Abstract
Emerging bevis tyder på at DNAM-en (CD226) spiller en viktig rolle i erkjennelsen av kreftceller og deres lysis av cytotoksiske T-lymfocytter ( CTL) og NK-celler. Selv om DNAM-1 ligand CD155 er ubikvitært uttrykt i forskjellige vev, mange humane tumorer betydelig oppregulerer ekspresjonen av CD155; DNAM-1 på CTL-og NK-celler kan være involvert i tumorimmunitet. Men i motsetning til de i mus, humant vev uttrykker også oppløselige isoformer av CD155 (sCD155) som mangler transmembranområdet. Her viser vi at sCD155 nivåene var signifikant høyere i sera av 262 pasienter med lunge, mage, bryst, og gynekologisk kreft enn i sera fra friske donorer. I tillegg sCD155 nivåene var signifikant høyere hos pasienter med tidlig fase (trinn 1 og 2) magekreft enn hos friske donorer, og var signifikant høyere hos pasienter med avansert stadium (trinn 3 og 4) sykdom enn i pasienter i de med tidlig stadium sykdom og friske donorer. Videre sCD155 nivåer ble signifikant redusert etter kirurgisk reseksjon av kreft. Således kan sCD155 nivå i serum være potensielt anvendelige som en biomarkør for kreftutvikling og progresjon
relasjon:. Iguchi-Manaka A, Okumura G, H Kojima, Cho Y, Hirochika R, Bando H, et al. (2016) Økt Løselig CD155 i serum hos kreftpasienter. PLoS ONE 11 (4): e0152982. doi: 10,1371 /journal.pone.0152982
Redaktør: Hiroshi Shiku, Mie Universitetet Graduate School of Medicine, JAPAN
mottatt: 24 august 2015; Godkjent: 22 mars 2016; Publisert: 06.04.2016
Copyright: © 2016 Iguchi-Manaka et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Denne forskningen ble støttet delvis av tilskudd gitt av departementet for utdanning, kultur, sport, vitenskap og teknologi fra Japan (Grant nummer 26861038, 24249021 og 25114701 til AI-M, AS og KS). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Immune overvåking av svulster undertrykker kreftutvikling for å beskytte verten. Sentrale aktører i cellemediert immunitet mot svulster, cytotoksiske T-lymfocytter (CTL) og NK-celler [1, 2], formidler tumor gjenkjennelse og aktivering gjennom deres antigenreseptorer, og en rekke av adhesjon og ko-stimulerende molekyler [2, 3]. Interaksjoner av celleoverflate-reseptorer med deres ligander som uttrykkes på tumorceller som induserer cytotoksiske aktivitet av CTL og NK-celler mot tumorer [4].
DNAM-1 (CD226) er et medlem av immunglobulin super og uttrykkes på NK -celler, T-celler, monocytter, makrofager, og blodplater [5, 6]. Dens ligander hos mennesker og mus er den poliovirus reseptoren CD155 og dets familie medlem CD112 (PPR-2 [PVR-relaterte familie 2], også kalt nectin-2) [7-9]. Menneskelig CD155 og CD112 er bredt fordelt på epiteliale og endoteliale cellene i mange vev [10, 11]; særlig er de overuttrykt på forskjellige tumorer, inkludert kolorektal [12, 13], gastrisk [12] og eggstokk-kreft [14]; neuroblastom [15]; myeloide leukemier [16]; multippelt myelom [17]; og føflekkreft [18]. Interaksjoner mellom CD155 og CD112 på tumorceller og DNAM-en på NK og T-celler øke celle-mediert cytotoksisitet og cytokin produksjon [7, 8]; DNAM-1 er sannsynligvis involvert i immunitet mot CD155- og CD112-uttrykke ondartede svulster. Faktisk, i en modell av kjemisk induserte tumorer i DNAM-1-manglende mus, er DNAM-1 viktig for immunovervåkning mot CD155-uttrykkende tumorer [19]. Derfor, CD155 på tumorer er avgjørende for DNAM-1-mediert tumorimmunitet.
