Abstract
Nyere data skaffe bevis for en viktig rolle trombocytter i lymphangiogenesis innen human ondartet sykdom. Målet med denne studien var å undersøke hvilken rolle trombocytter i lymphangiogenesis i menneskelig esophageal kreft. Perioperative perifere blodplater (PBPC) ble evaluert i ettertid i 320 pasienter med spiserørskreft, som består av 184 adenokarsinomer (AC), og 136 plateepitelkarsinom (SCC). Data om lymphangiogenesis evaluert av anti-podoplanin farging var tilgjengelig fra tidligere studier, ble blodplater innenfor svulstvev vurdert av CD61 farging. For
in vitro
studier ble menneskelige lymfatiske endotelceller (LMU) isolert og co-kultivert med perifere blodplater. Stromale trombocytopen klynger (STC) var tydelig i 82 prøver (25,6%), og vaskulære trombocytopen klynger (VTC) i 56 (17,5%). STC og VTC var assosiert med en signifikant høyere PBPC ved granskning av alle tilfeller. Tilstedeværelsen av STC var assosiert med høyere lymfatisk microvessel tetthet (p 0,001), ble PBPC og STC forbundet med lymphovascular invasjon av tumorceller i en regresjonsmodell. Tilstedeværelsen av STCs var assosiert med kortere DFS av alle pasienter (p = 0,036, Breslow test), og VTC med kortere DFS i i SCC (p = 0,025, Breslow test). I cellekultur, ble LEC spredning forsterket av co-kultur med humane blodplater i en dose- og tidsavhengig måte formidlet av utgivelsen av PDGF-BB og VEGF-C. Blodplater spiller en viktig rolle i lymphangiogenesis og lymphovascular invasjonen i spiserørskreft, påvirker prognose. Så avbrudd av signalveier mellom blodplater, tumorceller og lymfesystemet endotelet kan være til nytte for pasienter
Citation. Schoppmann SF, Alidzanovic L, Schult A, Perkmann T, Brostjan C, Birner P (2013) Trombocytter korrelerer med Lymphangiogenesis i human Esophageal Cancer og Mediate Vekst av lymphatic endotelceller
in vitro
. PLoS ONE 8 (6): e66941. doi: 10,1371 /journal.pone.0066941
Redaktør: Claudia Daniela andl, Vanderbilt University, USA
mottatt: 8 april 2013; Godkjent: 13 mai 2013; Publisert: 26 juni 2013
Copyright: © 2013 Schoppmann et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Forfatterne har ingen støtte eller finansiering for å rapportere
konkurrerende interesser:. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Esophageal adenokarsinomer (AC) av gastroøsofageal krysset er. antas å være hovedsakelig forårsaket av gastroøsofageal refluks, mens plateepitelkarsinom (SCC) er i hovedsak knyttet til alkohol og tobakk [1], [2]. I de siste tiårene, har forekomsten av AC hevet seg dramatisk i vestlige land [3]. Til tross for multimodale terapeutiske strategier, samlede resultatet for pasienter med gastroøsofageal kreft forblir fattige. Så nye terapeutiske begreper er sterkt behov for, og innsikt i patofysiologien av sykdommen er en forutsetning for deres utvikling. Som mange andre karsinomer, esophageal kreft hovedsakelig spres gjennom lymfesystemet, og lymphovascular invasjon av tumorceller er assosiert med redusert prognosen for pasienter [4].
I dag slående bevis eksisterer som svulster kan etablere ikke bare sitt eget blod fartøy forsyning, men kan også føre til dannelse av nye lymfekar (lymphangiogenesis) og migrere aktivt inn i dette nydannede fartøy for å fremme deres spredning [5].
