Abstract
Bakgrunn
Nye rapporter om
Propionibacterium acnes product: (
P. Acnes
) tyder på at denne bakterien er utbredt i prostata, er assosiert med akutt og kronisk prostatabetennelse, og kan ha en rolle i prostata kreftutvikling.
Metoder
for å evaluere patogene rolle denne urfolk bakterien, vi skjermet for bakterien i radikal prostatektomi prøver å bruke enzym immunhistokjemi med en roman
P. acnes
-spesifikk monoklonalt antistoff (PAL-antistoff), sammen med et anti-nukleær faktor kappa B-(NF-kB) antistoff. Vi undersøkte formalinfiksert og parafininnstøpte vevssnitt av radikal prostatektomi prøver fra 28 pasienter med prostatakreft og 18 alderstilpassede kontrollpasienter med blærekreft, men uten prostatakreft.
Resultater
immunhistokjemi med PAL antistoff avslørt små runde organer innen noen ikke-kreft kjertel epitel og stromale makrofager i de fleste prostata prøver. Prostatakreft prøvene hadde høyere frekvens av enten cytoplasma
P. acnes
eller kjernefysiske NF-kB uttrykk for kjertel epitel og høyere antall stromal makrofager med
P. acnes
enn kontrollprøver. Disse parametre var også høyere i den perifere sone enn i overgangssonen i prostata, spesielt i prostatakreft prøver. Nuclear NF-kB uttrykk var hyppigere i kjertlene med
P. acnes
enn i kjertler uten
P. acnes
. Antallet stromal makrofager med bakterien korrelert med grad av kronisk betennelse i både PZ og TZ områder og med karakteren av akutt betennelse i TZ-området.
Konklusjoner
Immunhistokjemisk analyse med et nytt monoklonalt antistoff for å påvise
P. acnes
i prostata antydet at intraepitelial
P. acnes
infeksjon i ikke-cancerous prostata kjertler og betennelser forårsaket av bakterien kan bidra til utvikling av prostatakreft
Citation. Bae Y, Ito T, Iida T, Uchida K, Sekine M, Nakajima Y, et al. (2014) Intracellulær
Propionibacterium acnes
Infeksjon i Glandular Epitel og stromal Makrofager av prostata med eller uten kreft. PLoS ONE 9 (2): e90324. doi: 10,1371 /journal.pone.0090324
Redaktør: Robert Hurst, Oklahoma University Health Sciences Center, USA
mottatt: 13 desember 2013; Godkjent: 29 januar 2014; Publisert: 28 februar 2014
Copyright: © 2014 Bae et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet av Japan Society for Promotion of Science Grant-i-Aid for Scientific Research 24659402 (YE). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Prostatakreft er den nest vanligste kreftformen hos menn over hele verden, med anslagsvis 900.000 tilfeller og 258.000 dødsfall i 2008 [1]. Mens flere risikofaktorer for prostatakreft er identifisert, for eksempel etnisk opprinnelse, alder, familiehistorie, og kosthold [2], den eksakte etiologien av prostatakreft er fortsatt ukjent. Mange nyere studier gir holdepunkter for at kronisk betennelse er en viktig medvirkende faktor for prostata kreftutvikling ved å forårsake DNA-skade, fremme cellular omsetning, og skape en vev mikromiljø som forbedrer celle replikering, migrering og angiogenese [3], [4].
i den inflammatoriske respons, er transkripsjonsfaktorer som nukleær faktor-kappaB (NF-kB) aktiveres ved binding av mønstergjenkjenning reseptorer (Toll-lignende reseptorer, nukleotid-bindende oligomeriseringsprosessen domene [NOD] -lignende reseptorer og andre ), pro-inflammatoriske cytokin-reseptorer (tumor nekrose faktor-α eller interleukin [IL] -1), og antigen-reseptorer [5] – [8]. Selv om NF-kB ikke passer den klassiske definisjonen av et onkogen, er det en kraftig aktivator av den ondartede tilstand og regulerer ekspresjonen av målgener viktige for celleformering, overlevelse, angiogenese, og reparasjon av vev [8] – [12].
