Abstract
Bakgrunn
Det er god dokumentasjon i litteraturen at cannabinoid system er forstyrret i tykk- og endetarmskreft. I denne studien har vi undersøkt om CB
1 reseptoren immunoreactive intensitet (CB
1IR intensitet) er assosiert med sykdommens alvorlighetsgrad og utfall.
metodikk /hovedfunnene
CB
1IR ble vurdert i formalinfikserte, parafininnstøpte prøver samlet med en påfølgende hensikt under primærtumor kirurgisk fjerning av en rekke tilfeller diagnostisert med tykktarmskreft. Tumor sentrum (n = 483) og invasiv foran (n = 486) CB
1IR ble scoret fra 0 (fraværende) til tre (intens farging) og dataene ble analysert som en median delt dvs. CB
1IR 2 og ≥2. I mikro stabil, men ikke mikrosatelitt ustabile tumorer (som rettferdig dømt på grunnlag av immunhistokjemiske bestemmelse av fire mismatch repair proteiner), var det en signifikant positiv assosiasjon av tumoren klasse med CB
1IR intensitet. Forskjellen mellom de mikro stabile og ustabile svulster for denne foreningen av CB
1IR var relatert til CpG island metylering status av tilfellene. Cox regresjonsanalyse indikerte et betydelig bidrag av CB
1IR til sykdomsspesifikk overlevelse i mikro stabile svulster ved justering for tumorstadium. For tilfellene med stadium II mikro stabile svulster, var det en signifikant effekt av både svulst sentrum og foran CB
1IR på sykdomsspesifikk overlevelse. De fem års sannsynligheten for overlevelse var: 85 ± 5 og 66 ± 8%; svulst interiør, 86 ± 4% og 63 ± 8% for CB
1IR. 2 og CB
1IR≥2 grupper, henholdsvis
Konklusjon /Betydning
Nivået av CB
1-reseptor-ekspresjon i kolorektal cancer er assosiert med tumoren karakter på en slik måte avhengig av graden av CpG hypermethylation. En høy CB
1IR er et tegn på en dårligere prognose i stadium II mikro stabile kreftpasienter
Citation. Gustafsson SB, Palmqvist R, Henriksson ML, Dahlin AM, Edin S, Jacobsson SOP, et al. (2011) High Tumor cannabinoidtest CB
1 Receptor immunreaktivitet negativt påvirker sykdomsspesifikk overlevelse i Stage II mikro Stabil tykktarmskreft. PLoS ONE 6 (8): e23003. doi: 10,1371 /journal.pone.0023003
Redaktør: Joseph Alan Bauer, Bauer Research Foundation, United States of America
mottatt: 29 desember 2010; Godkjent: 11 juli 2011; Publisert: 25 august 2011
Copyright: © 2011 Gustafsson et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Forfatterne takker den svenske Science Council (Grant ingen 12158, medisin, CJ Fowler.); den svenske Cancer Society (Grant ingen CAN2008 /856, R. Palmqvist,. Gi ikke CAN2010 /437, C.J. Fowler.); og forskningsmidlene av Det medisinske fakultet, Universitetet i Umeå (C.J. Fowler) for økonomisk støtte. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
G-proteinkoblet cannabinoid
1 (CB
1) reseptorer er mest kjent for sin rolle som formidler de psykotrope effekter ettertraktet av rekreasjonsbrukere av cannabis. Imidlertid CB
1 reseptorer og deres endogene ligander Anandamid (arachidonoylethanolamide) og 2-arachidonoylglycerol medierer en rekke virkninger i kroppen, inkludert regulering av smerte, bendannelse, energihomeostase og gastrointestinal funksjon [1] – [4]. I den humane tykktarm, CB
1-reseptorer er funnet i krypten epitelet, så vel som i subepiteliale inflammatoriske celler i glatt muskulatur i blodkar og i submucosal plexus [5], [6], hvor de modulerer, blant andre funksjoner , frekvensen av intestinal transitt og colonic fremdrift [4].
