Abstract
Polysaccharopeptide (PSP), fra
Coriolus versicolor
, har blitt brukt mye som en adjuvant kjemoterapi med demonstrert anti-tumor og bred immunmodulerende effekter. Mens PSP virkningsmekanismen fortsatt ukjent, den forbedrede immunmodulerende potensial med akasie tyggis er av stor interesse. Akasiegummi, som også inneholder polysakkarider og glykoproteiner, er blitt demonstrert å være immunpotensierende. For å belyse hvorvidt PSP aktiverer direkte T-celle-avhengig B-celle responser
in vivo
, brukte vi et veletablert hapten bæresystem (Nitrophenyl-kylling gammaglobulin (NP-CGG)). 6-ukers C57BL /6 hannmus ble immunisert med 50 ug av NP
25-CGG alun utfelles intraperitonealt. Mus ble gavaged daglig med 50 mg /kg PSP i en bærer inneholdende akasiegummi og avlivet på dag 0, 4, 7, 10, 14 og 21. ELISA ble anvendt for å måle den totale og relative hapten-spesifikke anti-NP IgA, IgM og IgG titernivåer sammenlignet med kontrollene. Det ble funnet at PSP, kombinert med akasiegummi, betydelig økt total IgG titer nivåer ved dag 4 (P 0,05), redusert IgM titernivåer på dager 4 og 21 (P 0,05) med ingen endringer observert i IgA eller IgE-titer nivåer ved noen av tidspunktene målt. Våre resultater tyder på at mens PSP kombinert med acacia gum ser ut til å utøve svake immunologiske effekter gjennom spesifikke T-celleavhengige B-celle responser, er de sannsynligvis til å være bred og uspesifikke som støtter den aktuelle litteraturen på PSP. Vi rapporterer for første gang anvendelse av en veletablert hapten-bærersystem som kan brukes til å karakterisere og beskrive spesifikke T-celleavhengige B-celleresponser på potensiell immunmodulerende glykoprotein-baserte urte medisiner kombinasjoner
in vivo
Citation. Sekhon BK, Roubin RH, Li Y, Devi PB, Nammi S, Vifte K, et al. (2016) Evaluering av utvalgte Immunmoduler glykoproteiner som et supplement til kreft Immunterapi. PLoS ONE 11 (1): e0146881. doi: 10,1371 /journal.pone.0146881
Redaktør: Valerie A. Ferro, University of Strathclyde, Storbritannia
mottatt: 12. august 2015. Godkjent: 24 desember 2015; Publisert: 22 januar 2016
Copyright: © 2016 Sekhon et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. All relevant data er innenfor papir
Finansiering: Dette arbeidet ble støttet av Cancer Institute NSW. DMS; Nasjonalt institutt for komplementær medisin. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
introduksjon til
Evading immun ødeleggelse har vært ansett som en fremvoksende kjennetegn på kreft [1]. Spesielt kan fraværet av sterke kreftantigener, tap av MHC klasse I eller stimulerende og eller kostimulerende molekyler resultere i svikt av T-celle-gjenkjennelse, antigen presentasjon og tumor eliminering [2,3]. De bivirkninger forbundet med kjemoterapi steder ekstra byrde på vertens muligheten til å montere en effektiv immunrespons mot antigener og svekket immunforsvar er derfor sårbare for potensielt livstruende infeksjoner [4]. Forsøk på å målrette og stimulere undertrykte vertens immunrespons mot slike overgrep har blitt møtt med blandet suksess i levering av effektive behandlinger. Selv om forskjellige immunterapeutiske tilnærminger som dendrittiske cellen vaksinering har lav toksisitet, dessverre de sjelden overstiger en objektiv klinisk tumor responsrate på 15% [5]. Behandlinger som tumor-infiltrerende lymfocytter (Tīlss) protokoller har nylig blitt evaluert i en samlet analyse rapporterer om en 20% komplett responsraten med 70% totalt objektiv responsrate hos pasienter med melanom [6]. Cytokin-terapier, spesielt systemisk administrasjon av IL-12 har vært forbundet med alvorlige bivirkninger, og en meget smal terapeutisk indeks [7]. Få slike kliniske studier som administrerer IL-12 hos kreftpasienter har viste