Men i tillegg til membranbundne CD155 (mCD155, CD155α), humant vev (i motsetning til de i mus) uttrykker løselig CD155 (sCD155 ) (CD155β og CD155γ) kodet av spleise isoformer av
CD155 Hotell som mangler transmembranområdet [20, 21]. Her har vi undersøkt serumnivåene av sCD155 i 262 pasienter med variable kreft og vise at sCD155 kan være nyttig som en biomarkør for kreftutvikling og progresjon.
Materialer og Metoder
Cellelinjer
Vi brukte følgende humane cellelinjer hentet fra ATCC: HeLa (livmorhalskreft), HOS (osteosarkom), RD (rhabdomyosarkom), U87MG (gliomer), Jurkat (T-celle leukemi), og Colo 205 (kolorektal kreft) . Metha (methylcholanthrene-indusert sarkom fra BALB /c mus) ble gitt av Dr. Eiichi Nakayama (Okayama University).
Samples
Vevsprøver ble oppnådd fra primære kreftpasienter som gjennomgikk kirurgisk reseksjon på University of Tsukuba Hospital, Japan. Serumprøver ble oppnådd fra primære kreftpasienter på University of Tsukuba Hospital og Ibaraki Prefectural Central Hospital, Japan, og fra friske frivillige. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle pasienter og friske frivillige. Denne studien ble godkjent av etisk komité ved University of Tsukuba og Ibaraki Prefectural Central Hospital (Godkjenningsnummer 531-5 og 307). Sykdom stadium ble klassifisert i henhold til The Union for International Cancer Control (UICC) TNM klassifikasjon av ondartede svulster.
Mus
BALB /c mus ble kjøpt fra Charles River (Yokohama, Japan). Alle mus ble plassert og oppvokst under spesielle patogenfrie forhold på Animal Resource Center ved University of Tsukuba. Eksperimentelle mus ble benyttet ved 7-10 ukers alder. Alle eksperimenter med mus ble godkjent av dyreforsøk Utvalget ved Universitetet i Tsukuba (godkjenningsnummer 09-390 og 10-237) og utført i henhold til retningslinjene fra dyreforsøk Utvalget ved Universitetet i Tsukuba.
PCR
Total RNA ble ekstrahert fra cellelinjer og vev med Isogen reagens (Nippon Gene). For RT-PCR, brukte vi høy kapasitet cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems). PCR-analyse av
CD155
spleisevarianter ble utført, som tidligere beskrevet [21].
kvantitativ real-time PCR
Total RNA ble ekstrahert fra vev ved hjelp Isogen reagens ( Nippon Gene). QRT-PCR analyse av
CD155
spleisevarianter ble utført med TaqMan genuttrykk Analyser (Applied Biosystems) og Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System. Vi brukte følgende TaqMan genuttrykk Analyser: Hs1050633_m1 (
CD155α
), Hs1050636_m1 (
CD155γ
), og Hs99999903_m1 (
ACTB
). For
CD155β
, brukte vi tilpassede TaqMan Gene Expression Analyser med følgende primere og reporter: forover primer 5′-AAAGAGGGACCTCCCAGTGA-3 «, reverse primer 5′-GAATAGGAGACATGCCCATTAGCT-3′, og reporter 5»-CACTCAGGTACAGAGCATG- 3 «. Ved å bruke en Agilent 2100 Bioanalyzer, vi analyserte kvaliteten på total RNA for QRT-PCR for en RNA integritet nummer 7. Alle verdier ble fastsatt i tre eksemplarer.
