Abstract
Bakgrunn
Den nye vannoppløselig forbindelse STA-1474 metaboliseres til ganetespib (tidligere STA-9090), en potent HSP90 inhibitor tidligere vist seg å drepe canine tumorcellelinjer
in vitro Hotell og hemme tumorvekst i innstillingen av murine xenografter. Formålet med følgende studien var å utvide disse observasjonene og undersøke sikkerhet og effekt av STA-1474 hos hunder med spontane svulster.
Metoder og funn
Dette var en fase en studie der hunder med spontane svulster mottatt STA-1474 under en av tre ulike doseringsplaner. Farmakokinetikk, toksisitet, biomarkør endringer og tumorrespons ble vurdert. Tjuefem hunder med en rekke krefttyper ble registrert. Toksisitet var hovedsakelig av gastrointestinal karakter består av diaré, oppkast, manglende appetitt og slapphet. Oppregulering av HSP70 protein uttrykk ble bemerket i både vevsprøver og PBMC innen 7 timer etter legemiddeladministrasjon. Målbare objektive responser ble observert hos hunder med ondartet mastcellesykdom (n = 3), osteosarkom (n = 1), melanom (n = 1) og skjoldbruskkjertelen carcinoma (n = 1), for en svarprosent på 24% (6 /25). Stabil sykdom ( 10 uker) ble sett i 3 hunder, for en resulterende totale biologiske aktiviteten til 36% (9/25)
Konklusjoner
Denne studien gir bevis for at STA-1474. utstillinger biologisk aktivitet i en relevant dyremodell stor av kreft. Gitt likhetene i hund og humane kreftformer med hensyn til tumorbiologi og HSP90 aktivering, er det sannsynlig at STA-1474 og ganetespib vil demonstrere sammenlignbare anti-kreft-aktivitet i humane pasienter
relasjon:. London CA, Bjørn MD , McCleese J, Foley KP, Paalangara R, Inoue T, et al. (2011) Fase I Evaluering av STA-1474, et prodrug av Novel HSP90 Inhibitor Ganetespib, i Hunder med Spontan kreft. PLoS ONE 6 (11): e27018. doi: 10,1371 /journal.pone.0027018
Redaktør: Mikhail V. Blagosklonny, Roswell Park Cancer Institute, USA
mottatt: 9 juli 2011; Godkjent: 07.10.2011; Publisert: 03.11.2011
Copyright: © 2011 London et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne kliniske studien ble støttet av midler fra Synta Pharmaceuticals Corp. de organer bidratt til studien design, farmakokinetiske analyser og utarbeidelse av manuskript, men hadde ingen rolle i behandling og evaluering av hundene i denne studien
Konkurrerende interesser:. den forfatterne har erklært at noen konkurrerende interesser eksisterer.
Innledning
varmesjokkprotein 90 (HSP90), en molekylær anstand som fremmer den konformasjonelle modning og stabilisering av et bredt spekter av klient proteiner, er en lovende mål for terapeutisk intervensjon i kreft [1], [2], [3], [4]. Mange HSP90 kunder er kjent teinene, inkludert EGFR familiemedlemmer, Akt, Bcr-Abl, mutant p53, Kit, og møtte blant andre [1], [3]. Inhibering av HSP90 funksjon fremmer degradering av disse proteinene klient oftest via ubikvitin-proteasom-reaksjonsveien til slutt resulterer i apoptose [2], [3], [4]. Selektivitet av HSP90-inhibitorer for ondartet versus normale celler er antatt å være gitt av det faktum at akkumulering av overuttrykt og muterte klient proteiner fremmer en overgang til den aktive, super-anstand kompleks form av HSP90 i kreftceller [5], [6 ], [7]. I denne tilstanden, en klient protein forbinder med HSP90 med hjelp av co-anstand som p23, HSP40, HOP, og HIP [3], [5], [6]. Denne super anstand komplekse utstillinger forbedret ATPase-aktivitet, og følgelig ofte binder seg lite molekyl ATP-mimetika med en høyere affinitet enn det ikke-kompleksdannet form av HSP90, som fører til akkumulering i tumorer i forhold til normalt vev. Som sådan, overfører den forbedrede HSP90-aktivitet en større følsomhet av maligne celler til tap av HSP90 funksjon [5]. Targeting HSP90 i kreft er også tiltalende som ingen resistensmutasjoner har blitt identifisert i dette proteinet i humane kreftformer, noe som tyder på det representerer et relativt stabilt mål for medikamentell behandling [8]. Fordi HSP90 hemming kan påvirke flere veier som ofte bidrar til onkogene prosessen, HSP90-hemmere har potensial til å demonstrere bred aktivitet på tvers av flere krefttyper [1], [3].