lovende resultater [7]. Men immunterapi med andre interleukiner som høy dose IL-2 gjenstår å være en effektiv behandling for de siste 20 årene i pasienter med metastatisk nyrecellekarsinom, overdragelse veldokumenterte komplett holdbare svar i 10-15% av utvalgte pasienter [8] . Antistoff mediert behandlinger som for eksempel utvikling av monoklonale antistoffer er blitt brukt for å kunne målrette ulike reseptorer, inkludert VEGF, EGFR, Her-2 utøver forskjellige virkninger på forskjellige kreftformer som resulterer i forlenget overlevelse [9]. Spesielt har utviklingen av den fullt ut humanisert monoklonalt antistoff IgG1 ipilimumab er rettet mot det cytotoksiske T-lymfocytt antigen 4 (CTLA-4) på overflaten av hjelper-T-celler og derved hemmer utviklingen av immuntoleranse. Ipilimumab er godkjent av FDA for behandling av melanom [10]. Flere nylig, oppdagelsen av MDX-1106 (nivolumab), et fullt humaniserte IgG4 sjekkpunkt hemmer mål programmert død 1 (PD-1) utøve immunsuppressive effekter på T-celler hindrer toleranse. Faser I og II studier har blitt utført på ulike kreftformer, viser objektiv tumorrespons og bedre total overlevelse av avansert melanom pasienter [11]. Som et resultat, har nivolumab blitt godkjent av FDA for behandling av pasienter med inoperabel eller metastatisk melanom som ikke lenger er lydhør overfor andre legemidler, og pasienter med metastatisk skvamøs ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) med progresjon på eller etter platinabasert kjemoterapi. Målet er å utvikle og kombinere ulike terapeutiske strategier sammen som leverer bredspektret effekter med potensielt mindre toksisitet samtidig minimere motstand, dermed behandlingsresultatene for de med kreft. Thalidomid er et slikt stoff som brukes for effektiv håndtering av myelomatose, som har komplekse, men mangefasetterte effekter inkludert potent cytotoksisk og immunmodulerende aktiviteter [12]. Spesielt har thalidomid evnen til å stimulere prognostisk betydelige cytotoksiske T-celler respons hos pasienter med myelomatose [13] og Walden makroglobulinemi [14].
Mange ernæringstiltak har vist potensial i å modulere dsyregulated immunrespons. Spesielt har sopp-derivater blitt grundig undersøkt, og er kjent for å ha immun-stimulerende virkninger, men klare bevis for deres evne til å forsterke immunresponser mot spesifikke antigener er langsomt voksende [15]. Proteinbundne polysakkarider eller polysaccharopeptides (PSP), er en klasse av forbindelser som finnes rikelig i visse sopp og har vært mye brukt som biologisk respons modifikatorer (BRM) i Øst-Asia [16]. PSP avledet fra
Coriolus versicolor
har blitt rapportert å forbedre immunforsvaret, og være en potent immunomodulator mot kreft og infeksjoner [17-19]. Immunostimulerende virkninger av PSP omfatter heving av pro-inflammatoriske cytokiner så som interferon-γ (IFN-y), interleukiner så som IL-2; naturlige killer (NK) celleaktivitet, aktivering av komplement (C3), og T-celle proliferasjon [20]. Viktigere, vi tidligere har rapportert at PSP oppregulerer prosentandelen av monocytter, men ikke endre T-celle-undergrupper, NK-celler eller B-celler [21]. Spesielt fant vi ikke noen signifikante forskjeller i /8 forholdet CD4 etter behandling PSP [21]. Dette funnet støtter kliniske studier som har rapportert noen vesentlige endringer i /8 forholdet CD4 etter behandling PSP [22,23]. Mens vår forrige undersøkelse på PSP ble utført in vitro, det gjorde ikke ta hensyn til saker av biotilgjengelighet eller dens virkninger på levermetabolisme. Det er sannsynlig at de negative T-celle resultater kan skyldes fraværet av et helt intakt immun triade av DC, T- og B-celler. En bekreftende studie med dyr er derfor avgjørende, og tema for denne studien.