ELISA for human løselig CD155
sCD155 nivåer i sera ble målt ved sandwich-ELISA ved hjelp av mus anti-human CD155 mAb (TX24) og kanin anti-human CD155 polyklonale Ab (pAB) som fangst og deteksjon Abs, henholdsvis, etterfulgt av HRP-linked anti-kanin IgG (GE Healthcare) og QuantaBlu Fluorogenic peroxydasesubstrat (Pierce Biotechnology). Sort 96-brønners plater (Greiner Bio-on) ble belagt med muse-anti-human CD155 mAb (TX24, 2 pg /ml blokkeringsbuffer, 100 ul /brønn) for fangst over natten ved 4 ° C, blokkert med blokkeringsbuffer (10% FBS, 200 ul /brønn) i en time ved romtemperatur, og vasket tre ganger med vaskebuffer (0,05% Tween 20). Human CD155-Fc-fusjonsprotein (som standard), og serumprøver ble sådd ut på 100 pl /brønn, inkubert i 1 time ved romtemperatur, og vasket med vaskebuffer. Etter inkubasjon under de samme betingelser med 100 ul av kanin-anti-human-CD155 Pab (5 ug /ml i blokkeringsbuffer), ble vasket platene inkubert under de samme betingelser med 100 ul anti-kanin-IgG-HRP (1: 2000 i vaske buffer), vasket og omsatt med 100 pl av QuantaBlu arbeidsløsning (Pierce Bioteknologi) i 30 minutter ved romtemperatur. Vi stoppet reaksjonene med 100 ul QuantaBlu Stop Solution (Pierce Biotechnology) og målte den relative fluorescens enhet (RFU) fra hver brønn ved bølgelengder av 320 nm for eksitasjon og 420 nm for utslipp ved hjelp av en Spectra Max M2E leser (Molecular Devices). Alle verdier ble bestemt i triplikat. Til mus anti-human CD155 mAb (TX24) og human CD155-Fc-fusjonsprotein ble samlet i vårt laboratorium som beskrevet tidligere [8]. Kaninen anti-human CD155 pAb ble generert i vårt laboratorium ved standardmetoder.
Etablering av Metha transfektant uttrykke muse sCD155
cDNA som koder ekstracellulære region av mus CD155 ble subklonet inn i p3 × FLAG -CMV-13 ekspresjonsvektor (Sigma-Aldrich) og omformet til Metha cellene til å generere transfektant stabilt uttrykker Flag-merket sCD155 bruker DMRIE-C transfeksjon reagens (Invitrogen). Den transfektant ble valgt av G418 (Sigma-Aldrich) og passert i bukhulen til mus.
ELISA for mus CD155-3 x FLAG-fusjonsprotein
Flag-tagged sCD155 i mus og ascites serum ble målt ved sandwich-ELISA hjelp av en rotte anti-mus CD155 mAb (TX56) og mus anti-FLAG BioM2 mAb (Sigma-Aldrich) som fange og deteksjons mAbs, henholdsvis, etterfulgt av streptavidin-HRP-konjugat (GE Healthcare) og QuantaBlu Fluorogenic peroksydasesubstrat (PIERCE). Sort 96-brønners plater (Greiner Bio-on) ble belagt med rotte-anti-mus CD155 mAb (TX56, 2 pg /ml i blokkeringsbuffer (10% FBS i PBS), 100 ul /brønn) over natten ved 4 ° C, behandles med blokkeringsbuffer (200 ul /brønn) i en time ved romtemperatur, og vasket tre ganger med en vaskebuffer (0,05% Tween 20). Prøvene ble belagt med 100 pl /brønn, inkubert i 1 time ved romtemperatur, og vasket med vaskebufferen. Etter inkubasjon under de samme betingelser med 100 ul av anti-FLAG BioM2 (Sigma-Aldrich, 1 pg /ml blokkeringsbuffer) ble platene inkubert under de samme betingelser med 100 pl av streptavidin-HRP (GE Healthcare, 1: 2000 vaskebuffer ), vasket og omsatt med 100 pl av QuantaBlu arbeidsløsning (Pierce Bioteknologi) i 30 minutter ved romtemperatur. Etter å ha stoppet reaksjonene med 100 mL av QuantaBlu Stop Solution (Pierce Biotechnology), målte vi relative fluorescens enheter av hver brønn ved bølgelengder av 320 nm for eksitasjon og 420 nm for utslipp ved hjelp av en Spectra Max M2E (Molecular Devices). Alle verdier ble bestemt i triplikat. Rotte anti-mus CD155 mAb (TX56) ble generert i vårt laboratorium som tidligere beskrevet [8].
Tumor vekstanalyse
Mus ble inokulert subkutant i ryggen med 8 × 10
4 sCD155-Metha celler. Musene ble overvåket i tumorstørrelse (den lange (L) og korte (S) dimensjoner) ved hjelp av calipers en gang i uken, og tumorvolumene ble beregnet ved ligningen: volum = (L x S
2) /2, som tidligere beskrevet [22]. Musene ble avlivet av CO2 eller anestesi etter slutten av forsøket.
statistikker
statistiske analysene ble utført ved hjelp av tosidige Mann-Whitney U-test og den tosidige Student t-test .