eksponering for miljøfaktorer, som for eksempel smittestoffer, kosttilskudd kreftfremkallende og hormonforstyrrende effekter, antas å føre til skade av prostata og utvikling av kronisk betennelse [3]. Nylige rapporter viser at
Propionibacterium acnes plakater (
P. Acnes
) blir ofte detektert i prostatavev fra pasienter med prostatitt og prostatakreft, og at bakterien er assosiert med akutt og kronisk betennelse og prostatisk kan ha en rolle i prostata kreftutvikling [13] – [21]
P.. acnes
er en Gram-positiv, ikke-sporedannende, anaerob Bacillus finnes hovedsakelig i talgkjertel-rike områder av huden hos voksne [22]. Den innfødte Bakterien er også isolert fra konjunktiva, munn og tarm [23]. Historisk
P. acnes
ble antatt å være av lav virulens, men ble nylig funnet å være det forårsakende middel i forskjellige patologier.
P. acnes
er spesielt implisert i acne vulgaris [24], men bakterien kan også være forbundet med en rekke inflammatoriske tilstander, slik som endokarditt, ledd og sentralnerve infeksjoner, og sarkoidose [25] -. [28]
Vi har tidligere rapportert at mange (71%) serotype i kliniske isolater av
P. acnes
invadere epitelceller [29], og intraepitelial
P. acnes
infeksjon aktiverer NF-kB i både en NOD1- og NOD2 avhengig måte [30]. Til tross akkumulere bevis på
P. acnes
infeksjon i prostata ved bakteriekultur eller polymerase chain reaction metoder, er det bare noen få rapporter der bakterien ble lokalisert i prostata vev ved in situ immunfluorescens metoder med polyklonale antistoff til
P. acnes product: [31] eller flerfarget fluorescens in situ hybridisering metoder målretting
P. acnes
23S rRNA [14].
For å undersøke videre etiologisk sammenheng mellom
P. acnes Hotell og betennelse eller kreftutvikling, ikke bare bakterien, men også histologiske trekk ved prostatavevet må analyseres i identiske histologiske snitt. Hensikten med denne studien var å finne
P. acnes
i prostata vevet under lysmikroskopi av enzymet immunhistokjemi. For dette formålet, har vi utviklet en ny anti
P. acnes
monoklonalt antistoff som reagerer med bakteriene i formalinfiksert og parafin-embedded prostata vev seksjoner. For å evaluere patogene rolle denne urfolk bakterien i utviklingen av prostatakreft, undersøkte vi radikal prostatektomi prøver tatt fra pasienter med eller uten prostatakreft ved immunhistokjemi med romanen antistoff til
P. acnes
og et antistoff til NF-kB, som ble brukt for å bestemme en mulig sammenheng mellom
P. acnes
infeksjon og kjernefysiske NF-kB uttrykk i prostata kjertler. Videre analyserte vi enten
P. acnes
smittestatus ble forbundet med prostata kreftrisiko.
Materialer og metoder
Etikk uttalelse
Denne studien ble godkjent av etisk komité i Tokyo Medical and Dental universitet (registreringsnummer 1373). Fordi studien involverte farging av klinisk innhentet og arkivert formalinfiksert og parafininnstøpte vevsprøve godkjente etikkutvalg avkall på spesifikt informert samtykke i samsvar med etiske retningslinjer for kliniske studier (endret 31.07.2008) ved Helsedepartementet, Arbeidsdepartementet og velferd i Japan. Dyret forsøksprotokoll brukt i denne studien ble godkjent av Center for Experimental Animal av Tokyo Medical and Dental University (registreringsnummer 0120203A) og ble utført i samsvar med retningslinjene fra ovenfor sentrum.
