Abstract
Bakgrunn
forstyrrelser i celleadhesjonsmolekyler er knyttet til endringer i cadherin-catenin komplekser og sannsynligvis spille viktige roller i invasjon og metastasering; deres innflytelse på tidlige forstadier etapper gjenstår ennå ukjent. Vi viste Alcam overekspresjon i tidlige munnsår og dens cytoplasmisk akkumulering i muntlig plateepitelkarsinom (OSCC) for å være en prediktor for sykdomsutvikling og dårlig prognose. Denne studien testet hypotesen om at endringer i E-cadherin og β -catenin uttrykk er tidlige hendelser i oral tumorigenesis, assosiert med sykdom prognose, og korrelerer med forstyrrelser i Alcam uttrykk.
Metoder
Expressions av E-cadherin og β-catenin ble analysert på samme kohort av 105 OSCCs, 76 munnsår og 30 normale orale vev ved immunhistokjemi og korreleres med clinicopathological parametere og prognose. Effekten av siRNA mediert Alcam knockdown på E-cadherin og β -catenin ble bestemt ved hjelp av western blot, konfokal mikroskopi og RT-PCR-analyse i orale kreftceller.
Resultater
Betydelig tap av membran E-cadherin og β-catenin uttrykk ble observert fra normal, hyperplasi, dysplasi å OSCCs (p
trend 0,001); og korrelert med cytoplasmisk Alcam akkumulering i OSCCs (p = 0,006). Multivariat analyse viste β-catenin membran tap og Alcam /β-catenin
atom /cytoplasma opphopning å være signifikant prediktor for sent klinisk stadium (p 0,001, OR = 8,7; p = 0,006, OR = 9.9, henholdsvis) og nodal metastase (p = 0,003, OR = 3,8; p = 0,025, OR = 3,4 henholdsvis). Cox regresjon viste E-cadherin membran tap /Alcam cytoplasma uttrykk [p 0,001; HR = 4,8] for å være uavhengige uønskede kunngjør i OSCCs. siRNA mediert stanse av Alcam medførte samtidig økning i E-cadherin og β-catenin både på karakterutskriften og protein nivå.
Konklusjoner
Tap av E-cadherin og β-catenin uttrykk er tidlig hendelser i oral tumorigenesis; sine assosiasjoner med aggressiv svulst atferd og tilbakefall av sykdommen understreker deres potensial som prognostiske markører. Korrelasjon av tap av E-cadherin og β-catenin med cytoplasmatiske Alcam opphopning både
in vitro Hotell og i
in vivo
tyder på at disse dynamiske endringer i celle adhesjon systemet kan spille sentral rolle i kreft i munnhulen .
Citation: Kaur J, Sawhney M, DattaGupta S, Shukla NK, Srivastava A, Walfish PG, et al. (2013) Klinisk betydningen av endrete Uttrykk for β-catenin og E-cadherin i Oral dysplasi og kreft: Potensielle Link med Alcam Expression. PLoS ONE 8 (6): e67361. doi: 10,1371 /journal.pone.0067361
Redaktør: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, Japan
mottatt: 30 november 2012; Godkjent: 16 mai 2013; Publisert: 28 juni 2013
Copyright: © 2013 Kaur et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Finans til støtte for dette arbeidet fra Mount Sinai Foundation of Toronto Da Vinci Gala fundraiser, Alex og Simona Shnaider Chair i skjoldbruskkjertelen, kanadiske Institutes of Health Research for Chair i Advanced Cancer Diagnostics, George Knudson Oakdale Golf Tournament Fund Raiser, og Mount Sinai Hospital Department of Medicine Research Fund er takknemlig erkjent. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. Forfatterne erklærte at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
forstyrrelser i orkestrert modulering av celle adhesjon forårsake defekter i vev arkitektur som spiller viktige roller i utviklingen av kreft [1] – [3]. E-cadherin er lokalisert på overflaten av epitelceller i områder av celle-celle-kontakt som er kjent som adherens veikryss og er involvert i celle-celle-adhesjon i epitelvev [4] – [6]. β-catenin samhandler med cadherins gjennom sin cytoplasmaområde. α-catenin forbinder E-cadherin og β-catenin komplekse til aktin filamenter. Dissosiasjonen av E-cadherin-catenin kompleks fra cellemembranen er viktig i ondartet progresjon. I mange epiteliale kreftformer, er membranøs E-cadherin tapt og β-catenin dissosierer i cytoplasma og akkumuleres i kjernen som en transkripsjonsfaktor, samtidig med tumorprogresjon [5]. Nedregulering av membran E-cadherin og β-catenin, og cytoplasma /atom akkumulering av β-catenin har tidligere blitt rapportert i flere kreftformer og holde løftet som prognostiske markører [7].
