For å sikre ZAK siRNA ikke utvikler seg målet konsekvenser, vi brukte nok en samling av siRNA rettet fra 5 prosent av ZAK mRNA. SiRNAmediated knock-down av ZAK bruker streng 2 også undertrykte doxorubicin indusert fosforylering av p38 og JNK MAPK. I tillegg siRNA mediert knockdown over Zak å anvende sekvens 2 fortrengt doxorubicin skyldes spalting av PARP, selv om det ikke er like effektivt som sekvens 1. På grunn av dette har vi anvendt sekvens 1 i de etterfølgende eksperimenter.
en invariant karakteristisk for ribotoxic årsaker er deres evne til å hemme protein oversettelse. For å fastslå om doxorubicin hemmer proteinsyntesen, eksponert vi HaCaT-celler til doksorubicin i forskjellige tidsrom, hvorved ganger celler ble eksponert for leucin i 30 minutter. Kontinuerlig undersøkelse av celler ved mikroskopi vist seg mindre mobil løsgjøring, selv 24 timer etter tilsetning av doksorubicin. Emetine blokker Kart E aktivering etter å ha en høy dose av doxorubicin. Transduksjon av ribotoxic stressfaktorer av signaler som fører til aktivering av SAPKs krever at ribosomene være involvert i proteinsyntese på tidspunktet da cellene er utsatt for stressfaktoren. oral Syk-inhibitor
Blokkade av proteinsyntese ved hurtigvirkende inhibitorer så som emetine, forut for eksponering av celler til ribotoxic triggere, stopper transduksjon av skiltet som fører til aktivering av p38 og JNK MAPK. vist at emetine blokkerte proteinsyntese i henhold til ett minutt etter tilsetning til cellene. For å finne ut hvorvidt forutgående behandling av HaCaT-celler med emetine kan hindre aktivering av p38 og JNK MAPK, ble cellene eksponert for emetine eller bærer før tilsetningen av doksorubicin. Vi søkte en høyere konsentrasjon av doksorubicin å oppmuntre til rask fosforylering av p38 og JNK MAPK. Tillegg på emetine før eksponering for doksorubicin helt blokkert fosforylering av JNK og p38 MAPK.
Doxorubicin trykkes inkorporering av leucin med 50% fullstendig og på en time ved 2 timer. Vi gjennomførte en lignende test med CdCl, det er ikke egentlig en ribotoxic stressorand resulterer i aktivering av p38 og JNK MAPK gjennom ulike elementer. I motsetning til doksorubicin, ble fosforylering av p38 og JNK MAPK ikke undertrykkes av emetine. Hemmere av ZAK blokk doxorubicin indusert apoptose og MAP K første i HaCaT celler. Et viktig mål i cancer-kjemoterapi ville være å redusere utilsiktet skade på normale vev og organer. Ledelsen i effektive doser av doxorubicin til kreftpasienter er ofte knyttet til potensialet for vekst av kardiotoksisitet og andre uønskede reaksjoner.
Id av agenter som kan selektivt undertrykke ødeleggelse av normalt vev ved doksorubicin kan aktivere administrasjon av større eller hyppigere doser av doxorubicin til kreftpasienter. Tidligere studier har vist at inhibering av ZAK ved en eksperimentell lite molekyl-inhibitor reduserer ribotoxic stressinduserte celledød. Likevel DHP 2 er ikke lenger skapt av Eli Lilly og er utilgjengelig.
I et omfattende arbeid for å gjenkjenne målet om 38 små molekyl kinase hemmere, Karaman et al. bestemmes dissosiasjonskonstantene i en celle av 287 spesifikke proteinkinaser, inkludert ZAK. Sorafenib, en variabel kinase-inhibitor som har blitt benyttet i behandling av nyrecellekreft og leverkreft, ble funnet å ha en veldig høy bindingsaffinitet for ZAK.