Prøver
Vi undersøkte formalinfiksert og parafininnstøpte vevssnitt av radikal prostatektomi prøver fra 28 pasienter (alder: 50-78 år) med prostatakreft som gjennomgikk kirurgi mellom 2008 og 2011 på Tokyo Medical and Dental universitetssykehus, og fra 18 kontrollpasienter (alder: 50-80 år) med blærekreft, men uten prostatakreft, som gjennomgikk kirurgi mellom 1994 og 2011 ved samme sykehus. Pasienter som fikk preoperativ behandling ble ekskludert fra studien. De clinicopathologic profiler av tilfellene er vist i tabell 1. parafininnstøpte vevsblokker ble valgt ut fra blokkene forberedt for rutinemessig patologisk undersøkelse. En horisontalt kutt delen av prostata inkludert verumontanum ble identifisert i hvert enkelt tilfelle, og prøvene ble inkludert i studien når kreften spredt var begrenset til høyre eller venstre lapp i seksjonen. En av de høyre og venstre fliker i et avsnitt uten kreft ble analysert for å undersøke fordelingen av
P. acnes
og intraepitelial aktivering av NF-kB i ikke-kreftvev, og den andre lapp ble analysert for å påvise
P. acnes
i kreftvev.
Produksjon av monoklonalt antistoff
Et nytt monoklonalt antistoff ble utviklet for å finne
P. acnes
i formalinfiksert og parafin-embedded prostata vev seksjoner. Antistoffet ble generert i henhold til den protokoll som er beskrevet i A Laboratory Manual [32] med modifikasjoner. BALB /c-mus (CLEA Japan, Tokyo, Japan) ble immunisert med sonikert hel bakteriell lysat av serotype I
P. acnes
isolert fra human prostata i en tidligere studie [29]. Hybridom cellelinjer som produserer anti-
P. acnes
antistoffer ble kontrollert ved enzymbundet immunosorbent assay med de bakterielle antigenene anvendt som immunogener. Hybridoma-cellelinjer med positive resultater ble screenet ved farging med formalinfikserte og parafininnstøpte vevssnitt av
P. acnes
-injected rottelever.
P. acnes
injiserte rottelever ble oppnådd ved intravenøs injeksjon av 30 mg av varme-drepte
P. acnes
inn i hunn Sprague-Dawley rotter (CLEA Japan) 1 time før drepe rotter. Tilsvar forberedt levervev deler av rotter injisert av hver stamme av andre kontroll bakterier ble også undersøkt for å bekrefte spesifisiteten til
P. acnes
. Hybridom cellelinjer som produserer antistoffer som genererte en sterk reaksjon som er spesifikk for
P. acnes
i rotteleversnitt ble utvalgt og ytterligere screenet ved farging med formalinfiksert og parafininnstøpte prostata vevssnitt av prøven fjernet ved prostatektomi der et stort antall av
P. acnes
ble dyrket i forrige undersøkelse [29]. Det hybridom som produserer antistoffet som genererte den mest spesifikke reaksjonsproduktet mangler noen kryssreaktivitet til humane prostata vev, inkludert Lipofuscin pigmenter, ble utvalgt og klonet ved to runder av begrensende fortynning. En enkelt hybridom klon ble deretter implantert i intraperitoneal plass av alvorlig kombinert immunsvikt-mus (CLEA Japan). Ved 1 eller 2 uker etter implantering, ble ascites oppsamlet og anvendt som en ufortynnet antistoff uten ytterligere rensing. Antistoffet ble kalt PAL.
Spesifisiteten av PAL-antistoff ble undersøkt ved Western blot i henhold til den tidligere beskrevne metoden [26] med serotype I
P. acnes
type stamme (ATCC 6919 og ATCC 11827), serotype II
P. acnes
type stamme (ATCC 11828), 19 kliniske isolater av
P. acnes product: (10 stammer av serotype jeg og 9 stammer av serotype II) fra prostata [29], andre kutan propionsyrekulturen (
P. granulosum
ATCC 25564,
P. avidum
, ATCC 25 577, og
P. lymphophilum
ATCC 27520), og andre kontroll bakterier (
Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli
,
Bacteroides flagilis
, og
Enterrococcus faecalis
).