Utviklingen av muntlige plateepitel cell carcinoma (OSCC) er en flertrinnsprosess som involverer interaksjoner mellom flere faktorer som for eksempel tobakk-assosiert intra-oral kreftfremkallende, areca mutter, betel spenn og alkoholforbruk, og /eller virusinfeksjoner [8], [9]. OSCCs er ofte innledes med klinisk tydelig lesjoner ofte leukoplaki, og risikoen for flere kreftformer er 5-10 ganger større hos pasienter med OSCCs innledes med leukoplaki [8], [10]. Disse lesjonene ofte utvikle seg til kreft hvis ubehandlet [11]. En gjennomsnittlig årlig transformasjon rate på 1% er foreslått basert på flere studier som rapporterte 5% forandring observert i 5 år [11], [12]. I India, over 80% av OSCCs oppstå fra eksisterende munnsår (OLS) [13], [14]. Evnen til å forutse utfallet av OLS er fortsatt en stor utfordring for tidlig intervensjon. Tidlig påvisning av OLS som vil utvikle seg til invasive tumorer er nødvendig for å forbedre den dårlige prognosen for oral kreftpasienter.
dynamiske forandringer i celleadhesjon manifestert ved dissosiasjon av membranøs E-cadherin-β-catenin kompleks er innblandet i tap av epitel samhold som en viktig begivenhet i invasjon og metastasering. Aktivert leukocytter celleadhesjonsmolekyl (Alcam) /MEMD /CD166) er et trans glykoprotein av immunoglobulin super som formidler celle-celle adhesjon gjennom både homofilist (Alcam-Alcam) og heterofile (Alcam-CD6) interaksjoner [15], [16]. Vi demonstrerte Alcam uttrykk er økt i OLS og dens cytoplasmisk akkumulering i OSCC er en prediktor for sykdomsutvikling og dårlig prognose [17]. Heri, søkte vi å undersøke den kliniske betydningen av E-cadherin og β-catenin uttrykk i serie vevssnitt av det samme settet av pasienter fra ulike sykdomsstadier av immunhistokjemi, for å identifisere scenen spesifikke protein endringer og bestemt sitt forhold til Alcam uttrykk. De eksperimentelle bevis til støtte for sammenhenger mellom forstyrrelser i Alcam uttrykk og endringer i E-cadherin og β-catenin uttrykk ble levert av kort interfering RNA (siRNA) mediert Alcam knockdown og bestemme endring i uttrykket av alle disse tre proteiner både på karakterutskriften og proteinnivåer.
Materialer og metoder
vevsprøver
Denne studien ble godkjent av human Etisk komité av All India Institute of Medical Sciences, New Delhi, India. For immunhistokjemisk analyse kirurgisk reseksjon vev eller snitt fra OSCC, dysplasi, hyperplasi og histologisk normale muntlige vev ble hentet fra Surgical Oncology Unit of Dr. B.R. Ambedkar Institute Rotary Cancer Hospital, All India Institute of Medical Sciences, New Delhi, India, med forutgående informert skriftlig samtykke fra pasientene.