I T-celleavhengige B-celle antistoffrespons, et antigen tatt opp av DC eller makrofager blir presentert for naive T-hjelpeceller der beslektet interaksjon mellom B-celler kan forekomme. B-celle med den samme spesifisitet som en spesiell T-celle omslutter og fordøyer antigenet og viser de antigene fragmenter bundet til dets unike MHC II-molekyler på overflaten for ytterligere presentasjon. En moden samsvarende T-celleinteragerer med B-celle og utskiller cytokiner som fører til celledelingen av B-celler og antistoffproduksjon. Denne prosessen kan føre til produksjon av minne B-celler (figur 1).
Interessant nok mye av data (inkludert vår egen) tyder på en økning av cytokinnivåer og immunologiske undergrupper gitt av PSP non -spesifikke, men brede spenner aktiviteter. Enten PSP utøver T-celleavhengige B-celle-antistoffresponser, eller T-celle-uavhengige B-celle-antistoffresponser er ikke klarlagt delvis på grunn av mangel på hensiktsmessige analyser, inkludert dyremodeller. Et forsøk på å evaluere adjuvant effekten av vaksinering med glykoprotein-baserte urte medisiner med immunmodulerende potensial (spesielt
Astragalus Hotell og PSP fra
Coriolus versicolor
) sammen med KLH konjugater er utført [24,25] . Selv om denne studien var i stand til å demonstrere betydelige adjuvant effekter med disse urtemedisin, KLH modeller presentere en rekke begrensninger. For det første har B-celle-respons til komplekset KLH proteinet er en polyklonal respons i forhold til et stort repertoar av antigene epitoper som gjør bestemmelse av spesifikke responser som T-celle-avhengig B-celle responser umulige. Dernest denne T-celleavhengig B-cellerespons på KLH modellen spenner over en lengre varighet som gjør det vanskelig å skille mellom direkte og indirekte effekter. Adjuvant effekten av vaksinering med glykoprotein-baserte urte medisiner i denne KLH studien er sannsynlig å være bred og uspesifikke. Derfor NP-CGG modell adresser begge disse begrensningene til KLH modellen i å være i stand til å bestemme direkte og spesifikke T-celle-avhengig B-celle-hjelpestoff-virkninger av immunmodulerende medisinske urter i kombinasjon med immunpotensierende midler. For å maksimere den miltimmunrespons, ble NP-CGG administrert via i.p. rute. Ettersom dette er et mekanistisk studie for å bekrefte adaptiv immunitet, er det ingen eventuell klinisk anvendelse for NP-CGG modell via i.p. ruta. Ved å måle spesifikke anti-NP responser på ulike tidspunkter, kan en synkron T-celle-avhengig B-celle respons skisseres tydelig.
Vi rapporterer her for første gang bruk av et veletablert hapten -carrier system NP-CGG for å karakterisere og beskrive de spesifikke T-celleavhengige B-celle immunologiske responser i nærvær av PSP, et hjelpestoff som vanligvis brukes til å cancer immunoterapi. T-celleavhengig B-celle antistoffresponser i særdeleshet har et enormt potensial for overdragelse adaptiv immunitet mot kreftantigener (økt grådighet) [26-28]. Derfor PSP evne til å utøve T-celle avhengige svar
er in vivo
derfor sterkt ønskelig og har blitt undersøkt i denne studien.
Vi antok at det i NP-CGG-modellen, utøver PSP sin immunologiske effekter gjennom T-celleavhengige B-celleinteraksjoner ved å endre den etterfølgende immunoglobulin (Ig) isotype klasse samt mengden av det Ig i dyr innledning utfordret av NP-CGG og deretter gitt PSP.
