Abstract
Det har lenge vært ansett som kreft i bukspyttkjertelen (PC) er en livstruende ondartet svulst. Dermed har mye oppmerksomhet blitt betalt for faktorer, særlig i forhold molekyler, prediktive for prognose av PC. Imidlertid, c-fos-ekspresjon i PC ble mindre undersøkt. I tillegg sin tilknytning clinicopathologic variabler og prognose er fortsatt ukjent. I denne studien ble det uttrykk for c-fos oppdaget av vev microarray-baserte immunhistokjemisk farging i kreft og tilstøtende vev fra 333 pasienter med PC. De fargingsresultater ble korrelert med clinicopathologic parametere og total overlevelse. Videre prognostisk betydning av c-fos i undergrupper av PC ble også evaluert. Det ble vist at lavt uttrykk av c-fos var oftere i kreft enn i tilstøtende vev av PC (
P
0,001). Dessuten høy kreft c-fos uttrykk var signifikant assosiert med svulst nettstedet og T scenen, mens peri-nevrale invasjonen var en border betydelig relevans. Log-rank test viste at høyt uttrykk av c-fos i kreftvev var en signifikant markør for dårlig total overlevelse, ledsaget av noen vanlige clinicopathologic variabler som kjønn, klasse, peri-nevrale invasjon, T- og N etapper. Enda viktigere, ble kreft c-fos ekspresjonen identifisert som en uavhengig prognosticator i multivariat analyse. Til slutt ble den prognostiske innblanding av c-fos ekspresjonen påvist i fire undergrupper av pasienter med PC. Disse data antydet at c-fos uttrykk var av relasjoner med progresjon og sturen prognose av PC
Citation. Guo J-C, Li J, Zhao Y-P, Zhou L, Cui Q-C, Zhou W-X, et al. (2015) uttrykk for c-fos var assosiert med Clinicopathologic Kjennetegn og prognose i kreft i bukspyttkjertelen. PLoS ONE 10 (3): e0120332. doi: 10,1371 /journal.pone.0120332
Academic Editor: William B. Coleman, University of North Carolina School of Medicine, USA
mottatt: 17 oktober 2014; Godkjent: 30 januar 2015; Publisert: 19 mars 2015
Copyright: © 2015 Guo et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er innenfor papir
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av National High Technology Research and Development Program (863 Program, 2014AA020609, https://program.most.gov.cn/), Kina. Den Funder hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
kreft i bukspyttkjertelen (PC) er en av de mest livstruende solide svulster, fordi denne type malignitet bærer dødeligheten nesten lik sin forekomst [1]. Det ble nylig oppsummert at bedring i langsiktig prognose for PC, selv om kirurgisk reseksjon var mer og mer anvendt, ble ikke nådd i løpet av to tiår [2]. Derfor har utforskning av prognostiske markører for PC vært hotspot av studien. Så langt, mange kliniske og patologiske seg, for eksempel lymfeknute status, nevrale invasjon, svulst markør nivåer og reseksjon margin, ble identifisert [3-8]. På den annen side, ble konsekvensene av molekyler som er involvert i tumor patogenesen og progresjon på prognose fra PC gradvis verdsatt og nylig anmeldt [9,10]. Selvfølgelig flere molekylære kunngjør trenger å bli oppdaget
Det har vært vel kjent at c-fos (den humane homologen av den retrovirale oncogene v-Fos), en av hovedkomponentene i aktivator protein (AP). – en kompleks, formidler kreft vekst, angiogenese, invasjon og metastasering, ved å regulere uttrykk for nedstrømsgener [11]. Funnene som c-fos uttrykk var signifikant assosiert med tilbakefall, metastasering og dårlig prognose i plateepitel lungekreft, brystkreft og osteosarkom gitt sitt potensial som et proto-onkogen [12-14]. Men andre data antydet at pasienter med høy c-fos uttrykk gjennomført gunstig å overleve i tykktarms, eggstokkreft og magekreft [15-18]. Således kan c-fos ekspresjonen og dens biologiske effekter være vevstype-spesifikke. I PC, ble helt andre positiver av c-fos og dens uønskede forbindelser med maligne fenotype, for eksempel lymfeknutemetastase og multimedikamentresistens, som tidligere rapportert [19-22]. Men dens clinicopathologic og prognostiske betydninger i PC er fortsatt ukjent.
