Abstract
Mål
lav serum 25 (OH) D-nivåer er assosiert med kardiovaskulære risikofaktorer, og også forutsi fremtidig hjerteinfarkt (MI), type 2-diabetes (diabetes mellitus type 2), kreft og totaldødelighet. Nylig flere enkelt nukleotid (SNP) i forbindelse med serum 25-hydroksyvitamin D (25 (OH) D) nivå har blitt identifisert. Hvis disse relasjonene er årsaks man ville forvente en tilsvarende sammenheng mellom disse SNPs og helse.
Metoder
DNA ble fremstilt fra personer som deltok i den fjerde undersøkelsen av Tromsø Study in 1994-1995 og som var registrert med endepunktene MI, diabetes mellitus type 2, kreft eller død, samt en tilfeldig valgt kontrollgruppe. Endepunkt registrene var fullstendig opp til 2007-2010. Genotyping ble utført i 17 SNP’er relatert til serum 25 (OH) D-nivå.
Resultatene
I alt 9528 individer ble utvalgt for genetiske analyser som ble utført med hell for minst én SNP i 9471 fag. Blant disse 2025 var registrert med MI, 1092 med diabetes mellitus type 2, 2924 med kreft og 3828 hadde dødd. De midlere forskjeller i serum 25 (OH) D-nivåer mellom SNP genotyper med den laveste og høyeste serum 25 (OH) D-nivåer varierte 0,1 til 7,8 nmol /L. En genotype resultatet basert på vektede risiko alleler av lavt serum 25 (OH) D-nivåer ble etablert. Det var ingen konsistent sammenheng mellom genotype scorer eller enkeltpersoner SNPs og MI, diabetes mellitus type 2, kreft, dødelighet eller risikofaktorer for sykdom. Men for rs6013897 genotyper (ligger på 24-hydroksylase genet (
CYP24A1
)) var det en signifikant sammenheng med brystkreft (P 0,05).
Konklusjon
våre resultater støtter ikke heller utelukke en årsakssammenheng mellom serum 25 (OH) D-nivå og MI, diabetes mellitus type 2, kreft eller dødelighet, og vår observasjon på brystkreft behov bekreftelse. Ytterligere genetiske studier er garantert, spesielt i populasjoner med vitamin D-mangel
Trial Registrering
ClinicalTrials.gov NCT01395303
Citation. Jorde R, Schirmer H, Wilsgaard T, Joakimsen RM, Mathiesen EB, Njølstad jeg, et al. (2012) Polymorfisme Relatert til Serum 25-hydroksyvitamin D-nivå og risiko for hjerteinfarkt, diabetes, kreft og dødelighet. Tromsøundersøkelsen. PLoS ONE 7 (5): e37295. doi: 10,1371 /journal.pone.0037295
Redaktør: John R.B. Perry, Peninsula College of Medicine og odontologi, Storbritannia
mottatt: 10 februar 2012; Godkjent: 17 april 2012; Publisert: 23 mai 2012
Copyright: © 2012 Jorde et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Den nåværende studien ble støttet med tilskudd fra Nord-Norge RHF (htpp /: www.helse-nord.no), Norsk diabetes~~POS=TRUNC (htpp /: www.diabetes.no) og Universitetet i Tromsø (htpp /: www .uit.no). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Vitamin D er en gammel hormon med udiskutabel betydning i kalsium og bein metabolisme. The vitamin D reseptor (VDR) er en kjernefysisk reseptor lokalisert i cellene i en rekke organer som indikerer viktige funksjoner også i ekstra-skjelettlidelser vev [1].
Dermed i tidligere rapporter fra Tromsø Study vi har funnet lavt serum 25-hydroksyvitamin D (25 (OH) D) nivåer (som er vitamin D-metabolitten brukes til å vurdere et individs vitamin D-status) å være sterkt relatert til hypertensjon [2], fedme [3], forhøyet glykosylert hemoglobin (HbA
1c) [4] og en ugunstig serum lipid profile [5]. I tråd med dette har vi funnet lave serum 25 (OH) D-nivåer for å bli assosiert med risiko for å utvikle type 2 diabetes mellitus (diabetes mellitus type 2) [6] samt med økt mortalitet [7]. Lignende observasjoner er blitt rapportert fra flere studier [8], [9], og serum 25 (OH) D-nivåer er også blitt forbundet med kreft [10]. Følgelig synes det serum 25 (OH) D-nivå for å være en viktig risikofaktor for sykdommer generelt. Men om det er en kausal sammenheng mellom lav serum 25 (OH) D og sykdom er usikker og venter resultatene av riktig utført randomiserte kliniske studier (RCT).