Den første klassen av HSP90-hemmere var basert på geldanamycin, en benzokinon ansamycin antibiotikum som binder seg til den N-terminale ATP-bindende lomme til HSP90, og dermed blokkere dens ATPase funksjon. Geldanamycin og dets halvsyntetiske derivater 17-AAG, og 17-DMAG hindre stabilisering av kunde proteiner, til slutt resulterer i deres degradering [9], [10], [11]. Imidlertid geldanamycin og dets derivater har en rekke begrensninger, inkludert formulerings utfordringer og bivirkninger, slik som levertoksisitet [12]. STA-1474 (Synta Pharmaceuticals Corp, Lexington, MA, USA) er en lett oppløselig prodrug av ganetespib (tidligere STA-9090), en ny resorcinol-inneholdende forbindelse som ikke er relatert til geldanamycin som binder i det ATP-biding domene ved N-terminus av HSP90 og virker som en potent HSP90-inhibitor. Ganetespib induserer nedbrytning av flere HSP90-klient proteiner, og drepte et bredt spekter av humane kreftcellelinjer ved lave nanomolare konsentrasjoner
in vitro
, og utviser potent anti-cancer-aktivitet i xenograft tumormodeller i mus ([13], [ ,,,0],14], [15] og upubliserte data, Synta Farmasi Corp).
I tidligere studier, viste vi at ganetespib og dens vannløselig prodrug STA-1474 har aktivitet mot canine tumorcellelinjer [14], [ ,,,0],15]. Behandling av osteosarkom (OSA) og mastcelletumor (MCT) cellelinjer med enten ganetespib eller STA-1474 indusert veksthemming, apoptose som var caspase3 /7 avhengig, og inaktivering og /eller nedregulering av pKit /Kit, pMet /Met , Pakt /Akt, og pSTAT3. Både ganetespib og STA-1474 viste overlegen aktivitet til geldanamycin derivatet 17-AAG. Ganetespib hemmet tumorvekst i en murine MCT xenograft modell, mens STA-1474 indusert tumorregresjon, caspase-3-aktivering og nedregulering av fosfor-Met (pMet) /Met og p-Akt /Akt i OSA xenografter [14], [15] . Formålet med følgende kliniske studien var å utvide våre
in vitro Kjøpe og murine studier og undersøke sikkerhet og effekt av STA-1474 hos hunder med spontane svulster som et forspill til framtidig klinisk arbeid hos mennesker med kreft.
Materialer og metoder
Kvalifikasjon
Denne kliniske studien ble godkjent av Ohio State University Veterinary Medical Center Hospital Executive Committee i juli 2007. skriftlig informert samtykke fra eieren av hver hund ble anmodet om i henhold til IACUC og The Ohio State University College of Veterinary Medicine retningslinjer. STA-1474 ble gitt til hunder med spontane svulster som hadde mislyktes konvensjonell terapi eller som var der ingen behandlingsalternativer, eller som konvensjonell terapi ikke var ønsket av eieren. For å være kvalifisert for studiet, må hver hund har blitt diagnostisert med en av et valgt sett histologisk bekreftet spontane maligniteter, og har møtt alle inklusjonskriteriene, og ingen av eksklusjonskriteriene. Kvalifiserte maligniteter inkludert karsinomer, sarkomer, mastcellesvulster, histocytiske sarkomer eller lymfomer. Andre kriterier som følger med: 1 år gammel ved studiestart; tilstrekkelig organfunksjon; minst 2 uker siden kjemoterapi eller stråling med fullstendig gjenoppretting fra de akutte toksisitet av disse behandlingene (3 uker for et kirurgisk inngrep); minst en uke etter tidligere behandling med en hvilken som helst annen utprøvings medikament; ingen diagnosen leukemi; og ingen tegn på hjernemetastaser eller noen alvorlig systemisk lidelse uforenlig med studiet ved skjønn av etterforskeren.