immunhistokjemi
histologiske snitt (3 mikrometer tykk) ble kuttet fra formalinfiksert og parafin-embedded vevsprøver og montert på silane-belagt lysbilder (Muto Pure Chemicals , Tokyo, Japan). Etter at delene ble de-paraffinized og utvannet, ble de varmes i mikrobølgeovn (Mikrobølgeovn Processor H2850; energistråle Sciences, East Granby, CT) i 40 minutter ved 97 ° C i 10 mmol /l citrat buffer (pH 6,0). Snittene ble så behandlet med 3% hydrogenperoksid i metanol i 10 min. Snittene ble først inkubert med normal hesteserum (Vectastain Elite ABC Kit Universal, Vector Laboratories, Burlingame, CA) og deretter inkubert over natten ved værelsetemperatur med enten passende fortynnet PAL-antistoff (1:60000) eller anti-NF-kB-antistoff (1 :2000, EPITOMICS, Burlingame, CA), eller en blanding av disse to antistoffer til cocktail immunofarging, i et fuktet kammer. Seksjonene ble deretter inkubert i 30 minutter med biotinylert sekundært antistoff, etterfulgt av 30 min inkubering med streptavidin-peroksydase-kompleks (Vectastain Elite ABC Kit Universal), begge ved romtemperatur. Før og etter hvert trinn, ble seksjonene vasket i fosfat-bufret saltvann inneholdende 0,5% Tween-20. Signalet ble utviklet som et brunt reaksjonsprodukt ved hjelp peroxydasesubstrat diaminobenzidine (HistofineSimplestain DAB Solution; Nichirei Bioscience Inc., Tokyo, Japan). Alle prøvene ble kontra med Mayers hematoksylin. Nærliggende områder ble også undersøkt med hematoxylin og eosin farging for konvensjonell histopathologic eksamen.
For samtidig identifisering av cytoplasma
P. acnes
og atom NF-kB-ekspresjon i den samme prostatavev seksjon, cocktail farging med en blanding av PAL-antistoff og anti-NF-kB-antistoff som det primære antistoff ble utført på alle prøver. For å sikre påliteligheten av denne fremgangsmåte, ble to seriesnitt av identiske prøver undersøkt ved immunfarging cocktail og immunoenzyme dobbel-farging, respektivt. For immunoenzyme dobbel-farging ble snittene først omsatt med PAL-antistoff ved å bruke avidin-biotin-kompleks metode med Vectastain ABC-AP Kit (AK-5000, VECTOR) og vektoren blå alkalisk fosfatase substrat Sett III (SK-5300, VECTOR ), og deretter inkubert i 5 minutter i denaturerende oppløsning (denaturerende løsning kit, BRR001DH, Biocare Medical) og videre inkubert i 5 min i Dako REAL Peroxidase-Blocking Solution (S2023, Dako, Glostrup, Danmark). Etter disse fremgangsmåtene, seksjonene gjennomgikk sekundær reaksjon med anti-NF-kB-antistoff, etterfulgt av immunhistokjemi anvendelse av en polymer metode med seg + System-HRP Labelled Polymer (K4001, Dako) og HistofineSimplestain DAB løsning.
Samme prøvene som brukes for immunoenzyme dobbel-farging ble også analysert ved immunfluorescens dobbeltfarging til fenotype cellene med intracellulære
P. acnes
bruker antistoffer til epitelceller og phagocytes; anti-cytokeratin monoklonalt antistoff (AE1 /AE3, Dako) for epitelceller, anti-humant CD68 monoklonalt antistoff (klon KP1; Dako) for makrofager, eller anti-humant fascin monoklonalt antistoff (klon 55K-2; Dako) for dendrittiske celler, i henhold til de tidligere beskrevne metoder [33].
for å bekrefte at PAL antistoffet ikke kryssreagerer med lipofuscin pigmenter som ofte finnes i prostatakjertler, immunfluorescens farging med eller uten PAL antistoff ble sammenlignet ved hjelp av serie prostata vevssnitt og immunoenzyme flekker med PAL antistoff ble etterfulgt av Fontana-Masson flekker eller fluorescens-mikroskopisk observasjon for identiske prostata vevssnitt.
