Abstract
CAR er et transmembranprotein som er uttrykt i forskjellige epiteliale og endoteliale celler. CAR medierer adenovirus-infeksjon, så vel som adenovirus-mediert oncolysis av AxdAdB-3, et E1A /E1B dobbelt begrenset onkolytisk adenovirus, i prostatakreftceller. Denne studien videre undersøkt den terapeutiske effekt av AxdAdB-3 med Arg-Gly-Asp (RGD) -fiber modifikasjon (AxdAdB3-F /RGD), som muliggjør integrin-avhengige infeksjon, i prostata kreft. Følsomhet av prostata kreft celler LNCaP, PC3 og DU145 til adenovirus infeksjon ble assosiert med CAR uttrykk. Alle de prostatakreftcellelinjer uttrykte integrin α
vp
3 og α
vp
5. AxdAdB-3 var mer cytopatisk i CAR-positive prostatakreftceller enn i CAR-negative celler, mens AxdAdB3-F /RGD forårsaket potent oncolysis både CAR-positive og CAR-negative prostatakreftceller. I motsetning til dette ble AxdAdB3-F /RGD ikke cytopatisk mot normale prostata epitelceller, RWPE-1. Intratumoral injeksjon av AxdAdB3-F /RGD inn i bilen-negative prostatakreft celletransplantater i nakne mus hemmet tumorvekst. Den aktuelle studien viser at E1A /E1B dobbelt begrenset onkolytisk adenovirus med en RGD-fiber modifikasjon forbedrer infeksjon effektivitet og anti-tumor aktivitet i CAR-mangelprostatakreftceller, mens sparsom normale celler. Fremtidige studier vil vurdere det terapeutiske potensialet i AxdAdB3-F /RGD i prostatakreft
Citation. Shen Y-H, Yang F, Wang H, Cai Z-J, Xu Y-P, Zhao A, et al. (2016) Arg-Gly-Asp (RGD) -modifisert E1A /E1B Double Mutant Adenovirus Forbedrer antitumoraktivitet i prostata kreft celler
In Vitro Hotell og hos mus. PLoS ONE 11 (1): e0147173. doi: 10,1371 /journal.pone.0147173
Redaktør: Ilya Ulasov, svensk Neuroscience Institute, UNITED STATES
mottatt: Mai 10, 2015; Godkjent: 30 desember 2015; Publisert: 22 januar 2016
Copyright: © 2016 Shen et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. All relevant data er innenfor papir
Finansiering:. Denne studien ble støttet delvis av en bevilgning fra Science Foundation i Zhejiang-provinsen i Kina (# LY12H16031) Naturlig og fra Health Bureau of Zhejiang-provinsen, Kina (# 2012KYA025) .
konkurrerende interesser:. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Prostatakreft er den hyppigst forekommende kreftform i verden, spesielt i vestlige land. Det er anslått at prostatakreft vil føre til 220,800 nye tilfeller og 27,540 kreftrelaterte dødsfall i USA i 2015. [1] I Kina forekomsten av prostatakreft har vært sterkt økende de siste tiårene, og mer enn 70% av prostatakreftpasienter har avansert eller metastatisk sykdom. [2] til dags dato, er hormonbehandling fortsatt den mest nyttige terapi for pasienter med prostatakreft, men det gis for en begrenset en periode, og nesten alle pasienter med prostatakreft som får androgen ablasjon slutt utvikle seg til androgen refraktær sykdom, [3] er kjent som kastrering resistent prostatakreft (CRPC). Docetaxel-basert kjemoterapi er ofte brukt til å behandle pasienter med CRPC, men progresjonsfri overlevelse bare varer i seks måneder. [4] Selv om romanen androgen reseptor inhibitor (Enzalutamide) og cytokrom P450, familie 17, underfamilien A polypeptid (CYP17) inhibitor ( abiraterone) har blitt rapportert å mer effektivt behandle CRPC pasienter, kan slik behandling bare bedre overlevelse for et par måneder. [5, 6] Derfor nye og mer effektive behandlingsstrategier er sterkt behov for å forbedre prostata kreft prognose.
