Abstract
Bakgrunn
NPM, TFF3 og TACC1 er molekylære markører som spiller viktige roller i celle Differensiering. Heri vi undersøkt deres prognostisk effekt i pasienter med primær magekreft (GC) og bestemme hvorvidt de kunne brukes som markører for mer aggressive gastriske karsinomer ved å detektere graden av ekspresjon i humane magekarsinom prøver.
metodikk /hovedfunnene
Tumor vevsprøver fra 142 GC pasienter ble retrospektivt hentet og immunhistokjemisk evaluert. Sammenhenger mellom NPM, TFF3 og TACC1 over-uttrykk og clincopathologic parametre, og deres prognostiske verdier ble undersøkt med χ
2, Kaplan-Meier metoden, og Cox uni- og multivariate overlevelsesmodeller. NPM, TFF3 og TACC1 uttrykk var betydelig høyere i GC pasienter med dårlig differensiert histologisk type enn at hos pasienter med godt differensiert histologisk type. NPM uttrykk var signifikant høyere hos pasienter med levermetastaser eller residiv enn hos pasienter uten metastaser. TFF3 ekspresjon var signifikant høyere hos pasienter med positiv lymfeknutemetastase enn det hos pasienter med negative lymfeknutemetastase. Age, lymfeknutemetastase, og TFF3 og TACC1 over-uttrykk ble signifikant korrelert med lav overlevelse (P 0,05, P 0,05, P = 0,005 og p = 0,009, henholdsvis). Multivariat analyse viste at lymfeknutemetastase og TFF3 og TACC1 overuttrykk var uavhengige prognostiske faktorer.
Konklusjoner
TFF3 og TACC1 over-uttrykk i epitelceller kirurgisk resected GC vev var en uavhengig prediktor av kort overlevelse i GC pasienter. Prognosen var dårligere hos pasienter med positivt uttrykk for både TFF3 og TACC1 enn hos pasienter med positivt uttrykk for TFF3 eller TACC1 alene, eller med negative uttrykk for TFF3 og TACC1
Citation. Ding A, Zhao W, Shi X, Yao R, Zhou F, Yue L, et al. (2013) Effekt av NPM, TFF3 og TACC1 på prognosen for pasienter med primær Gastric Cancer. PLoS ONE 8 (12): e82136. doi: 10,1371 /journal.pone.0082136
Redaktør: Yves St-Pierre, INRS, Canada
mottatt: 16 august 2013; Godkjent: 21 oktober 2013; Publisert: 16.12.2013
Copyright: © 2013 Ding et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien støttes av Shandong Natural Science Foundation (2009HW024); Shandong Utmerket Young Scientist forskningspris Fund Project (2006BSB14114; BS2010YY013). Shandong Takle Nøkkel Problemer i Science and Technology (2010GSF10245; Y2006C23). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP (GC) er 4
th vanligste kreftformen i verden (7,8% av alle krefttilfeller) og 2
nd største årsaken til kreftdød (9,7% av alle kreftdødsfall) over hele verden [1]. Selv kirurgisk fjerning er et levedyktig alternativ for tidlig stadium GC pasienter, forblir kontroll av GC progresjon vanskelig [2], [3]. Patogenesen av GC er tilknyttet flere faktorer. Nylig har forskjellige biologiske faktorer som er involvert i patogenesen av GC blitt identifisert, men deres kliniske relevans har ikke blitt bekreftet. En bedre forståelse av det biologiske grunnlaget for GC vil være nyttig.
