Abstract
Flere studier har antydet ErbB3 /HER3 kan være et nyttig prognostisk markør for tykktarmskreft. Tumorer med en intestinal stamcelle signatur har også vist seg å være mer aggressive. Her undersøker vi om ErbB3 er assosiert med tarmstamcellemarkører i kolorektal kreft, og hvis kreftstamceller i svulster er preget av uttrykk for ErbB3. Uttrykk for ErbB3 og tarmstamcellemarkører (LGR5, EPHB2, CD44s og CD44v6) ble vurdert ved QRT-PCR i grunnskolen kolorektal tumorer (faser 0 til IV) og matchet normalt vev fra 53 pasienter. Lokalisering av ErbB3, EPHB2 og KI-67 innen svulster ble undersøkt ved hjelp av co-immunfluorescens. Uttrykk for ErbB3 og tarmstamcellemarkører ble signifikant forhøyet i adenomer og kolorektal tumorer i forhold til normalt vev. Positive korrelasjoner ble funnet mellom ErbB3 og tarmstamcellemarkører. Men co-immunfluorescens analyse viste at ErbB3 og EPHB2 merket spesifikke cellepopulasjoner som var gjensidig utelukkende innenfor svulster med forskjellige proliferative potensialer, de fleste av ErbB3 + ve celler blir ikke-proliferativ. Dette mønsteret ligner cellular organisasjon innenfor normal kolonepitelet hvor EPHB2 merket proliferative celler bor i krypten base og ErbB3 + ve celler markere differensierte celler på toppen av krypter. Våre resultater viser at ErbB3 og tarmstamcellemarkører korrelerer i kolorektal kreft. ErbB3 lokaliseres til differensierte cellepopulasjoner i løpet av tumorer som er ikke-proliferative og forskjellig fra kreft stamceller. Disse dataene støtter ideen om at svulster inneholde diskrete stilk, proliferativ og differensiering avdelinger lik som finnes i vanlige krypter
Citation. Jarde T, Kass L, Staples M, Lescesen H, Carne P, Oliva K, et al. (2015) ErbB3 Positively korrelerer med tarm Stem Cell Markers men Markerer en distinkt røyk proliferativ cellepopulasjonen i tykktarmskreft. PLoS ONE 10 (9): e0138336. doi: 10,1371 /journal.pone.0138336
Redaktør: Michelina Plateroti, Universitetet Claude Bernard Lyon 1, FRANCE
mottatt: 23 desember 2014; Godkjent: 28 august 2015; Publisert: 14. september 2015
Copyright: © 2015 Jarde et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. forfatterne erkjenner støtte til dette arbeidet fra National Health and Medical Research Council (Australia) prosjekttilskudd 1010429 til HA og PJM, og 1011187 til HA. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
tykktarms~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP er en av de vanligste diagnosen og dødelige kreft over hele verden, med mer enn 1,2 millioner nye tilfeller og 0,6 millioner dødsfall estimerte i 2008 [1]. Terapeutiske strategier som omfatter kirurgisk reseksjon koplet til kjemoterapi er relativt effektiv i å behandle hele tumormassen. Imidlertid vil mange kreftformer gjenoppstår i løpet av måneder eller år. Sykdom tilbakefall har vært foreslått å skyldes kjemoterapi resistente kreft stamceller som formidler før tumorreseksjon. Disse multipotente celler er deretter i stand til å gi opphav til en ny tumor, som fører til kreft tilbakefall og metastasering. Nylige fremskritt innen kolorektal kreft har ført til karakterisering av tarmstamcellemarkører, inkludert LGR5, EPHB2, og CD44 [2-4]. I normal kolonepitelet, er disse markørene begrenset til bunnen av kryptene hvor stamceller bor. Høyere ekspresjonsnivåene av disse markørene er funnet i kolorektal cancer i forhold til tilstøtende normalt vev og LGR5 uttrykk positivt korrelerer med antallet av lymfeknutemetastaser [4-7]. Kolorektal kreftpasienter med høy uttrykk for en intestinal stamcelle gen signatur, inkludert LGR5 og EPHB2, har en 10 ganger høyere risiko for tilbakefall sammenlignet med pasienter med lave nivåer [8]. Forstå signalveier og molekyler som regulerer kreft stamceller er nødvendig for å utvikle robuste prognostiske tilnærminger og nye terapeutiske strategier.