Tidligere studier har vist at en onkolytisk adenovirus var i stand til å selektivt kopiere og drepe kreftceller mens sparsom normale celler. Dette onkolytiske viral terapi kan være klinisk lovende for behandling av kreft hos mennesker, inkludert prostatakreft. [7-9] Vår tidligere studie viste at en E1A /E1B dobbel mutant onkolytisk adenovirus, AxdAdB-3, hadde antitumor aktivitet i en orthotopic, prostatakreft SCID (alvorlig kombinert immunsvikt) mus modell. [10] Men AxdAdB-3 viste utilstrekkelige cytopatiske effekter i enkelte prostatakreft cellelinjer som uttrykte lave nivåer av coxsackie virus adenovirus reseptor (CAR). [10] CAR er et transmembranprotein som er uttrykt i forskjellige epiteliale og endoteliale celler og funksjoner for å mediere adenoviral infeksjon. Kreftceller med redusert CAR uttrykk er blitt rapportert å være motstandsdyktige mot viral infeksjon og adenovirus-mediert genterapi. [11] I prostatakreft, er ofte fraværende CAR uttrykk, [12, 13] som kan begrense bruken av adenovirus-leverte genterapi . En tidligere studie vist at innsetting av Arg-Gly-Asp (RGD) peptidet inn i HI sløyfen til fiberen knott domene forbedret adenovirus-mediert genet transduksjon i CAR-negative celler ved binding av RGD-peptidet til integriner på målcellene . [14] Således, i denne studien evaluerte vi den terapeutiske effekt av det E1A /E1B dobbel mutant onkolytisk adenovirus, AxdAdB-3, med Arg-Gly-Asp (RGD) -fiber modifikasjon (AxdAdB3-F /RGD) i prostata kreft
in vitro Hotell og i nakne mus.
Materialer og metoder
celle~~POS=TRUNC linjer~~POS=HEADCOMP og kultur
Menneske androgen-avhengige prostatakreft cellelinje LNCaP (metastase til den lymfeknute), human androgen-uavhengig prostatacancercellelinjer PC3 (metastaser til benet) og DU145 (metastaser til hjernen), og normale voksne prostata epiteliale celler infisert med et enkelt kopi av human papilloma virus 18 (kalt RWPE- 1) ble oppnådd fra American Type Culture Collection (ATCC) (Manassas, VA, USA). LNCaP celler har villtype p53 og p16 uttrykk; [15, 16] har PC3 celler mutert p53 men denaturert villtype p16;. [15, 16] og DU-145 celler har både muterte p53and p16 [15, 16] humane embryonale nyre 293 (HEK-293) celler ble oppnådd fra Celle Bank of Chinese Academy of Sciences (Shanghai, Kina). Cellelinjene ble opprettholdt i Roswell Park Memorial Institute eller Eagles minimale essensielle medium (for HEK293) supplert med 10% føtalt bovint serum, 100 IU /ml penicillin og 100 ug /ml streptomycin i fuktig 5% CO
2 atmosfære ved 37 ° C. RWPE-en ble opprettholdt i K-SFM komplett medium (cellesystemer, Kirkland, WA, USA) og deretter arrestert i K-SFM uten serum vekstfaktor før virusinfeksjon.
