Abstract
Prostatakreft (PCA) er den hyppigst diagnostisert kreft for menn i den industrialiserte verden. Androgen reseptor-signalreaksjonsveien spiller en viktig rolle i progresjon av prostata kreft. Nyere studier viser at mikroRNA MIR-124 utøver en svulst undertrykkende funksjon i prostata kreft. Imidlertid er forholdet mellom AR og MIR-124 uklart. I denne studien fant vi en negativ feedback loop mellom AR og Mir-124 uttrykk. På den ene siden, MIR-124 var en positivt regulert målgen av AR, på den annen side, overekspresjon av MIR-124 hemmet ekspresjon av AR. I tillegg fant vi at MIR-124-2 og MIR-124-3 arrangører ble hypermethylated i AR-negative PCA celler. Videre overekspresjon av MIR-124 hemmet spredning priser og invasivitet kapasitet på PCA celler
in vitro
, og undertrykt xenograft tumorvekst
in vivo
. Til sammen våre resultater støtte en negativ feedback loop mellom AR og Mir-124 uttrykk. Metylering av MIR-124-2 og MIR-124-3 kan tjene som en biomarkør for AR-negative PCA celler, og overekspresjon av MIR-124 kan være av potensiell terapeutisk verdi for behandling av PCa.
Citation : Chu M, Chang Y, Guo Y, Wang N, Cui J, Gao WQ (2015) Regulering og metylering av tumor suppressor MiR-124 ved androgen Receptor i prostata kreft celler. PLoS ONE 10 (4): e0116197. doi: 10,1371 /journal.pone.0116197
Academic Redaktør: Zoran Culig, Innsbruck Medical University, ØSTERRIKE
mottatt: 01.10.2014; Godkjent: 07.12.2014; Publisert: 10 april 2015
Copyright: © 2015 Chu et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter fil
Finansiering:. studien er støttet av midler til W.-Q. Gao fra det kinesiske departementet for vitenskap og teknologi (2012CB966800; 2013CB945600 og 2012CB967900), Stiftelsen National Natural Science of China (81130038 og 81372189), Science and Technology Commission av Shanghai kommune (Pujiang program), Shanghai Utdanningsutvalget Key Disiplin og tema Foundation (J50208), Key Disiplin og tema Foundation of Shanghai Helse Bureau og KC Wong fundament, og til M. Chu fra Shanghai Postdoktor Scientific Program of China (12R21415100)
konkurrerende interesser:. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer.
Innledning
microRNAs (MIR) er endogene, enkelt-strandet liten ikke-kodende RNA (ca. 20-22 nukleotider) som vanligvis forårsaker genet Slå ved å redusere mRNA stabilitet og /eller oversettelse [1]. Deres avvikende ekspresjon har blitt funnet å være assosiert med flere typer kreft [2-4]. MiR-124 er et svært konservert mikroRNA som spiller en tumor suppressor rolle i ulike typer av kreft [5-9]. Den modne sekvens av MIR-124 er behandlet fra tre forløper varianter sekvenser, som er plassert på kromosomene 8p23.1 (MIR-124-1), 8q12.3 (MIR-124-2) og 20q13.33 (MIR-124- 3), som alle inneholder CpG øyer i sin promoter region [9].
CpG øyer er genomiske regioner som inneholder en høy frekvens av CpG nettsteder og vanligvis lokalisert i nærheten transkripsjonsstartsider [10]. Metyleringen av CPGs i disse regionene er antatt å føre til transcriptional stanse av deres gener nedstrøms [10]. Nyere studier har vist at metylering er en årsak til den lave uttrykk for MIR-124 i livmorhalskreft [9], akutt lymfatisk leukemi [5], leverkreft [6], og bukspyttkjertelkreft [7]. Imidlertid Raynal et al. [11] rapporterte at DNA-metylering ikke stabilt blokkerer genekspresjon siden histondeacetylase inhibitorer kan aktivere genekspresjon uten å påvirke metylering status [11]. Men mønstre av metylering kan tjene som epigenetiske markører for langsiktig vedlikehold av genet Slå [11]. På grunn av sin spesifisitet og stabilitet i humane prøver, kan DNA-metylering profiler være som en nyttig biomarkør i kreft screening [12, 13]. I samsvar med denne forestillingen, har nyere studier indikerte at avvikende DNA metylering av MIR-124 varianter gir en verdifull biomarkør for livmorhalskreft [9], blærekreft [14] og klarcellet nyrecellekarsinom [15].