i tillegg til de funksjonene som er beskrevet ovenfor, fungerer endocannabinoid systemet som en «skade begrensende» system for å dempe virkningene av patologiske situasjoner. Dette synes å være særlig for gastrointestinal endocannabinoid systemet. Således, inflammasjon indusert av midler slik som 2,4-dinitrobenzen-sulfonsyre, trinitrobenzen sulfonsyre, sennepsolje eller dekstransulfat natrium er mer uttalt i CB
1
– /- mus enn i deres villtype kullet, mens behandling med et CB reseptor agonist, eller med forbindelser som blokkerer celle fjerning og metabolisme av endocannabinoids, lindrer inflammasjon [7] – [11]. En CB
1-reseptoren polymorfisme (1359 G /A) er forbundet med en redusert følsomhet for ulcerøs kolitt hos mennesker [12], men så vidt vi vet er det ikke kjent hvordan denne enkeltnukleotidpolymorfi påvirker cannabinoid signalering. Avvikende krypten foci i tykktarmen, en tidlig patologisk endring i adenom-karsinom sekvens i tykktarmskreftutvikling, er dannet som et resultat av azoxymethane behandling i mus, og behandlingen er assosiert med en økning i nivåene av 2-arachidonoylglycerol. Blokade av metabolismen av denne endocannabinoid reduserte forekomsten av avvikende krypten brennpunkter, det samme gjorde behandling med et CB reseptor agonist [13] og, kanskje overraskende, ved behandling med et CB
1 reseptor invers agonist [14].
cannabinoider og endocannabinoids produsere potensielt nyttige effekter på kreftcelle spredning, motilitet og invasive atferd (anmeldelser, se [15], [16]). I kolorektal kreft-cellelinjer, har begge CB
1-avhengige og-Uavhengig virkninger av endogene og /eller syntetiske cannabinoider ved cellenes levedyktighet blitt rapportert [17] – [20]. I en genetisk modell av kolorektal kreft progresjon (Apc
Min /+ mus), dyr som mangler CB
1 reseptoren viste et større antall små tarm og colonic polypper enn den tilsvarende CB
1
+ /+ mus [21]. Kolorektal kreftpasienter som enten er homo- eller heterozygot for 1359 G /A CB
1 reseptoren polymorfisme viser en kortere overlevelsestid enn G /G vill type pasienter [22]. Til slutt, redusert ekspresjon av CB
1 reseptor-mRNA og protein er blitt rapportert i kolorektal cancer [17], [21], skyldes i det minste delvis til en økt hastighet av metylering av det promotor-regionen av reseptoren [21].
de ovenfor angitte data er i overensstemmelse med antydningen om at det endogene cannabinoid systemet kan være dysfunksjonell i kolorektal cancer, og at en slik dysfunksjon kan påvirke sykdomsgrad og /eller utfall. En måte å undersøke denne mulighet er å bestemme nivået av CB
1-reseptor-ekspresjon i en stor kohort av velkarakteriserte tilfeller av kolorektal kreft med lange oppfølgings ganger. Dette har blitt foretatt i denne studien. Gitt at tykktarmskreft er svært heterogen, har blitt gjort et særlig fokus på forholdet mellom CB
1 immunreaktive intensiteter med viktige patologiske /molekylære komponenter av sykdommen [23]: scenen, svulst klasse, mikro ustabilitet screening status, forekomst av knopper på svulsten foran og CpG island methylator fenotype (CIMP).
Metoder
Etikk erklæringen
den forskningsetiske komité ved Umeå universitet sykehus (Regional etisk Review Board i Umeå, Sverige) godkjent håndtering av vevsprøver og pasientdata i denne studien, herunder prosedyre der pasienter verbalt ga sitt samtykke. Dette samtykke ble dokumentert i hver pasientjournalen, og dette ble behandlet av den etiske komité for å være tilstrekkelig. I databasen som brukes for analysene her ble vevsprøver gitt et saksnummer og år, og pasienten navn ble ikke angitt i databasen.