Evaluering av immunhistokjemiske og histologiske funn
for å evaluere
P. acnes
infeksjon og atom NF-kB-ekspresjon i samme histologiske snitt ble det lys-mikroskopiske bilder av seksjonene immunfarget med en blanding av PAL-antistoff og anti-NF-kB-antistoff (cocktail immunofarging) inkorporert inn i virtuelle lysbilder med Mirax MIDI BF /FL Digitaliserer for 12 lysbilder (Carl Zeiss MicroImaging, Jena, Tyskland) og undersøkt ved hjelp av en Pannoramic Viewer 1.15 service Pack 2 (3DHISTECH, Budapest, Ungarn). ble utført morfometrisk analyse av alle prostata kjertler som inngår i avsnittene under høyt makt visning av de virtuelle lysbilder. Hver prostatakjertelen ble ansett som
P. acnes
-positivt når cytoplasmatiske positive signaler etter PAL-antistoff ble observert i det minste en epitelcelle av kjertelen. Når det gjelder atom NF-kB ekspresjon, ble kjertelen ansett som positive når nucleus-positive signaler ble observert i det minste en epitelcelle. Cytoplasmatiske NF-kB-ekspresjon ble ikke ansett som positiv fordi aktivert NF-kB translocates fra cytoplasma til kjernen [34], [35]. I henhold til tilstedeværelse eller fravær av cytoplasmatisk
P. acnes Hotell og kjernefysiske NF-kB uttrykk for hver kjertel, alle prostata kjertler (totalt antall kjertler per seksjon strekker 933-5519 med en gjennomsnittlig antall 2358) ligger i de områdene av randsonen (PZ) eller overgangssone ( TZ) ble kategorisert i fire grupper (
P acnes Twitter /NF-kB.. + /+ +/- – /+, og – /-), og kjertler kategorisert til hver gruppe ble preget av en forskjellig farge på de virtuelle lysbilder. Ifølge resultatene som oppnås ved de fire-gruppen klassifisering, påvisning frekvensen av kjertler med enten cytoplasma
P. acnes
eller kjerne NF-kB-ekspresjon ble beregnet for hvert tilfelle i PZ og TZ områder, henholdsvis. Alle de prostatiske stromale celler med cytoplasma-signaler ved PAL-antistoff ble tellet i den PZ og TZ områder, henholdsvis på den virtuelle glide delene som ble immunfarget med bare PAL-antistoff. For å vurdere graden av akutt og kronisk betennelse, ble tilstøtende seksjoner undersøkt med hematoxylin og eosin farging og klassifiseres i fire karakterer (0, 1+, 2+ og 3+) i henhold til kriteriene som brukes av Cohen et al. [13].
Statistiske analyser
frekvens (%) av
p.acnes
-positive kjertler eller kjernefysiske NF-kB-positive kjertler ble beregnet som antall positive kjertler delt på antall totale kjertler for hver pasient; og antall
P. acnes
-positive makrofager ble regnet for hver pasient. Disse parametrene ble oppsummert som median [25
th og 75
th persentiler] for hver PZ og TZ området og sammenlignet mellom kontroll- og prostatakreft prøver ved hjelp av en Mann-Whitney U-test. Parameterne i hver kontroll og prostatakreft prøven ble også sammenlignet mellom PZ og TZ områder ved hjelp av Wilcoxon svidd-rank test. Sammenhengen mellom disse parametrene og karakteren av akutt eller kronisk betennelse ble analysert ved hjelp av Spearmans rang korrelasjonskoeffisient. Grade av akutt eller kronisk inflammasjon ble også sammenlignet mellom kontroll- og prostatakreft prøver ved hjelp av en Mann-Whitney U-test. Hyppigheten av kjernefysiske NF-kB uttrykk i kjertler med
P. acnes Hotell og kjertler uten
P. acnes
ble beregnet for hver pasient, oppsummert som median [25
th og 75
th persentiler], og sammenlignet med Wilcoxon svidd-rank test i PZ og TZ områder av kontroll og prostatakreft prøver. Spearmans rang korrelasjonskoeffisient ble brukt til å vurdere sammenhengen mellom frekvensen av
p.acnes
-positive kjertler og antall
P. acnes
-positive stromal makrofager. Analysene ble utført for PZ og TZ områder, henholdsvis.