erbB familien av reseptor tyrosin kinaser, også kjent som HER reseptorer, består av fire medlemmer-ERBB1 /HER1 , ErbB2 /HER2, ErbB3 /HER3 og ErbB4 /HER4. Disse reseptorer er viktige modulatorer av normal vekst og utvikling, og deres feilregulering har vært implisert i initiering og progresjon av kreft [9, 10]. Antistoff-basert terapi rettet mot ERBB1 eller ErbB2, med sikte på å redusere sine signaloverførings evner, har vist klinisk nytteverdi i behandling av flere svulster [11]. På grunn av fravær av en aktiv intracellulært tyrosinkinase-domene, ble ErbB3 tilsidesatt for flere år som et mål kreft [12]. Imidlertid, ErbB3 har nylig blitt foreslått å være involvert i ervervet resistens til terapi og har dukket opp som et potensielt terapeutisk mål som fører til utvikling av flere anti-ErbB3-antistoffer [13]. Selv om den nøyaktige funksjonen til ErbB3 i kolorektal kreft ikke er fullt ut forstått, flere studier tyder på at ErbB3 blir forstyrret i svulster. For eksempel har ErbB3 somatiske mutasjoner er funnet i 11% av kolon kreftformer og flere studier har vist at ErbB3 uttrykkes i 36-89% av kolorektal kreft [14-20]. Noen studier har antydet at økt ErbB3 protein ekspresjon i kreft i tykktarmen er også assosiert med redusert pasientoverlevelse [20, 21].
In vitro
, redusert ErbB3 knockdown celleproliferasjon, apoptose og blokkerte migrasjon av tykktarmskreftceller [21]. En lignende mekanisme ble observert
in vivo
hvor ErbB3 knockdown forsinket tumorvekst [14]. Selv om disse dataene er tydelig indikasjon på en onkogene potensial for ErbB3, er det foreløpig ukjent om ErbB3 regulerer kolorektal kreft stamcelle basseng som er foreslått å kjøre startfasen og tumorresidiv [8, 22].
Materialer og metoder
pasient~~POS=TRUNC rekruttering og vev samling
Femti tre pasienter med primær adenomer (n = 4) eller adenokarsinomer (n = 49) ble operert i 2012/2013 på Cabrini Hospital (Malvern, Victoria) . Studien ble godkjent av Cabrini menneskelige forskningsetiske komité. Alle pasienter gitt skriftlig informert samtykke. Tumor prøver og matchet normale tykktarm vev ble nylig lagret i RNAlater (Qiagen) for RNA-ekstraksjon og fiksert i 4% paraformaldehyde for vev uttrykk analyse.
Cell kultur
LIM1215, LIM1899, LIM2405, LIM2550 , CACO2 og SW480 menneskelige kolorektal kreft cellelinjer ble brukt i denne studien (ble levert som en gave fra The Ludwig Institute for Cancer Research, Parkville, Australia) [23-26]. Celler, bortsett CACO2 cellene ble rutinemessig passert i RPMI 1640 inneholdende 10% føtalt kalveserum (Gibco), penicillin /streptomycin (Gibco) og Glutamax (Gibco). CACO2 celler ble holdt i DMEM inneholdende 20% føtalt kalveserum (Gibco), penicillin /streptomycin (Gibco) og Glutamax (Gibco). Celler ble dyrket i en fuktig atmosfære med 5% CO2 ved 37 ° C.
RNA-ekstraksjon, cDNA-preparat og kvantitativ RT-PCR
vev oppnådd fra resekterte kolorektal kreft og matchet normalt vev ble homogenisert og total RNA ekstrahert ved hjelp TRIzol reagens (Life Technologies) og RNeasy mini kit (Qiagen). Total RNA ble ekstrahert fra kolorektal kreftceller fra de 6 cellelinjer ved bruk av RNeasy Mini Kit (Qiagen). RNA ble revers transkribert ved hjelp av QuantiTect Reverse Transcription Kit (Qiagen). Kvantitativ revers transkriptase polymerase chain reaction (QRT-PCR) ble utført ved hjelp Brilliant II SYBR Grønn QPCR Master Mix (Agilent Technologies). Tredoble Prøvene ble analysert på en LightCycler 480 maskin (Roche Diagnostics). Genuttrykk nivåer ble beregnet ved hjelp av to
-DDCt metode med det geometriske gjennomsnittet av 2 housekeeping gener. P-ACTIN og β-2-mikroglobulin som Normalisering fordi de genererte best score når du sammenligner kreft med normal slimhinne [27, 28]. Grunning er oppført i S1 tabell.