rekombinant adenovirus og celle infeksjon
AxCAZ3-F /RGD [17] og AxCAlacZ [18] er E1 slettede replikasjons-defekt adenovirus-vektorer som uttrykker
Escherichia coli
lacZ-genet under kontroll av promoteren CAG med eller uten et RGD peptid i HI sløyfe av fiber knott domene. AxdAdB-3 har en mutant replikasjonskompetente Ad5 inneholdende SXGXE (STGHE) mutasjon i stedet for LXCXE (LTCHE) Rb-bindende motiv i E1A og sletting av E1B55 KD [19]. For å konstruere AxdAdB3-F /RGD ved hjelp pWEAxKM-F /RGD, klonet vi de RGD-4C aminosyrer i HI sløyfe av fiber knott domene mellom aminosyrerestene 546 og 547 med en E3 delesjon. Aminosyresekvensene av den RGD-mutasjonen var T 546 CDCRGDCFCP 547. AxdAdB3-F /RGD ble dannet ved ko-transfeksjon av HEK293-celler med pWEAxKM-F /RGD kosmid DNA som var blitt spaltet med
Cia I
og
Pac
jeg, sammen med
EcoRI
I- og
Åse
i-fordøyd DNA-TPC (terminal proteinkompleks) på AxdAdB3 [17]. De virale vektorer ble levert av Riken Genbank (Tsukuba, Japan) og transfektert inn i HEK293-celler til å produsere adenovirus og den virale titer ble bestemt ved en standard plaque-analyse.
For infeksjon ble celler sådd ut på en 6 -Vel plate og dyrket over natten. På neste dag ble cellene infisert med AxCAlacZ eller AxCAZ3-F /RGD ved en multiplisitet av infeksjon (MOI) på 100 ° C i 24 timer. Ekspresjon av adenoviral hekson-proteinet i de infiserte cellene ble bestemt ved Western blot-analyse. I mellomtiden ble cellene infisert med AxCAlacZ eller AxCAZ3-F /RGD adenoviruser ved en MOI på 100 ° C i 24 timer, og nivåer av adenoviral hekson-proteinet i infiserte celler ble deretter vurdert ved hjelp av strømningscytometri (beskrevet i det følgende avsnitt) med et muse-monoklonalt anti- hekson-antistoff (MAB805, Chemicon International, Temecula, CA).
protein ekstraksjon og Western blot
Cellene ble lysert i 100 ul lyseringsbuffer, og proteinkonsentrasjonen ble målt ved BCA-metoden. Deretter ble like mengder av proteinprøver i supernatanten separert ved anvendelse av natriumdodecylsulfat-polyakrylamid-gel-elektroforese (SDS-PAGE) på en 12% SDS-PAGE-gel og deretter overført til en polyvinylidendifluorid-membran (Millipore, Billerica, MA, USA) . Membranen ble deretter inkubert med et muse-monoklonalt anti-hekson-antistoff (MAB805, Chemicon International, Temecula, CA, USA) og deretter inkubert med et anti-mus-IgG-antistoff i 1 time, etterfulgt av forsterket kjemiluminescens (ECL; Cell Signaling Technology, MI , CA, USA). Membranen ble deretter utsatt for x-ray filmer og skannet for kvantifisering ved hjelp av Image J programvare (National Institute of Heath, Bethesda, MD, USA).
Flowcytometri å bestemme uttrykket av CAR og integrin nivået i cellene
Cellene ble sådd ut på en 6-brønns plate og dyrket over natten. For å detektere ekspresjonen av CAR og integrin α
vp
3 og α
vp
5, ble cellene løsnet ved hjelp av en enzym-fri dissosiasjon løsning og deretter inkubert med et muse-monoklonalt anti-humant CAR antistoffet (Upstate bioteknologi, Lake Placid, NY, USA), en mus monoklonale anti-human integrin α
vp
3 antistoff (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), eller en mus monoklonalt anti-human inte α
vp
5 antistoff (R D Systems, Inc., Minneapolis, Minnesota, USA), alt til en fortynning på 1: 100 for en time på is. Deretter ble cellene vasket tre ganger med fosfatbufret saltvann (PBS), og deretter ytterligere inkubert i 30 minutter med en sekundær fluorescein isotiocyanat-konjugert antistoff. Etter vaskingene ble cellene øyeblikkelig analysert ved hjelp av et strømningscytometer (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA).