prostatakreft (PCA) er den vanligste kreftformen blant eldre menn i den industrialiserte verden med økende priser i utviklingsland [16]. Androgenreseptoren (AR) signalveien er meget viktig i prostata kreft [17], som regulerer mange andre gener som er involvert i tumorprogresjon eller tumor suppresjon [18]. I tillegg har det vist seg at AR er korrelert med metylering status av spesifikke microRNAs i PCA-celler [19]. Imidlertid er mekanismene bak regulering og metylering av MIR-124 er fremdeles uklare.
Den foreliggende studien er beregnet til å studere reguleringen av mekanismen MIR-124, metylering status av MIR-124 og anti-tumor funksjon av MIR-124 i PCA celler. Resultatene av vår eksperiment viste at AR signale fremmet uttrykk for miR124, mens miR124 trykt AR uttrykk. Det var en negativ feedback loop mellom miR124 og AR uttrykk. I tillegg er DNA-metylering analyse viste at høy metylering av miR124-2 og MIR-124-3 skjedde i AR-negative PCA-celler, noe som tyder på at denne fenotype kan bli brukt som en biomarkør for AR-negative PCA-celler. Videre overekspresjon av MIR-124 viste anti-tumor aktivitet
in vitro Hotell og
in vivo
, noe som tyder på en potensiell terapeutisk verdi av MIR-124 for behandling av PCa.
Materialer og metoder
Prostatakreft cellekulturer og dihydrotestosteron behandling
LNCaP, 22Rv1, DU145 og PC-3 cellelinjer ble hentet fra American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA ). C4-2 celler, en underlinjen av LNCaP celler, ble hentet fra UroCore (Oklahoma City, OK, USA). PC3 /AR celler er de PC3-celler som stabilt overuttrykker villtype-AR-genet [20]; PC3 /neo-celler er en kontrollcellelinje. Celler ble opprettholdt i henhold til produsenten og tilbydernes protokoller. For dihydrotestosteron (DHT, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) behandling, medium som inneholder 10% føtalt bovint serum (Hyclone, Logan, UT, USA) ble erstattet med 10% trekull-strippet storfekalveserum (Bioind , Israel) når LNCaP-celler var 60% -70% sammenflytende, og deretter 0, 5 og 10 nM DHT ble tilsatt henholdsvis, og cellene ble ytterligere dyrket i 12 timer.
Plasmider, lentiviral produksjon og infeksjon
A 21mer-sekvens (5-GGTGTCACTATGGAGCTCTCA-3) er designet for å generere lentiviral vektor av AR kort hårnål RNA (shRNA) [21], og den vektorkonstruksjon, ble lentiviral produksjon og infeksjon utføres i henhold til foregående beskrivelse [19] . Den lentiviral plenti-CMV-MIR-124 vektor ble konstruert for å stabilt overekspresjon moden sekvens av MIR-124. Vektoren av pLenti CMV /TO Puro tom (Addgene plasmid # 17482 [22]) ble kjøpt fra Addgene. Den genomisk segment av MIR-124 -2 sekvenser ble forsterket ved hjelp av primere MIR-124-2-F: CCTGGATCCGCTGTAAATGGCATGGAGATAT og MIR-124-2-R: GCGTCTAGAGCGGCTGTAATGGAAAAGTAG; og subklonet inn BamH1 og Xbal områder av pLenti CMV /TO Puro tom vektor [23]. Lentivirus produksjon og transduksjon ble gjort i henhold til en tidligere metode [23].