Inntak av vitamin D og soleksponering er viktige determinanter av serum 25 (OH) D-nivå, men kan ikke fullt ut forklare forskjellene i serum 25 (OH) D mellom individer [11]. Basert på familie- og tvillingstudier har det blitt anslått at mer enn 50% av variasjonen kan tilskrives genetiske faktorer [12], og nylig flere enkeltnukleotidpolymorfi (SNPs) knyttet til serum 25 (OH) D har blitt identifisert [13 ], [14]. Disse SNP’er, hvor de mindre allelfrekvensene varierer mellom 16 og 40%, fremstår som viktig for serum 25 (OH) D-nivå som effekten av vitamin D og på langt nær så viktig som virkningen av sesongen [13]. Følgelig, hvis serum 25 (OH) D-nivå er kausalt relatert til helse, vil man forvente at personer med polymorfismer forbundet med lav serum 25 (OH) D-nivå vil være mer utsatt for sykdom enn personer med formodentlig mer gunstige polymorfismer.
Tromsø studien er en longitudinell epidemiologisk befolkningens helse studie med gjentatte undersøkelser gjennomført på 6-7 år intervaller [15]. I den fjerde undersøkelsen utført i 1994-1995, ble blodprøver for fremstilling av DNA samles opp i nærheten av 27 000 fag. Deltakerne følges opp med registrering av hendelsen hjerteinfarkt (MI), diabetes mellitus type 2, kreft og død, og vi hadde derfor muligheten til å teste om SNPs i vitamin D-systemet er knyttet til harde endepunkter samt kardiovaskulær sykdom (CVD) risikofaktorer. Imidlertid gjorde studien ikke gi konsistent bevis for slike relasjoner.
Materialer og metoder
Tromsø studien
Tromsø Study, utført av Universitetet i Tromsø i samarbeid med det Statens helseundersøkelser, er en langsgående populasjonsbasert multipurpose studie med fokus på livsstilsrelaterte sykdommer. Den fjerde undersøkelsen ble utført i 1994-1995, den femte i 2001-2002 og den sjette i 2007-2008; 27 158, 8130 og 12984 individer deltok henholdsvis (tabell 1) [15], [16].
Definisjon av diabetes mellitus type 2 endepunkter
Mulige tilfeller av diabetes mellitus type 2 ble identifisert gjennom selv rapportert diabetes i spørre i fjerde (1994-1995), femte (2001-2002) og sjette (2007-2008) kartlegging av Tromsø Study, gjennom økt HbA
1c ( 6,5%) i en av de to tidligere helseundersøkelser, ved kobling av den fjerde undersøkelsen deltakerlisten til Universitetssykehuset Nord-Norge digitalt utflod diagnose register (ICD-9 koder 250, 357,2, 362,0, 583,8, 648,0, 648,8, 790,2, ICD-10-kodene E10.0- E14, O24 og R73) i forbindelse med den samtidige CVD registrering, eller ved kobling til dødsårsaksregisteret. I tillegg gjorde vi systematisk manuelle og elektroniske søk gjennom medisinske diagrammer for diabetes (før 2001 papir, fra 2001 digitale poster) på alle deltakere registrert med følgende kardiovaskulære diagnostisere koder i International Classification of Diseases versjon 9 og 10: ICD-9 koder 410-414 (iskemisk hjertesykdom), 427 (hjerterytmeforstyrrelser), 430-438 (cerebrovaskulær sykdom), 798 (sudden death) og 799 (andre dårlig definerte og uspesifiserte dødsårsaker), og ICD-10-koder I20-I25 (iskemisk hjertesykdom), I47 (paroksysmal takykardi), I47 (atrieflimmer og -flutter), I60-I69 (cerebrovaskulær sykdom), R96 (annet plutselig død av ukjent årsak) og R98 (ubetjent død) og R99 (annet dårlig definert og uspesifiserte dødsårsaker). Tilfeller av diabetes registrert ved hjelp av en av disse prosedyrene ble verifisert av journalinformasjon ved Universitetssykehuset Nord-Norge, den eneste lokale sykehuset betjener Tromsø befolkningen. Tilfeller av ukjent type diabetes ble ikke inkludert i analysene, og bare tilfeller av bekreftet diabetes mellitus type 2 ble brukt. Differensiering mellom type 1 og type 2 diabetes mellitus var basert på klinisk skjønn og på målinger av C-peptid og /eller glutaminsyredekarboksylase antistoff (anti-GAD). De diabetes mellitus type 2 endepunkter ble inkludert til slutten av 2008 [17].