Pasienter
formalinfiksert, parafin -embedded utvalget som ble brukt i denne studien ble innhentet fra vev som samles inn under primærtumor kirurgisk reseksjon av tykk- og endetarmskreft (crums (tykktarmskreft i Umeå studien)). Prøvene ble samlet med en påfølgende hensikt ved Kirurgisk avdeling, Umeå universitetssykehus, Sverige, i perioden 1995-2003, og der det er mulig pasientene ble fulgt i opptil 113 år [24]. I tillegg til de klinisk-patologiske data rapportert i [24], er data på mikro stabilitet /ustabilitet screening status (immunokjemiske bestemmelse av ekspresjonen av fire mismatch repair proteiner) og CIMP blitt samlet inn og tidligere rapportert [25]. Forekomst av knopper på svulsten fronten ble evaluert som i [26]. Eksklusjonskriterier var tilstrekkelige eller tilgjengelige svulst vevsprøve og tilstrekkelig klinisk informasjon. Alt i alt ble 487 tilfeller scoret for enten svulst sentrum eller svulst foran CB
1 reseptoren immunoreaktivitets (se nedenfor). Den klinisk informasjon i databasen for disse pasientene var som følger: median alder 71 år (26-96, n = 487, hvorav 269 var hanner og hunner 218); kreft beliggenhet i høyre colon 31,1%, venstre colon 31,1%, endetarm 37,8% (n = 482); sykdom trinn I 15,5% II 39,3%, 21,0% III, IV 24.2% (n = 476); tumor grade godt /godt moderat differensiert 48,75%, moderat dårlig /dårlig differensiert 51,25% (n = 480); mikro stabil 85,0%, mikro ustabil 15,0%; (N = 473); CIMP status negativ 50,4%, 37,2% lav, høy 12.4% (n = 484). Videre fikk 82,4% (av 483 tilfeller) ikke får preoperativ strålebehandling (enten 5 × 5 Gy eller 25 × 2 Gy); 75,0% (av 476 tilfeller) hadde radikal kirurgi; og 13,7% (av 475 tilfeller) fikk adjuvant kjemoterapi.
Måling av CB
1 reseptoren immunoreaktivitets (CB
1IR) i svulstvev
De parafininnstøpte vevssnitt ble deparaffinized og rehydrert før antigen henting i en trykkoker (2100 retriever, Biocare Medical) i Diva Decloaker (Biocare Medical). Prøvene ble deretter plassert i en Ventana semiautomated farging maskin (Ventana Medical Systems Inc., Tucson, AZ). CB
1 reseptor-antistoff (Abcam katt. Nr. 23703, Abcam plc, Cambridge, UK, fortynnet 1:50) og de sekundære komponenter (iView DAB Detection Kit, Ventana Medical Systems Inc.) ble deretter tilsatt. Antistoffet, en kanin polyklonalt hevet til et peptid svarende til C-terminale aminosyrene 461-472 av den humane CB
1-reseptoren, og som kryssreagerer med human, mus og rotte CB
1-reseptoren i henhold til data fra produsentene, har blitt vist tidligere av forskere i Umeå (inkludert den tilsvarende forfatter) for å fremstille det passende mønster av flekker i human cerebellum, men ikke for å fremstille immunreaktivitet i forhjernene fra CB
1
– /- mus [27 ]. En ExPasy Blast (https://expasy.org/tools/blast/) av peptidsekvens ga CB
1 og sine to spleisevarianter som den eneste treff i mennesket. I flere andre arter, ble CB
1-reseptorer igjen identifisert, den eneste ikke-CB
1 treff blir fra proteiner betegnet «uncharacterized protein [Gene: CNR1]» (fra gris, hund og kylling) samt » antatte uncharacterized protein [Gene: PANDA_015085] -.