Mens det er vel fastslått at i denne modellen maksimal antistoff-produksjon av spesifikke klasser finner sted ved bestemte tidspunkter (IgM = dag 10, IgG = dag 14, IgA = dag 18 [29]), kan en hvilken som helst styrking av PSP lett bestemmes. Det har tidligere vært vist at for primærresponser mot NP, eksisterer det en første lag fase av 3-4 dager T-celle-priming [30]. Da NP-spesifikke B-celler vil bli rekruttert inn i miltantistoffrespons, aktiveres og vokse eksponensielt. Disse B-celle kloner da enten utvikle seg til kortlivede plasmablasts i extrafollicular brennpunkter, eller vandrer inn follikler der de danner germinalsenter langlivede plasmaceller. Ikke bare gjør rednings spenner over plasmaceller fra disse to kildene er forskjellige, germinal senter-avledede plasmaceller er blitt funnet å være av mye høyere affiniteter overfor det spesifikke immunogen [30]. Denne forbedrede antigen-antistoff-blindingen vil ha en viktig rolle for effektive B-celle-effektor-funksjoner, og således klinisk relevante implikasjoner. Målet med studien var å bestemme antistoffresponser på forskjellige tidspunkter og vurdere den klassen av immunglobulin de produseres. Vår studie tillater oss å belyse virkningsmekanismen til en klinisk nyttig urtemedisin som et supplement til kreft ledelse. Acacia er et velkjent immunopotentiator, hvor studier har vist at akasiegummi kan aktivere dendrittiske celler [31], jf medfødt og adaptiv immunitet (Strobel og Ferguson, 1982) [32] samt utøve anti-parasittiske effekter
i vivo product: [33]. I tillegg Strobel og andre (1986) senere funnet at akasiegummi kan anvendes for å indusere oral toleranse avhengig av modellen benyttet [34]. I vår studie ble akasie tyggegummi brukt som en immunopotentiator å utforske den kombinerte effekten med PSP for å fastslå om T-celleavhengige B-celler respons ble forbedret i forhold til akasie tyggegummi alene
Materialer og Metoder
Dyr og kosthold
5 uker gamle C57BL /6 hannmus ble hentet fra The Animal Resource Centre (Canning Vale, Australia) og vedlikeholdes i en bestemt patogen gratis anlegget med bestrålt mat og vann ad libitum.
Alle dyr prosedyrer ble utført i henhold til anbefalingene i forsøksdyr Services standard operasjonsprosedyrer og retningslinjer som er utviklet av University of Sydney. Protokollen ble godkjent av Animal etikkomiteen ved University of Sydney (Godkjenning: L24 /2-2007 /1/4484). Referer til flytskjema i figur 2. Alle mus ble overvåket regelmessig og spesielt etter gavaging og immunisering for eventuelle uheldige helsemessige problemer og håndteres deretter. Egnede metoder for avliving ble utført.
5 uker gamle mus fikk lov til å akklimatisere seg i en uke, immunisert med NP
25-CGG på 6 uker, ble grupper av mus da gavaged daglig med PSP, akasie eller MQ i opptil 21 dager og ofret ved forskjellige tidspunkter (dager 0, 4, 7, 10, 14 og 21).
Immunisering og antigen
4-hydroksy 3-nitrophenylacetyl (NP) hapten konjugert til kylling γ globulin (CGG) (NP
25-CGG, Biosearch Technologies, Novato, CA) ble utfelt i alun [35]. 6 uker gamle mus ble immunisert med 50 ug alun bunnfall (i 200 ul PBS) injisert i.p. ved baseline (dag 0) og deretter delt inn i 4 grupper: NPCGG = ingen sonde kontroll eller ubehandlet kontroll, MQ = MQ vann kjøretøy kontroll, akasie = akasie tyggegummi, PSP = PSP behandlet
PSP og serum samling
Polysaccharopeptide (PSP) avledet fra det kinesiske
Cov-en
stamme av
Coriolus versicolor plakater (Winsor Health Products Ltd, Hong Kong) ble oppnådd og beskrevet tidligere [21]. PSP ble suspendert i 5% sterilisert akasiegummi i vann MQ (Sigma, St. Louis, MO, USA) i en sluttkonsentrasjon på 5 mg /ml. 50 mg /kg (200 ul) av PSP ble administrert daglig til mus i behandlingsgruppen ved oral tvangsforing (PSP) og stoppet etter 21 dager. Siden akasie tyggegummi var den immunmoduler potensial baseline for studien, ble PSP administrert sammen med akasie tyggegummi. Eventuelle immunmodulerende effekter av PSP kan forventes å være større enn de av akasiegummi. De resterende mus var kontroller og administreres akasie tyggegummi (ACACIA), MQ vann (MQ), eller ingen sonde (NP-CGG). PSP ble ikke gitt til mus i MQ gruppen
Grupper på 6 mus ble deretter avlivet sekvensielt ved baseline (dag 0).; 4, 7, 10, 14 og 21 dager etter immunisering. PSP og akasie-behandlede mus ble avlivet på dag 4, 7, 10, 14 og 21; mens MQ og NP-CGG behandlede mus ble avlivet på dag 10 og 21. Serum ble samlet inn på alle disse tidspunkter.