STA-1474 formulering
STA-1474, en løselig prodrug av ganetespib, ble gitt av Synta Pharmaceuticals Corp (figur 1). Lyofilisert STA-1474 medikament produkt ble lagret ved 4 ° C og beskyttet mot lys, inntil dagen av behandlingen. Medikamentet ble oppløst i Plasmalyte 148 USP og pH ble justert til området fra 6,0 til 7,0, ved anvendelse av 0,1 N NaOH standardløsning for en endelig konsentrasjon på 3 mg /ml. Stoffet Løsningen ble sterilfiltrert med 0,2 μ nylonfilter og fylt i en ikke-DEHP fluidbane IntraVia
TM 250 ml tom beholder. Den fylte infusjonsposen ble deretter koblet til en polyetylen-foret ventilert paclitaxel sett, inneholdende en 0,22 μ filter, for administrasjon. Både infusjonsposen og linjen var dekket for å beskytte mot lys. Drug løsningen ble brukt i løpet av 24 timer med forberedelser.
Synlig er den kjemiske strukturen av STA-1474, et vannløselig fosfat prodrug av ganetespib.
Studiedesign
Denne studien var en fase i dose eskalerende, åpen vurdering av sikkerhet og farmakokinetikk av STA-1474 i kundeeide hunder med spontane maligniteter. Hunder ble administrert STA-1474 på en av tre doseringsregimer og ble bedømt ukentlig eller to ganger per uke avhengig av regime. Vurdering av kliniske toksisitet og tumorrespons ble utført ved hvert besøk. Hundene ble evaluert for hematologisk og biokjemiske toksisitet hver 7. dag med rutine bloodwork. Den første dosen av STA-1474 ble satt til 7 mg /kg basert på tidligere data fra normale laboratorie hunder (data ikke vist) og doseøkning ble satt på trinn 2,5 mg /kg i kohorter av tre til dosebegrensende toksisitet (DLT) ble identifisert. Den DLT ble ansett å være noen grad 3 eller 4 hematologisk eller ikke-hematologisk toksisitet basert på de etablerte VCOG-CTAE kriterier [16]. I tillegg noen kronisk ikke-grad 3 eller 4 toksisitet vurderes å betydelig forringe livskvaliteten (dvs., slapphet, manglende appetitt) var kvalifisert som DLTs. Sykdomsprogresjon eller tegn og symptomer definitivt relatert til sykdommen ble ikke ansett bivirkninger (AES).
Toxicity vurdering
Hver pasient gjennomgikk en baseline komplett historie, fysisk undersøkelse, og før dosering laboratorium vurdering som inkluderte en komplett blodprosent (CBC), serum biokjemi profil, og urinalysis. Pasientene ble vurdert for bivirkninger på dag 8, 15, 22 og 29, og da en komplett blodtelling med differensial og klinisk kjemi ble utført. Urinanalyse ble utført ved baseline og gjentas bare hvis indisert. Bestemmelser om minimale hematologiske krav for å fortsette dosering ble inkludert i protokollen: hematokrit 25%, nøytrofile 1500 /L, blodplater 100000 /L. I tillegg ble levertransaminaser som kreves for å være. 4X øvre normalgrense med en normal total bilirubin og serumkreatinin å fortsette STA-1474 terapi
Samtidige medisiner
For å forebygge eller behandle narkotika -relaterte gastrointestinale bivirkningene, støttebehandling ble gitt som nødvendig for å hunder som deltok i de daglige doserings kohorter. Dette typisk besto av famotidin, metronidazol, loperamid, metoklopramid, ondansetron, og /eller maropitant. Antihistaminer ble administrert til hunder med mast celle svulster, da disse tumorene er kjent for å frigi histamin. Andre støttebehandling gis til hunder besto av prednison og ikke-steroide anti-inflammatoriske medisiner for å behandle tumor-assosiert betennelse, manglende appetitt, og for smertekontroll.
Tumor respons vurdering
Kreft Vurderingene ble utført før studiestart, og dager 8, 15, 22, og 29. for hunder som fortsatte utover de planlagte 4 doser av STA-1474, ble responsmålinger utføres hver 3-6 uker etterpå, eller ved mistanke om svulst progresjon. Svarene ble vurdert av utprøver i henhold til forhåndsdefinerte protokoll kriterier. Responsen hos hunder med assessable sykdom ble utført ved klinisk undersøkelse, røntgen, ultralyd, eller CT. Mange lesjoner var ikke mottagelig for kvantitativ røntgenfotografering, men ble fulgt enten ved serie klinisk undersøkelse (overfladiske lesjoner; opplagte lymfeknuter) eller ved ultralyd (mage lymfeknuter). Thorax lesjoner ble vurdert av thorax røntgen og nese lesjoner av CT scan.