Ailuropoda melanoleuca plakater (Giant panda) «og» kromosom 14 SCAF15003, hele genomet hagle sekvens fragment «i
Tetraodon nigroviridis plakater (Grønn pufferfish)
CB
1IR ble vurdert av en etterforsker (SBG) som ble blindet for den kliniske status av pasientene. Prøvene ble gradert på grunnlag av den dominerende CB
1-reseptoren immunoreaktivt intensitet (CB
1IR) i tumor interiører og i tumor invasive fronter og et innlegg som 0 (fravær) til 3 (intens) for cellene . Når alle prøvene hadde blitt scoret, etterforskeren gjentok prosedyren (uten tilgang til tidligere score) og deretter sammenlignet resultatet på de to kjøringer. Tilfeller der resultatet var divergerende ble deretter vurdert en tredje gang, igjen uten tilgang til de tidligere poengsummer. For de svulst foran prøvene scoret, for eksempel, var det 53 tilfeller hvor den første og andre scorer uenige, hovedsakelig på grunn av feilaktige score fra den innledende fasen av den første løp. De endelige poengsummer ble da ført av en annen forsker (CJF) inn i databasen for analyse.
statistiske evalueringer
Kaplan-Meier overlevelsesanalyser, Fishers eksakte test og χ
2 testene ble foretatt ved hjelp av statistikkpakke innebygd i GraphPad Prism 5 dataprogram for Macintosh (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Cox proporsjonal-farer og binære logistisk regresjon ble utført ved bruk av IBM SPSS statistikk 19 programvare for Macintosh (IBM Inc., Somers, NY, USA). For å overleve analyser, ble sykdomsspesifikke hendelser definert som død med kjente disseminert eller tilbakevendende sykdom ( «†
ca»). Død av andre årsaker ble sensurert, som var tilfeller der pasienten var fortsatt i live på datoen for siste oppfølging. Varigheten av overlevelse er definert som tiden fra diagnose til enten dato for tykktarmskreft død, død av andre årsaker, eller hvis ingen død oppstått, frem til dato for siste oppfølging.
Resultater
CB
1IR immunhistokjemi
Innledende studier ble gjennomført ved bruk av samme batch av antistoffet som i en tidligere studie av forskere i Umeå bruker microarray fra prostatakreft prøvene [27]. Vi fant at ved en fortynning på 1:300, CB
1IR ble funnet i epitelceller krypter, med spredt positivitet i subepiteliale inflammatoriske celler (Fig. S1A), en finne i samsvar med studier av CB
1IR i normal tykktarm [5], [6]. Et eksempel på tumorvev farget med denne sats er vist på fig. 1B. På grunn av begrensede mengder av antistoff gjenværende, anvendte vi en senere sats av Abcam antistoff (batch-761993) for hoved studien, og funnet at en lavere fortynning (1:50) var nødvendig for god farging. Et eksempel på farging er vist på fig. 1A, med et tilsvarende serie seksjon uten primære antistoff er vist i fig. 1B.
Deler fra det samme tilfelle ble benyttet i nærvær (panel A) og fravær (panel B) av det primære antistoff. Mål forstørrelse er 10 ×.
Det beste spesifisitet test for immunokjemi anses å være bruk av knockout kontroller [28]. Vi fant at passende immunkjemiske farging ble sett i hjernen til villtype mus, mens dette var fraværende fra hjernen til CB
1
– /- mus (Fig. S2). Ashton [29] har nylig hevdet at tetthets histogrammer optiske er anvendelige for å skille mellom en endring i mønsteret av immunomerking (som bør sees for en sann tap av signalering i en knockout) sammenlignet med en reduksjon i merking intensitet (som ville øke en spørsmål med hensyn til gyldigheten av antistoffet). Optisk tetthet histogrammer av våre villtype og CB
1
– /-. Vev er helt klart annerledes (. Best sett for de høyere forstørrelse lysbilder, Fig S2), i samsvar med god antistoff spesifisitet [29]
En vanlig måte å teste for antistoffspesifisitet er å undersøke preadsorbtion av antistoffet med det immuniserende peptid, selv om nytten av dette tiltaket har vært stilt spørsmål [30]. Ikke desto mindre, en serie av forsøk under anvendelse av preinkubasjon av antistoffet med det immuniserende peptid (Abcam, Cat. No. 50542) ble også foretatt. Imidlertid preinkubering med det immuniserende peptid i stor grad økt det observerte immunreaktiviteten i stedet for blokkerte, og ga en ganske tilfeldig mønster av immunoreaktivt farving (data ikke vist). Den immunisering av peptid (aminosyresekvens MSVSTDTSAEAL) har to negativt ladede aminosyrer (aspartat og glutamat), fem polare aminosyrer (tre serin, treonin to), og ikke i noe positivt ladede aminosyrer. Det er vel kjent at negativt ladede peptider som binder seg til glass, og vi konkludere med at vaskeprosedyren i Ventana teknikk, mens den er tilstrekkelig til å gi god spesifisitet
per se plakater (som sett i knockout mus), er ikke er tilstrekkelig til å fjerne antistoff-bundet positiv kontroll peptid holde ikke-spesifikt til glass og /eller zwitterioniske lipider.