immunfluorescens
Faste vev ble parafin innebygd og kutt i 4 mikrometer seksjoner. Glass ble deparaffinised i xylen, rehydratisert i graderte alkoholer og inkubert i citrat-bufferoppløsning (pH = 6) i 10 minutter i en trykkoker.
kolorektal kreft celler fra 6 forskjellige cellelinjer ble dyrket i 4 dager på poly-L-lysin belagte lysbilder, vasket med PBS og fast med iskald aceton i 10 minutter.
Begge vevssnitt og tykktarmskreft cellelinje lysbilder ble blokkert med CAS blokk (Life Technologies) i 1 time ved romtemperatur før inkubasjon over natten ved 4 grader med primære antistoffer, EPHB2 (R 2 ganger) sammenlignet med matchede normalt vev (fig 1). Medianverdien av ErbB3-ekspresjon i adenokarsinomer (0,141) var signifikant høyere enn i normale vev (0,079) (Wilcoxon en matchende par test, p 0,0005) (figur 1). Lignende resultater ble oppnådd i adenomer sammenlignet med normale vev, selv om forskjellen ikke statistisk signifikant (paret Students t test, p = 0,061) sannsynligvis på grunn av det lave antall adenom prøver i denne pasient kohort (n = 4) (fig 2A ). Den midlere verdi for logaritmen av folden endring (0,587) var signifikant forskjellig fra 0 (p = 0,009, en-prøve t-test). Lineær regresjon modellering indikerte at ErbB3 ekspresjonsnivåer var også signifikant høyere i trinn IV tumorer i forhold til scenen I tumorer (koeffisient = 1,36, (95% konfidensintervall (CI) 0,07, 2,64), p = 0,039, data ikke vist). Det var ingen andre signifikante sammenhenger mellom ErbB3 uttrykk nivåer og kliniske markører som sykdom stadium, klasse og TNM etapper. Øket ekspresjon av ErbB3 i adenomer og adenokarsinomer, sammenlignet med normale vev ble bekreftet ved immunhistokjemi (figur 2B). ErbB3 ble hovedsakelig lokalisert til den apikale og basolateral celleoverflaten hos normale intestinale epitelceller og ble detektert på celleoverflaten hos de fleste tumorer med noe diffus cytoplasmatisk farge tydelig i noen få tilfeller (S1 Fig).
kvantitative real-time PCR-resultater er uttrykt i forhold til matchet normalt vev for hver adenokarsinom (n = 50). Skjær viser boksplott som sammenligner de absolutte verdier av genekspresjon i normal (N) og tumor (T) vev. * Betydelig forskjell sammenlignet med kontroll vev (Wilcoxon tegn rank test, p 0,001)
(A). De gjennomsnittlige uttrykk nivåer (2
-ΔΔCt) for hvert gen ble beregnet i forhold til beta-2-mikroglobulin og p-aktin-ekspresjonsnivåer ved QRT-PCR i normale tykktarm vev (n = 54), kolorektale adenomer (n = 4) og kolorektal adenokarsinomer (n = 54) (gjennomsnitt ± sEM). Signifikante forskjeller (*) ble observert i forhold til kontroll vev (paret Student t test, p 0,001). (B): Immunohistokjemisk påvisning av ErbB3 og EPHB2 i normal tykktarm vev, adenom og adenokarsinom. Scale bar, 50 pm.