Definisjon av MI endepunkter
til sykehus, tilfeller av hendelsen MI ble identifisert ved å koble deltakerlisten Tromsø Study til utslipps diagnose registrere ved Universitetssykehuset Nord-Norge. For å identifisere alle mulige aller første MI tilfeller vår søkestrategi omfattet følgende diagnosekoder: fra 1980 til 1998 ICD 9 kodene 410-414 og 798-7998; og deretter ICD 10 koder I20-I25, og R96 og R98-99. Som for diabetes, vi også systematisk søkte medisinske poster for MI i deltakere registrert med ICD-9 koder 427, 430-438 og 798-799, og ICD-10-koder I47-48, I60-I69, R96 og R98-99. Sykehuset medisinske posten ble deretter hentet for saken validering. Epikriser fra sykehusinnleggelser i andre sykehus ble også samlet inn når det passer. Videre ble det deltakerlisten Tromsø Study koblet med landsDødsårsaksRegisteret ved Statistisk Norge og dødsattester ble hentet for de med en underliggende eller medvirkende diagnose av hjerte-og karsykdom eller plutselig uventet død. Relevant informasjon ble samlet inn fra flere kilder som obduksjonsrapporter og poster fra sykehjem, ambulansetjenester og allmennleger. Denne prosedyren identifisert fatale hendelsen tilfeller av MI som oppstod som ut-av-sykehus dødsfall, inkludert dødsfall utenfor Tromsø. Saker som oppfyller diagnostiske kriterier for sikker eller sannsynlig dødelig eller ikke-dødelig aller første MI ble klassifisert som MI. WHO MONICA /MORGAM kriterier ble brukt i algoritmer og inkludert kliniske symptomer og tegn, funn i elektrokardiogram, verdier av hjerte biomarkører og (når gjeldende) obduksjonsrapporter [18]. Silent MIS som er definert av EKG bare var ikke inkludert som tilfeller på grunn av vanskeligheter med å bestemme den eksakte datoen for hendelsen. MI endepunkter ble inkludert til slutten av 2007.
Definisjon av kreft og dødelighet endepunkter
Informasjon om kreftforekomst og kreft plassering ble hentet fra Kreftregisteret Norge oppdatert til slutten av 2008 . opplysninger om død ble hentet fra dødsårsaksregisteret, og informasjon om flytting ut av Tromsø-området og utvandring fra Norge ble hentet fra Norsk Registeret Vital Statistics oppdatert til slutten av 2010.
Valg av studiekohorten og styrkeberegning
i tillegg til MI, diabetes mellitus type 2, endepunktsregistre for hjerneslag, hofte og radial frakturer, og aortastenose har blitt opprettet som en del av Tromsø studien. Når motivene for denne studien ble valgt i desember 2010, ble 1874 individer registrert med MI, 1136 med diabetes mellitus type 2, 1150 med slag, 754 med hoftebrudd, 1177 med radial brudd, 569 med aortastenose, 2932 med kreft og 3850 var døde . I tillegg ble 769 pasienter med en total karotid plaque område i den øvre kvartil i carotis ultralydmåling ved den andre går av den fjerde undersøkelsen inkludert som tilfeller. Som alle disse endepunktene var av potensiell interesse om genetisk polymorfisme, og begrensede midler ikke tillate DNA forberedelse og genetiske analyser av hele Tromsø Study kohorten, bestemte vi oss på et sak-kohort design. Med denne tilnærmingen, kan den samme «kontrollgruppen», tilfeldig valgt fra hele kullet som deltok på fjerde undersøkelsen i 1994-1995, brukes som «kontrollgruppe» for alle de forskjellige endepunkter [19].