Nucleophosmin (NMP), også kjent som numatrin eller NO38, er medlem av nucleoplasmin (NPM) familie. Det er en nukleolært fosfoprotein konstant skytteltrafikk mellom kjerne og cytoplasma [4]. NPM utøver mange funksjoner, inkludert generering av ribosomer, vedlikehold av genomisk integritet og transport av proteiner inn i kjernen [5]. Derfor synes den nucleophosmin /B23 gen (B23) for å være involvert i kontrollen av cellevekst, differensiering og programmert celledød [6], [7]. NMP er overuttrykt eller mutert i humane kreftceller, og er derfor en kandidat prognostisk markør i tykktarm, eggstokkreft og prostatakreft [8], [9]. Men siden de fleste av disse konklusjonene ble fremherskende basert på indirekte bevis med in vitro-modeller, den eksakte bidraget av NPM til tumorigenesis er langt fra klart i stor grad på grunn av mangel på relevante kliniske studier.
Trefoil faktor 3 (TFF3 ) er et medlem av familien TFF genet, som koder for en rekke små mucin-assosiert polypeptider [10]. TFF3 er hovedsakelig til stede i mage-tarmkanalen og andre epiteliale vev, og er kjent for å spille en viktig rolle i å opprettholde integriteten slimhinne [11]. TFF3 er ment for å forbedre cellemigrering gjennom modulerende funksjoner av E-cadherin /catenin komplekser [12]. Nylig TFFs har blitt rapportert å være overuttrykt på både gen og protein nivå i menneskelige svulster, inkludert tarm, bukspyttkjertel og prostata cancer
trans surt kveilet
-.
Spole 1 (TACC1) var opprinnelig identifisert som den eneste kodende sekvens gående innenfor den 8p11 human brystcancer-fragment [13]. Det uttrykkes ved høye nivåer i embryogenese og deretter nedregulert i differensierte vev [13] – [15]. TACC1 er involvert i flere krefttyper, inkludert bryst og eggstokkreft og leukemi. I en fersk studie [16], ble TACC1 funnet å være oppregulert og fungere som et onkogen i bryst og eggstokkreft. Men en fersk serie analyse av genuttrykk (SAGE) foreslo at TACC1 ble nedregulert i ovarietumorer og eggstokkreft cellelinjer [17]. Derfor, om TCAA1 fungerer som et onkogen [16] eller en tumor suppressor [18] er svært krefttype avhengig [13].
I denne studien undersøkte vi uttrykket nivåer av NPM, TFF3 og TACC1 i GC pasienter, og også analysert deres potensielle sammenhenger med kliniske funksjoner og total overlevelse (OS) av GC pasienter.
Materialer og metoder
pasienter og kliniske prøver
Inkludert i denne studien var 142 pasienter (93 menn og 49 kvinner) som fikk kirurgisk reseksjon av primær GC ved institutt for generell kirurgi i våre sykehus mellom juli 2007 og september 2009. undersøkelsen protokollen ble godkjent av etikkomiteen av Affiliated Hospital of Qingdao university School of Medicine (Qingdao, Kina). Pasientene hadde inngått et informert samtykke. Median alder var 59 år (27 til 89 år). Tumorstykkene ble fiksert i 10% formaldehyd-løsning og innstøpt i parafin. Ingen av pasientene hadde fått kjemoterapi eller strålebehandling før operasjonen. De patologiske diagnoser og klassifikasjoner ble gjort i henhold til den japanske Klassifisering av magekarsinom. Komplett demografiske og kliniske data ble samlet retrospektivt. «Tidlig kreft» ble definert som kreft invasjon begrenset til submucosa, og «avanserte kreft» ble definert som kreft invasjon inn i muskularis propria eller serosa. Sluttdatoen for oppfølgingen var juli 2012, og median oppfølgingsperiode for OS var 47 måneder (variasjon 3-59 måneder) med en 3-års postsurgical overlevelsesrate på 64,2%.
Immunohistochemistry
Array blokker ble skiver i 4-mikrometer seksjoner, deparaffinized og hydrert i gradert etanol. Antigen gjenfinning ble utført ved å dyppe objektglassene i citrat-buffer (pH 6,0) og mikrobølgeovnen i 10 min. Deparaffinized og hydratiserte vevssnitt ble behandlet med 0,3% hydrogenperoksidase i metanol i 15 min, vasket i PBS og inkubert med primære antistoffer mot NPM, TFF3 og TACC1 for over natten ved 4 ° C (tabell 1). Antistoff farging ble påvist med avidin-biotin-peroksidase kompleks (PV9005, mus overfølsomhet, Beijing gran Jinqiao, Kina). Diaminobenzidin ble anvendt for å visualisere peroksydase avsetning på det antigene området, og disse snitt ble motfarget med hematoksylin.