p
-verdier ble justert for multiple sammenligninger av Holm metode der det er hensiktsmessig. En
p
-verdi på mindre enn 0,05 ble ansett for å være statistisk signifikant. Statview programvaren (versjon 5.0, SAS Institute, Cary, NC). Ble brukt for alle de statistiske beregninger
Resultater
Spesifisitet av monoklonalt antistoff
PAL antistoff reagerte med alle stammer av serotype i
P. acnes Hotell og reagerte ikke med noen stammer av serotype II
P. acnes
, andre kutan propionsyrebakterier, eller andre verne bakterier. Antistoffet anerkjent en
P. acnes
-spesifikke epitop av lipoteichonsyre syre som vanligvis deles av alle stammer av serotype I
P. acnes
.
Lokalisering av
P. acnes
i prostata
I de ikke-kreft prostata kjertler, PAL-antistoff reagerte med små runde kropper i epitelceller (figur 1). De små runde legemer ble observert i hyperplastiske, normal, og atrofisk epitelceller, men oftere i hyperplastiske epitel-celler (figur 2A-B) enn i normale eller atrofiske celler (figur 2C-D). I prostata stroma, ble PAL-positive små runde kropper også påvist i makroceller, som ble distribuert tynt i klynger i stroma. Disse cellene dukket opp i forholdsvis høy densitet i nærheten av de atrofisk kjertler, ledsaget av mononukleære inflammatoriske celler (figur 2E-F). I enkelte områder med alvorlig periglandular betennelse, makro PAL-positive celler infiltrert kjertlene og ble noen ganger påvist i luminal mellomrom.
antistoff reagerte med små runde kropper (piler) i noen ikke-kreft glandular epitelial celler.
Positive signaler ved antistoff var hyppigere i kjertlene med epitelial hyperplasi (A, B) enn i normale eller atrofisk kjertler (C, D). I prostata stroma, var positive signaler som finnes i makrofaglignende celler ledsaget av mononukleære inflammatoriske celler (E, F). Noen positive signaler ble sjelden funnet i noen kreftceller (G, H). Høyere forstørrelse av det området som er angitt med pilen, er vist i den innfelte av hver figur.
Immunofluorescence dobbeltfarging bekreftet at alle kjertler signaler som detekteres av PAL-antistoffet var i cytoplasma av epitelcellene farget med anti-cytokeratin antistoff (AE1 /AE3) og alle de stromale signaler som detekteres av PAL-antistoff ble i makrofager farget med anti-CD68-antistoff, men ikke med anti-fascin antistoff (figur 3A-C). Lipofuscin pigmenter ble observert i enkelte prostatakjertler med intracellulære
P. acnes
. Disse Lipofuscin pigmentene var farget mørkebrunt med Fontana-Masson og produsert sterk auto-fluorescens, og PAL-antistoffet ikke kryssreagerer med disse Lipofuscin pigmenter (figur 3D-J).
Immunofluorescence dobbel-farging av
P. acnes
-positive celler i prostata vev (A-C). Grønn signal (FITC): PAL antistoff; røde signaler (TRITC): anti-cytokeratin-antistoff (A), anti-CD68-antistoff (B), og anti-fascin antistoff (c). Resultater fra dobbelt-farging er slått sammen i alle bilder. I prostata kjertler, alt
P. acnes
-positive signaler overlappet (gul) med cytokeratin-positive kjertel epitelceller (A). I prostata stroma, alt
P. acnes
-positive signaler overlappet (gul) med CD68-positive makrofager (B), og ikke overlapper hverandre i det hele tatt (grønn) med fascin-positive dendrittiske celler (C). Farging med PAL-antistoff, etterfulgt av Fontana-Masson farging (D). De fleste av de røde positive signaler ved PAL antistoff (piler) i prostata glands ikke overlapper med Lipofuscin pigmenter (pilspisser), som er mørk brun med Fontana-Masson farging. Immunoenzyme farging av prostatavevet med eller uten PAL antistoff ved hjelp av serie prostata vevssnitt (E, F). Mange intracellulære mørkebrune signaler (piler) ble observert i avsnittet med PAL antistoff (E), men ingen slike signaler ble observert i seksjonen uten antistoff (F). Identisk del av prostatakjertelen med eller uten immunoreaktive signaler ved de enzymmetoden observert ved både lys og fluorescens mikroskopi (G-J). I den del av et prostatakjertelen med mange positive signaler antistoff (piler) (G), lite lipofuscin auto-fluorescens (pilspiss) ble observert i det samme område (H). I motsetning til dette, i den del av et prostatakjertelen med ingen positive antistoffsignaler (I), en større grad av lipofuscin auto-fluorescens (pilspisser) ble observert i det samme område (J).