i kraft beregningen for å bestemme størrelsen av kontrollgruppen, antok vi en forskjell i serum 25 (OH) D og 20 nmol /L mellom de med de mest gunstige og ugunstige genotype [13], at denne forskjellen vil resultere i en forskjell i relativ risiko på omtrent 1,3 om MI [20], og at 20% av kontrollene hadde den eksponerte polymorfisme. Med disse forutsetningene og a = 0,05 inkludert 3655 kontroller og 1218 tilfeller vil gi en effekt på 0,9 til å påvise en forskjell mellom genotyper for MI. Vi bestemte oss derfor på en kontroll kohort av 4000 fag, men inkludert flere fag i tilfelle noen av de genetiske analyser eller DNA-ekstraksjon var mislykket. Registreringen og kvalitetskontroll av endepunkter fortsatte frem til august 2011, og de endelige tallene for personer med punktene var derfor forskjellig fra når de fagene for DNA-analyser ble valgt.
Målinger
Ved undersøkelsen i 1994 -1995, deltakerne fylte ut spørreskjemaer om medisinsk historie, og livsstilsfaktorer. Blodtrykk, høyde og vekt, serum total kolesterol og triglyserider ble analysert som tidligere beskrevet [15].
Sera fra den andre besøk ble lagret ved -70 ° C, og etter å ha en median lagringstid på 13 år, tint i mars 2008 og analysert for 25 (OH) D ved hjelp av en automatisert klinisk kjemi analysator (Modular E170, Roche Diagnostics®, Mannheim, Tyskland) [21].
i det første besøket fullblod ble samlet for forberedelse av blodpropper som senere ble lagret på HUNT /NTNU Biobank i Levanger, Midt-Norge hvor DNA ble også fremstilt ved hjelp av en manuell isolasjonsmetoden basert på Clotted Lysatfremstilling protokoll for 8 eller 16 prøver på Autopure LS Instrument fra Gentra (Gentra Systems Inc. MN, USA) ved hjelp av reagenser fra Qiagen (Qiagen NV, Venlo, Nederland).
i den femte undersøkelsen i Tromsø studie i 2001-2002 serum parathyreoideahormon (PTH) ble målt entydig som tidligere beskrevet [22] og inkludert i denne studien som en etablert markør for vitamin D’s biologisk effekt [1].
Basert på tilgjengelige data fra to genom-wide assosiasjonsstudier [13], [14], og en omfattende forening analyse [23], 17 SNPs som ligger på eller i nærheten av følgende gener med betydning for vitamin D metabolismen og rapporteres å være den mest sterkt forbundet med serum 25 (OH) D-nivå, ble valgt ut for analyse i denne studien:
– vitamin D bindende protein (DBP) genet (
DBP eller GC
): de seks øverste SNPs ifølge Wang et al. [13] (rs2282679, rs7041, rs1155563, rs3755967, rs17467825, rs2298850) og en ytterligere lovende SNP rapportert av Bu et al. [23] (rs222020)
– Den 25-hydroksylase genet (
CYP2R1
) som er involvert i omdannelsen av vitamin D til 25 (OH) D:. De tre beste SNPs ifølge Wang et al. [13] (rs10741657, rs2060793, rs12794714 (rs1993116 sannsynligvis proxy for rs2060793 og ikke inkludert)), og en ekstra lovende SNP rapportert av Bu et al. [23] (rs1562902)
– Den 7-dehydrokolesterol reduktase /NAD syntetase 1 genet (
NADSYN1
) er ansvarlig for tilgjengeligheten av 7-dehydrokolesterol i huden. De to øverste SNPs i henhold til Wang et al. [13] (rs12785878, rs3794060) og de to øverste SNP’er henhold til Ahn et al. [14] (rs3829251, rs11234027)
– Den 24-hydroksylase genet (
CYP24A1
) som er involvert i nedbrytningen av 25 (OH) D:. Rs6013897 [13]. Rs2762939 er ikke relatert til serum 25 (OH) D-nivå, men ble likevel inkludert på grunn av en potensiell forhold til forkalkninger [24], noe som kan være relevant i denne studien.