Real-Time PCR
Totalt RNA ble ekstrahert ved hjelp av RNeasy Plus Mini kit (Qiagen, Valencia, CA, USA) fra ulike PCA celler. Revers transkripsjon ble utført ved hjelp av PrimeScript RT reagenssett (Takara, Dalian, Kina) og TaqMan mikroRNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) i henhold til produsentens instruksjoner. Relative mengder av Mir-124 (med TaqMan mikroRNA Analyser, Applied Biosystems) og AR (ved hjelp av SYBR Grønn Realtime PCR Master Mix, Toyobo, Osaka, Japan) ble utført med en 7500 Real Time PCR System (Applied Biosystems). Genekspresjon ble normalisert ved endogene styre RNU44 (MIR-124) eller β-aktin (AR). De Ct-verdier ble beregnet ved hjelp av ΔΔCt metoden. De følgende primere ble anvendt: AR forover CCAGGGACCATGTTTTGCC, revers CGAAGACGACAAGATGGACAA; β-aktin frem CATGTACGTTGCTATCCAGGC, omvendt CTCCTTAATGTCACGCACGAT.
Natriumbisulfitt modifikasjon og sekvense
metylering status for hver MIR-124 varianter ble bestemt ved Bisulfite-sekvensering PCR (BSP) etter bisulfite konvertering av celler bruker EZ DNA metylering Direkt kit (Zymo Research Corporation, Irvine, CA, USA) etter standardprotokoller. BSP Primere ble utviklet ved bruk av methyl Primer Express v1.0 programvare (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) (tabell 1). PCR-produktene ble ligert inn i pMD19-T Simple Vector (Takara Biotechnology Co., Ltd., Dalian, Kina). Kolonier (n = 10) ble valgt per PCa cellelinje og sekvensert ved Shanghai Shenggong Biotech (Shanghai, Kina).
celleproliferasjon analyser
Celleproliferering ble målt ved hjelp av en celle telling kit (CCK-8; Dojindo, Kumamoto, Japan) analysen. Celler ble sådd ut i 96-brønners plater med 5000 celler per brønn og undersøkt ved 48, 72, 96 timer etter utplating (n = 12). CCK-8 (10 ul) ble tilsatt til hver brønn og cellene ble inkubert i ytterligere 2 timer. Absorbansen ble målt med en mikroplateleser (BioTek, USA) ved bølgelengder på 450 nm.
Migrasjon analyser
Costar Transwell Migrasjon plater med 8 pm porestørrelse (# 3422, Corning, USA) var anvendes. Det øvre kammer ble podet med 1 x 10
5-celler i serumfritt medium og 20% FBS ble anvendt som lokkemiddel i det nedre kammer. Etter 24 timers dyrking ble kultur innsatsene fjernet og vasket med fosfatbuffer saltvann (PBS) flere ganger for å bli kvitt ufestede celler. Alle de resterende cellene på oversiden ble skrapt med en bomullspinne. Migrerte celler på den nedre side av innlegget ble fiksert i 4% paraformaldehyd i 15 minutter, vasket to ganger med PBS, og farget med 0,1% krystallfiolett i 10 minutter. For hver innskuddet, ble 5 tilfeldig utvalgte områder av filteret tellet under et lysmikroskop. Hver av forsøket ble gjentatt tre ganger.