også bekreftet at deteksjons resultatene av cytoplasma
P. acnes
og atom NF-kB-ekspresjon i prostatakjertel epitelceller var nesten den samme mellom den immunoenzyme dobbeltfarging og den cocktail farging som ble anvendt for analyse av de virtuelle bakker (figur 4). Samtidig evaluering av
P. acnes Hotell og NF-kB status i identiske deler av cocktail farging avdekket en panoramisk fordeling av kjertler kategoriseres i fire grupper på de virtuelle lysbilder (figur 5).
I (venstre kolonne) double-flekker, de positive signalene som detekteres av PAL-antistoff (piler) og de positive signaler ved atom anti-NF-kB-antistoff (pilhoder) ble visualisert ved blå og brune farger, respektivt. I cocktail farging (høyre kolonne), ble begge av de positive signalene visualisert ved den brune fargen. Representative kjertler som ble kategorisert i hver av de fire gruppene i henhold til statusen for intraepitelial
P. acnes
infeksjon og kjernefysiske NF-kB uttrykk er vist i hver rad. Resultatene av disse parametrene var det nesten samme mellom immunoenzyme dobbeltfarging og cocktail farging. . NNF-kB: kjernefysiske NF-kB
Venstre, prostatakreft prøve (A); høyre, kontrollprøve (B). Røde sirkler, kjertler med både
P. acnes Hotell og kjernefysiske NF-kB uttrykk; gule sirkler, kjertler med
P. acnes
men ingen kjernefysiske NF-kB uttrykk; blå sirkler, kjertler med kjernefysiske NF-kB uttrykk, men ingen
P. acnes
; og hvite sirklene, kjertler med verken
P. acnes
eller kjernefysiske NF-kB uttrykk. Svarte linjer viser grensen mellom randsonen (PZ) og overgangssonen (TZ). Totalt antall av kjertler undersøkt ved det virtuelle bilde analysatoren var 1894 i prøven (A) fra en pasient prostatakreft og 1465 i prøven (B) fra en pasient med blærekreft, men ingen prostatakreft. Legg merke til at mer røde og gule sirkler ble observert i PZ området av prostatakreft prøven sammenlignet med både den PZ og TZ områder av kontrollprøven, så vel som til den TZ området av prostatakreft prøven.
Prostata kreft celler i de fleste tilfeller var negative for PAL antistoff, med tre spesielle tilfeller (figur 2G-H). Okkupasjons område av kreft kjertler med
P. acnes
infeksjon i hele området av kreft lesjon i seksjonen var 5% i ett tilfelle, og mindre enn 1% i de to andre tilfellene. PAL-positive stromal makrofager ble påvist i 13 (46%) av 28 kreftvevet.
Deteksjon hyppigheten av
P. acnes
i prostata
intraepitelial
P. acnes
av de ikke-kreft prostatakjertler ble påvist i alle prøver, og stromale makrofager med bakterien ble observert hos 27 av 28 kreftprøvene og 14 av 18 kontrollprøver.
midtlinje [25
th og 75
th persentilene] frekvens (%) av prostata kjertler med intraepitelial
P. acnes
var 14,4 [8,8, 28,0] i PZ området og 4,9 [2,4, 9,1] i TZ område av kreftprøver (Figur 6A). I kontrollprøver, frekvensen var 4,3 [1,3, 8,1] i PZ området og 1,6 [1,1, 3,2] i TZ-området. Frekvensen var signifikant høyere hos kreftprøver enn i kontrollprøver i både PZ og TZ områder. I begge kreft og kontrollprøver, frekvensen var signifikant høyere i PZ området enn i TZ-området.