Alle genotyping ble utført av KBioscience (https://www.kbioscience.co.uk) med KASP (KBioScience Allele Spesifikke Polymorphism) SNP genotyping system. KASP er en konkurransedyktig allel-spesifikk PCR omfatter en FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) drikk kassett. Rapporteringssystemet KASP består av følgende bestanddeler oligonukleotider:
– To allel-spesifikke primere (en for hver SNP allel). Hver primer inneholder en unik umerket hale sekvens på sin 5 «ende
-. En vanlig (bakover) primer
-. To 5 «fluor-merket oligonukleotider, en merket med FAM, ett med HEX. Disse oligonukleotidsekvenser er utformet for å samvirke med sekvensene av halene av allel-spesifikke primere
-. To ytterligere oligonukleotider med quenchere bundet ved deres 3 «ender. Disse oligonukleotid- sekvensene er komplementære til de av fluor-merkede oligonukleotider (og dermed også komplementære med haler av de allel-spesifikke primere). Disse seig oligonukleotider derfor binde deres fluor-merket utfyller og alt fluorescerende signal bråkjøles inntil påkrevet.
I den innledende fasen av PCR, binder den passende allel-spesifikk primer til dens komplementære regionen direkte oppstrøms av SNP (med 3′-enden av primeren plassert ved nukleotid SNP). Den felles revers primer binder også og PCR-forløper, med allel-spesifikke primer bli inkorporert inn i malen. I løpet av denne fase, forblir fluor-merkede oligonukleotider bundet til sin drikk-bundet komplementære oligonukleotider, og ingen fluorescerende signal genereres.
PCR-forløper, et av de fluor-merkede oligonukleotider som tilsvarer den amplifiserte allel blir også innlemmet i malen, og er dermed ikke lenger er bundet til sin drikk-bundet komplement. Ettersom fluor ikke lenger er slukket, blir den passende fluorescerende signal generert og detektert ved vanlige midler. Dersom genotype ved en gitt SNP er homozygot, vil bare den ene eller annen av de mulige fluorescente signalene bli generert. Hvis individet er heterozygot, vil resultatet bli en blandet fluorescerende signal.
I alle genotyping plater no-mal kontroller (NTCS) er inkludert for å demonstrere at en eventuell forsterkning i prøvebrønner skyldes utelukkende av tilstedeværelsen av prøve-DNA. To separate manuell kvalitetskontroll kontroller utføres, og dataene blir også kontrollert av spesifikk programvare for å fastslå at det ikke er noen feil samtaleoppgaver, ingen prøver for nær eller for langt fra opprinnelsen, ingen NTCS forsterket, eller eventuelle feil samtaler.
Statistiske analyser
forholdet mellom SNP genotyper og endepunktene MI, ble diabetes mellitus type 2, kreft og dødelighet evaluert i Cox regresjonsanalyser med alder, kjønn, kroppsmasseindeks (BMI), og vitamin D /tran tilskudd som kovariater. For MI den risikofaktorer systolisk blodtrykk og serum kolesterol var også inkludert i en egen analyse for å undersøke om relasjoner kan forklares gjennom disse risikofaktorene. For dødelighet ble observasjonstid satt fra 1994, for de andre endepunktene fra fødselen. Observasjonsperioden ble kuttet innen utgangen av 2007 for MI, 2008 for diabetes og kreft, og 2010 for dødelighet. Den forhåndsdefinerte kontrollgruppen ble brukt som kontroller for personer med en bestemt endepunkt (tilfeller). Siden denne kontrollen kohorten ble tilfeldig valgt fra hele kullet, det følger også med et betydelig antall personer med en eller flere endepunkter. Når du analyserer et bestemt endepunkt, ble forsøkspersonene i kontrollgruppen til den bestemte endepunktet flyttet til saken gruppen (som bare inkluderte pasienter med den aktuelle endepunkt). Derfor er størrelsen av kontrollgruppen varieres avhengig av endepunkt i spørsmålet. På grunn av størrelsen på kontroll-kohorten, gjorde vi ikke gjøre justeringer til den delvise sannsynligheten i Cox regresjonsanalyser [19].