uttrykk for flere tarmstamcellemarkører ble undersøkt (LGR5, EPHB2, CD44s og CD44v6). CD44s er en isoform felles for alle CD44 varianter og har blitt brukt for å identifisere mulige stamceller i flere typer vev. En fersk studie antydet at CD44v6, som inkluderer variant exon 6, var en viktig regulator av tarm stamceller og kreftdannelse, så vi har også analysert dette i våre studier [29, 30]. LGR5, EPHB2, CD44s og CD44v6 var signifikant oppregulert i kreftvevet i forhold til normalt vev (median økning 9,4 ganger, 3,5 ganger, 3,0 ganger og 6,4 ganger henholdsvis alle p-verdier og lt; 0,0005, en- sample t-test av loggede verdier = 1) (fig 1). Lignende resultater ble oppnådd i adenomer sammenlignet med normale vev (figur 2A). Uttrykket nivåer av LGR5, EPHB2, CD44s og CD44v6 ble økt minst to ganger i 70,8% (34/48), 72,0% (36/50), 66,0% (33/50) og 86,0% (43/50) av tumor vev sammenlignet med matchede normalt vev (fig 1). Øket ekspresjon av EPHB2 i adenomer og adenokarsinomer, sammenlignet med normale vev ble bekreftet ved immunhistokjemi og var tydelig lokalisert til epiteliale tumor vev (figur 2B). EPHB2 uttrykk nivåer var signifikant høyere i fase III, men ikke iscenesette IV, svulster i forhold til scenen jeg svulster (Coefficient = 1,47 (95% KI 0,30, 2,64), p = 0,015). Det var ingen andre signifikante sammenhenger mellom uttrykket av stamceller og kliniske markører.
ErbB3 positivt korrelerer med tarmstamcellemarkører i kolorektal kreft og tykktarmskreft cellelinjer
Korrelasjoner mellom mRNA kaste endringer ( adenokarsinom
vs
normal) av markører som er beskrevet i tabell 1 ble vurdert ved hjelp av Spearman rank korrelasjon test. Tarmstamcelle markør kaste endringer (LGR5, EPHB2, CD44s og CD44v6) var positivt inter-korrelert (tabell 1). Interessant, var positive korrelasjoner funnet mellom ErbB3 og stamcellemarkører LGR5, EPHB2 og CD44v6 (tabell 1). Lignende resultater ble oppnådd når adenom og adenokarsinom ble kombinert (S3 tabell).
A QRT-PCR-analyse av EPHB2 og ErbB3 uttrykk nivåer ble også utført ved bruk av 6 kolorektale carcinom-cellelinjer. Både ErbB3 og EPHB2 ble påvist ved forskjellige uttrykk nivåer i disse cellelinjer (figur 3A). Viktigst, og som observert i primærsvulster, uttrykk for ErbB3 og EPHB2 var positivt korrelert (Fig 3B, Pearson korrelasjon test, rho = 0,999, p 0,0001)
(A). Den gjennomsnittlige uttrykk nivåer (2
-ΔΔCt) av ErbB3 og EPHB2 ble beregnet i forhold til beta-2-mikroglobulin og p-aktin-ekspresjonsnivåer ved QRT-PCR i 6 forskjellige kolorektal cancer-cellelinjer (n = 3, middelverdi ± sEM). (B). Positiv lineær sammenheng mellom ErbB3 og EPHB2 uttrykk nivåer (Pearson korrelasjon test, rho = 0,999, p 0,0001)
Tykktarmskreft ligner normal tykktarm vev
Den positive korrelasjoner funnet på RNA-nivå mellom ErbB3 og tarmstamcellemarkører bedt oss om å undersøke potensialet samlokalisering av ErbB3 og tarmstamcellemarkører i svulster. Flere antistoffer rettet mot LGR5 (Sigma-Aldrich, HPA012530; Abgent, AP2745, Abcam, ab75850), CD44 (Abcam, ab41478) og EPHB2 (R EPHB2 + /ERBB3-; EPHB2- /ErbB3 +; EPHB2- /ERBB3-) ble kvantifisert (mellom 100-200 P -H3 + celler per svulst). 70,0% (området fra 57,5% til 81,8%) av P-H3 + celler ble plassert i EPHB2 + /ERBB3- befolkning, mens i motsetning til bare 8,8% (2,5 til 14,0%) p-H3 + celler ble plassert i EPHB2- /ErbB3 + cellepopulasjonen (figur 6C). P-H3 + -celler var sjelden doble positive for EPHB2 og ErbB3 (5,6%) (figur 6C). Representative bilder som viser lokalisering av P-H3 + celler i EPHB2 + /ERBB3- cellepopulasjonen i 2 forskjellige svulster er presentert i figur 6D og 6E.