Responsen hos hunder med målbar sykdom ble dømt av utprøver på grunnlag av RECIST kriterier [17]. En fullstendig respons (CR) ble definert som forsvinning av alle sykdommer på to målingene er atskilt med en minimumsperiode på 3 uker. En delvis respons (PR) ble definert som mer enn 30% reduksjon i summen av den lengste diameteren av mållesjoner dokumentert ved to vurderinger atskilt med minst 3 uker. En økning av 20% i størrelsen av alle målbare tumorområder som målt ved summen av lengste diameteren til mållesjoner tatt som referanse den minste summen siden behandlingsstart, eller utseendet av enhver ny lesjon (er) vil kvalifisere som progressiv sykdom (PD). En blandet respons (MR) ble definert som PR i noen mållesjoner med PD i andre mållesjoner. Stabil sykdom (SD) ble definert av fravær av kriterier for enten en reaksjon eller progresjon. Hunder som ikke hadde noen tegn til tumorprogresjon og som ikke hadde opplevd noen uakseptabel toksisitet var kvalifisert for utvidet behandlingssykluser. Doseøkning i den enkelte hunden var tillatt hvis hunden ble tolerer terapi
Ganetespib farmakokinetikk
Plasmaprøver ble samlet inn på dag 1 og dag 22 av behandlingen ved de angitte intervallene. Før og etter dosering ved 30, 60, 90, 120, 180, 300 (5 timer), 540 (9 timer), og 1440 (24 timer) minutter i forhold til starten av doseringen. På dag 8, dag 15 og dag 29, ble plasma samlet før dosering bare. Omtrent 1 ml blod ble tatt fra et kateter som er lagt inn i en natriumheparin vakuum glassrør, og plassert på is inntil sentrifugering. Blodprøver ble sentrifugert ved 3300 rpm i 10 minutter, i løpet av 30 minutter etter prøvetaking. Plasma ble overført med pipette inn i to cryovials og lagret ved -80 ° C inntil analyse.
Plasmakonsentrasjonene av ganetespib ble bestemt ved anvendelse av en kvalifisert væskekromatografi tandem massespektrometri (LC-MS /MS) -metoden. Prøvene ble analysert på en HPLC-system bestående av en Agilent HP1100 separasjonsmodul (Santa Clara, CA) koblet til en AB-SCIEX API400 MS /MS-detektor (Foster City, CA). Stabil isotop-merket ganetespib ble anvendt som en indre standard. Eksempel ekstraksjon ble utført ved en væske-væske-ekstraksjon metode med 25 pl plasmaprøver og 800 pl metyl-tertiær-butyleter. Den organiske fase av prøvene ble inndampet til tørrhet under nitrogen og rekonstituert med vann /acetonitril-løsning for injeksjon. Kromatografisk separasjon ble oppnådd på en omvendt-fase analytisk kolonne (4 um partikkel, 50 x 2,0 mm i.d.) med gradienteluering med vann /0,1% maursyre og acetonitril /0,1% maursyre, ved en strømningshastighet på 500 mL /min. Den totale kjøretid var 4 min. Kvantifisering ble oppnådd ved MS /MS-deteksjon i positiv ion-modus ved multippel reaksjon overvåking. Den nedre grense for kvantifisering (LLOQ) var 1,00 ng /ml, med et konsentrasjonsområde 1,00 til 1000 ng /ml.
De farmakokinetiske parametrene for ganetespib ble bestemt fra plasmakonsentrasjonsdata med Noncompartmental Analysis modul i WinNonlin, versjon 5.2 (Pharsight Corporation, St.Louis, MO). De før dosering prøver som målte under LLOQ (BQL) ble behandlet som null for beregningene. Maksimumskonsentrasjon (Cmax) og tidspunktet for maksimum konsentrasjon (Tmaks) ble direkte bestemt fra de observerte konsentrasjons-tidsprofiler. Arealet under plasmakonsentrasjon-tidskurven (AUC) ble beregnet ved den lineære trapesregelen. Den tilsynelatende halveringstid (t
1/2) ble beregnet som t
1/2 = 0,693 /λ hvor λ var eliminasjonshastighetskonstanten beregnet fra regresjonen av terminalen skråningen av konsentrasjonskurven.