Resultater
uttrykk for CD155α og CD155β i tumorvev var høyere enn i ikke-tumorvev
Selv om sCD155 er sterkt uttrykt i kolorektal kreft [12], dens uttrykk profil i andre kreftformer er uklart. Ved hjelp av RT-PCR, analyserte vi uttrykket for
CD155
mRNA i flere tumorcellelinjer og primære cervical, ovarian, og livmorkreft; alle cellelinjer og kreft uttrykt både membranbundet (
CD155α
) og løselig (
CD155β Hotell og
CD155γ
)
CD155
mRNA (fig 1). Så, ved kvantitativ real-time PCR (QRT-PCR), sammenlignet vi uttrykk for
CD155
isoformene blant kolorektal, mage og bryst kreft og deres tilstøtende ikke-tumorvev; uttrykk for
CD155α Hotell og
CD155β
, men ikke
CD155γ
, var signifikant høyere i kreft enn i de ikke-tumorvev (P 0,05) (fig 2).
PCR ble utført ved anvendelse av primersettene plassert på hver side av de forskjellige spleisesetene. Tre band av predikerte størrelsene (α: 273 bp, beta: 138 bp, y: 114 bp) er observert i PCR-produkter. mRNA for membranbundet (α) og oppløselig
CD155 plakater (β,
γ
) ble uttrykt av forskjellige humane kreftcellelinjer (A) og cervikal, ovarial og endometrial kreft vev (B ).
tumor~~POS=TRUNC og tilstøtende ikke-tumor vev ble tatt fra kirurgisk reseksjon prøver av tykk- (adenokarsinom, n = 9), mage (adenokarsinom, n = 4), og bryst (invasive duktalt karsinom, n = 3) kreft. QRT-PCR av
CD155
RNA-spleisevarianter ble utført, og den ganger endring av den relative ekspresjon av tumorvevet i forhold til den tilstøtende ikke-svulstvev ble beregnet. Ekspresjonen av membran-bundet (α) og oppløselige (β)
CD155
RNA i tumorvev var betydelig høyere enn for de ikke-tumorvev (P 0,05).
sCD155 nivåene var høyere i sera fra kreftpasienter enn hos de friske givere
Fordi uttrykk for
sCD155
i kreftvev ble oppregulert, etablerte vi en sandwich ELISA for måling sCD155 (S1 figur) og kvantifisert sCD155 i sera hos 262 pasienter med forskjellige typer kreft, inkludert lungekreft, øsofageal, gastrisk, kolorektal, galle-kanal, bukspyttkjertel, bryst, eggstokk, endometrial, og livmorhalskreft (tabell 1). Sammenlignet med friske donorer (n = 60), sera fra cancerpasienter hadde betydelig høyere sCD155 nivåer (gjennomsnitt = 15,6 ng /ml og 28,3 ng /ml, henholdsvis, P 0,0001) (tabell 1, figur 3A), som var ikke påvirket av pasientens alder eller kjønn (data ikke vist). Mottakeren opererer karakteristiske kurve illustrerer kraften i den sCD155 nivå for å skille mellom kreftpasienter og friske donorer; verdien for arealet under kurven var 0,718 (figur 3B).
(A) Løselig CD155-nivåer i sera fra friske donorer (n = 60) og kreftpasienter (n = 262) ble analysert ved hjelp av sandwich-ELISA . Sammenlignet med friske givere, sera hos kreftpasienter hadde signifikant høyere sCD155 nivåer (P 0,0001). Red bar: gjennomsnitt, svart strek: SD. (B) Mottaker opererer karakteristikk-kurve som illustrerer kraften av løselig CD155 nivå for å skille mellom friske donorer og kreftpasienter.