Så mulig hemming av denne prosessen kan være til nytte for pasienter, særlig ettersom nyere data tyder på at prosessen med lymphangiogenesis og lymfekar invasjon (LVI) er ikke bare begrenset til primærsvulster, men er også tydelig i lymfeknutemetastaser, noe som resulterer i ytterligere spredning av kreftceller [6].
dannelsen av tumorassosierte lymfekar er en kompleks prosess og for tiden bare delvis er forstått. Under embryonal angiogenese, blodplater synes å spille en nøkkelrolle i å skille blod og lymfatiske blodkar [7]. Men det er økende bevis for at blodplater kan samhandle med den menneskelige lymfesystemet også i ondartet sykdom, og kan legge til rette for lymphangiogenesis og metastase [8], [9].
Formålet med denne studien var å undersøke hvilken rolle av blodplater med hensyn til lymphangiogenesis i menneskelig esophageal kreft.
Materialer og metoder
pasienter
Alle pasienter som gjennomgikk kirurgisk fjerning av karsinom i spiserøret eller gastroøsofageal krysset mellom 1992 og 2011 på Kirurgisk avdeling, Medical University of Vienna, ble inkludert i denne studien hvis tilstrekkelig vev og preoperativ trombocytopen telling var tilgjengelig. Svulster av alle pasienter ble vurdert på nytt i henhold til UICC syvende utgaven TNM staging.
Etikk erklæringen
Institutional Review Board godkjenning ble innhentet (Institutional Review Board of Medical University of Vienna, Østerrike, EK 1122/2009). På grunn av den retrospektive natur denne studien, kun ved hjelp arkivert vev, ble ikke informert samtykke fra pasientene trengte og fikk, som er godkjent av vurdering bord. De spesifikke eksempler brukt i denne studien har allerede blitt brukt i tidligere publikasjoner [4], [10] -. [15]
Analyse av perifer blodplater (PBPC)
PBPC av pasienter ble bestemt rutinemessig før operasjonen og også før oppstart av neoadjuvant kjemoterapi, hvis administreres.
Analyse av PBPC ble rutinemessig utført på standard automatiserte hematologianalysatorer ved Institutt for laboratoriemedisin, Medical University of Vienna. I løpet av observasjonsperioden 1992-2011 følgende hematologianalysatorer benyttet: inntil 1995 Coulter STKS (Coulter, Hialeah, FL), 1995-2001 Sysmex NE-8000 (TOA Medical Electronics, Kobe, Japan), siden 2001 Sysmex XE- 2100 (Sysmex Corporation, Kobe, Japan).
Farging
Immunohistochemistry (IHC) ble utført på parafininnstøpte prøvene faste i 4% bufret formalin, ved hjelp av tre mikrometer tykke histologiske snitt.
data~~POS=TRUNC på lymfekar vurdert av monoklonale mus anti-podoplanin antistoff D2-40 (Ventana Medical Systems, Tucson, Arizona) var tilgjengelig fra tidligere studier [4], [15].
For deteksjon av trombocytter farging ble utført ved hjelp av et monoklonalt anti CD61 antistoff (NCL-CD61-308, Leica Biosystems, Newcastle, UK) i en fortynning av 1:1600. En Benchmark Ultra immunostainer (Ventana Medical Systems, Tucson, Arizona) ble brukt for immunhistokjemi
Analyse av anti-podoplanin farging ble utført som beskrevet tidligere [16].
I korte trekk, for bestemmelse av LMVD, området innenfor eller i direkte tilknytning til kreftformasjoner med flest tydelig markerte microvessels ( «hot spot») ble valgt ved lav forstørrelse. LMVD ble deretter bestemt ved å telle alle immunostained skip til en samlet forstørrelse på x200 i en undersøkelse område på 0,25 mm
2. En sak ble ansett som positivt med hensyn til LVI når ved skanning av hele immunostained skyve en svulst celle klynge var synlig innenfor en podoplanin dekorert vaskulære rommet.
For analyse av anti-CD61 farging, overfladisk, exulcerated eller blødning tumor områder ble ekskludert fra analysen. En svulst ble scoret som positive for trombocytopen klynger i skip (VTC), dersom minst to fartøy slike klynger ble sett (figur 1A.)