Bøyning av NP succinimidester til proteinbærere
Ved hjelp av den metoden Lalor [36] den succinimidester av NP (4-hydroksy-5-jod-3-nitrofenyl) kaproat-O-succinimid (NIP-OSu) (Biosearch Technologies, Novato, CA, USA) ble konjugert til bovint serumalbumin (BSA; Sigma) som gir et tilnærmet substitusjon forholdet mellom NP
2-BSA og NP
18-BSA hhv.
Påvisning av NP-spesifikt serum antistoff ved ELISA
NP-spesifikt serum IgM, IgG, IgA og IgE ble kvantifisert ved hjelp av ELISA ved forskjellige tidspunkter. For å bestemme hvorvidt PSP var i stand til å forsterke den overveiende tidlig IgM-antistoffrespons på NP-CGG som topper ved dag 10, målte vi serumnivåer av mus ved 0, 4, 7, 10, 14 og 21 dager etter immunisering. Tilsvarende for å vurdere endringer i IgA responser til NP-CGG som topper på dag 18, vi målte serum titernivåer mus på 0, 10, 14 og 21 dager etter vaksinasjon. For å undersøke hvorvidt PSP har potensial til å utfylle eventuelle langtids immunologiske responser som forekommer post 14 dager etter immunisering, vi målte høy affinitet og total IgG-antistoffresponser på NP-CGG ved direkte ELISA ved bruk av NP
2-BSA og NP
18-BSA som henholdsvis belegget protein. Serum titre ble bestemt på 0, 4, 7, 10, 14 og 21 dager etter immunisering om NP
25-CGG. For å utelukke eventuelle inflammatoriske eller allergiske reaksjoner som kan ha oppstått som følge av administrasjon PSP for en lengre periode, målte vi IgE titernivåer 7 dager etter immunisering. I korte trekk 96-brønners plater ble belagt med enten 100 ul av 5 ug /ml NP
2-BSA eller NP
18-BSA i 0,5 M karbonat-buffer (pH 9,6) ved 4 ° C over natten og blokkert med 1% BSA i PBS. Etter fire vaskinger med PBS inneholdende 0,05% Tween 20 (Santa Cruz Biotechnology, California, USA), ble serielt fortynnede serumprøver tilsatt til hver brønn i duplikat og inkubert i 1 time ved 37 ° C i en fuktet boks. Etter vasking, biotin-konjugert geit-anti-mus IgM, IgG, IgA (Caltag Laboratories) eller IgE (Southern Biotech) fortynninger varierende fra 1: 3000 til 1: ble 10 000 tilsatt og inkubert i 1 time ved 37 ° C i en fuktet boks . SA-HRP aktivitet ble visualisert ved hjelp av O-phenylenediamine (OPD, Sigma). Etter utvikling den fargede reaksjonen ble stoppet med 50 ul 20% H
2SO
4 og optisk tetthet ble bestemt ved 492 nm ved hjelp av en Polarstar plateleser (BMG Labtech, Australia). Positive kontrollsera ble inkludert, slik at standard kalibreringskurver for bestemmelse av relative antistofftiter kunne bli produsert.
Statistisk analyse
Statistiske analyser ble utført ved hjelp av ikke-parametrisk Kruskall-Wallis eller
post-hoc
Mann-Whitney tester når det passer. Statistisk signifikans ble oppnådd når p 0,05 sammenlignet med kontrollgruppene.
Resultater
Acacia og PSP har ingen effekt på kropp og miltvekt
Som PSP og Acacia er begge kjent for å være immunopotentiators, det er sannsynlig at eventuelle forbedrede immunresponser forårsaket av disse legemidlene i NP-CGG-modellen er sannsynlig i milten og gjenspeiles i endringer i milt vekt. Kroppsvekt ble også vurdert å korrespondere med endringen i miltvekt og utelukke eventuelle uheldige virkninger av PSP og Acacia som kan omvendt ses i en reduksjon i kroppsvekt. Vi fant ikke noen betydelig variasjon i kroppsvekt hos mus før eller under immunisering (tabell 1). Det var heller ingen signifikant variasjon i kroppsvekt av mus i mellom grupper eller ved ulike tidspunkt unntatt på dag 21, hvor NPCGG og MQ (P 0,05) var signifikant økt sammenlignet med ACACIA (tabell 2). Det er en trend med økende miltvekt sett fra dager 7-14 i ACACIA gruppen selv om denne økningen ikke nådde statistisk signifikans. Totalt var det ingen signifikant variasjon i miltvekt på liv og død mellom gruppene (tabell 3).