Evaluering av HSP70 uttrykk
Små biopsier ble samlet inn fra en undergruppe av pasient svulster som var tilgjengelig på 0, 7, og 24 timer etter behandling. Biopsier ble oppnådd ved hjelp av en 3 mm hull biopsi instrument eller 14 gauge Tru-cut nål. Alle prøver ble plassert i cryovials, straks flash frosset i flytende nitrogen, og lagret ved -80 ° C inntil analyse HSP70. For å bedømme relative hsp70 nivåene i de oppsamlede tumorprøver, en kommersielt tilgjengelig HSP70-enzymbundet immunosorbent analyse (ELISA; Assay Designs, Ann Arbor, MI) ble utført. Frosne tumorprøver ble pulverisert ved hjelp av en frossen morter. Det resulterende pulver ble resuspendert i flytende nitrogen, ble oppsamlet, deretter delt mellom to 15-ml kuler; en konisk for ELISA og ett for Western blot (se metode nedenfor). Når flytende nitrogen dampet bort, ble prøvene tillatt å tine på is. Prøver for ELISA ble resuspendert i (1X) Ekstraksjonsreagens inneholdende 1 mg /ml aprotinin, 1 pg /ml leupeptin, 1 ug /ml pepstatin A, 1 mM PMSF, 1 mM natriumortovanadat, and10 mM natriumfluorid, ved bruk av 1 ml for hvert 0,5 cm
3 av vev. Prøvene ble inkubert på et vippe i 1 time ved 4 ° C, sentrifugert i 15 minutter ved 4 ° C, og deretter supernatanter ble oppsamlet. Bradford protein kvantifisering analyse ble utført på de ekstraktene ved hjelp av BioRad-reagens (BioRad, Hercules, CA). Prøvene ble utlignet til 250 ug /mL med (1X) Ekstraksjonsreagens, delt i porsjoner og lagret ved -80 ° C inntil analyse. På et senere tidspunkt, frosne prøver der lov til å tine på is, deretter seriefortynnet med prøvefortynner 2 (følger med kit) til 01:04, 01:16 og 01:32. 100 ul av hver fortynning ble tilsatt til de passende brønner i to eksemplarer av den 96-brønns pre-belagt ELISA-plate. ELISA ble utført i henhold til produsentens instruksjoner, og absorbans ble målt i løpet av 30 minutter ved hjelp av en Spectramax mikroplateleser (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) med bølgelengde satt til 450 nm og en korreksjon bølgelengde på 540 nm.
Å vurdere hsp70 nivåer i perifere mononukleære blodceller, ble 8 ml helblod oppsamlet før dosering og 24 timer etter behandling (i noen tilfeller også på 7 timer etter behandling) på dag 1 og dag 22 fra halsvenen til to 4 ml BD Vacutainer CPT-rør (BD, Franklin Lakes, NJ). Prøvene ble oppbevart i romtemperatur før sentrifugering i en time ved 1600 RCF, innen 2 timer etter innsamling. Etter sentrifugering ble det mononukleære cellelaget i plasma overføres til et 15 ml konisk. PBMC ble vasket ved tilsetning av 15 ml PBS og sentrifugering i 15 minutter ved 300 RCF. Etter to vaskinger ble cellepelletene resuspendert i 1 ml PBS og overført til et 1,5 ml mikrosentrifugerør. Celler ble pelletert på nytt ved sentrifugering ved 13 000 RCF i 1 minutt. Supernatanten ble fjernet og cellepellets hvor flash-frosset i flytende nitrogen og lagret ved -80 ° C. Umiddelbart før analysen ble PBMC pellets tillatt å tine på is, og deretter hver prøve ble resuspendert i 500 ul (1x) Ekstraksjon buffer med proteasehemmere. Ved å bruke fremgangsmåten beskrevet ovenfor, ble prøvene analysert for relative konsentrasjoner av HSP70 hjelp av HSP70-enzym-linked immunosorbent assay (Assay Designs, Ann Arbor, MI).