A:. Vaskulær trombocytopen cluster (VTC) i en spiserørskreft prøven (opprinnelig forstørrelse x400). B: stromal trombocytopen cluster (STC) i en spiserørskreft prøven vurderes av anti – CD61 farging (original forstørrelse x400). C: spiserørskreft prøven med høy lymfatisk microvessel tetthet (LMVD) vurdert av anti- podoplanin farging (original forstørrelse x200). D: Lymphovascular invasjon av tumorceller vurderes av anti-podoplanin farging (original forstørrelse x200). E: Double farging for lymfekar bruker (rød, anti-podoplanin) og trombocytter (brun, anti- CD61) (original forstørrelse x400). F-H: Feilfelt som viser gjennomsnittsverdier ± 2 × standard feil. Perifere blodplater (PBPC) var signifikant høyere i prøvene med VTC (F). PBPC (G) og LMVD (H) var signifikant høyere i spiserørskreft prøver med STC.
A tumor ble betraktet som viser trombocytopen klynger i tumoren stroma (STC), hvis mer enn en utvetydig CD61 immunostained cluster var synlig i tumor stroma (fig. 1B).
Analyse av immunhistokjemi ble utført av to uavhengige etterforskere (SFS, PB) blindet for kliniske data. Tilfeller med avvikende resultater ble evaluert sammen med en mangehodet mikroskop.
Statistical Analysis
T-test, Mann-Whitney test, Chi kvadrat tester og lineær regresjon ble brukt som passer. Alle tallene gitt er middelverdier ± standardavvik, hvis ikke annet er angitt.
total overlevelse (OS) ble definert som tiden mellom primær kirurgi og pasientens død, overlevelse inntil slutten av observasjonsperioden ble ansett som sensurert observasjon. Sykdomsfri overlevelse (DFS) ble definert som tiden fra operasjonsdagen inntil første bevis på sykdomsprogresjon. Univariat analyse av overlevelse ble utført ved hjelp av Breslow test, multivariat analyse ved hjelp av Cox proportional- farer modell. Pasienter alder, radikalitet av reseksjon, tumor og lymfeknute trinn (i henhold til gjeldende UICC klassifisering), tumor karakter og lymfeknute status ble inkludert i Cox regresjon. En to-tailed p-verdi på ≤0.05 ble ansett som signifikant, ble SPSS 19.0 brukt for alle beregninger.
endotelcelle Isolering og kultur
Primære endotelceller ble isolert fra human forhud prøver ved proteolytisk spaltningen, og renset ved anvendelse av anti-CD31 antistoff koblet magnetiske kuler (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA). Isolater ble dyrket i mikrovaskulær endotelial vekstmedium EGM2-MV (Clonetics®, Lonza, Walkersville, MD) inneholdende 1 pg /ml fibronektin, 5% FCS og humane vekstfaktorer uten tilskudd av vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF). For ytterligere separasjon av lymfesystemet og blod endotelceller (LMU og Wien), anti-podoplanin antistoff kombinert magnetiske kuler ble brukt. Alle isolatene viste ≥98% renhet og levedyktighet.
Celler ble sådd ut ved en tetthet på 1 x 10
5 i 30 mm brønner i 24 timer. Etter grundig vasking med fosfatbufret saltløsning, ble celler inkubert med 10
5-10
7 gel filtrerte blodplater i EBM-2 basisk medium (Lonza) inneholdende 0,5% FCS. For blokkerende forsøk ble de følgende reagenser tilsatt til co-kulturer: geite-anti-human PDGFR-β nøytraliserende IgG ved 1 ug /ml (R 0,05, t-test), ble PBPC etter neoadjuvant kjemoterapi (umiddelbart før kirurgi) som ble brukt ved disse pasientene for analyse. STC var til stede i 82 prøver (25,6%, 36 AC, 46 SCC), VTC i 56 (17,5%, 22 AC, 34 SCC). Figur 1 viser eksempler på immunfarging. Vanligvis STC (p = 0,004, Chi Square test) og VTC (p = 0,002, Chi kvadrat test) var mer vanlig i SCC sammenlignet med AC. En signifikant sammenheng mellom tilstedeværelsen konverteringene fra visninger og STCs ble sett ved undersøkelse av alle tilfeller og ved undersøkelse av AC og SCC separat. (P 0,001 henholdsvis Chi kvadrat test)
Selv om ingen tilknytning til tilstedeværelsen av STC med svulst staging og histologisk gradering ble sett i alle tilfeller og AC, i SCC mer avansert lymfeknute status ble sett i svulster med STC (median på PN1 i begge tilfeller, p = 0,024, Mann Whitney test).