I denne studien, forfatterne tok sikte på å løse problemene, basert på en stor kinesisk kohort med PC.
Materialer og metoder
pasienter
studiet kohorten besto av 333 pasienter med PC, inkludert 206 menn og 127 kvinner. Alderen varierte 34-85 (median: 60) år. Pasientutvelgelseskriterier: (1) Histologisk påvist adenokarsinom; (2) Kirurgisk resected eksemplarer tilgjengelig; (3) finnes Clinicopathologic data. Tabell 1 oppsummerer clinicopathologic karakteristika for pasientene. De sammenkoblede formalinfikserte parafininnstøpte kreft og ikke-cancervev for pasienter ble benyttet. Den skriftlig informert samtykke fra alle pasientene ble oppnådd. Prosjektet (inkludert sitt samtykke prosedyre) ble godkjent av etikkomiteen av Peking Union Medical College Hospital.
Bygging av Tissue microarray (TMA)
Tissue microarray byggingen ble utført i henhold til metoder og standarder samme med de som tidligere er rapportert [23]
immunhistokjemisk farging
En kanin anti-human polyklonale antistoff for c-fos (sc-52, fortynning. 1: 50, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA), og en to-trinns immunfarging kit (EnVision
TM + kit, Dako, Danmark) ble anvendt for farging. Den blokkerer peptid (Santa Cruz) ble vedtatt for spesifisitet validering av det primære antistoff. Objektglass ble farget i overensstemmelse med fremgangsmåten som tidligere ble brukt [23]. Ikke-immune kaninserum på samme fortynning ble vedtatt som negativ kontroll.
Evaluering av Farging Resultater
To uavhengige patologer som ble blindet til clinicopathologic og overlevelsesdata (QCC og WXZ) evaluert fargings resultater. Den brune nukleær og /eller cytoplasma farging ble definert som det positive signal. Ifølge tidligere foreslått [24], forholdet mellom positive celler ble delt inn i tre karakterer (0-10%, klasse 1; 10-≥50%, klasse 2; 50%, grad 3). På den annen side, ble fargeintensitet også scoret tre grupper (svake, scorer ett, moderate, scorer to, intensiv-, scorer 3). Den endelige karakteren ble oppnådd ved multiplikasjon av positive forholdet karakter og intensitet score (vist i tabell 1), og delt inn i lav (sluttkarakteren 6). Og høye uttrykk (sluttkarakteren ≥6)
opp- opp
Oppfølging (median: 14 måneder, range: 2 til 87 måneder) ble utført for 229 pasienter, hovedsakelig gjennom poliklinikk, telefon og e-post. Under oppfølgings sikt, har 170 pasienter døde.
Statistical Analysis
McNemar test og Pearsons korrelasjonsanalyse ble brukt for å sammenligne c-fos uttrykk mellom kreft og tilstøtende ikke-kreft vev, og for å vise sammenhengen mellom dem. Sammenhengen mellom c-fos uttrykk og clinicopathologic egenskaper ble avslørt av Chi-kvadrat test. Kaplan-Meier metoden og log-rank test ble brukt for å estimere total overlevelse og deres forskjeller. Multivariat Cox regresjon (proporsjonal risikomodell) analyse ble utført for identifisering av uavhengige prognostiske faktorer. Alle analysene ble avsluttet med statistisk programvarepakke SPSS11.5 (SPSS Inc, Chicago, IL). En
P
verdi mindre enn 0,05 ble definert som statistisk signifikant.