Celleviabilitet celletelling kit-8 (CCK-8) assay
celler (3 x 10
3 per brønn) ble sådd ut på 96-brønners plater og infisert med AxCAlacZ, AxCAZ3-F /RGD, AxdAdB-3, og AxdAdB3-F /RGD ved en MOI på 30 for 0, 1, 3, 5 og 7 dager. Cellelevedyktigheten ble evaluert ved bruk av CCK-8 (Dojindo, Japan) i henhold til produsentens protokoll. I korthet, ble 10 ul av CCK-8-løsning tilsatt til hver brønn og cellene ble inkubert i 4 timer. Absorbansen av fargede formazanforbindelsen ble målt ved hjelp av en mikroplateleser ved 450 nm.
Dyreforsøk
De antitumor effekter av AxdAdB3-F /RGD ble evaluert i en subkutan svulst modell i 6-uke- gamle BALB /C-mus. I korte trekk ble mus injisert subkutant med 5 x 10
6 PC3-celler for tumor xenograft dannelse til ca 6-7 mm i størrelse. Musene ble deretter administrert en intratumoral injeksjon av AxCAZ3-F /RGD, AxdAdB-3, eller AxdAdB3-F /RGD (1 x 10
8 plaque-dannende enheter) en gang daglig i tre påfølgende dager. Tumorstørrelse ble deretter målt ukentlig ved hjelp av en elektronisk skyvelære og tumor volum ble beregnet ved hjelp av følgende formel: volum = største dimensjon x minste dimensjon
2 x 0,4. På dag 28 etter behandling ble musene avlivet og tumorxenografter ble tatt og behandlet for immunhistokjemisk analyse av adenoviral hekson-proteinet for å bestemme adenovirus replikasjon i tumorlesjoner. Kort sagt ble parafininnstøpte seksjoner deparaffinized i xylen, rehydrert med etanol, og deretter immunostained i henhold til produsentens instruksjoner under anvendelse av en immunhistokjemisk kit inneholdende streptavidin-biotin-teknikk (LSAB kit, Dako, Japan) og et mus monoklonalt anti-hekson-antistoff (# MAB805, Chemicon International).
Statistisk analyse
statistiske analysene ble utført ved hjelp av SPSS programvare for Windows, versjon 19 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Dataene ble oppsummert som gjennomsnitt ± standardavvik, og betydningen av forskjeller mellom gruppene ble statistisk analysert ved anvendelse av en uparet to-halet t-test. P 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Resultater
CAR og inte uttrykk i prostatakreftceller og normale prostata epitelceller
flowcytometri data viste et høyt nivå av CAR uttrykk i DU145 celler, et moderat nivå i LNCaP og RWPE-1 celler, og et svært lavt nivå i PC3 celler (fig 1). Inte uttrykk var også annerledes i disse cellelinjene, men CAR-negative PC3 cellelinje uttrykt høye nivåer av integrin α
vp
5 (fig 1).
Celler ble dyrket og immunostained med CAR , integrin α
vp
3, eller α
vp
5 antistoff og deretter utsatt for flowcytometrisk analyse. Kolonner, prosenter av celler som uttrykker CAR, αvβ3 og αvβ5. Data er presentert som gjennomsnitt ± standardavvik for tre uavhengige eksperimenter.
RGD-fiber modifisert infeksjon kapasitet på adenoviruses
Etter 24 timers infeksjon med adenovirus, ble Western blot analyse brukes til å oppdage ekspresjon av det adenovirale hekson-proteinet i infiserte celler (figur 2A). Hekson protein uttrykk var lik i bilen-positive cellelinjer DU145, LNCaP og RWPE-en etter enten AxCAlacZ eller AxCAZ3-F /RGD infeksjon. Men CAR-negative PC3 cellelinje (uttrykker integrin α
vp
5) viste høye nivåer av hekson protein uttrykk etter AxCAZ3-F /RGD infeksjon sammenlignet med celler infisert med AxCAlacZ (2A), noe som indikerer at RGD -fiber modifisering forbedret adenovirus (AxCAZ3-F /RGD) infeksjon kapasitet i CAR-negative prostatakreftceller.