In vivo
xenograft analyser
Seks uker gamle BALB /C hårløse mus (SLAC, Shanghai, Kina) ble tilfeldig gruppert og subkutant injisert med 4 x 10
6 LNCaP-kontroll eller LNCaP-MIR-124-celler blandet med et like stort volum av Matrigel (BD Biosciences, Bedford, MA, USA). Hver gruppe hadde minst fem mus. Tumorer ble målt med en passer hver 10. dag fra 2 uker etter inokulering, og volumet ble beregnet som π /6 x lengde x bredde
2. Xenografttumorer ble skåret ut og veid på offer på 34 dagen etter tumorcelle injeksjon. Alle mus eksperimenter ble godkjent av Renji sykehus dyr omsorg og bruk komité.
Statistisk analyse
Data ble analysert ved hjelp av SPSS 13.0 programvare (SPSS Inc., Chicago, Ill., USA) og Prism GraphPad 5 (GraphPad Software, La Jolla, California., USA). Statistisk analyse ble utført ved hjelp av t-test. Data er presentert som gjennomsnitt ± SEM fra minst tre uavhengige eksperimenter. Sannsynlighets verdier mindre enn 0,05 ble betraktet som signifikant.
Resultater
En negativ feedback loop mellom MIR-124 og AR uttrykk
For å avgjøre om AR regulerer uttrykket av MIR-124 i PCA cellelinjer, AR overekspresjon og AR knockdown forsøkene ble utført i PC3 celler (vs. PC3 /AR) og LNCaP celler (vs. LNCaP-sh-AR), henholdsvis. Som vist på fig. 1, mens overekspresjon av AR i PC3-celler forsterket uttrykking nivå av MIR-124 (fig. 1A), knockdown av AR i LNCaP-celler redusert ekspresjonsnivået av MIR-124 (fig. 1B). Videre undersøkte vi om MIR-124 er et androgen responsive mikroRNA. LNCaP-celler, androgen-responsive PCA-celler ble sådd ut i androgen-fritt medium og behandlet med DHT for 0 nM, 1 nM og 10 nM, respektivt. Etter 12 timer, ble RNA ekstrahert og sanntids-PCR ble analysert. Disse eksperimentene viste en økning i ekspresjonen beløper nivåer av MIR-124-genet i LNCaP-celler ble behandlet med DHT (10 nM) behandling (Fig. 1C). Resultatene ovenfor antyder at AR er nært positivt korrelert med ekspresjonen av MIR-124. Det er imidlertid ikke klart hvorvidt det eksisterer en tilbakemelding påvirkning mellom MIR-124 og AR. For å studere denne muligheten, ble LNCaP celler infisert med en kontroll lentivirus (LNCaP-kontrollceller) eller plenti-CMV-mir-124 lentivirus (LNCaP-MIR-124 celler) som uttrykker høye nivåer av MIR-124 (Fig. 1 D). Ekspresjonsnivået av AR ble deretter analysert ved QRT-PCR. Som vist på fig. 1E, overekspresjon av MIR-124 signifikant hemmet AR mRNA nivå, som er konsistent med en tidligere studie rapporterer at behandling med MIR-124 resulterte i en reduksjon av AR protein i LNCaP celler [8]. Samlet utgjør disse resultatene antydet en negativ feedback loop mellom MIR-124 og AR uttrykk (Fig 1F.)