PSP reduserer NP-spesifikke IgM titernivåer på dager 4 og 21
Vi vurderte IgM titernivåer siden de er de første antistoffet som skal bli produsert av B-celler mot et antigen hos mus og mennesker likt, og er spesielt potente til å aktivere komplementsystemet. IgM-titer nivåer ble vurdert ved hvert tidspunkt (dager 4, 7, 10, 14 og 21) for å kunne fastslå hvorvidt PSP kombinert med Acacia kunne forsterke den kjente IgM titer nivå i henhold til NP-CGG modell. I denne modellen vil vi forvente at IgM titer nivå til topp på dag 10. Eventuelle avvik som et skifte i denne toppen eller tidligere eller senere endringer vil bli reflektert i denne maksimums oppstår ved ulike tidspunkt. Interessant nok har vi funnet en signifikant reduksjon i serum NP spesifikke IgM-titer nivåer i mus behandlet med PSP på dager 4 og 21 (figur 3B og 3F) sammenlignet med de som ble behandlet med Acacia (P 0,05). I motsetning til dette har vi funnet en signifikant økning i Acacia gruppen sammenlignet med NP-CGG kontrollgruppen (P 0,05) på dag 21 (figur 3F). MQ-gruppen viste en svak økning i serum NP spesifikke IgM titernivåer ved dag 10 som er mer synlig på dag 21 (Figur 3D og 3F), selv om de ikke var signifikant forskjellig fra en hvilken som helst av de andre gruppene. Det var ingen signifikante forskjeller i NP spesifikke IgM titernivåer på 7, 10 eller 14 dager etter immunisering i PSP eller akasie grupper eller i MQ eller NP-CGG kontrollgrupper (P 0,05) (figur 3C-3E).
C57BL /6 mus ble immunisert med NP
25CGG og serum ble oppsamlet på dagene 0, 4, 7, 10, 14 og 21. NP-spesifikke IgM-titere ble målt fra to-ganger fortynnet i serie ( 1 /40-1 /80) serumprøver ved hjelp av ELISA. ACACIA økte signifikant NP-spesifikke IgM-respons på dag 21 sammenlignet med NP-CGG alene. Data er vist som median fra to uavhengige eksperimenter med 5-6 mus pr gruppe. * P 0,05.
PSP øker NP-spesifikke IgG titernivåer på dag 4
Vi vurderte IgG-nivåer som siden de følger produksjonen av IgM og IgA om mer potent i lengre sikt sekundær immun responser, IgG titernivåer ble vurdert ved hvert tidspunkt (dager 4, 7, 10, 14 og 21) for å kunne fastslå hvorvidt PSP kombinert med Acacia kunne forsterke den kjente IgG-titer nivå i henhold til NP-CGG modell. I denne modellen vil vi forvente at IgG titre nivå til topp på dag 14. Eventuelle avvik som et skifte i denne toppen eller tidligere eller senere endringer vil bli reflektert i denne maksimums oppstår ved ulike tidspunkt. Vi har funnet en signifikant økning i lav affinitet NP-spesifikke IgG-serum titernivåer i mus behandlet med PSP på dag 4 i forhold til Acacia (P 0.05) som vist i figur 4. Denne økning i titer nivå på dag 4 forekommer mye tidligere enn forventet. Forholdet mellom ekspresjonen av den totale høy affinitet til lavaffinitets NP-spesifikt IgG antistoffrespons var signifikant for Acacia ved dag 4 (P = 0,008) sammenlignet med PSP (figur 4). MQ-gruppen viste en svak økning i NP spesifikk IgG-serum titernivåer ved dag 10 som er mer synlig på dag 21 (Figur 4D og 4F) for både den totale høy affinitet og lav affinitet responser, selv om de ikke var signifikant forskjellig fra en hvilken som helst av de andre grupper.