Immunhistokjemisk farging ble bedømt semikvantitativt ved å måle både intensiteten av fargingen (0, 1, 2 eller 3), og graden av farging (0, 0%, 1, 0-10%, 2, 10-50%, 3, 50-100%). Poengene for intensiteten og omfanget av fargingen ble multiplisert for å gi en vektet score for hvert tilfelle (maks mulig, 9). For den statistiske analysen ble de vektede skårer gruppert i to kategorier der score til 0-3 ble ansett som negativt, og 4-9 positiv.
Statistical Analysis
Alle statistiske analyser ble utført ved hjelp av statistikkpakke SAS versjon 9.2. X2 testen og Fishers eksakte test ble brukt for å undersøke sammenhenger mellom uttrykket av molekylære markører og diverse clinicopathological parametere. Univariat analyse ble utført ved hjelp av Kaplan-Meier-metoden, og statistisk signifikans mellom overlevelseskurver ble bestemt ved log rank test. OS ble bestemt fra dato for operasjonen til den tiden av kreft død. For å vurdere de uavhengige verdier av ulike variabler på overlevelse, ble multivariat analyse utført i nærvær av andre variabler ved hjelp av Cox modell. Bare variabler av betydelig verdi fra univariate analysen ble inngått Cox regresjonsanalyse. p 0,05 ble ansett som statistisk signifikant
Resultater
NPM, TFF3 og TACC1 uttrykk mønstre i tumorceller
Uttrykk av NPM, TFF3 og TACC1 ble målt ved semi-kvantitativ. IHC analyser. NPM ble lokalisert i kjerne, kjernen og cytoplasma av tumor epitelceller (positiv 47% vs. 53% negative) (Figur. 1). TFF3 ble uttrykt i cytoplasma av tumor epitelceller (positiv 44% vs 56% negativ), og ingen farging ble observert i kjernen (fig. 1). TACC1 ble uttrykt i cytoplasma av tumor epitelceller (positiv 49% vs 51% negativ) (fig. 1), og ingen farging ble observert i kjernen.
Sterk farging av NPM ble observert i nucleolus , nucleus og cytoplasma av tumor epitelceller (a, b). Høy ekspresjon av TFF3 (c og d) ble hovedsakelig observert i cytoplasma av tumor epitelceller. TACC1 ble uttrykt i cytoplasma av tumor epitelceller (e og f).
Pasient Clinicopathological Variabler
Median alder for pasientene i denne studien var 59 år (27-89 år). Median oppfølging total overlevelse var 47 måneder (spredning 3-59 måneder), og 3-års postsurgical overlevelse var 64,2%. Mediantumorstørrelse var 35 mm (range 15-130 mm). Med hensyn til tumorstadium, 14% (20/142) av pasientene var i begynnelsen av cancer og 86% (122/142) var i fremskreden kreft. Lymfeknutemetastase ble iakttatt i 55% (78/142) av pasientene. Fjernmetastaser, inkludert levermetastaser, venøs invasjon og peritoneal metastaser, forekom hos 15 pasienter.