(A) PC3 /AR-celler er en stabil cellelinje som overuttrykker human AR cDNA.; PC3 /neo celler blir anvendt som en kontroll. (B) LNCaP-sh-AR celler er AR-knockdown celler, der LNCaP celler ble infisert med lentivious AR shRNA; LNCaP-sh-kontrollceller blir anvendt som en kontroll. (C) 0 nM, 1 nM og 10 nM DHT ble tilsatt til LNCaP-celler og dyrket i 12 timer. (D) LNCaP celler ble infisert med en kontroll lentivirus (LNCaP-kontrollceller) eller plenti-CMV-mir-124 lentivirus (LNCaP-Mir-124 celler). Relativ uttrykk for MIR-124 i LNCaP celler ble bestemt ved QRT-PCR og korrigert for å RUN44 nivåer. Verdier betyr fold-endringer normalisert til (A) PC3 /neo celler; (B) LNCaP-sh-AR celle; (C) LNCaP-celler (0 nM DHT) og (D) LNCaP-kontrollceller. (E) Relativ ekspresjon av AR ble bestemt ved QRT-PCR og normalisert til p-actin nivåer. Verdier betyr fold-endringer normalisert til LNCaP-kontrollceller. (F) Et skjematisk diagram av veien som er beskrevet i studien. Data er vist som gjennomsnitt ± SEM fra 3 uavhengige eksperimenter, som hver ble utført i tre paralleller
Metylering analyse av MIR-124 i PCA celler
Den modne MIR-124 inneholder 3 premature varianter: Mir-124-1, MIR-124-2 og MIR-124-3 (20q13.33). Bisulfitt sekvense PCR (BSP) og gen-sekvensering ble utført for å analysere DNA-metylering nivåer av hver av de MIR-124 varianter. Disse analysene viste at metylering aktiviteter MIR-124-2 og MIR-124-3 var høyere i AR-negative PCA celler (85% -96%, 80% -88%, henholdsvis) enn i AR-positive PCA celler (0 % -50%, 1% -3%, henholdsvis) (figur 2).. Men i både AR-negative og positive AR-PCA-celler, ble promotorområdet av MIR-124-1 metylert til bare en begrenset grad (2% -38%, fig. 2). I tillegg MIR-124-1 metyleringen var ikke signifikant høyere enn den AR-positive celle i AR-negative celler (PCA DU145, PC3) bortsett DU145 celler i hvilke metylering var signifikant høyere enn AR-positive celler (22RV1, C4- -2 og LNCaP; p. 0,05)
Skjematisk oppsummering av CpG områder i MIR-124-1, MIR-124-2 og MIR-124-3 promoter regioner. (A) Metylering analyse ble gjort i løpet av 10 kloner fra hver cellelinje. Hver rad av sirkler representerer en enkelt klon, og hver sirkel representerer en enkelt DNA-metylert eller demetylert området. (B) metylering prosenter av 10 kloner fra hver av cellelinjene er oppsummert i den søylediagram. Data er vist som gjennomsnitt ± SEM. Stjernene viser P 0,05, indikerer dobbel stjerne P. 0,001
MiR-124 overekspresjon undertrykker LNCaP celler spredning, indikerer migrasjon og xenografttumorer vekst
Tidligere studier som MIR-124 spiller en rolle som en tumor suppressor [5-9], så vi ønsket å etterforsker om overekspresjon av MIR-124 kan hemme PCa celler spredning. For å besvare dette spørsmålet, ble LNCaP-kontrollceller og LNCaP-MIR-124 celler sådd ut i 96-brønners plater og undersøkt ved 48, 72, 96 timer etter den første plating (n = 12). Celleproliferasjon ble målt ved absorbans (optisk densitet, OD) på 450 nm bølgelengder. Våre resultater viste at overekspresjon av MIR-124 signifikant hemmet LNCaP cellevekst på 48, 72 og 96 timer, henholdsvis (fig. 3A).