tilstedeværelsen av VTC var assosiert med mer avansert tumor stadium i alle tilfeller (median på pT3 i begge tilfeller med en trend mot høyere iscenesettelse hos pasienter med VTC, p = 0,036, Mann Whitney test), men denne foreningen ble ikke sett når undersøker AC og SCC separat.
PBPC var høyere i tilfeller med VTC ved undersøkelse av alle tilfeller (275 ± 83 vs. 250 ± 79 g /l, p = 0,001, t-test) (fig. 1F ), men denne forbindelsen ble sett ved egen granskning av tumortyper bare i SCC (282 ± 75 vs. 243 ± 81 g /l; p = 0,007, t-test), men ikke i AC (p = 0,077, t-test) . Ingen sammenslutning av VTC med LMVD ble sett i alle tilfeller og AC og SCC separat. (P 0,05, t-test).
Tilstedeværelsen av STC var assosiert med en høyere PBPC ved undersøkelse av alle tilfeller sammenlignet med pasienter uten STC (279 ± 88 g /l vs. 246 ± 76 G /l; p = 0,001, t-test) (figur 1G).. Ved undersøkelse av tumortyper hver for seg, ble en slik sammenheng funnet bare i SCC (282 ± 75 g /l vs. 243 ± 82 g /l, p = 0,007, t-test), men tapte betydning i AC (274 ± 101 G /l vs. 247 ± 73 g /l, p = 0,077, t-test). Tilstedeværelsen av STC var assosiert med høyere LMVD i alle tilfeller (16 ± 7 vs. 12 ± 5 microvessels /idrettsplass; p 0,001, t-test) (Fig. 1 H) og også i AC (16 ± 6 vs. 12 ± 5 microvessels /felt, p 0,001, t-test) og SCC (17 ± 7 vs. 13 ± 6, p = 0,002, t-test) separat
Ingen direkte sammenslutning av STC eller VTC med LVI. ble observert (p 0,05, Chi-square test)., men i en lineær regresjonsmodell med LVI som avhengig variabel og med PBPC, STC og VTC viste at PBPC (p = 0,035, koeffisient for regresjon 0,001) og VTC (p = 0,018, regresjonskoeffisient 0175) var assosiert med LVI.
i en annen lineær regresjonsmodell med LMVD som avhengig variabel, inkludert de samme uavhengige variablene, igjen PBPC (p = 0,034, regresjonskoeffisient -0,009) og STC. (p 0,001, regresjonskoeffisient 5,415) påvirket LMVD
Survival Analysis
Mean observasjonstid var 50 ± 3 (standard feil) måneder, i løpet av denne observasjonsperioden, 154 pasienter (48,1 %) utviklet tilbakevendende sykdom, og 131 (40,9%) døde.
tilstedeværelsen av STC var assosiert med kortere DFS av alle tilfeller i univariat analyse (p = 0,036, Breslow test, fig. 2A). Ved undersøkelse av tumortyper Separat ble ingen slik påvirkning finner i AC, men ved analyse av SCC (p = 0,037, Breslow test, fig. 2B). STC var assosiert med kortere DFS i multivariat analyse av AC (p = 0,022, Cox regresjon, tabell 2, figur 2C.)