sammenhenger mellom Clinicopathological data og Uttrykk for NPM, TFF3 og TACC1
NPM, TFF3 og TACC1 uttrykk var signifikant høyere hos pasienter med dårlig differensiert histologisk typen GC enn hos pasienter med høyt differensiert histologisk typen GC (NPM, 0,88 vs 0,12, TFF3, 0,90 vs 0,10, TACC1, 0,90 vs 0,10; P 0,05). Bare NPM uttrykk var signifikant høyere hos pasienter med levermetastaser (0,88 vs 0,12; P 0,05) eller tilbakefall (0,73 vs 0,27; P 0,05). TFF3 var signifikant høyere hos pasienter med positiv lymfeknute metastaser enn hos pasienter med negativ lymfeknutemetastase (TFF3, 0,61 vs 0,39, p 0,05). TACC1 uttrykk korrelerte signifikant med venøs invasjon (0,88 vs 0,12; P 0,05) og kvinnelige pasienter (0,69 vs 0,31; P 0,05). Kliniske og histopatologiske variabler er vist i tabell 2.
Univariat analyse
Univariate analyser viste at alder, lymfeknutemetastase, TFF3 over-uttrykk og TACC1 over-uttrykk ble signifikant korrelert med en kort overlevelsestid (tabell 3, figur 2). For statistisk analyse, den utpekte «høyrisikogruppen» hadde en endret uttrykk av 2 eller 3 proteiner. den utpekte «lav-risikogruppe» hadde en endret uttrykk for 0 eller 1 proteiner. Prognosen var dårligere hos pasienter med positiv co-uttrykk for NPM /TFF3, TFF3 /TACC1, NPM /TACC1 og NPM /TFF3 /TACC1 enn hos pasienter med positivt uttrykk for NPM, TFF3 eller TACC1 alene, eller med negative co-uttrykk av disse markørene (Tabell 3)
Forkortelser. alder = 0 betyr age≤60 år; alder = 1 betyr alders 60 år. node = 0 betyr ingen lymfeknutemetastase; node = 1 betyr lymfeknutemetastase.
bilder
multivariat analyse
multivariat analyse viste at lymfeknutemetastase og uttrykk for TFF3 og TACC1 i tumor epitelceller var uavhengige prognostiske faktorer for total overlevelse (tabell 4), og at hasardratio (HR) i tumor-dødsfall økt med 3,409 ganger i FF3 gruppen (P 0,001; 95% KI 2,387 til 8,143). Den 3,311 ganger økning i HR av tumorrelaterte dødsfall i lymfeknutemetastase gruppe var obviouslyly signifikant (P 0,001; 95% CI 2,148 til 8,651) (tabell 4). Den 2,278 ganger økning i HR av tumorrelaterte dødsfall i TACC1 gruppe var også åpenbart signifikant (P 0,001; 95% KI 1,803 til 5,959).
Diskusjoner
Følgelig undersøkelse av uttrykket av spesifikke gener i mage carcinoma celler kan hjelpe deg å forstå de histopatologiske funksjonene GC.Consequently, er det viktig å studere de forskjellige molekylære markører for å kunne forstå mekanismen for tumordannelse og metastaser. Derfor søkte vi ut for å teste et panel av tre molekylære markører assosiert med tumorigenesis.
Nucleophosmin /B23 uttrykk er en nukleolært fosfoprotein konstant skytteltrafikk mellom kjerne og cytoplasma [4], og på RNA og protein nivå kan bidra til utbruddet av kreft [19], [20], NPM er tidligere foreslått som en prognostisk faktor for dårlig overlevelse og er relatert til tumorprogresjon og motstand [21], [22]. Men resultatene som oppnås i foreliggende studie var forskjellig i flere viktige henseender fra disse tidligere studiene. Vi har funnet en dårligere resultat hos pasienter med NPM over-ekspresjon, men det er ikke en uavhengig prognose markør, muligens på grunn av den biologiske variasjonen av protein ekspresjon i forskjellige områder av tumorvev. I vår studie NPM over-uttrykk ble observert hos 73% av pasientene med tilbakefall, noe som indikerer at NPM overuttrykk var signifikant assosiert med tilbakefall. Studiet av Tsui et al [23] viste også at høy NPM /B23 nivået ble korrelert med tilbakefall av blærekreft. I tillegg er det interessant å spekulere i at NPM kanskje var korrelert med fremme levermetastaser av denne kreftformen. Resultatet av denne studien tyder på at NPM over-uttrykk kan vise seg å være en prediktor for dårlig prognose av GC, men den eksakte underliggende mekanismen er fortsatt uklart.