(A) LNCaP-kontrollceller og LNCaP-Mir-124 celler belagt i 96 brønner og undersøkt ved 48, 72, 96 timer ved hjelp CCK8 analysen. Celleformering ble analysert ved hjelp av verdien av OD. Data er vist som gjennomsnitt ± SEM (n = 12). Gruppe data (B) og representative bilder (C, D) vises. (B) Antall trekkende celler per felt av LNCaP-kontrollceller og LNCaP-MIR-124 celler. Representative mikrofotografier som illustrerer migrasjon av LNCaP-kontrollceller (C) og LNCaP-MIR-124 celler (D). Fem nakne mus per gruppe ble injisert subkutant med 4×10
6 LNCaP-kontrollceller eller LNCaP-MIR-124 celler. (E) Volumet av xenograft tumorer ble målt hver 10. dag fra 2 uker etter inokulering. (F) Tumorvekter ble målt på avlivningstiden på 34 dag etter tumorcelle-injeksjon. (G) Tumorene ble skåret ut ved tidspunktet for avlivelse på 34 dag etter tumorcelle-injeksjon. Data er presentert som gjennomsnitt ± SEM. Stjernene viser P 0,05, indikerer dobbel stjerne P. 0,001
Videre avgjør vi om overekspresjon av MIR-124 undertrykker PCa celle migrasjon, transwellkamrene ble brukt for å evaluere den vandrende effekten av LNCaP- kontrollceller og LNCaP-MIR-124 celler. Transwell analysene viste at overekspresjon av MIR-124 undertrykte betydelig migrering av LNCaP-celler (fig. 3B, C, D). Observasjonen at MIR-124 hemmer LNCaP celler spredning og migrasjon bedt oss om å finne ut om MIR-124 overekspresjon kan hemme xenograft tumorvekst av LNCaP celler
in vivo
. For å besvare dette spørsmålet, ble mannlige naken mus inokulert subkutant med LNCaP-kontrollceller eller LNCaP-MIR-124 celler. Vi fant at begge grupper av mus viste håndgripelig xenografttumorer på 14 dagen etter vaksinasjon. Men størrelsen av svulster var betydelig mindre i LNCaP-MIR-124 xenotransplantater sammenlignet med LNCaP-styre xenotransplantater etter 24 dager (fig. 3E, G). I tillegg fant vi at vekten av svulster var betydelig lettere i LNCaP-Mir-124 xenografter sammenlignet med LNCaP-kontroll xenografter på tidspunktet for offer på 34 dager (Fig. 3F, G). Kollektivt, overekspresjon av MIR-124 ikke bare hemmet LNCaP celleproliferasjon og migrasjon
in vitro
men også undertrykte betydelig vekst av xenografttumorer
in vivo
.
Diskusjoner
i denne studien har vi presentert bevis for at MIR-124 er et androgen /AR responsive genet og overekspresjon av MIR-124 hemmer AR uttrykk og undertrykker PCa celler spredning, migrasjon og xenograft tumorvekst. Disse resultatene tyder på en negativ feedback loop mellom AR og Mir-124 uttrykk, og MIR-124 kan være et lovende terapeutisk mål for PCa.
Androgen /AR signalering er svært avgjørende i utbruddet og progresjon av prostata kreftutvikling [ ,,,0],24, 25]. Ikke bare steroidhormoner, men også ikke-steroide forbindelser kan aktivere AR signale [26]. Dessuten, i «hormon ildfaste prostata cancer», AR signaleringen kan aktiveres alle de samme [27]. Kort sagt, i androgen /AR signalering, spiller AR en viktigere rolle enn androgen. Derfor det første vi utført AR overekspresjon og knockdown eksperimenter for å verifisere om AR signalering kan påvirke uttrykket av MIR-124. Vi fant at uttrykket av MIR-124 var positivt korrelert til AR. Dernest behandling av LNCaP celler med DHT indusert et økt uttrykk av MIR-124. Derfor AR positivt regulerer uttrykket av MIR-124. Det bemerkes at våre resultater ikke er forenlig med en tidligere rapport hvor androgen analog R1881 ble brukt og ikke regulere MIR-124 [8]. En forklaring på dette avviket kan skyldes ulike forskningsmetoder. Videre studier er nødvendig for å avklare inkonsistente resultater.