Fig.2A. Tilstedeværelse av stromale trombocytopen klynger (STC) var assosiert med kortere DFS i alle tilfeller. Ved undersøkelse av tumortyper hver for seg, ble STC forbundet med kortere DFS i squamous cellekreft (SCC) (fig. 2B), så vel som i adenocarcinoma (AC) (Fig. 2C). Fig. 2D: Tilstedeværelse av vaskulære trombocytopen klynger (VTC) var assosiert med kortere DFS i SCC. Fig. 2E: Overraskende, VTC var assosiert med signifikant lengre DFS i AC i multivariat analyse. Likevel oppmerksom på at kun relativt få hendelser er sett i VTC + kurve, og kurver krysser hverandre over, kvalifiserer dette funnet. Fig. 2F: VTC var assosiert med kortere OS i SCC
Ingen påvirkning av STC ble sett på OS ved undersøkelse av alle tilfeller, så vel på etterforskning av AC og SCC separat (p 0,05. , Breslow test eller Cox regresjon, henholdsvis. tabell 2)
Ingen relevansen av VTC på DFS ble sett ved granskning av alle tilfeller. Ved undersøkelse av AC og SCC separat, ble VTC assosiert med kortere DFS i univariat analyse i SCC (p = 0,025, Breslow test, median DFS 506 ± 82 vs. 794 ± 139 dager, Fig. 2D), men i forbindelse med lengre DFS i multivariat analyse av AC (p = 0,008, Cox regresjon, median DFS 2928 ± 990 vs. 700 ± 141 dager, figur 2E). Tilstedeværelse av VTC var også assosiert med betydelig kortere OS i SCC (p = 0,049, Breslow test, Fig 2F.)
PBPC var ikke assosiert med DFS eller OS i uni-eller multivariat analyse (p . 0.05, uni- eller multivariat Cox regresjon, henholdsvis).
Cell Kultur
LMU ble sådd på 1 × 10∧5 per 30 mm godt, og etter 24 timer isolerte blodplater ble lagt på 3 × 10 ∧7, 10∧6 eller 10∧5 per brønn, og cellene ble dyrket i en annen 48 timer. Som vist i figur 3A-E, telle LEC celle økte med antallet av tilsatte isolerte blodplater, noe som indikerer at LEC spredning forsterkes ved ko-kultur med humane blodplater i en doseavhengig måte
A:. LEC spredning forsterkes ved ko-kultur med humane blodplater i en doseavhengig måte. LMU ble sådd på 1 × 10∧5 per 30 mm godt. Etter 24 timer isolerte blodplater ble tilsatt ved 3 x 10∧7, 10∧6 eller 10∧5 per brønn, og cellene ble dyrket i en annen 48 timer. For kvantifisering av celleproliferasjon, ble LEC tellingen bestemmes (sorte stolper, høyre akse) og den metabolske aktiviteten ble målt ved reduksjon tetrazolium assay (hvite streker, venstre skala). B-E: Tilsvar mikroskopiske bilder til A: B: Kontroll; C: EC + Px10∧7, D: EC + Px10∧6, E: EC + Px10∧5. F: LEC spredning forsterkes ved ko-kultur med humane blodplater i en tidsavhengig måte. LMU ble sådd på 1 × 10∧5 per 30 mm godt. 24 timer senere isolerte blodplater ble tilsatt ved 1 x 10∧7 per brønn, og cellene ble dyrket i ytterligere 24, 48 og 72 timer. Celletall ble bestemt for LEC-blodplate-ko-kulturer (heltrukket linje) sammenlignet med LMUene uten blodplate-tilsetning (stiplet linje). G + H: Vekst faktor utgivelse i løpet av co-kulturen i LMU og humane blodplater. LMU ble sådd på 1 × 10∧5 per 30 mm godt. Etter 24 timer isolerte blodplater ble tilsatt ved 7 x 10∧7, 10∧6 eller 10∧5 per brønn, og cellene ble dyrket i en annen 48 timer. Kultursupernatant ble høstet, sentrifugert (for å fjerne cellulære komponenter) og deretter analysert med hensyn på konsentrasjonen av PDGF-BB (G) og VEGF-C (H) ved hjelp av enzymbundet immunosorbent assay. I: Blodplate-indusert proliferasjon LEC medieres av PDGFRp, VEGFR-2 og -3. LMU ble sådd på 1 × 10∧5 per 30 mm godt. Etter 24 timer isolerte blodplater ble tilsatt ved 7 x 10∧7 per brønn med eller uten sperre reagenser mot PDGFRß, VEGFR-2 og /eller VEGFR-3. Cellene ble dyrket i ytterligere 48 timer før bestemme LEC teller.