A, RGD-fiber modifisert infeksjon kapasitet på adenoviruses. Western blot-analyse av hekson-proteinet uttrykket i mock-infeksjon (1) eller infeksjon med AxCAlacZ (2) og AxCAZ3-F /RGD (3) i prostatakreftceller. B, Strømningscytometrisk analyse av hekson protein ekspresjon i AxCAZ3-F /RGD adenovirus-infiserte celler eller AxCAlacZ adenovirus-infiserte celler. Data er presentert som gjennomsnitt ± standard avvik for tre uavhengige eksperimenter. ** P 0,01 og N.S., ikke statistisk signifikant. C, cytopatiske effekter av RGD-fiber modifisert adenoviruses på prostatakreftceller. Celler ble infisert med AxCAlacZ (romber), AxCAZ3-F /RGD (firkanter), AxdAdB-3 (triangler) og AxdAdB3-F /RGD (sirkler) ved en MOI på 30 for 0, 1, 3, 5 og 7 dager etter og deretter underkastet en cellelevedyktighet assay. Data er presentert som gjennomsnitt ± standard avvik for tre uavhengige eksperimenter. ** P 0,01 og N.S., ikke statistisk signifikant.
Vi evaluerte også infektivitet ved fluorescens-aktivert cellesortering for å påvise adenoviral hekson-proteinet i infiserte celler (figur 2B). CAR-positive DU145, LNCaP og RWPE-1 celler viste lignende uttrykk for hekson protein etter enten AxCAlacZ eller AxCAZ3-F /RGD infeksjon. I skarp kontrast, CAR-negative cellelinjen PC3, uttrykker αvβ5 viste ekspresjon av hekson-proteinet i celler infisert med AxCAZ3-F /RGD men ikke med AxCAlacZ, som var i overensstemmelse med resultatene av Western blot.
cytopatiske effekter av adenovirus på prostatakreftceller
AxdAdB-3 var mer cytopatisk i CAR-positive prostatakreftceller (LNCaP eller DU145) enn i CAR-negative celler (PC3). AxdAdB3-F /RGD forårsaket potent oncolysis både CAR-positive og CAR-negative prostatakreft cellelinjer (figur 2C), noe som indikerer at RGD-fiber modifisert adenovirus (AxdAdB3-F /RGD) forbedret antitumoraktivitet i CAR-negative nedbrutt kreft celler . Men AxdAdB3-F /RGD ble ikke cytopatisk i HPV-udødelig normal prostata RWPE-en epitelial cellelinje (Fig 2B).
Antitumor aktivitet AxdAdB3-F /RGD
in vivo
Vi først etablerte prostatakreft PC3 celle xenotransplantater i nakne mus og deretter injisert direkte AxdAdB3-F /RGD eller kontrollvirus AxdAdB-3 inn i tumorlesjoner en gang om dagen i tre dager. Musene ble avlivet på dag 28 og AxdAdB3-F /RGD antitumoraktivitet. Tumorvekst kurve, og tumorvolum ble målt (figur 3). Tumorxenografter ble også analysert for ekspresjon av virus hekson-proteinet (figur 4). Våre data viser at AxdAdB3-F /RGD signifikant hemmet veksten av tumorxenografter
i VI vo
ved 4 uker etter behandling sammenlignet med AxdAdB-3 (P 0,005, fig 3).
Prostatakreft PC3-celler ble subkutant injisert inn i nakne mus. Etter tumorlesjoner nådde omtrent 6-7 mm i størrelse virus ble injisert i tumoren lesjon en gang om dagen i tre dager, og musene ble avlivet på dag 28. Tumorvolumet ble målt etter at dyrene ble behandlet med virus (n = 5 pr gruppe) . Data er presentert som gjennomsnittlig tumorvolum ± standardavvik. ** P 0.005.