Fordelingen av CB
1IR score i tumoren sentrum og fronter
A total av 483 (tumor interiør) og 486 (tumor foran) saker ble scoret for CB
1IR intensitet og lagt inn i databasen. Både plasmamembranen og cytoplasma CB
1IR ble scoret, så verdiene representerer den totale pool av CB
1 reseptorer. Nuclear farging av CB
1IR (finnes i 42 tilfeller) ble ikke scoret. Frekvens distribusjoner av CB
1IR for svulsten sentrum og fronter var lik, med en score på 0 blir returnert for 77 og 60 tilfeller; en score på 1 for 196 og 185 tilfeller; en score på 2 for 140 og 156 tilfeller; og en poengsum på 3 for 70 og 85 tilfeller (tallene er svulst sentrum og fronter, henholdsvis). Det var ingen signifikant forskjell i fordelingsmønsteret av de to sett innsnitt (p 0,1, χ
2-test). Det ble bemerket at resultatet for de to regionene var ikke alltid det samme for et gitt tilfelle. Faktisk, for de 482 tilfellene skåret for både tumor midten og foran, resultatet var det samme i bare 319 (66%) av tilfellene, er høyere i tumoren foran i 110 (23%) saker og høyere i tumoren sentrum i 53 (11%) tilfeller. I følge gjennom denne studien, både svulst senter og tumor foran score har blitt analysert separat. Non-ondartet vev ble ikke scoret, men generelt nivået av immunoreaktivitets syntes å være lavere heller enn høyere enn sett for svulstvev.
Association of CB
1IR med pasientkarakteristika ved kirurgi
i lys av den frekvensfordeling av CB
1IR analysene ble utført ved bruk av en enkel median splitt, dvs. CB
1IR mindre enn 2 og ≥2. Bruke hele datasettet for å søke etter variabler, en binær logistisk regresjon med parametre kjønn, språk (dvs. rett colon, venstre tykktarm, endetarm), strålebehandling (før kirurgi), sykdom stadium, tumor histologisk grad (dvs. differensiering), tumortype (dvs. mucinous eller ikke-mucinous), mikro ustabilitet screening status [stabil (MSS) eller ustabile (MSI)], mengden av lymfocytter på svulsten fremre og hyppigheten av kreft knopper (små aggregater av tumorceller på tumorinvasjon foran, [31]) ble utført. Av disse variablene, bare tumor histologiske grad (p 0,005) og mikro ustabilitet screening status (p 0,05) var signifikant assosiert med CB
1IR (data ikke vist). Disse effektene kan ganske enkelt bli visualisert ved å dele datasettet inn i fire grupper på grunnlag av de to viktige parametre (fig. 2). Flertallet av tilfellene ble klassifisert som MSS, og den detaljerte CB
1IR distribusjoner for MSS tilfeller som ikke får strålebehandling før operasjonen er oppsummert i tabell 1. I både svulsten sentrum og tumor fronter, det er flere tilfeller med en CB
1IR≥2 for MSS tilfeller med moderat dårlig /dårlig tumor differensiering enn med godt /godt moderat differensierte svulster. I MSI tilfeller er denne effekten av svulsten histologisk grad ikke sett, og sakene har en lignende CB