uttrykk for den totale høy affinitet og lav affinitet NP-spesifikke IgG titer ble målt fra to ganger serielt utvannet serumprøver (fra 1 /40-1 /80 for dag 4-1 /8000- 1/10000 for dag 10 og utover) bruker NP
2-per BSA (NP
2) og NP henholdsvis
18 per BSA (NP
18) ved ELISA. Den lave affinitet NP-spesifikke IgG-antistoffresponser til Acacia var signifikant på dag 4, men ikke på noe annet tidspunkt (dag 7, 10, 14 eller 21) i forhold til PSP. Forholdet mellom ekspresjonen av total høy affinitet og lav affinitet NP-spesifikke IgG-responser var signifikant for Acacia på dag 4 i forhold til PSP. NP
2 baseline meget lave (data ikke vist). Data er vist som median fra to uavhengige eksperimenter med 5-6 mus pr gruppe. * P 0,05.
Totalt fant vi ikke noen signifikante forskjeller i uttrykket av de totale høy affinitet eller lav affinitet NP-spesifikke IgG serumnivåer til NP-CGG på noen av de andre tidspunkter eller grupper (P 0,05).
PSP endrer ikke NP-spesifikke IgA titernivåer
Vi vurderte IgA titernivåer siden de er det første nivået av forsvaret fungerer som en nøytraliserende antistoff mot antigener invaderende gjennom slimhinnen. IgA titernivåer ble vurdert ved hvert tidspunkt (dager 4, 7, 10, 14 og 21) for å bestemme hvorvidt PSP kombinert med Acacia kunne forsterke den kjente IgA titer nivå i henhold til NP-CGG modell. I denne modellen vil vi forvente at IgA titre nivå til topp på dag 18. Eventuelle avvik som et skifte i denne toppen eller tidligere eller senere endringer vil bli reflektert i denne maksimums oppstår ved ulike tidspunkt. Som sådan, fant vi ikke noen signifikante forskjeller i NP-spesifikke IgA serumnivåer ved noen av tidspunktene undersøkte heller ikke i noen av gruppene (P 0,05). (Fig 5)
Etter NP CGG immunisering ingen endringer i IgA-antistoffresponser ble observert på noe tidspunkt (dag 0, 10, 14 eller 21) for å PSP eller acacia. NP-spesifikke IgA titere ble målt fra to-ganger fortynnet i serie (1 /50-1 /100) serumprøver ved hjelp av ELISA. Data er vist som median fra to uavhengige forsøk med 5-6 mus per gruppe.
PSP endrer ikke NP-spesifikke IgE titernivåer
Vi vurderte IgE titernivåer å herske ut om PSP er i stand til å indusere allergene effekter i denne modellen siden antigenbindende kan utløse mastcelle å frigjøre kjemiske mediatorer slik som histamin som induserer anti-parasitt immunitet og allergi. Vi fant ingen signifikante endringer i IgE nivåer på dagene 10, 14 eller 21 i PSP behandlede gruppen sammenlignet med baseline (NP-CGG gruppe på dag 0 innlegg immunisering) (P 0,05) som vist i figur 6. Det er usannsynlig at PSP utøver allergiske reaksjoner i denne modellen.
Når NP-CGG immunisering ble det ikke observert forandringer i IgE-antistoffresponser som helst punkt (dag 4, 7, 10, 14 eller 21) for å PSP NP- spesifikk IgE-titere ble målt fra to-ganger fortynnet i serie (1 /5-1 /20) serumprøver ved hjelp av ELISA. Data er vist som median fra to uavhengige forsøk med 5-6 mus per gruppe.
Diskusjoner
Kreft immunosurveillance oppstår når immunsystemets sjekke prosesser er svekket, og dermed resultere i en manglende evne til å korrekt identifisere, effektivt målrette og ødelegge kreftceller som kan føre til tumorvekst og metastasering. Mer nylig, «cancer immunoediting» har blitt brukt for å beskrive denne dynamiske elimineringsprosess, likevekt og unnslippe [37]. Mens immunterapi er en lyd målrettet tilnærming til adresse og forsterke hver av disse prosessene, bruk av urtemedisin har store løftet. Polysaccharopeptides som PSK og PSP avledet fra sopp
Coriolus versicolor
har blitt godt studert og påstått å styrke immunforsvaret med brede spenner anti-kreft aktiviteter, overdragelse en overlevelsesfordel i kreftpasienter [38]. PSK (ellers kjent som Krestin) har blitt brukt i Japan som en adjuvans til konvensjonelle anti-kreft-behandling siden 1977 [39].