Distribusjonen av de kontinuerlige variablene serum 25 (OH) D, blodtrykk, lipider , BMI og HbA
1c ble evaluert for skjevhet og curtosis og visuell inspeksjon av histogrammer og funnet normal bortsett triglyserider, HbA
1c og PTH som ble normalisert ved log transformasjon før bruk som avhengige variabler. Trender på tvers av genotyper ble evaluert med lineær regresjon med alder, kjønn, BMI, måned for undersøkelse (med bruk av dummyvariabler) og inntak av vitamin D-tilskudd eller tran som kovariater. CVD risikofaktorer ble vurdert innen hele kullet.
genotype frekvensene ble undersøkt for overholdelse av Hardy-Weinberg likevekt ved hjelp av chi-squared analyse [25]. Koblingsulikevekt (LD) mellom SNPs ble evaluert med r
2 og Lewontin er D «statistikk [26], [27].
Basert på beta-koeffisienter fra regresjonsanalyser med serum 25 (OH) D som avhengig variabel, ble de risiko alleler (de som er forbundet med lavt serum 25 (OH) D-nivåer) veid og en genotype poengsum konstruert [13]. For dette resultatet bare SNP signifikant relatert til serum 25 (OH) D-nivåer ble tatt, og kun SNP’er som var ukorrelerte (R «> 2 0,40) [28]. I Cox regresjonsanalyser kohorten ble delt i genotype poengsum iler med lavest kvartil (den med høyest serum 25 (OH) D-nivå) som referanse. I tillegg ble de individuelle SNP også evaluert i Cox regresjon med de store homozygot genotype anvendt som referanse.
Dataene er vist som gjennomsnitt ± SD. Alle testene ble utført tosidig, og en P-verdi 0,05 ble ansett statisk signifikant. Hvor de enkelte SNPs ble analysert, ble korreksjoner for flere tester utført med Bonferroni metoden. Derfor, i Cox regresjonsanalyse P-verdier ble multiplisert med en faktor på 32 (4 SNP’er og 8 endepunkter) og for forholdet mellom CVD risikofaktorer og SNP’er med en faktor på 4.
Ethics
studien ble godkjent av Regional komité for medisinsk og helsefaglig forskningsetikk (REK Nord) (referanse 2010 /2913-4). Kun de med gyldig skriftlig samtykke ble inkludert.
Resultater
I alt 9528 personer ble valgt for deltakelse i studien og DNA hell fremstilt og analysert for minst én SNP i 9471 fag. Blant disse, 4175 ble inkludert som kontrollgruppen, ble 2025 fag endelig registrert med endepunktene MI, 1092 med diabetes mellitus type 2, 2924 med kreft og 3828 hadde dødd (tabell 1). Aldersfordelingen, kjønn, røykevaner og laboratoriedata fra 1994-1995 i disse fagene er vist i tabell 2. genotyper for alle SNPs var i Hardy-Weinberg likevekt i alle analyser med unntak av de fire SNPs på
NADSYN1
genet der chi-kvadrat test gav P. 0,05
de enkelte SNP analyser var vellykket i 98,8 til 99,5% av pasientene. Serum 25 (OH) D-nivåer i forhold til genotypen er vist i tabell 3. Generelt er de gjennomsnittlige forskjeller i serum 25 (OH) D mellom de store og små homozygote genotyper var for SNP’er knyttet til
GC
,
CYP2R1
,
NADSYN1 Hotell og
CYP24A1
gener 0,3 til 7,8 nmol /L, 0,6 til 2,4 nmol /L, 1.8 til 2.9 nmol /L, og 2.3- 2,7 nmol /L, henholdsvis.