Evaluering av tumorbiopsi for HSP90 ekspresjon
Frosne tumorprøver ble bearbeidet som beskrevet ovenfor, deretter resuspendert i 100-150 pl av lyseringsbuffer bestående av 20 mM Tris-HCl pH 8,0, 137 mM NaCl, 10% glycerol, 1% IGEPAL CA-630, 10 mM etylendiamintetraeddiksyre (EDTA), 1 mg /ml aprotinin, 1 mg /ml leupeptin, 1 mg /ml pepstatin A, 1 mM phenylmethysulphonyl fluorid, 1 mM natriumortovanadat, 10 mM natriumfluorid (alle fra Sigma, St. Louis, MO). Prøve ble rystet ved 4 ° C i 1 time, og deretter sentrifugert i 15 minutter ved 13 000 RCF. En Bradford-proteinanalysen ble utført på de lysatene ved hjelp av BioRad-reagens (Hercules, CA). 60-100 ug protein ble separert ved SDS-PAGE, og overført til PVDF-membraner. Membranene ble inkubert over natten med anti HSP90-antistoff (Cell Signaling Technology, Danvers, MA), vasket og deretter inkubert med pepperrot-peroksidase koblet sekundært antistoff. Membraner ble vasket igjen, og deretter utsatt for Super Signal West Dura Utvidet Varighet substrat (Pierce, Rockford, IL) Membraner ble strippet, vasket, og reprobed for β-Actin (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) ved hjelp av SNAP i.d. apparat (Millipore, Billerica, MA) i henhold til produsentens instruksjoner.
Resultater
Fag
Det er totalt 25 hunder med en rekke spontane kreft ble rekruttert til studien. Pasient demografi og tumortype er listet opp i tabell 1. De fleste hunder som deltok i denne studien hadde mislyktes tidligere behandlingsregimer (n = 18, 72%) inkludert kirurgi, strålebehandling, kjemoterapi, eller en kombinasjon av disse behandlingene. Gitt de tidligere data som demonstrerer biologisk aktivitet av ganetespib i hjørnetann osteosarkom (OSA) og mastcelletumor (MCT) cellelinjer, så vel som tilstedeværelse av tumor regresjon /stabilisering i murine xenograft-modeller av canine OSA og MCT, hunder med disse tumortyper var beriket i denne fase i-studie. Tumortyper som er representert inkludert OSA (n = 10), MCT (n = 4), thyroid karsinom (n = 3), lymfom (n = 3), andre karsinom (n = 2), nasal kondrosarkom (n = 1), oralt malignt melanom (n = 1), og oral fibrosarkom (n = 1).
behandling grupper og farmakokinetisk analyse
Dogs (n = 12) ble opprinnelig inngått et behandlingsregime bestående av STA-1474 administrert intravenøst over en time en gang per uke. En annen kohort av hunder (n = 6) ble administrert STA-1474 over 8 timer en gang per uke. Dette doseringsregimet ble valgt basert på en delvis respons på behandlingen observert i en hund med malignt melanom i det første kullet etter narkotika ekstravasasjon og langvarig eksponering for legemidlet på grunn av langsom subkutan absorpsjon. Den tredje kohort av hunder (n = 7) fikk STA-1474 administreres i løpet av en time to ganger per uke. Hver hund inngått studien var ment å motta minst 4 doser av STA-1474 med mulighet for å fortsette behandlingen i møte med enten stabil sykdom eller en objektiv tumorrespons.
Farmakokinetiske data er oppsummert i tabell 2 . full farmakokinetisk prøvetaking ble utført for alle hunder i denne undersøkelsen på den første dagen for legemiddeladministrering. Gjennomsnittlig plasmakonsentrasjon – tidsprofiler for hunder i de tre behandlingsgruppene er vist i figur 2a, med representative profiler for 6 hunder (to i hver behandlingsgruppe) i figur 2b. For hunder som får noen av de tre doseringsregimer, AUC var relativt lik, som strekker seg mellom 5013-5701 ng /ml-timers ganetespib. Imidlertid timelegemiddelinfusjoner på 9,25 mg /kg eller 5 mg /kg resulterte i en kortere Tmaks (0,7 timer og 1,1 timer, henholdsvis) og høyere Cmax (3982 ng /ml og 3415 ng /ml, henholdsvis) i forhold til 8 timers infusjon (Tmax 5,7 time, Cmax 802 ng /ml)
a) Midlere ganetespib plasmakonsentrasjon -. tidsprofil for hvert doseringsregime b) Representative ganetespib plasmakonsentrasjon – tidsprofiler for to pasienter i hver doseringsregime.