På samme måte, PSP har vært brukt som en immunforsterker i Kina og har vært gjenstand for 30 år med forskning; Men til tross for omfattende
in vitro
,
in vivo Hotell og kliniske studier, den spesifikke immunologiske virkningsmekanismen er fortsatt ikke klart identifisert. Vi er de første til å rapportere bruken av et veletablert
in vivo
modell NP-CGG til urte medisiner med immunterapeutisk potensial. Vi rapporterer at PSP ikke utøve spesifikke immunologiske effekter gjennom T-celleavhengige B-celle responser. Dette kan sees i fravær av vesentlige endringer i de ulike anti NP-immunglobuliner testet inkludert IgM, IgG, IgA eller IgE (figur 3-6). Selv om vi har observert en statistisk signifikant reduksjon i serum spesifikt IgM-titer nivå hos mus behandlet PSP på dagene 4 og 21 (figur 3B og 3F) sammenlignet med de som ble behandlet med ACACIA (P 0,05), disse resultatene om små indikerer en trend. I tillegg ble det observert en signifikant økning i den totale IgG-serum-titer nivå i mus behandlet med PSP på dag 4 i forhold til Acacia (P 0.05) som vist i figur 4. I forhold til de kjente mekanikken i NP-CGG-modellen, IgG reaksjoner er sannsynlig å skje på dag 14 og utover [30], disse tidlige observerte endringene er små, men lavere enn forventet. Mens PSP ikke signifikant påvirker IgE titernivåer i mus behandlet med PSP (figur 6), er det lite sannsynlig at PSP bidrar til allergiske reaksjoner. I denne studien har vi vist en konsekvent økende trend over alle Ig klasser, unntatt IgE, til NP-CGG av PSP. Dette er konsistent med isotypeveksling IgM til IgG. IgA-responser frafalt over tid som forventet på grunn av toleranse som skyldes konsistent mucosal stimulering av gavaging. PSP produserer derfor små effekter på T-celle avhengige B-celle responser
in vivo
. Det er en trend med økende miltvekt sett fra dager 7-14 i ACACIA gruppen vekt med en tilsvarende reduksjon i kroppsvekt, selv om denne økningen ikke nådde statistisk signifikans. I tillegg har vi ikke observere noen signifikante endringer i kropps eller miltvekt i noen av gruppene målt grunn tillegg av PSP (tabell 2 og 3) eller bivirkninger forbundet med vaksinering. Økt kroppsvekt i løpet av grupper var som forventet.
Interessant effekten av akasiegummi på T-celleavhengige responser er av betydning. I motsetning til PSP, har vi funnet en signifikant økning i IgM-titer nivå i Acacia gruppen sammenlignet med NP-CGG gruppe (P 0,05) på dag 21 (figur 3F), som er senere enn forventet som IgM topper på dagen 10. det er interessant at forholdet mellom ekspresjonen av den totale høy affinitet og lav affinitet np-spesifikt IgG antistoffrespons var signifikant for Acacia ved dag 4 (P = 0,008) sammenlignet med PSP (figur 4), også forekomme tidligere enn forventet. Det var en liten, men ikke-signifikant økning i serum NP spesifikk IgM og IgG titer nivåer for MQ, spesielt på dag 21, som kan skyldes den større variasjon av individuelle respons observert i løpet av den bestemte gruppe (P 0,05). I tillegg gjorde vi ikke finne noen signifikante forskjeller i uttrykket av den totale høy affinitet eller lav affinitet IgG serumnivåer til NP-CGG på noen av de andre tidspunkter eller grupper (P 0,05). Selv om disse resultatene tyder på at ACACIA kan påvirke T-celleavhengige B-celle responser, bretteforskjellene er små og må bekreftes. Studier har vist at akasie tyggegummi kan aktivere dendrittiske celler [31], jf medfødt og adaptiv immunitet samt utøve anti-parasittiske effekter
in vivo
.