Tidligere studier [24], [25] viste at TFF3 ble ofte over-uttrykt i brystcancer og andre primære tumorer. Våre resultater viste at 44% av mage karsinom uttrykt TFF3, og enda viktigere at TFF3 over-uttrykk i GC var en uavhengig negativ prognostisk indikator for OS. Risikoen for å dø øker betydelig hos pasienter med TFF3 over-uttrykk. I tillegg TFF3 overuttrykk var den nest høyeste risikoen ved siden av lymfeknutemetastase for postoperativ overleve. Signifikant korrelasjon mellom TFF3 over-uttrykk og dårlig prognose, har tidligere blitt rapportert i kolangiokarsinom [26] og endometrioid livmorkreft [27], som er konsistent med vår resultatet. Våre data tyder også på at TFF3 over-uttrykk ble korrelert med mer aggressive clinicopathological parametere. For eksempel, TFF3 over-ekspresjon ble påvist i ca. 50% av pasientene med positiv lymfeknutemetastase
vs.
En tredjedel av pasienter med negativ lymfeknutemetastaser, og indikerer at TFF3 over-ekspresjon spiller en viktig rolle i lymfeknutemetastaser i GC pasienter. Videre studier på molekylær mekanisme for å definere mer presist rolle trekløverpeptid ekspresjon i tumorprogresjon og metastase.
Tidligere studier [28], [29] har foreslått en mulig effekt av TACC1 på celleproliferasjon og dens kreftfremkallende egenskaper. Men til vår beste kunnskap, er det ingen andre studier som rapporterer sammenhengen mellom TACC1 over-uttrykk og klinisk betydning i GC pasienter. En av de viktigste funnene i denne studien er det store kjønnsrelatert innvirkning på TACC1 over-uttrykk, som viser at 69% av de kvinnelige GC pasienter viste positive TACC1 uttrykk. I tillegg har antall kvinnelige pasienter med TACC1 overuttrykk var dobbelt så høy som hos mannlige pasienter med negativ TACC1 uttrykk. Men TACC1 overuttrykk hadde ingen signifikant effekt på overlevelse i forhold til kjønn i motsetning til betydelig innvirkning på overlevelse av ulike aldersgrupper, noe som tyder på at det kan være andre mekanismer som påvirker overlevelse av GC pasienter. Resultatet av multivariat analyse viste at TACC1 over-ekspresjon var et uavhengig prognostisk faktor av GC, noe som er i overensstemmelse med tidligere funn på prognostisk betydning TACC1 observert i ovarietumorer [30]. I tillegg er våre data gi bevis for at TACC1 overekspresjon er assosiert med venøs invasjon, noe som tyder på sin mulige rolle i tumormetastaser.
Om lag halvparten av kreftprøver ble funnet med co-uttrykk for disse to markører. Univariat analyse viser at høyrisikogruppen var signifikant assosiert med kortere pasient total overlevelse, og at høyrisikogruppen viser en dårligere prognose enn lav-risikogruppe. Enten den kombinerte uttrykk for NPM, TFF3 og TACC1 bidrar en vekst fordel av svulst må videre bestemmes av in vitro og kliniske studier.
I konklusjonen, TFF3 og TACC1 over-uttrykk i tumor epitelceller kirurgisk reseksjon gastic adenokarsinom kan uavhengig spår en kortere overlevelse. NPM over-uttrykk er signifikant korrelert med de kliniske patologi funksjonene i GC. Disse observasjonene tyder på at over-uttrykk er avgjørende for patogenesen og utvikling av GC. Ytterligere undersøkelser er nødvendig for å gi et bedre grunnlag for utvikling av mer effektive terapeutiske strategier for GC og andre menneskelige kreftformer.