SNP’er med det samme gen sted, og at det i tillegg signifikant relatert til serum 25 (OH) D-nivåer, ble sterkt korrelert. Dermed, for
GC
genet, rs2298850, som var den SNP med høyest forskjell i gjennomsnittlig serum 25 (OH) D mellom store og små homozygote, var i LD med rs2282679, rs1155563, rs3755967, rs17467825 (r
2 = 0,90, 0,59, 0,92, 0,92, henholdsvis), men ikke med rs7041 (r «> 2 = 0,38). Tilsvarende for
CYP2R1
genet, rs10741657 var i LD med rs2060793 og rs12794714 (r
2 = 1,00 og 0,49, henholdsvis), og for de
NADSYN1
genet rs3794060 var i LD med rs12785878 (r
2 = 1,00). Men ingen av SNPs rs2298850, rs7041, rs10741657, rs3794060 og rs6013897 var i LD med hverandre, og disse fem SNPs ble brukt til bygging av genotype poengsum. Gjennomsnittlig serum 25 (OH) D-nivå i de fire kvartiler av denne genotypen poengsum var 62,5 ± 20,7, 59,1 ± 19,8, 57,3 ± 19,5 og 54,7 ± 19,5 nmol /L, henholdsvis.
I tabellene 4 og 5 resultater angåendepunktene i forhold til disse genotype poengsum iler sammen med de fire SNPs valgt på grunn av betydelig og høyeste forskjell i serum 25 (OH) D mellom store og små homozygote innenfor hvert gen, blir presentert.
genotypen resultatet var ikke relatert til serum PTH, men rs6013897 ligger på
CYP24A1
gen viste en signifikant relasjon med lavere gjennomsnittlig serum PTH nivået for polymorfisme med høyest bety serum 25 (OH) D-nivå (Tabell 6 ).
Store endepunkter
Verken genotype poengsum heller ikke noen av de fire utvalgte SNPs var signifikant assosiert med MI, diabetes mellitus type 2, kreft og dødelighet etter korreksjon for multippel testing (tabell 4) . For MI inkludering av risikofaktorer systolisk blodtrykk og serum kolesterol ikke påvirke disse resultatene (data ikke vist). Når kreften ble inndelt etter plassering (bryst, lunge, tykk- og prostata), rs6013897 ved
CYP24A1
gen viste en signifikant relasjon med brystkreft (P 0,05) hvor den mindre homozygot, som var den med den laveste serum 25 (OH) D-nivå, hadde en 86% høyere risiko for å utvikle brystkreft enn de store og referanse homozygot (figur 1). Dette var den eneste av de fire utvalgte SNP, samt genotype stillingen, som viste en signifikant relasjon til en bestemt cancer.
CVD risikofaktorer
Det var ingen signifikant forholdet mellom CVD risikofaktorer og genotypen poengsum eller fire utvalgte SNPs (tabell 6). Det var ingen forskjell i røykevaner i forhold til noen av SNP genotyper (data ikke vist).
Diskusjoner
Så vidt vi vet, er dette den første store befolkningsbaserte studien hvor SNPs assosiert med serum 25 (OH) D-nivåer er rapportert i forhold til de store sykdommene CVD, diabetes mellitus type 2, kreft, dødelighet og risikofaktorer for sykdom. Som forventet fant vi en signifikant sammenheng mellom de valgte SNPs og serum 25 (OH) D-nivå [13], [14], mens forholdet til den harde endepunkter og CVD risikofaktorer ikke var konsekvent.
SNPs analysert av oss er alle involvert i viktige skritt i vitamin D metabolismen som tilgjengelighet av substrat for vitamin D produksjon i huden (
NADSYN1
genet), hydroksylering til 25 (OH) D (
CYP2R1
gen), transport av 25 (OH) D i sirkulasjon (
DBP
eller
GC
genet) og degradering til inaktive metabolitter (
CYP24A1
genet) [13]. De SNPs er ikke påvirket av livsstil, og deres effekter er livslang. Følgelig kan de potensielt være bedre markører for et emne vitamin D-status enn en enkelt serum 25 (OH) D-måling. Selv om ingen erstatning for RCT, har identifikasjon av disse SNPs gjorde det mulig å indirekte teste forholdet mellom serum 25 (OH) D og sykdommer. Spesielt kan en forvente å se en forbindelse med sykdommer som utvikler seg over en lang tidsperiode, for eksempel CVD, diabetes mellitus type 2, kreft og til slutt også død.