Den negative feedback loop som vi observerte mellom MIR-124 og AR uttrykk kan spille en rolle i utviklingen av kastrering-resistente PCa (CRPC). Som vi vet, androgen deprivasjon terapi som fjerner sirkulerende androgener eller blokkerer AR er en standard vare behandling for prostatakreft behandling. Til tross for en innledende effektiv respons på behandling, nesten alle pasienter uunngåelig utvikler til CRPC. Selv om det har vært mye forskning gjort, er mekanismen fortsatt uklart. Våre resultater viste androgen /AR signalering kan positivt påvirke ekspresjon av MIR-124, men den sistnevnte inhiberer ekspresjonen av den førstnevnte. Vi spekulerer i at i normal prostata celle, AR og Mir-124 uttrykk er på en balanse som foreslått for den som forekommer mellom proto-onkogener og tumor dempere [28]. Dersom AR-signalering er aktivert, vil ekspresjon av nedstrøms MIR-124 være høy, og omvendt hemmer AR signalering. Imidlertid er balansen forstyrret i PCa, det vil si den AR signaleringen kan ytterligere forbedres, når ekspresjonen av mir-124 er lav [8].
Gitt at metylering spiller en rolle i reguleringen av gen ekspresjon, har den foreliggende studien undersøkte hvorvidt ekspresjonen av MIR-124 var forbundet med sin metylering status. Moden sekvens av MIR-124 har tre forløper varianter, MIR-124-1, MIR-124-2 og MIR-124-3, som alle ble analysert for metylering status i våre studier. Foruten MIR-124-1, er promotorområdene av MIR-124-2 og MIR-124-3 svært metylert i AR-negative PCA celler enn AR-positive PCA celler (fig. 2). Når uttrykk for MIR-124 er undersøkt i PCA celler, betyr det ikke vist konsistens med metylering status for PCA celler (S1 fig.). Dette discordancy kan forklares med en fersk ny teori antyder at DNA metylering ikke stabilt stenge genekspresjon, men i stedet fungerer som en molekylær markør for en langsiktig vedlikehold av genet stanse [11]. På grunn av DNA-metylering representerer en mer kjemisk og biologisk stabil kilde for molekylær diagnostisk informasjon enn RNA eller de fleste proteiner [29], har det et stort potensiale for å være en nyttig informativt biomarkør i kreft screening [12, 13]. I denne forbindelse, våre resultater tyder på at avvikende hypermethylation av MIR-124-2 og MIR-124-3 kan gi en nyttig biomarkør for AR-negative PCA celler.
Det bør påpekes om overekspresjon av speil 124 kan hemme PCa kreftfremkallende prosessen
in vitro Hotell og
in vivo
, gjør knockdown av MIR-124 i LNCaP cellene ikke endre kreftfremkallende status (data ikke vist). En forklaring kan være at de modne sekvenser av MIR-124 har tre forløper varianter sekvenser, og det er vanskelig å dypt nedregulere uttrykket. Imidlertid er ytterligere studier for å avklare dette punktet.
Til sammen våre resultater gir ny innsikt i reguleringsmekanismen av tumor suppressor MIR-124 og annerledes metylering status for MIR-124 varianter kan brukes som et potensielt nyttig biomarkør for PCA celler.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 fig. Uttrykk av MiR-124 i PCA Cells.
Relativ uttrykk for MIR-124 i PCA cellelinjer ble bestemt ved QRT-PCR og korrigert for å RUN44 nivåer. Verdier betyr fold-endringer normalisert til LNCaP celler. Data er vist som gjennomsnitt ± fra 3 separate eksperimenter, som hver ble utført i tre paralleller
Doi:. 10.1371 /journal.pone.0116197.s001
(DOC)
Takk
undersøkelsen er støttet av midler til WQ Gao fra det kinesiske departementet for vitenskap og teknologi (2012CB966800; 2013CB945600 og 2012CB967900), Natural Science Foundation National of China (81130038 og 81372189), Science and Technology Commission av Shanghai kommune (Pujiang program), Shanghai Utdanningsutvalget Key Disiplin og tema Foundation (J50208), Key Disiplin og tema Foundation of Shanghai Helse Bureau og KC Wong fundament, og til M Chu fra Shanghai Postdoktor Scientific program of China (12R21415100).