AxdAdB3-F /RGD behandling resulterte i mer omfattende tumor nekrose enn AxdAdB-3 (HE flekker, opprinnelig forstørrelse x 200 i toppanelet x 400 i midtpanelet). Immunhistokjemisk farging av AxdAdB3-F /RGD-behandlede svulster oppdages adenovirus hekson protein (nederst panel, opprinnelig forstørrelse x 400).
Diskusjoner
Vår nåværende studie viser at RGD fiber er i stand til å endre antitumor aktivitet av E1A /E1B dobbel mutant adenovirus AxdAdB3-F /RGD i prostatakreftceller
in vitro Hotell og i naken mus xenograft modell. Vår nåværende data indikerer at AxdAdB3-F /RGD besitter en potent terapeutisk aktivitet i prostatakreft. AxdAdB3-F /RGD forårsaket sterke cytopatiske effekter i alle prostatakreft cellelinjene som ble testet, uavhengig av CAR uttrykk. AxdAdB3-F /RGD også hemmet veksten av prostata kreft transplantater i nakne mus. Men uten RGD modifikasjon, AxdAdB-3-virus bare viste antitumoraktivitet i CAR-positive prostatakreftceller. Videre studier er nødvendig for å vurdere den totale sikkerheten av disse adenoviruser før bruk i humane pasienter.
Adenoviral infeksjon krever at viruset fester seg til overflaten av målcellene ved binding av knotten domenet av fiberen til CAR, og deretter påfølgende internalisering gjennom samspillet av RGD motiver av Penton base med integrin reseptorer α
vp
3 og α
vp
5. [14, 20] Dermed spiller CAR en avgjørende rolle som formidler og fremme adenovirus infeksjoner. Vanligvis kreftceller uttrykker meget lave nivåer av CAR protein og motstå adenovirus infeksjoner, og er derfor ildfast å adenovirus-mediert viral behandling. [11] I den aktuelle studien, fikk vi bekreftet at AxdAdB-tre infeksjon var i stand til å redusere levedyktigheten til prostatakreft DU145 og LNCaP cellelinjer som uttrykker høye eller moderate nivåer av CAR, men hadde begrensede effekter av PC3 celler, som uttrykker svært lave nivåer av CAR. Faktisk, prostata kreft cellelinjer og tumorvev ofte har redusert eller tap av CAR uttrykk. [12] For å forbedre smittsomhet av onkolytisk adenovirus i CAR-negative prostatakreft, endret vi viruset med RGD å produsere en AxdAdB3-F /RGD viruset, som betydelig forbedret onkolytisk adenovirus aktivitet i prostatakreft.
AxdAdB3-F /RGD er et virus som inneholder en RGD peptid, som kan formidle ikke bare CAR-avhengig virus oppføring, men også CAR-uavhengig og RGD-inte (α
vp
3 og α
vp
5) -avhengig virus innreise til målrettede celler. Kreftceller uttrykker CAR eller inte vil derfor være utsatt for AxdAdB3-F /RGD infeksjon. Derfor, selv om tap av eller redusert CAR uttrykk forekommer hyppig i prostatakreft, rikelig uttrykk for integrin α
vp
3 og α
vp
5 bør legge til rette virusinfeksjon. [21] Vår nåværende studien bekreftet denne hypotesen og viste at AxCAZ3-F /RGD forbedret infeksjon kapasitet i forhold til AxCAlacZ (uten RGD) i CAR-negative PC3 celler. Videre AxdAdB-3 var mer cytopatisk i CAR-positive celler i forhold til CAR-negative celler; Men AxdAdB3-F /RGD forårsaket potente cytopatiske effekter både i bil-positive celler og CAR-negative celler. Også AxdAdB3-F /RGD hemmet xenograft vekst i naken mus modell. Disse dataene antyder at RGD fiber modifisert adenovirus forbedrer adenovirus infeksjoner kapasitet og oncolysis effekt gjennom inte (αvβ3 og αvβ5) -avhengig oppføring. På grunn av sin økt infeksjons kapasitet, kunne AxdAdB3-F /RGD på et lavere viral dose potensielt unngå noen uheldige bivirkninger og samtidig øke effekten av viral terapi.