Når det gjelder dødelighet, hvor et lavt serum 25 (OH) D-nivå er en prediktor [7], [9], alle fare forholdstall var nær 1,00 med noen trend for den lave genotype stillingen, og heller ikke de enkelte genotyper forbundet med høy serum-25 (OH) D-nivåer, for å ha en beskyttende virkning. Tilsvarende lave serum 25 (OH) D er en prediktor for MI [29], men ingen av genotypene for SNP’er undersøkt opptrådte i forbindelse med MI risiko. Dette ble ikke endret ved inkludering av risikofaktorene systolisk blodtrykk og serumkolesterol i Cox regresjonsanalyser. Selv om det ikke er statistisk signifikant, var det også verdt å merke seg at for rs2298850 (som var den SNP med den høyeste forskjell mellom større og mindre homozygote med hensyn serum 25 (OH) D)) var det 17% redusert risiko for MI for genotype med lavest serum 25 (OH) D-nivå. En sammenheng mellom SNPs i
CYP24A1
genet og MI kunne ha vært forventet som Sehn et al. [24] rapporterte en slik SNP (rs2762939) for å være relatert til koronar forkalkning, som igjen forut CVD [30]. Men ingen av
CYP24A1
genet SNPs, (inkludert rs2762939) dukket opp i forbindelse med MI i vår kohort.
En sammenheng mellom vitamin D og kreft er sannsynlig som VDR, som er et kjernefysisk reseptor , er funnet i celler i en rekke vev og den aktive formen av vitamin D, 1,25-dihydroksyvitamin D (1,25 (OH)
2D), ser ut til å ha anti-proliferative effekter [31]. Epidemiologiske data indikerer en negativ prognostisk rolle for lav serum 25 (OH) D-nivåer vedrørende kreft [32], men så langt en årsak-virkning forholdet ikke er etablert [33]. I tråd med dette, for genotypen rillekvartiler og de fleste av SNPs analysert av oss hazard ratio for kreft var nær 1,00 bortsett rs6013897. For dette SNP genotypen forbundet med lavest serum 25 (OH) D-nivået hadde en 20% økt risiko for kreft, men dette var ikke signifikant etter justering for multiple sammenligninger.
I vår kohort inkluderes så mange som 2924 tilfeller med kreft, vi også undersøkt bryst, colorectal, lunge- og prostatakreft separat. For lungekreft [34] samt for prostatakreft [35] er det bare svake indikasjoner for en sammenheng med vitamin D, og heller ikke for genotype poengsum iler eller de SNPs analysert av oss var det noen signifikante sammenhenger. For brystkreft, er situasjonen lik med ingen enighet om hvorvidt serum 25 (OH) D er prediktiv for fremtidig sykdom eller ikke [36]. Men for SNP rs6013897, fag med mindre homozygot genotype (som var den med lavest serum 25 (OH) D-nivå), hadde nesten dobbelt så stor risiko for å utvikle brystkreft sammenlignet med personer med store homozygot genotype.
rs6013897 er relatert til
CYP24A1
genet som regnes som et onkogen. Dette genet (den 24-hydroxylase enzym) omformer 25 (OH) D og 1,25 (OH)
2D til sine inaktive former, og er til stede også i perifere vev. Lokalt produserte 1,25 (OH)
2D antas å ha en anti-kreft effekt, og en økt lokal uttrykk for
CYP24A1
genet (og dermed økt nedbrytning av 1,25 (OH)
2D) har blitt assosiert med dårlig overlevelse [37]. Det er derfor rimelig at også polymorfismer i dette genet kan påvirke kreftrisiko. Imidlertid, Anderson et al. [38] som undersøkte 1560 pasienter med brystkreft og 1633 kontroller fant ingen sammenheng mellom SNPs i
CYP24A1
genet og brystkreft, mens de rapporterte en sammenheng mellom brystkreft og rs7041 som ikke ble sett i vår studie (data ikke vist). Og for å legge til forvirring, i en studie fra Kina, inkludert 2919 tilfeller og 2323 kontroller, verken rs7041 eller rs2762932 (proxy for rs6013897) ble vurdert signifikant relatert til brystkreft [39].
For tykktarmskreft synes det å være en invers sammenheng med inntak av vitamin D, så vel som med serum 25 (OH) D-nivåer [40]. Imidlertid er RCT bevis begrenset, og ingen av SNPs undersøkt av oss, eller genotype score, viste en signifikant sammenheng med tykktarmskreft.