For å undersøke den differensierte statusen EPHB2- /ErbB3 + celler i tykktarmskreft, vev ble trippel farget for MUC2, en markør for differensierte slimceller, ErbB3 og EPHB2. Interessant, de fleste MUC2 + kolorektal kreft celler var også EPHB2- /ErbB3 + (Fig 7A). Lignende observasjoner ble funnet i flere svulster (Fig 7B og S6 Fig). Imidlertid kan en sub-gruppe av EPHB2- /ErbB3 + kreftceller ikke var positive for MUC2 i disse tumorer (figur 7A og 7B, hvite piler). I tillegg kolorektal tumorer som ikke inneholder noen MUC2 + celler fortsatt hadde en EPHB2- /ErbB3 + cellepopulasjonen (data ikke vist).
Påvisning av EPHB2 (grønn), ErbB3 (rød) og MUC2 (grå) etter co-immunfluorescens i to representative kolorektal kreft prøver (DAPI, blå). Legg merke til tilstedeværelsen av EPHB2- /ErbB3 + celler (hvit pil) som er MUC2-. Scale bar, 50 pm.
Samlet utgjør disse dataene viser at ErbB3 + kolorektal kreft celler er overveiende ikke proliferativ og differensiert, i motsetning til EPHB2 + celler.
Diskusjoner
for å definere om ErbB3 signalering spiller en rolle i reguleringen av kolorektal kreft stamceller, ble uttrykket av ErbB3 og tarmstamcellemarkører undersøkt i flere kolorektale svulster, inkludert tidlig stadium adenomer og karsinomer (Stage i-IV). Vi fant betydelig heving av ErbB3 mRNA nivåer i adenomer og kolorektal kreft sammenlignet med normalt vev. Lignende resultater ble oppnådd for LGR5, EPHB2, CD44s og CD44v6, i overensstemmelse med tidligere studier. [4, 5, 8] Tatt sammen tyder disse data på at ekspresjon av ErbB3 og stamcelle markører er forhøyet over hele den progressive stadier av kreftutvikling. Mest interessant, fant vi ut at ErbB3 og flere molekyler som markerer stamcellepopulasjoner positivt korrelert på RNA nivå ved kolorektalkreft.
Dette funnet bedt oss om å undersøke om ErbB3 var til stede i stamcelle befolkningen innen svulster. Vi analyserte om EPHB2, en definert stamcelle markør, samlokalisert med ErbB3 uttrykk i kolorektal kreft vev. Denne viste tre forskjellige kreft undergrupper basert på i) anrikning av EPHB2 + celler og mangel på ErbB3 + celler, ii) fravær av EPHB2 + -celler eller iii) nærvær av både ErbB3 + og EPHB2 + kreftcellepopulasjoner. I senere undergruppe, ErbB3 og EPHB2 markert forskjellige gjensidig utelukkende celle populasjoner med forskjellige proliferative potensialer, de fleste av ErbB3 + celler blir ikke-proliferativ. Overraskende viser disse resultater viste at selv om det var en positiv korrelasjon mellom ekspresjon av ErbB3 og EPHB2 på RNA-nivå, disse to markørene var ikke til stede i de samme cellene. Interessant, ekspresjon av ErbB3 og EPHB2 i distinkte domener ble detektert i normal kolonepitelet hvor EPHB2 merkede stamceller og progenitorer proliferative på krypten bunnen og ErbB3 merket den ikke-proliferative differensiert cellerommet ved toppen av intestinal krypter. Våre resultater viser at de fleste kolorektal kreft vi undersøkt ligne normalt vev med atskilte cellekamre og proliferative status, og at en dobbelt EPHB2 /ErbB3 signatur kunne identifisere tumorer med denne morfologi. Et lignende mønster av uttrykket har blitt observert i kolorektal kreft ved hjelp EPHB2 og cytokeratin 20 som en differensiering markør [8, 31]. Interessant, cytokeratin 20 ekspresjonsnivåer ble nedregulert i kolorektal kreft vev sammenlignet med normale vev, i motsetning til ErbB3 i våre studier, noe som antyder en mer kompleks rolle for ErbB3 [8]. I samsvar med den ekspresjonsprofilen av ErbB3, uttrykket nivåer av PMEPA1, som er en markør for terminalt differensierte celler som utelukkende er funnet på overflaten av colonic epithelial krypter, økes i kolorektale tumorer sammenlignet med normalt vev [32], som tyder på at molekyler som markerer differensiert cellepopulasjon kan også være forhøyet i noen tilfeller i løpet av kolorektal kreftutvikling.
