttredelse, noe som favoriserer den lokale tilhørighet C4D.
Vi fant også at C4D gjorde det bedre enn andre komplement relaterte markører, C4 og C5a, eller den foreslåtte svulst markør Cyfra 21-1. I tilfelle av C4, forløperen molekylet for C4D, konkluderer vi med at dens tilstedeværelse i luftveis fluidene er for det meste på grunn av sin ekstravasasjon fra blod. Tilsvarende økte nivåer av andre ekstravaserte plasmaproteiner, så som komplement faktor H eller albumin, ble tidligere observert i bronkiene fluider fra lungekreftpasienter [15]. På den annen side, våre data tyder på en lokal produksjon av C5a, en anaphylatoxin som kan fremstilles ved lungekreftceller [17]. Men da dette ble det funnet en signifikant økning i BAL prøver fra lungekreftpasienter i bare ett av de tre kullene. Lignende resultater ble observert med Cyfra 21-1, en av de mest studerte lungekreft biomarkører i litteraturen [7, 14]. Våre data foreslo en lokal produksjon av Cyfra 21-1 i tumoren mikromiljøet, men dens nivåer over gruppene var dårlig konsekvent og forskjellene mellom maligne og ikke-maligne prøvene ble ikke funnet i en av seriene. Disse observasjoner tyder på at C5a og Cyfra 21-1 blir produsert i nærvær av lungesvulster, men også i nærvær av ikke-maligne inflammatoriske tilstander som er felles for pasienter som gjennomgår bronkoskopi.
Gitt den relativt lave følsomheten av cytologisk undersøkelse av bronkoskopiske prøver, er mer invasive diagnostiske tester vanligvis nødvendig. I denne sammenheng til en diagnostisk prosedyre nyttig bestemme hvilke pasienter med mistanke om lungekreft, men negative bronchoscopies, bør gjennomgå ytterligere diagnostiske tester vil være klinisk relevant. I denne studien ble tilsetningen av C4D kvantifisering til den diagnostiske fremgangsmåten økte følsomheten av bronkoskopi, selv om redusert sin spesifisitet. Reduksjonen i spesifisitet kan begrense sin adopsjon som en rutinemessig klinisk diagnostisk verktøy. Imidlertid konsistensen av markør på tvers av uavhengige kullene av bronkial fluidprøver og dets bedre ytelse enn tidligere foreslåtte biomarkører oppmuntre integrering av C4D i et panel av biomarkører for å komplettere cytologi i diagnostisering av sykdommen. Dette er et viktig punkt siden nye paneler av biomarkører som autoantistoffer, microRNAs eller proteomikk classifiers har gitt lovende resultater i blodprøver fra lungekreft kliniske kohorter [31, 32, 33]. Videre våre data tyder på at C4D evaluering i ikke-invasive spyttprøver kan også være et nyttig verktøy for lungekreft diagnose. Denne observasjonen, basert på en liten kohort av spyttprøver, fortjener videre evaluering i større serie som bruker mer klinisk relevante kontroller med ikke-ondartet lungesykdom. Andre aspekter som må avklares er resultatene av analysen i de forskjellige histologiske subtyper, så vel som påvirkningen av røyking, og spesifikke ikke-maligne luftveislidelser og behandlinger på C4D nivåer. I dag kan vi konkludere med at C4D nivåer er konsekvent økt bronkial væsker fra lungekreftpasienter og kan utfylle cytologi i diagnostisering av sykdommen.
Takk
Vi takker Amaya Lavin, usua Montes og Ana Remirez for teknisk assistanse.