Clinicopathological karakteristika for pasienter
Ett hundre og fem primære OSCC pasienter (aldersgruppe, 29-75 år, gjennomsnittsalder 40 år) som gjennom kurativ oral cancer kirurgi, ved Kirurgisk onkologi Unit of Dr. BR Ambedkar Institute Rotary Cancer Hospital, All India Institute of Medical Sciences, New Delhi, India ble inkludert i studien etter å ha innhentet skriftlig samtykke fra pasientene. Den kliniske og patologiske data, inkludert klinisk TNM staging (tumor, node, metastaser basert på Union International Center le Cancer TNM-klassifikasjon), stedet for lesjonen, histopatologiske differensiering, alder og kjønn ble registrert i en pre-designet Performa som beskrevet tidligere [ ,,,0],17]. Diagnosen var basert på klinisk undersøkelse og histopatologisk analyse av vevsprøver. Området distribusjon av OSCC tilfeller var: munnslimhinnen (36), tunge (35), alveolus (12), leppe (6) og andre steder (16) inkludert ginigivobuccal sulcus, harde ganen, bløte gane, retromolar trigone og gulvet i munn. Svulstene ble histologisk gradert også, moderat eller dårlig differensierte SCCS. Biopsier fra OLS med histologiske tegn på hyperplasia (56 tilfeller) og dysplasi (20 tilfeller) ble også inkludert i denne studien. Området fordeling av OLS var: munnslimhinnen (53), tunge (12), alveolus (5), leppe (4) og ginigivobuccal sulcus (2). Tretti ikke-maligne vev tatt fra en fjern stedet OSCCs (med histologisk bekreftet normal oral epitel hit til referert til som muntlig normalt vev) ble også evaluert for Alcam uttrykk. Etter utskjæring, ble vevet umiddelbart hurtigfrosset i flytende N
2 og lagret ved -80 ° C inntil videre bruk, og en brikke ble samlet opp i 10% formalin og innstøpt i parafin for histopatologiske og immunohistokjemiske analyser.
immunhistokjemi
Parafin innleiret seksjoner (5 um tykkelse) av humane orale vevsprøver ble farget med hematoksylin og eosin for histopatologisk analyse, og immunfarging ble utført på seriesnitt som tidligere beskrevet av Sawhney
et al
. [17]. Kort sagt ble vevssnitt etter antigen gjenfinning i citratbuffer inkubert med anti-E-cadherin eller anti-β-catenin antistoff (0,2 ug /ml) (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santacruz, CA) i 16 timer ved 4 ° C. Antistoffer ble påvist ved hjelp av biotinylert sekundært antistoff og peroksidase merket streptavidin komplisert å bruke Dako LSAB pluss kit (Dako Labs, Glostrup, Danmark) med diaminobenzidin (DAB) som kromogen. I negative kontroller, ble det primære antistoff erstattet med ikke-immun IgG av den samme isotype for å sikre spesifisitet. Brystkreft vevssnitt med kjent immunopositivity for E-cadherin eller β-catenin ble brukt som positive kontroller i hvert parti av seksjonene analysert.
Positiv Kriterium for immunhistokjemisk farging
farging ble evaluert i tilfeldig valgt fem ikke-overlappende områder av vevet seksjoner med mer enn 80% epitelceller. For E-cadherin, ble spesifikk farging i membranet definert som positiv farging. Skinnene ble scoret som følger: ≥50% tumorceller viser immunoreaktivitets ble gradert som positivt for E-cadherin uttrykk, mens de som viser farging i 50% tumorceller ble gradert som negativ [18]. For β-catenin proteinekspresjon, ble spesifikk farging i membranen /cytoplasma /kjerner definert som positiv farging. For membranfarging lysbildene ble scoret som følger: ≥50% tumorceller viser immunoreaktivitets ble gradert som positive, mens de som viser farging i 50% tumorceller ble gradert som negativ [18]. For cytoplasma /kjernefysiske farging av beta-catenin lysbildene ble scoret som følger: 0, 10% tumorceller viser immunoreaktivitets; 1 = 10-30% tumorcellene viser immunoreaktivitets; 2, ≥31-50% tumorcellene viser immunoreaktivitets; 3, 50% tumorcellene viser immunoreaktivitets. Immunhistokjemisk undersøkelse var blind, dvs. lysbildene ble kodet og patolog ikke har forkunnskaper i den lokale tumor byrde, lymphonodular spredning og gradering av OSCCs mens ledelsen med immunoreaktivitets.