1IR fordeling til moderat dårlig /dårlig differensierte MSS tilfeller (fig. 2). Videre analyse av de 62 tilfellene med MSI scoret for CB
1IR som ikke fikk strålebehandling før biopsi viste ingen signifikant sammenheng av svulsten sentrum eller foran CB
1IR med enten sykdom stadium (her trinn I og II ble kombinert siden bare fire tilfeller med stadium jeg ble scoret for svulst sentrum CB
1IR), tumor grad, om svulstene var mucinous eller ikke-mucinous, forekomst av lymfocytter ved tumor foran eller CIMP status (p 0,1, Fishers eksakte test eller χ
2 test, som hensiktsmessig, data ikke vist). For kjønn, p-verdiene for CB
1IR distribusjoner var 0,069 og 0,18 for svulst sentrum og foran, henholdsvis (Fishers eksakte test), og for forekomsten av knopper på svulsten foran, p-verdiene (χ
2-test) var 0,086 og 0,073, respektivt (data ikke vist)
Panel A, tumor senter.; Panel B, tumor foran. Dataene er gruppert etter svulst histologisk grad (w-m, godt /godt moderat differensiert, m-p, moderat dårlig /dårlig differensiert) og mikro stabilitet (MSS, stabil, MSI, ustabil). Den χ
2 og dermed p-verdier er for dataene gruppert som en 4 × 2 matrise (der to er CB
1IR). n refererer til det totale antall tilfeller for hver stolpe.
En stor forskjell mellom MSS og MSI er større forekomst av en høy grad av CpG island metylering i det siste [32]. I vårt datasett, av de 467 tilfellene scoret for mikro ustabilitet screening status, CIMP status og tumor sentrum CB
1IR, de CIMP distribusjoner var: MSS (n = 396), negative 225 (57%), lav 153 (39 %) og høy 18 (4,5%); MSI (n = 71), negativ 15 (21%), lav 17 (24%) og høy 39 (55%) (p 0,0001, χ
2-test). Når CIMP status av prøvene ble tilsatt til den binære logistisk regresjon av hele datasettet med parametrene beskrevet ovenfor, ble signifikant effekt av tumoren histologiske grad beholdes (p 0,005) for både tumor midten og foran CB
1IR , men virkningen av mikro ustabilitet screening status var tapt for tumorsentrene (p 0,1), men ikke for kreft fronter (p 0,05) (data ikke vist). For å undersøke dette nærmere, ble dataene for prøvene delt inn i de tre CIMP grupper: negative, lave og høye uavhengig av mikro ustabilitet screening status eller om pasientene hadde fått strålebehandling før operasjonen. Det var en klar påvirkning av CIMP status på resultatene, hvor effekten av svulsten histologisk grad ble sett i tilfeller med CIMP-negativ score, men ikke i de tilfeller med CIMP-høy score, de CIMP lave tilfeller være et sted i midten (fig. 3). Denne analysen ikke ta hensyn til den mikro ustabilitet screening status av tilfellene, for å oppnå tilstrekkelig gruppe størrelser. Men et lignende mønster er sett når MSS og MSI tilfeller analyseres separat, men som en påminnelse bør det påpekes at noen av gruppestørrelser er svært små (fig. S3).