Frekvens (%) av
P. acnes
-positive kjertler (A) eller kjernefysiske NF-kB-positive kjertler (B), og det totale antallet
P. acnes
-positive stromal makrofager (C) i de perifere og overgangssoner av prostatakreft (PCA) og kontrollprøver.
P
-verdier ble justert for multiple sammenligninger (4 sammenligninger i hvert panel) ved Holm metode. NS. Uvesentlig
Median antall stromal makrofager med
P. acnes
var 30 [10, 82] i PZ-området og 12 [3,35] i TZ område av kreftprøver, mens medianen var tallet to [0, 32] og 5 [0, 7] i kontroll prøver, henholdsvis (figur 6C). Antallet stromale makrofager signifikant høyere i kreftprøvene enn i kontrollprøvene i både PZ og TZ områder. I kreftprøvene, var antallet signifikant høyere i PZ område enn i det TZ-området. Antallet
P. acnes
-positive stromal makrofager korrelerte med frekvensene av
P. acnes
-positive kjertler i PZ område av kreftprøver (Spearmans rang korrelasjonskoeffisient = 0,47,
p
= 0,015).
Deteksjon hyppigheten av kjernefysiske NF-kB uttrykk
Nuclear NF-kB ekspresjon av kjertel epitelceller ble påvist i alle prøver. I kreftprøvene var median frekvens (%) av NF-kB-positive kjertlene var 17,1 [10,3, 31,4] i PZ området og 7,1 [2,8, 14,8] i TZ-området (figur 6B). I kontrollprøver, frekvensen var 7,3 [4,4, 11,1] i PZ området og 4,4 [2,1, 11,3] i TZ-området. I PZ området, frekvens var signifikant høyere hos kreftprøvene enn i kontrollprøvene. Hos kreftprøver, frekvensen var signifikant høyere i PZ området enn i TZ-området.
Sammenheng mellom
P. acnes
infeksjon og kjernefysiske NF-kB uttrykk
Hos kreftprøver, median frekvens (%) av kjernefysiske NF-kB uttrykk for kjertlene med
P. acnes
var 27,6 [18,3, 47,5] i PZ området og 14,0 [5,8, 25,6] i TZ-området, mens median frekvens av kjertler med kjernefysiske NF-kB uttrykk, men uten
P. acnes
var 15,9 [9,0, 27,2] i PZ området og 6,7 [2,7, 13,7] i TZ-området (figur 7A). I kontrollprøver, frekvensen i
P. acnes
-positive kjertlene var 17,8 [8,9, 24,8] i PZ området og 13,0 [1,3, 36,1] i TZ-området, mens frekvensen i
P. acnes
-negative kjertlene var 7,2 [4,1, 10,9] i PZ området og 4,1 [2,0, 10,7] i TZ-området (figur 7B). Frekvensen av kjernefysiske NF-kB uttrykk var betydelig høyere i
P. acnes
-positive kjertler enn i
P. acnes
-negative kjertler i PZ og TZ områder av både kreft og kontrollprøver.
Frekvens (%) av kjernefysiske NF-kB uttrykk i kjertlene med eller uten cytoplasma
P. acnes
i de perifere eller overgangssoner av prostatakreft (A) og tak prostata (B) prøver.
P
-verdier ble justert for multiple sammenligninger (2 sammenligninger i hvert panel) ved Holm metode.
Sammenheng mellom betennelse og
P. acnes
infeksjon status eller NF-kB-aktivering
Grad av akutt eller kronisk betennelse i PZ eller TZ områder av kreft og kontrollprøver er vist i figur 8. I begge PZ og TZ områder, karakter av betennelse var ikke signifikant forskjellig mellom kreft og kontrollprøver. Karakteren av akutt eller kronisk betennelse korrelerte ikke med enten hyppigheten av kjertler med cytoplasmatiske
P. acnes
eller frekvens av kjertler med kjernefysiske NF-kB uttrykk.