oppfølgingsstudie
sytti-to av de 105 OSCC pasienter som gjennomgikk behandling av primær OSCC 2002-2005, kunne følges jevnlig i oppfølgingen klinikken, mens 33 pasienter ble ikke fulgt opp. Survival status av pasientene ble verifisert og jevnlig oppdatert fra Tumor registret poster, Institute of Rotary Cancer Hospital, som i desember 2010. I henhold til vår protokoll, OSCC pasienter med T
1 og T
2 svulster ble behandlet med radikal strålebehandling eller kirurgi alene, mens mesteparten av pasienter med T
3 og T
4 sykdom ble behandlet ved anvendelse av en kombinasjon av radikal kirurgi etterfulgt av postoperativ radikal strålebehandling som beskrevet [19]. Pasientene ble fulgt opp med jevne mellomrom og tid til tilbakefall ble registrert. Hvis en pasient døde under oppfølging, ble pasienten overlevelse sensurert på tidspunktet for dødsfallet. Medisinsk historie, klinisk undersøkelse, og radiologisk vurdering ble brukt til å avgjøre om dødsfallet skyldtes tilbakevendende kreft (pasienter med tilbakefall) eller fra noen annen årsak. Sykdomsfri overlevende ble definert som pasienter frie fra kliniske og radiologiske tegn på lokalt, regionalt, eller fjern tilbakefall ved tidspunktet for den siste oppfølging. Lokoregionalt tilbakefall /død ble observert i 32/72 (44%) av pasientene overvåkes i denne studien. Pasienter som ikke viser tilbakefall var i live til slutten av oppfølgingsperioden. Blant de 33 pasientene som ble tapt til å følge opp, kan antall dødsfall ikke kan påvises; derfor total overlevelse kan ikke betraktes som en separat parameter i vårt studium. Bare sykdomsfri overlevelse av pasientene ble undersøkt. Sykdomsfri overlevelse ble uttrykt som antall måneder fra datoen for operasjonen til lokoregionalt tilbakefall. Pasientene ble fulgt i en periode på median 24 måneder og maksimum 91 måneder.
Statistical Analysis
immunhistokjemiske data ble utsatt for statistisk analyse ved hjelp av SPSS 17.0 programvare (Chicago IL). Sammenhengene mellom E-cadherin, β-catenin og Alcam uttrykk og clinicopathological parametere ble testet i univariat analyse av Chi-Square test, Chi-Square test for trend, Fishers eksakte test og logistisk regresjonsanalyse. For å finne ut uavhengige prediktorer for tumorigenesis ble logistisk regresjonsanalyse utføres trinnvis for de enkelte variabler, clinicopatholgical parametere og proteiner E-cadherin, β-catenin og Alcam. Ulike kombinasjoner av variabler ble generert for å vurdere sammenhengen mellom disse kombinasjonene og pasient prognose. Oppfølgingsstudier ble analysert ved Kaplan-Meier og Cox proporsjonale farer test. Bare sykdomsfri overlevelse ble evaluert i denne studien, som antall dødsfall på grunn av sykdomsprogresjon ikke tillot en pålitelig statistisk analyse. Sammenhengen mellom pasient utfall og variabler ble vurdert av log-rank test. Tosidig p-verdiene ble beregnet og p. 0,05 ble ansett å være betydelig
short interfering RNA-mediert Alcam knockdown
Menneskelig hode og nakke plateepitel karsinom cellelinje, SCC-4-celler ble opprettholdt i DMEM inneholdende 10% FBS, 100 ug /ml streptomycin, 100 U /ml penicillin ved 37 ° C i fuktig atmosfære med 5% CO
2. SCC-4-celler ble transient transfektert hjelp Hiperfect reagens (Qiagen) og en butt-ended duplex av RNA oligonukleotider, 5’AAG CCC GAU GGC UCC CCA GUA UU-3’and 5′-AAU ACU GGG GAG CCA UCG GGC UU -3 «. SCC-4-celler ble behandlet med varierende konsentrasjoner av siRNA (1-15 nM) og med varierende konsentrasjoner av Hiperfect reagens (1-4,5 ul). Alcam siRNA (15 nM) med 4,5 ul av Hiperfect reagens i 48 timer ble funnet å være den beste konsentrasjon med maksimal transfeksjonseffektiviteten (95%) og maksimal lyddemping av Alcam genekspresjon (data ikke vist). Førti-åtte timer etter transfeksjon, ble siRNA-behandlede celler brukes i senere eksperimenter.