Våre resultater indikerer at målretting ErbB3 i tykktarmskreft ved hjelp av monoklonale antistoffer, som nå er under utvikling [13], kan målrette differensierte celler og bidra til eliminering av tumordelen, men kan ikke påvirke den proliferative kreft stilk-lignende cellepopulasjon. Det gjenstår å eksperimentelt testes. Ødeleggelsen av differensierte kolorektal kreft celler kan være gunstig som disse cellene har nylig blitt beskrevet som viktig formidler av resistens mot behandlingen [33] og kan beskytte kreft initiere celler fra kjemoterapi agenten irinotecan på grunn av sine narkotika utvise kapasiteter [33]. Det ville være interessant å definere om den differensierte cellepopulasjon beskrevet av Emmink
et al
. lapper med ErbB3 + differensiert befolkning. I tillegg kan disse ikke-proliferative ErbB3 + celler fortsatt har en rolle å spille i løpet tumorresidiv som det har blitt rapportert at post-mitotiske tarmcellene kan de-differentiate, erverve stamcellelignende egenskaper og initiere tumorgenesen i noen tilfeller [34].
Forhøyede nivåer av ErbB3 uttrykk har blitt assosiert med redusert pasientoverlevelse ved kolorektalkreft [20, 21]. Det synes viktig å definere om disse ErbB3 + celler er viktige drivere for kreftutvikling, og om de virker ved å støtte den tilhørende stamcelle befolkningen eller direkte bidra til en reduksjon i pasientens overlevelse.
Oppsummert viser våre resultater at forhøyet uttrykk av ErbB3 og tarmstamcellemarkører er de vanligste funksjonene i kolorektal kreft og identifisere svulster som inneholder differensierte ikke-former celle populasjoner forskjellige fra proliferative områder hvor kreftstamceller bor. Basert på uttrykk for EPHB2 stamcelle markør og ErbB3 differensiering markør, vi forsøksvis foreslår at kolorektal kreft er organisert i i) stilk-lignende celle beriket svulster, ii) differensierte svulster med en stilk-lignende cellerommet eller iii) mangler en EPHB2 stamcelle.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 fig. ErbB3 hovedsakelig er plassert på membranen i adenokarsinomer.
Immunohistokjemisk påvisning av ErbB3 i 7 kolorektal kreftprøvene viser en overveiende sterk membranfarging (A-D) eller både diffuse og cytoplasmisk farging av membranen (E-G). Scale bar, 50 pm
doi:. 10,1371 /journal.pone.0138336.s001 plakater (TIF)
S2 Fig. ErbB3 er heterogent uttrykt i kolorektale cancercellelinjer product: (A):. Immunofluorescent påvisning av ErbB3 (rød) i 6 forskjellige kreftcellelinjer motfarget med DAPI (blå). (B): Uttrykk for ErbB3 (grønn) og EPHB2 (rød) i LIM1215 og LIM1899 kreftcellelinjer kontra med DAPI (blå). Scale bar, 50 pm
doi:. 10,1371 /journal.pone.0138336.s002 plakater (TIF)
S3 Fig. ErbB3 positive kolorektal kreftceller er hovedsakelig ikke-former.
Co-immunofluorescent påvisning av KI-67 (grønn) og ErbB3 (rød) i to forskjellige kolorektal kreft prøver motfarget med DAPI (blå). Scale bar, 50 pm
doi:. 10,1371 /journal.pone.0138336.s003 plakater (TIF)
S4 Fig. ErbB3 positive kolorektal kreftceller er hovedsakelig ikke-proliferativ i motsetning til EPHB2-positive celler.
Co-immunofluorescent påvisning av KI-67 (grønn), ErbB3 (rød, A, C, E) og EPHB2 (rød, B, D, F) i tre forskjellige kolorektal kreft prøver, DAPI (blå). Scale bar, 50 pm
doi:. 10,1371 /journal.pone.0138336.s004 plakater (TIF)
S5 Fig. EPHB2 positive celler er KI-67 positive i normal human colon.
Co-immunofluorescent påvisning av EPHB2 (grønn) og KI-67 (rød) i normal tykktarm vev (DAPI, blå). Legg merke til fraværet av KI-67-positive celler i differensiert kupé (hvit pil). Scale bar, 50 pm
doi:. 10,1371 /journal.pone.0138336.s005 plakater (TIF)
S6 Fig.