Resultater
Uttrykk av c-fos og sin tilknytning til Clinicopathologic Kjennetegn i PC
det ble vist at det positive signal hovedsakelig lokalisert i cellekjernen, og blir også sett i cytoplasma (fig. 1). Etter behandling med sperre peptidet, det funn at positivt signal forsvant (S1 fig.) Bekreftet spesifisiteten av det primære antistoff. Lave og høye uttrykk ble funnet i kreftvev fra 167 og 166 pasienter med PC, og tilstøtende ikke-kreft vev fra 63 og 270 personer. Lav c-fos uttrykk var mer vanlig i kreft enn i tilstøtende vev (
P
0,001, McNemar test). Det var signifikant korrelasjon mellom c-fos uttrykk i kreftvevet, og at i tilstøtende ikke-kreft vev (
P
0,001, Pearsons korrelasjonsanalyse). Chi-kvadrat analyse viste at høy kreft c-fos uttrykk var signifikant hyppigere i ikke-hode og T3 svulster, sammenlignet med hodet og T1-2 seg, henholdsvis (Tabell 2,
P
= 0,013 og 0,017). Videre c-fos uttrykk i kreftvevet var marginalt signifikant sammenheng med perinevral invasjon (tabell 2,
P
= 0,069). Uttrykk av c-fos i tilstøtende vev var ikke relatert til clinicopathologic parametre inkludert (data ikke vist).
(A) Høy uttrykk i kreftvev (original forstørrelse × 200). (B) Høy uttrykk i tilstøtende ikke-kreft vev (opprinnelig forstørrelse × 200).
Prognostic Betydningen av c-fos i hele Cohort of PC
Univariat analyse i hele kohort av PC viste at høy kreft c-fos ekspresjonen forutsagte forkortet total overlevelse (
P
= 0,020, fig. 2 og tabell 3), i tillegg til kjønn, histologiske grad, perinevral invasjon, og T N stadier (
P
0,05, tabell 3). Multivariat Cox regresjon definert c-fos uttrykk som en av uavhengige prognostiske indikatorer for total overlevelse av PC (
P
= 0,022, Tabell 3).
Påvirkninger av c- fos uttrykk på total overlevelse i delsett av PC
Fordi denne studien evaluert åtte clinicopathologic variabler, ble pasientene delt inn i seksten undergrupper. Univariat analyse definert kreft c-fos uttrykk som en signifikant prediktor for total overlevelse i fire enere, dvs. mannlige pasienter, svulster ≤4cm, N0 svulster og de uten perinevral invasjon (
P
0,05, Fig. 3) . Cox regresjonsanalyse etablert at c-fos uttrykk i kreftvevet var av uavhengig prognostisk implikasjon hos menn, N0 svulster og de uten perinevral invasjon (
P
0,05, tabell 4).
( A) Mannlige pasienter (
P
= 0,006). (B) Svulster ≤4cm (
P
= 0,026). (C) Svulster uten peri-nevrale invasjon (
P
= 0,039). (D) N0 svulster (
P
= 0,008). N, lymfeknute.