Reverse Transcription-PCR analyse
Total RNA ble isolert fra SCC-4 celler (kontroll og siRNA transfektanter) som tidligere beskrevet [20]. PCR-amplifikasjon ble utført i et totalvolum på 20 pl inneholdende 3 pl revers transkribert cDNA, 10X PCR-buffer, 10 mM dNTPs, 20 pM av hver primer og 1unit av Taq-polymerase (Gibco BRL, Gaithersburg, MD). Etter 5 minutters innledende denaturering, 35 amplifiseringscykluser av 1 minutt ved 94 ° C, ble 2 minutter ved spesifikk varmebehandlingstemperaturen og 1 minutt ved 72 ° C utført, etterfulgt av en 10 minutters forlengelse ved 72 ° C. For forsterkning av Alcam cDNA fremover primer, 5′-GTC TGG GCA ATA GTG ACT CC-3 «og revers primer 5′-AAC CAT TGC AAG TGG AAA CC-3′ ble brukt. For E-cadherin cDNA, frem primer 5»-CAG CAC GTA CAC AGC CCT AA-3 «og revers primer 5′-ACC TGA GGC TTT GGA TTC CT-3′ ble brukt. For β-catenin cDNA, frem primer 5»-GAA ACG GCT TTC AGT TGA GC-3 «og revers primer 5′-CTG GCC ATA TCC ACC AGA GT -3» ble brukt. β-aktin ble benyttet som en intern kontroll for å sikre at lik mengde RNA ble anvendt i kontroll og siRNA transfekterte celler. For β-actin cDNA, forover primer 5’CAG CCA TGT ACG TTG CTA TCC AG -3 «og revers primer 5’GTT TCG TGG ATG CCA CAG GAC -3» ble brukt. PCR produktene ble separert på 1,5% agarosegel, farget med etidiumbromid, og visualisert med AlphaEase FC programvare (versjon 3.1.1) Styrken på PCR-band ble kvantifisert med Chemi Imager IS-4400 (Alpha Innotech Corp, CA) som beskrevet tidligere [14].
Immunoblotting
Alcam siRNA transfektert SCC-4-celler i 48 timer og ubehandlede kontrollceller ble anvendt for fremstilling av celleekstrakter ved å koke cellepelleten i SDS-lyseringsbuffer. Kort sagt ble hel-celleekstrakt (100 ug protein /spor) oppløses ved SDS-PAGE og overført på nitrocellulosemembran [21]. Nitrocellulose-membranene ble blokkert med 10% ikke-fettholdig melk over natten ved 4 ° C og probet med anti-Alcam; E-cadherin og β-catenin antistoffer (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santacruz, CA) i 2 timer ved 37 ° C. Deretter ble membranene probet med sekundære antistoffer mot disse proteinene (anti-geite 1:5000 og anti-mus 1:2000 fortynning). Blottene ble reprobed med α-tubulin å normalisere for likt protein lasting. Blottene ble utviklet ved hjelp av Enhanced chemiluminescence Reagens (ECL) (Amersham, Buckinghamshire, UK) som beskrevet [21].