Som andre forsøket undersøkte vi om LEC spredning forsterkes av humane blodplater i en tidsavhengig måte. For dette formål, ble blodplater på 1 x 10∧7 per brønn tilsatt til isolerte LMUene (1 x 10∧5 per 30 mm brønn) og cellene ble dyrket i ytterligere 24, 48 og 72 timer. Fig. 3F viser at LEC spredning forsterkes av co-kultur med humane blodplater i en tidsavhengig måte i forhold til LMU uten plate tillegg.
Som neste skritt, undersøkte vi om pro-lymphangiogenic faktorer som lanseres i løpet co-kultur av LMU og blodplater. Isolerte blodplater ble tilsatt ved 7 x 10∧7, 10∧6 eller 10∧5 per brønn til LMUene (1 x 10∧5 per 30 mm brønn) etter 24 timer, og cellene ble dyrket i en annen 48 timer. Kultursupernatant ble høstet, sentrifugert for å fjerne cellekomponentene og deretter analysert med hensyn på konsentrasjonen av PDGF-BB og VEGF-C ved hjelp av enzymbundet immunosorbent assay.
Figur 3G og 3H viser at ved en blodplatekonsentrasjon på 10∧ 6, ble PDGFR-β og VEGF-C sluppet, og denne utgivelsen av vekstfaktorer ble sterkt økt på en platekonsentrasjon av 10∧7
Som et siste trinn, ble blokkerer eksperimenter utført.
LMU ble sådd på 1 × 10∧5 per 30 mm godt. Etter 24 timer isolerte blodplater ble tilsatt ved 7 x 10∧7 per brønn med eller uten sperre reagenser mot PDGFRß, VEGFR-2 og /eller VEGFR-3. Cellene ble dyrket i ytterligere 48 timer før bestemme LEC teller. Fig. 3I viser at LEC celleproliferasjon ble delvis redusert ved tilsetning av de individuelle forbindelsene i forhold til LEC /blodplate-ko-kultur uten å blokkere stoffer. Inhibering av VEGFR-3 (blokkering av VEGF-C-signalering) var mest potente og redusert blodplate-mediert LEC proliferasjon med 90%. Denne effekten kan ikke bli ytterligere forbedret ved kombinasjon med anti-PDGFRß og anti-VEGFR-2 antistoffer
Diskusjoner
Blodplater spiller en viktig rolle i menneskelig ondartet sykdom. Så det har vært vist i mange studier som preoperativ forhøyet perifer blodplater spår dårlig prognose i en rekke av kreft hos mennesker [17] blant dem også magekreft [18].
i spiserørskreft (SCC og AC), en økning i antall blodplater etter en bloc reseksjon har blitt rapportert å være assosiert med bedre prognose i en studie [19], og i en studie fra Pakistan, ble lave preoperative trombocytter assosiert med dårlig prognose [20]. I motsetning til en annen studie fant at preoperativ trombocytose indikerte dårlig prognose i esophageal SCC [20].
Likevel er det ikke helt klart om forhøyede trombocytter er indusert av en mer aggressiv fenotype av svulster, eller bidra selv til kliniske oppførsel av tumorer. Mest sannsynlig svulster kan indusere thrombopoesis direkte f.eks via faktor som IL-6 [21].
Blodplater synes også å fremme metastaser, men de eksakte mekanismene er fortsatt uklart [22], [23].
Blodplater spiller også en rolle i tumor angiogenese etter aktivering, f.eks i respons til endotelial skade [24]. Denne effekten synes å være forårsaket ikke bare av platefaktor sekresjon, men også ved direkte stimulering av angiogenese [25].