Panel A, svulst center; Panel B, tumor foran. Dataene er gruppert etter svulst histologisk grad (w-m, godt /godt moderat differensiert, m-p, moderat dårlig /dårlig differensiert) og CIMP status. Av de 473 tilfellene scoret for svulst sentrum CB
1IR, 389 ble klassifisert som MSS, 71 som MSI og 13 ikke klassifisert i databasen. De tilsvarende tallene for svulst foran CB
1IR var 392, 71 og 13, henholdsvis. De p-verdiene er for Fishers eksakte test. Den totale (dvs. CB
1IR 2 og ≥2). Antall tilfeller er vist omsluttet hver bar
Association of CB
1IR med sykdom utfall
sakene i databasen hadde blitt fulgt i opptil 113 år [24] slik påvirkning av CB
1IR poengsum ved diagnose på sykdommen utfallet bestemmes. Bruke hele datasettet (dvs. også de tilfeller hvor CB
1IR ble ikke scoret, en univariat Cox regresjonsanalyse på hele datasettet indikert at administrasjonen av strålebehandling før operasjonen var, overraskende, i forbindelse med sykdom utfall (Exp ( B) 0,60 [95% KI 0,40 til 0,91] p. 0,05) der antall tilfeller ikke får /mottar strålebehandling var 441/102 den Cox regresjonsanalyse er en test som brukes til å bestemme bidraget av parameter (e) under etterforskning ved sykdomsspesifikk overlevelse uten å gjøre forutsetninger om innholdet i overlevelseskurve. tiltaket Exp (B), noen ganger kalt farer ratio, indikerer endringen i risiko som parameter under etterforskning er endret fra standard parameter (her ingen radioterapi) til test-parameter (her radioterapi). i dette tilfellet, strålebehandling redusert risiko for død som følge av sykdommen siden den Exp (B) verdien var betydelig lavere enn enhet. for å fjerne innflytelsen av denne parameteren CB
1IR data ble analysert bare for de sakene som ikke får strålebehandling. I tillegg ble MSS og MSI tilfeller analyseres separat.
For de MSS tilfeller, en univariat Cox regresjonsanalyse klarte ikke å vise en signifikant effekt av enten svulst interiør eller foran CB
1IR på sykdoms- spesifikk overlevelse. Imidlertid, når en bivariate analyse ble foretatt med sykdommens scene som den andre parameteren, en meget betydelig bidrag av CB
1IR ble observert (tabell 2). Dette ble bekreftet i Kaplan-Meier-overlevelses plott: for hele datasettet, var det ingen signifikant bidrag av tumoren indre CB
1IR (Fig. 4A), mens det i tumorstadium II (hvor svulstene har infiltrert muscularis propria i tykktarmen eller endetarmen, men har ikke gitt opphav til lymfeknutemetastase), og i tumor stadium IV (hvor svulstene har spredd seg til andre organer), saker med en CB
1IR≥2 har en dårligere sykdomsspesifikk overlevelse enn tilfeller med et CB
1IR 2 (fig. 4B og D; definisjoner av sykdom staging er gitt i [33]). Ingen forskjell ble sett for tumor stadium III, selv om det bør tas i betraktning at dette er en svært heterogen gruppe, at antall tilfeller var mindre enn for sykdomsstadier II og IV og som subgruppeanalyser lider av lavt strømforbruk. Det var bare tre pasienter diagnostisert med stadium I tykktarmskreft (der svulsten har bare infiltrert submucosal lag i tykktarmen eller endetarmen og har ikke spredd seg til lymfeknuter eller andre organer) som døde som et resultat av deres kreft i løpet av føl- periode, utelukker analyse av påvirkning av CB
1IR på sykdomsspesifikke utfall i denne pasientgruppen. I tilfelle av tumoren fremre CB
1IR, den betydelige virkning på tumor resultat i trinnet II pasienter ble også sett, men ikke i den fasen IV pasienter (fig. 4 og data ikke vist, henholdsvis). I stadium II tilfellene fem år sannsynligheten for overlevelse var: 85 ± 5 og 66 ± 8%; svulst interiør, 86 ± 4% og 63 ± 8% for CB
1IR 2 og CB
1IR≥2 grupper, henholdsvis. Det kan bemerkes at noen av scene II tilfellene døde innen en måned etter operasjonen. Men når disse sakene ble ekskludert, det betydelige bidraget fra CB
1IR til sykdomsspesifikke utfall ble beholdt (data ikke vist). Ved videre oppdeling av trinn II tilfeller i henhold til kreft området, et betydelig bidrag fra både svulst sentrum og foran CB
1IR på sykdomsspesifikk overlevelse ble sett for endetarms kreft, men ikke for tykktarm kreft, selv om retningen ( dvs. dårligere overlevelsen for en høy CB
1IR) var den samme. Det er viktig å merke seg imidlertid at tolkningen av resultatene med disse undergruppene er begrenset av en lav effekt og er ikke støttet av Cox analyser (se nedenfor).