Sammenlignet med de friske kontrollprøvene, de sCD155 nivåer i sera fra pasienter med hver type kreft unntatt livmorhalskreft var signifikant høyere (lunge: P 0,05, esophageal: P 0.001, mage: P 0,0001, tykktarms: P 0,001, galle-kanal: P 0,0001, bukspyttkjertelen: P 0,0001, bryst: P 0,05, eggstokkreft: P 0,01, livmor: P 0,01) (tabell 1, figur 4A). Spesielt sammenlignet med friske donorer, pasienter med tidlig stadium (trinn 1 og 2) magekreft hadde betydelig høyere sCD155 nivåer (P 0,01). Videre sCD155 nivåene var signifikant høyere hos pasienter med avansert stadium (trinn 3 og 4) magekreft enn i pasienter i tidlig fase (P 0,05) og friske kontroller (P 0,001) (figur 4B). Selv om sCD155 nivåene ikke ble endret, eller til og med øket i visse pasienter etter kirurgisk reseksjon av kreft, og dette kan være avhengig av hver enkelt pasient med forskjellig cancer, statistisk analyse for total populasjon viste at sCD155 nivåene var signifikant redusert (P 0,05) (fig 4C )
(A) Løselig CD155 nivåer i sera i henhold til de ulike krefttyper (lunge. n = 52, esophageal: n = 8, mage: n = 49, tykktarms: n = 12, galle-kanal : n = 25, bukspyttkjertel: n = 18, bryst: n = 32, eggstokkreft: n = 23, livmor: n = 16, cervical: n = 15) analysert av sandwich-ELISA. Red bar: gjennomsnitt, svart strek: SD. (B) Løselig CD155 nivåer i sera av magekreftpasienter stratifisert etter sykdom scenen. Stages 1 2: n = 24, stadiene 3 og 4, n = 25. (C) Løselig CD155 nivåer i sera fra kreftpasienter som gjennomgikk kirurgi (n = 73) ble analysert for kreft før og etter. Løselig CD155 nivå betydelig redusert etter operasjonen. Red tomten: gjennomsnitt, preoperative gjennomsnittet: 26,529 ng /ml, postoperative bety: 22,390 ng /ml, P 0,05. Postoperative dager: 69,30 ± 61,95
sCD155 nivåer i sera var avhengig av tumorbyrde i en musemodell
Basert på resultatene som er beskrevet ovenfor, vi hypotese at sCD155 nivåer i sera. av kreft pasienter forbinder med tumorbyrde. For å løse denne hypotesen, vi transfektert Metha fibrosarkom cellelinje som uttrykte bare endogene mCD155, med en retrovirusvektor inneholdende enten cDNA som koder for den ekstracellulære del av mus CD155 eller med en mock-kontroll vektor. Vi inokulert transfektantene (sCD155-Metha eller Mock-Metha) inn i bukhulen på mus, og 10 dager senere, samlet ascites. For å kvantifisere sCD155 nivå, etablerte vi en ELISA system. Selv om sCD155 ble nesten ikke detektert i ascites i mus som var blitt inokulert med Mock-Metha ved hjelp av ELISA, har vi oppdaget at en betydelig mengde av sCD155 i ascites i mus som var blitt inokulert med sCD155-Metha (figur 5A). Resultatene viste at sCD155-Metha produsert sCD155
in vivo
. Vi subkutant inokulert mus med sCD155-Metha og måles både serum sCD155 nivåer og tumorstørrelse. Vi har observert at sCD155 nivåer i sera ble korrelert med sCD155-Metha tumorstørrelse (figur 5B). Disse resultatene tyder på at serum sCD155 nivåer forbinder med tumorbyrde.
(A) Metha transfektant sekresjon sCD155 (sCD155-Metha) eller kontroll protein (Mock-Metha) ble inokulert i bukhulen og deretter ascites ble samlet inn. sCD155 nivåer i ascites i mus som var blitt inokulert med disse transfectantss ble målt ved hjelp av ELISA. (B) BALB /c-mus ble inokulert subkutant med sCD155-Metha transfektant. Tumorstørrelse og sCD155 nivåer i serum ble målt og korrelasjonskoeffisienten ble beregnet.
Diskusjoner
Selv om sCD155 ble identifisert 25 år siden [20], er lite kjent om sitt uttrykk og funksjon. Her viste vi at uttrykket av sCD155 (
CD155β
) samt mCD155 (CD155
en
) mRNA i tumorvev var betydelig høyere enn hos ikke-tumorvev. I tillegg er pasienter med forskjellige typer kreft viste signifikant høyere nivåer av serum sCD155, sammenlignet med friske kontrollprøver. Videre ble sCD155 nivåer i sera korrelert med sykdomsprogresjon i mage kreftpasienter og tumorstørrelse hos mus. Våre resultater tyder på at sCD155 nivåer i sera hos kreftpasienter er muligens avhengig av tumorbyrde. Forrige rapport viste at oppregulering av mus CD155 er mediert av Raf-MEK-ERK-AP-1 signalveien [23], noe som tyder på at uttrykk for både mCD155 og sCD155 er oppregulert gjennom denne veien også i menneske, selv om ytterligere studier er nødvendig for å fastslå hvordan sCD155 er oppregulert i kreft. Ikke desto mindre våre resultater tyder på at serumnivået sCD155 er potensielt nyttig som en biomarkør for progresjon av kreft.