Det er vel kjent at perifere humane blodplater er i stand til å utskille pro-lymphangiogenic faktorer som VEGF-C og PDGFR-B, som er utgitt under plateaktivering [26]. I tillegg er blodplater spiller en viktig rolle i fosterutviklingen av lymfesystemet [7]. Slik at de har blitt rapportert å inhibere proliferasjon og migrering av lymfatiske endotelceller under embryonal utvikling ved aktivering av interaksjon av CLEC2 og podoplanin, som uttrykkes på lymfatiske endotelceller [27].
I ondartet sykdom, samspillet mellom blodplater og podoplanin via CLEC-2 induserer en rekke veier som er involvert i tumorcellemigrasjon og vekst [28].
Overraskende, så vidt vi vet ingen data om rollen av blodplater i lymphangiogenesis i menneskelig ondartet sykdom finnes så langt.
i denne studien har vi undersøkt i en stor serie av esophageal kreft foreningen av PBPC med blodplater i svulst fartøy innenfor tumor stroma og med lymphangiogenesis.
Perioperativ PBPC var assosiert med tilstedeværelse av blodplater i løpet av tumorvevet, og blodplater i tumorvevet var assosiert med øket lymphangiogenesis. Selv om ingen direkte tilknytning til STC eller VTC med LVI av tumorceller ble sett, PBPC og VTC påvirket LVI i regresjon analysis.This indikerer at et komplekst samspill mellom PBPC, VTC og STC fremmer LVI av tumorceller.
Å undersøke våre funn i detalj
in vitro
, utførte vi cellekultur eksperimenter som viser at blodplater fremme vekst av LMU i en dose- og tidsavhengig måte. Denne induksjon av LEC vekst ser ut til å bli indusert ved sekresjon av pro-lymphangiogenic faktorer som VEGF-C og PDGF-BB.
So våre funn kan være en mulig forklaring på hvorfor økt preoperative PBPC er forbundet med redusert prognose i en rekke humane kreftformer, selv om dette ikke var tydelig i vårt studium. Selv om podoplanin kommuniserer med blodplater under utvikling, har en vekselvirkning mellom lymfekar endoteliale celler og blodplater ikke blitt beskrevet tidligere. Dette kan forklares ved det faktum at trombocytter ikke blir funnet i det lymfatiske karsystemet. Likevel, blodplater lette ekstravasasjon av utgivelsen av matriksmetalloproteinaser og ved stimulering av tumor og endotelceller [28]. Som det fremgår i vårt studium, kan blodplate klynger, men ble funnet ikke bare i blodkar, men også innen tumoren stroma, noe som indikerer lekkasje fartøy. Siden vaskulære og stromal plate klynger korrelert, synes migrasjon av blodplater ut av fartøyene å bli indusert av vaskulære klynger. De lymphangiogenic faktorer utskilles i stroma av ekstravaserte blodplater kan indusere vekst av lymfatisk endotel, og dermed støtter dannelsen av nydannede lymfekar.
En vist i våre cellekulturforsøk, synes dette stimulering av spredning av LMU av blodplater å bli indusert i en tids- og doseavhengig måte hovedsakelig av VEGF-C og PDGF-BB, som utskilles av blodplater. Blokkerings forsøk indikerer en dominerende rolle av VEGF-C i denne prosessen.
Som rapportert i en rekke studier, var økningen i lymfekarene korrelerer med sannsynligheten for å utvikle LVI og påfølgende lymfeknutemetastaser. [29] -. [34] Det faktum at blodplater fremme ekstravasering av tumorceller er velkjent [17], men basert på de data det synes meget sannsynlig at blodplater i tumoren stroma også fremme invasjon av tumorceller inn i det lymphovascular system
i sammendraget, viser vi for første gang i store serier av menneskelige kreftpasienter og også
in vitro
at perifere blodplater spiller en viktig rolle i kreftfaren lymphangiogenesis og LVI, og dermed påvirke prognosen for pasienter. Så avbrudd av signalveier mellom blodplater, tumorceller og lymfesystemet endotelet kan være til nytte for pasientene.