Kaplan-Meier plott av sykdomsspesifikk overlevelse for tumor regioner og sykdomsstadier vist. Vist i figurene er antall saker (n) etterfulgt av nummeret som døde som følge av kolorektal kreft (†
ca). Den χ
2 verdi gitt i tallene er fra log-rank (Mantel- Cox) test sammenligner de to kurvene; ** P 0,01, * p 0,05,
† 0,05 p 0,1;
NSP 0,1. Den tilsvarende χ
2 verdier for svulst foran trinn III og IV var 0,24
NS og 1,44
NS, henholdsvis.
Det faktum at i MSS pasientene CB
1IR er assosiert med tumoren histologiske grad ved kirurgi kan selvsagt bety at foreningen er beskrevet ovenfor er bare en refleksjon av påvirkning av tumoren histologiske grad ved sykdomsforløp. Denne muligheten ble undersøkt ved hjelp av multivariate Cox regresjonsanalyser (tabell 2), hvor det ble funnet at svulsten histologisk grad gitt additiv prognostisk informasjon til at sett med svulsten sentrum CB
1IR når sykdommen scenen var også inkludert som en parameter. I motsetning til dette tumor fremre CB
1IR parameter tapt betydning. Når imidlertid forekomsten av knopper på tumoren fremre ble også inkludert (i seg selv en prognostisk faktor), ble innflytelsen av tumoren histologiske grad ved sykdomsforløp redusert, mens påvirkning av både tumor midten og foran CB
1IR var signifikant (Tabell 2). Disse data tyder på at den prognostiske betydningen av svulsten sentrum og muligens også svulst foran CB
1IR er ikke sekundært til sin tilknytning til svulsten histologisk grad. Videre analyser indikerte at prognostisk betydning CB
1IR forble når CIMP status, kjønn og tumor-regionen ble tatt med i den multivariate analysen (tumor senter, Exp (B) 1,77 [95% CL 1,16 til 2,72, s 0,01; tumor foran Exp (B) 1,67 [95% CL 1,11-2,50] p. 0,05)
for MSI tilfeller ingen konklusjoner kan trekkes på om CB
1IR påvirket ved sykdomsspesifikk overlevelse i fase II tilfeller bare på grunn av de 32 sakene som falt inn under denne kategorien (etter utelukkelse av tilfellene får strålebehandling før operasjonen), bare én døde av kreft i løpet av oppfølgingsperioden.
Diskusjoner
den foreliggende studien ble motivert av data fra både dyrkede celler og pasientprøver som tyder på at en dysfunksjonell endocannabinoid signaleringssystem er involvert, enten i patogenesen og /eller som en følge av kolorektal kreft [13], [14], [17 ], [21], [22]. I utgangspunktet er det verdt å kommentere på det faktum at både celleoverflate og cytoplasma-CB
1-reseptorer ble scoret. CB
1-reseptorer blir ofte betraktet som celleoverflatereseptorer, men det er velkjent i mange celler og vev som de har blitt funnet intracellulært [34] – [37], som ville være forventet for reseptorer som internal følgende vedvarende agonist-stimulering [38], [39]. Det er blitt antydet at disse intracellulære reseptorer er aktive og par til ekstracellulære signalregulerte kinase [35], selv om andre forfattere ikke har sett intracellulær ko-lokalisering av CB
1-reseptorer med Gα subenheter [39]. Naturlig forekommende ligander for CB
1 reseptorene er svært lipofilt og således plasmamembranen er ikke en hindring for deres cellulære penetrasjon. Ekstracellulære signalregulerte kinase er en viktig signalmolekyl, og har vært implisert i antiproliferative virkninger av cannabinoider i en rekke forskjellige kreftcellelinjer [40], så er det ikke urimelig (og teknisk betydelig mindre vanskelig) å score den kombinerte intensiteten fra plasmamembranen og intracellulær CB
1 reseptorer. Det er tre hoved resultater i fra studien, og disse er omtalt i sving.
1.