Selv om mCD155 uttrykkes på tumorer er blitt antatt å være involvert i DNAM-1-mediert immunitet tumor, motstridende resultater har vært rapportert . For eksempel ble overekspresjon av mCD155, som bestemmes av immunhistokjemisk undersøkelse ved hjelp av anti-CD155 antistoff, i lunge adenokarsinom og melanom korrelert med dårlig prognose [24, 25]. Men disse studiene ikke diskriminere mellom mCD155 og sCD155. I denne studien viste vi at uttrykket av både mCD155 (
CD155α
) og sCD155 (
CD155β
) ble oppregulert i kreft, inkludert tykktarms, mage og bryst kreft, sammenlignet med ikke-kreft vev. Selv om, på grunn av begrenset antall av hver type kreft, kan vi ikke vurdere sammenhengen mellom uttrykk nivåer av sCD155 (
CD155β
) mRNA i kreft vev eller serum CD155 nivåer og sykdomsutvikling og prognose, høyere nivåer av sCD155 i sera var assosiert med avansert stadium av magekreft og tumorstørrelse hos mus.
Tidligere rapporter viste seg rollen som løselig form av membranreseptorer i tumor unndragelser. Membranbundne molekyler slik som NKG2D ligander MHC klasse I-relatert molekyl (MIC) og UL16-bindende proteiner (ULBPs) og FAS som er involvert i NK-celler og CTL-mediert cytotoksisitet mot tumorer, har vist seg å bli gitt ut som oppløselig former i sera fra forskjellige kreftpasienter [26-30]. I motsetning til CD155, er oppløselige MIC og ULBPs generert fra tumorer ved proteolytisk shedding [26, 31, 32]. Svulster kan unndra fra NKG2D-mediert immun overvåking av flere mekanismer; en av dem er at oppløselige MIC nedregulerer NKG2D uttrykk [31, 33]. Tidligere rapport viser at høye nivåer av oppløselig ULBP2 i sera var assosiert med dårlig prognose sykdom i melanomapasienter [27], som tyder på at oppløselige ULBP2 er involvert i tumorImmunflukt.
I motsetning til NKG2D-ligander, som er funksjonell signifikans av sCD155 i tumor immunitet har vært uklart. Nyere studier viser at DNAM-1 aksjer liganden CD155 med T-celle immunoreceptor med Ig og ITIM domener (TIGIT) eller CD96 [34, 35]. Cross-linking CD96 med plate-bundet CD155-Fc fusjonsprotein hemmet produksjon av IFN
γ
av NK-celler [36]. Videre CD96-manglende mus viste redusert eksperimentelle tumormetastase [36], som tyder på at CD96 og DNAM-1 overfor hverandre i tumorimmunitet. På samme måte har TIGIT en motsatt virkning til DNAM-1 på tumorimmunitet [37, 38]. For å klargjøre den funksjonelle betydningen av sCD155 i tumor immunitet, er videre studier er nødvendig hvordan samspillet mellom sCD155 med sin aktive (DNAM-1) og hemmende (CD96 og TIGIT) reseptorer og deres signal via disse aktivering og hemmende reseptorer er regulert.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 fig. Etablering av sandwich-ELISA for sCD155. Product: (A) Standard kurve av menneskelig CD155-Fc fusjonsprotein. (B) I en 12-brønns plate, 1 x 10
6 HeLa ble dyrket per 1 ml av medium; kultursupernatanter ble samlet etter 24 og 48 timer for løselig CD155 protein deteksjon
doi:. 10,1371 /journal.pone.0152982.s001 plakater (EPS)
Takk
Vi takker Tochihara S og Nomura Y for sekretærhjelp.