Sikkerhetsvurderingen
Alvorlige hendelser i behandlingssykluser (oppsummert i tabell 3) besto nesten utelukkende av gastrointestinal opprørt (anoreksi, kvalme, oppkast, diaré) og apati. Ingen legemiddelrelaterte hematologiske eller biokjemiske toksisitet ble observert ved noen doser. En hund med metastatisk osteosarkom utviklet akutt anuriske nyresvikt som resulterer i aktiv dødshjelp. Etterfølgende obduksjon viste nærværet av store tumor embolier i begge nyrearteriene, uten noen tegn på legemiddelinduserte endringer i nyreparenchymet, og som sådan progressiv sykdom ble bestemt til å være årsaken til den observerte nyresvikt. En annen hund utviklet akutt leverfunksjonsprøver (ALAT, ALP) og bilirubin 24 timer etter legemiddeladministrasjon. Hunden deretter kastet opp et stort fremmedlegeme som består av gasbind pads brukes til bandasjering av kateterstedet og de biokjemiske verdier tilbake til det normale innen 72 timer; en delvis midlertidig obstruksjon av galleveiene på grunn av fremmedlegeme ble bestemt å være årsaken til de biokjemiske endringer i dette tilfellet.
Doseøkning ble utført og dosebegrensende toksisitet ble identifisert ved hjelp av en gang per uke time infusjon. Mens nesten alle gastrointestinale bivirkningene var hovedsakelig av grad 1 eller 2 i naturen, ved doser over 9,5 mg /kg, ble hundene funnet å ha apati og anoreksi at eierne følte betydelig svekket livskvalitet, noe som resulterer i seponering av medikamentet administrasjon. For eksempel, alle tre hundene som fikk 10,25 mg /kg av stoffet opplevd grad 2 diaré, slapphet, og anoreksi og hver senere fikk bare én dose av stoffet. Som sådan, 9,5 mg /kg ble ansett for å være den maksimale tolererte ukentlig dose av legemiddel når det administreres ukentlig i løpet av 1 eller 8 timer. På denne dosen, de gastrointestinale bivirkningene var håndterlig med tillegg av legemidler samtidig som består av ondansetron, metoklopramid og /eller maropitant for kvalme /oppkast og metronidazol og /eller loperamid for diaré. Alle hunder som fortsatte behandlingen med STA-1474 utover de 4 første behandlingssykluser forble på legemidler samtidig for varigheten av medikamentell behandling.
Respons på behandling
Svarprosent ble bestemt for hunder påmeldt inn i 3 forskjellige doseringsgrupper. For hunder som en gang mottatt per uke doseringsregime (n = 12), ble ingen objektive svar bemerket med unntak av en hund med en omfattende muntlig malignt melanom som opplevde en bloduttredelse hendelse i løpet av 4
th behandling med STA-1474. Denne hunden hadde en delvis respons på tumorstørrelse og følgende farmakokinetiske analyse (figur 3), ble det fastslått at den utilsiktet subkutan administrasjon resulterte i en utvidet Tmax, uten en vesentlig forandring i selve AUC (data ikke vist).
Pasient # 5 hadde en aggressiv muntlig malignt melanom som hadde invadert inn i nesehulen. I løpet av 4
th behandlingssyklus med STA-1474, skjedde en bloduttredelse hendelse som resulterer i narkotika farmakokinetikken endres. En markert nedgang i munn massen ble observert 7 dager senere, og en etterfølgende CT scan bekreftet en delvis respons på behandling. Vist er to representative matchet CT-bilder av svulsten før og etter behandling.