Vår nåværende data viser at nivåene av CAR og inte α
vp
3 uttrykk er høy i DU145 og lavt i PC3 celler, som ligner på funnene i en tidligere studie av Adams
et
.
al
. [22]. Interessant, vår nåværende studie fant at integrin α
vp
5 uttrykk var høy i DU145 og PC3 celler. Dette er i strid med Adams «studie [22], som viste at integrin α
vp
5 uttrykket er høy i DU145, men lav i PC3 celler. Men, i samsvar med våre resultater, nivåer av integrin α
vp
5 var høyere enn inte α
vp
3 i PC3 cellene i Adams «rapport. [22]. Men mengden av integrin α
vp
5 variert. En annen tidligere studie [23] viste også at PC3 og LNCaP celler uttrykte integrin α
vp
5 på tilsvarende nivå, som er konsistent med våre nåværende resultater. Dermed er videre studier er nødvendig for å bekrefte disse data og deres underliggende molekylære mekanismene.
Videre våre nåværende data viser at AxdAdB3-F /RGD har færre cytopatiske effekter på HPV-udødelig normal prostata epitelceller. Adams
et
.
al
. [22] rapporterte at onkolytisk adenovirus mutant AdΔΔ i prostatakreft modeller (AdΔΔ har en mutasjon av E1A i CR-2) eliminert binding til pRb, og sletting av 19 KD E1B forbedret onkolytiske potens. Imidlertid har de publiserte studier vist at enten E1A eller E1B enkelt mutant var i stand til å replikere i normale celler. [24,25] Vår tidligere studie viste at E1A /E1B dobbel mutant onkolytisk adenovirus, AxdAdB-3, ikke signifikant indusere toksisitet sammenlignet til E1A eller E1B enkelt mutante adenovirus i normale cellelinjer avledet fra prostata. [10] Vår studien er i samsvar med tidligere studier som viser at den E1A /E1B dobbel mutant onkolytisk adenovirus var mindre toksisk sammenlignet med E1A eller E1B enkle mutanter i normal celler, men hadde en lignende onkolytiske effekt på kreftceller. [19, 26] Nylig, kliniske studier av onkolytiske adenoviruses levert intratumorally, intraperitonealt, og intravenøst for å behandle pasienter med tilbakevendende eller avansert kjemoterapi refraktær solid tumor ble rapportert å være trygg og potensielt effektive. [27] blir således disse studiene oppmuntrende og støtte bruken av AxdAdB3 /F-RGD som et terapeutisk middel for prostatacancer. I tillegg er prostatakreft godt egnet for onkolytisk adenovirus behandlingen på grunn av enkel levering av adenovirus inn i den intra-prostata, slik at høye titere av adenovirus for å infisere tumorceller uten spredning til andre områder. [9] for adenovirus replikasjon resulterer i frigivelse av avkom virus for å infisere tilstøtende tumorceller, noe som fører til forsterkning av inngangsvirus. Igjen er E1A /E1B dobbel mutant onkolytisk adenovirus i stand til å replikere i målceller og lyse tumor celler som har unormalt i p53 og /eller P16 /Rb /E2F-trasé. [19] Prostatakreft har ofte et bredt spekter av genetiske mutasjoner, inkludert p53, pRb, og P16 veier, [28] og ville være en ideell organ stedet for onkolytisk adenovirus terapi.
Vår nåværende studien gir proof-of-prinsippet, og mer arbeid er nødvendig før våre funn kan være oversatt til klinisk anvendelse. Vår nåværende data viser at E1A /E1B dobbelt begrenset onkolytisk adenovirus med RGD-fiber modifikasjon forbedrer virusinfeksjon kapasitet og antitumor aktivitet både CAR-positive og negative prostatakreftceller
in vitro Hotell og i naken mus xenografter, mens sparsom normale celler.