Diskusjoner
Som et viktig medlem av fos familien av transkripsjonsfaktorer, ble c-fos vist seg å være en viktig regulator av spredning, differensiering , angiogenese, invasjon og metastase av cancer, gjennom AP-1-relaterte mekanismer [11]. Men det er interessant at c-fos spiller forskjellige, selv motsatte roller i ulike kreftformer. I bryst og blære kreftformer samt glioma celler [25-28], synes c-fos å ha pro-onkogene egenskaper, i motsetning til i eggstokkreft [29]. Selv i en samme type malignitet, PC, resultater om uttrykk og fenotyper av c-fos fortsatt å være inkonsekvent. Ved hjelp av immunhistokjemi for noen få individer, Lee et al. [19] fant at c-fos ble sterkt uttrykt i PC vev, men bare svakt uttrykk ble observert i et lite antall pasienter som deltok i en annen studie [20]. Videre funn som c-fos ble nedregulert i PC med lymfeknutemetastase og økte c-fos uttrykk indusert multiresistens 1 (MDR1) i PC-celler indikerer de komplekse roller molekylet i PC [21,22]. Andre undersøkelser som viste at c-fos bidrar til cellemotilitet [30], og fungerer som en av målene for noen tumorsuppressorgener [31,32], støtte sin onkogene potensial i PC. I dagens etterforskning, uttrykk for c-fos ble først oppdaget for mer enn 300 pasienter med PC. Det er uventet at lav c-fos uttrykk er hyppigere i kreft enn i tilstøtende ikke-kreft vev (McNemar test). Deretter ble de positive /potensielt positive assosiasjoner mellom høy c-fos uttrykk og senere T scenen samt tilstedeværelse av perinevral invasjon vist. Resultatene tyder på at c-fos kan spille viktige roller i både initiering og progresjon av PC. Tidligere arbeid funnet at c-fos-indusert inflammasjon-mediert tumorigenesis [33]. I tillegg ble kronisk pankreatitt (CP) kjent som et vesentlig etiologisk faktor på PC [34]. Derfor, om c-fos spiller en viktig rolle i prosessen fra CP til PC kan være av interesse. Det ble foreslått at K-ras, en avgjørende muterte genet i både CP og PC, aktivert Raf /MEK /ekstracellulære signalregulerte kinase (ERK) sti gjennom en kompleks kaskade [34], mens ERK, en slags mitogen-aktivert protein kinase (MAPK), var involvert i aktivering av c-fos [35]. Dermed kan høy c-fos uttrykk i tilstøtende ikke-kreft vev i denne studien gi en foreløpig anelse av konsekvensene ved konvertering fra betennelse til malignitet i bukspyttkjertelen. På den annen side ble kreft c-fos ekspresjonen viste seg å være signifikant og marginalt signifikant assosiert med T scene og perinevral invasjon, noe som indikerer at denne transkripsjonen faktor kan være en promoter av PC progresjon. Tatt sammen, våre data understøttet at c-fos tjener som et proto-onkogen i løpet av malign transformasjon til progresjon i PC, forskjellig med forrige viser nedregulering av c-fos i PC med lymfeknutemetastase [21]. I fremtiden, detaljerte undersøkelser for fenotyper og relative mekanismer verdt å bli gjort.
Det ble vist at c-fos var knyttet til dårlig eller god prognose i mange typer kreft [12-18]. Imidlertid har sin betydning for utfallet av PC ikke blitt klarlagt. Her rapporterer vi at høy c-fos uttrykk i kreftvev var assosiert med utilfredsstillende total overlevelse i både univariate og multivariate analyser, presentere sin makt som en sterk prediktor for dyster prognose i PC. Resultatene som c-fos var av uavhengig prognostisk betydning i noen undergrupper av PC styrke sin prognostisk rolle. Disse funnene, støttet av den positive sammenhengen mellom c-fos uttrykk og ondartede fenotyper av PC etablert i denne studien, er i overensstemmelse med de som stammer fra osteosarkom, lunge- og brystkreft [12-14]. Ingen tvil om disse overlevelse analyseresultater indikerer også funksjonen av c-fos som et proto-onkogen.
I konklusjonen, våre data viste at c-fos uttrykk er knyttet til progresjon og dystre prognose av PC. Dermed kan dette proteinet være en roman molekylære produsent av PC.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 Fig. Spesifisitet validering av det primære antistoff mot c-fos i bukspyttkjertelkreft. Product: (A) Med blokking peptid (opprinnelig forstørrelse x 200). (B) uten å blokkere peptid (opprinnelig forstørrelse × 200)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0120332.s001 plakater (TIF)