Basert på bevis på biologisk aktivitet forbundet med en lengre Tmax, farmakokinetikkmodeller ble ansatt for å bestemme en dosering modell som ville oppnå en lignende Tmax når stoffet ble levert over en lengre tidsperiode med samme dose rate. Det ble spådd at 9,5 mg /kg av STA-1474 gitt over en 8 timers infusjon vil resultere i plasmakonsentrasjoner av ganetespib over 100 ng /ml plasma for 8-10 timer og følgelig de neste 6 hunder ble inngått en kohort evaluere dette doseringsregime. I tillegg to hunder fra første doserings kohort (9,5 mg /kg én gang per uke) ble byttet til 8 timers infusjon protokollen etter slutt de planlagte 4 doser av stoffet. Av de 6 hunder i utgangspunktet behandles med lengre infusjon, det var to partielle responser (metastatisk thyroideakarsinom, 36 uker, figur 4a, metastatisk OSA, 20 uker, figur 4b), en blandet respons (metastatisk MCT, 16 uker), og to hunder opplevd stabil sykdom (begge med metastatisk OSA, 12 uker). En hund med metastatisk thyroideakarsinom som byttet fra en time til 8 timers infusjon opplevd stabil sykdom i 40 uker, og hunden med oral malignt melanom og bloduttredelse hendelsen opplevde en fortsatt delvis respons i 12 uker, mens på 8 timers infusjon protokollen.
a) Pasient # 14 hadde et lokalt residiverende thyroideakarsinom med metastatisk sykdom til lungene. Denne pasienten fikk STA-1474 på 8 timers infusjon protokollen og opplevd en delvis respons på behandling av både lokalt residiverende eller metastatisk sykdom. Vist er representative røntgenbilder før og etter 15 behandlinger med STA-1474. De gule pilene peker på metastatiske lunge knuter. b) Pasient # 18 hadde metastatisk OSA til lungene etter amputasjon og kjemoterapi for en appendicular OSA. Denne pasienten fikk STA-1474 på 8 timers infusjon protokollen og opplevd en delvis respons på behandling. Vist er representative røntgenbilder før og etter 4 behandlinger med STA-1474. De gule pilene peker på metastatiske lunge knuter.
Siden lenger infusjonsprotokollen ut til å være assosiert med biologisk aktivitet, ønsket vi å finne ut om hyppigere bruk av STA-1474 med en times infusjon protokollen ville være både utholdelig og indusere objektive responser på behandling. En dose på 5 mg /kg administreres i løpet av en time to ganger per uke ble valgt basert på foreløpige data av toleranse i normale hunder og farmakokinetisk modellering (data ikke vist). Som vist i figur 2a og b, denne doseringsregime resulterte i et Cmax og AUC litt lavere enn det som genereres av den /dose 9,5 mg kg. Toksisiteter observert var lik dem med én gang i uken høyere dose av STA-1474. Av de 7 hunder administrert denne protokollen, to erfarne partielle responser til terapi (begge MCT, figur 5) og begge hundene gikk på å ha sine gjenværende sykdom kirurgisk skåret. En hund (metastatisk OSA) opplevde stabil sykdom for en kort periode, men eieren valgte å ikke fortsette behandlingen, og som sådan, dette gjorde ikke oppfyller RECIST kriterier. De resterende hundene (lymfom, n = 3, metastatisk OSA, n = 1) opplevde progressiv sykdom
a) # 19 hadde tilbakevendende grad 3 kutane MCT Pasient.. Denne pasienten fikk STA-1474 på en times infusjon protokoll to ganger per uke og opplevde en delvis respons på behandling av kutane lesjoner etter 7 behandlinger. b) Pasient # 24 hadde en stor tidligere ubehandlet kutan MCT. Denne pasienten fikk STA-1474 på en times infusjon protokoll to ganger per uke og opplevde en delvis respons på behandling av kutane lesjoner etter 4 behandlinger.
Evaluering av HSP90 og HSP70 uttrykk i tumorprøver og PBMC
Etter hemming av HSP90, er rask oppregulering av HSP70 uttrykk ofte bemerket [14], [15], [18]. Som sådan kan HSP70 oppregulering potensielt tjene som en biomarkør for tap av HSP90 funksjon. For å avgjøre om behandling med STA-1474 forandret uttrykket av HSP70, og hvis HSP70 kan tjene som et potensielt sensitive surrogat biomarkør for HSP90 hemming PBMC ble samlet før og etter behandling, og Western blotting for HSP70 ble utført. Som vist i figur 6a, små økninger i HSP70 ekspresjon var tydelig i de etterbehandlings PMBC prøver, selv om disse endringene var vanskelig å nøyaktig kvantifisere. Følgelig ble en ELISA test som benyttes ved senere prøver å mer definitivt vurdere oppregulering av HSP70.