Confocal Laser Mikros
SCC-4 celler dyrket på dekk ble behandlet med Alcam siRNA i 48 timer og behandlet for konfokal lasermikroskopi som tidligere beskrevet [21]. Celler ble skylt i Dulbeccos PBS (DPBS), fiksert i metanol i 5 min. ved -20 ° C og inkubert med anti-Alcam, E-cadherin og β-catenin antistoffer (10 ng /ml) oppnådd fra Santacruz Biotechnologies Inc., Santacruz, CA. Etter skylling i DPBS, ble objektglassene inkubert med biotinylert sekundært antistoff (anti-kanin /geit, LSAB + Kit, DAKO Cytomations, Glostrup, Danmark) i 45 minutter. ved 37 ° C, etterfulgt av inkubering med streptavidin-konjugert fluorokrom, fluoresceinisotiocyanat (FITC) (DAKO Cytomations, Danmark). Deretter ble dekkglassene motfarget med propidiumjodid (PI) (10 mg /ml; Sigma-Aldrich, MO) i 30 sek. Objektglassene ble deretter skylt og montert i monteringsmedium. Lysbilder ble undersøkt med Confocal Laser Scanning Microscope som beskrevet tidligere [21].
Resultater
Immunhistokjemisk analyse av E-cadherin Membranous Expression i Normal Oral Vev, høyt blodtrykk, dysplasi og OSCC
E-cadherin ekspresjon i membranen av epitelceller ble observert i 27/30 (90%) av de histologisk normale orale vev med leilighetsvis cytoplasmatisk ekspresjon (Tabell 1, figur 1A). Betydelig tap av E-cadherin membranøs ekspresjon ble observert i hyperplasi [19/56, 34% (figur 1B) sammenlignet med de normale orale vev (3/30, 10%), [p = 0,015; OR = 4.6, 95% CI = 1,2 til 17,2] og i 12/20, 60% dysplasi (figur 1C) [H /D: p = 0,06; OR = 2.9, 95% CI = 1,0 til 8,4]. Chi-Square trendanalyse viste signifikant tap av E-cadherin membran uttrykk i vev fra ulike stadier av kreft i munnhulen utvikling (normal, hyperplasi, dysplasi og invasiv kreft, p
trend 0,001). Tap av E-cadherin membranøs ekspresjon ble observert i 61/105 (58%) OSCCs (tabell 1, figur 1D) ble og forbundet med sen klinisk stadium (p = 0,006, OR = 3,1, 95% CI = 1,3 til 7,0), økt tumorbelastning (p = 0,03; OR = 2,4, 95% KI = 01.01 til 05.03), og nodal metastase (p = 0,04; OR = 2,4, 95% KI = 01.01 til 05.03)
Histologisk normal. vevssnitt viser membranøs immunoreaktivitet for E-cadherin (A), og β-catenin (G) proteiner. Hyperplastisk (B), dysplastiske (C), OSCC (D) vevssnitt som viser tap av membranfarging for E-cadherin. Hyperplastisk (H), dysplastiske (I), OSCC (J) vevssnitt som viser tap av membranøs farging for β-catenin. I negative kontroller, for E-cadherin (E) og β-catenin (F), ble det primære antistoff erstattet med ikke-immun IgG av den samme isotype for å sikre spesifisitet. Brystkreft vevssnitt anvendt som positiv kontroll viste membranfarging for E-cadherin (K) og β-catenin (L) proteiner. Original forstørrelse X 200.
Association of Tap av Membranous E-cadherin Expression med sykdom Utfall
Sytti-to OSCC pasienter kan bli fulgt opp i en periode på maksimum 91 måneder (median 24 måneder). Kaplan-Meier overlevelsesanalyse og Cox proporsjonal risikomodell viste at pasienter med E-cadherin positive tumorer hadde økt median sykdomsfri overlevelse (DFS) for 74 måneder sammenlignet med de med tap av membran immunopositivity (median DFS = 18 måneder) [p = 0,001; HR = 3,9; 95% CI = 01.06 til 09.06] (figur 2A)
A: tap av E-cadherin membran (E-cad
-) uttrykk, B:. Tap av β-catenin membran (β-catM
-) uttrykk, C: tap av E-cadherin og β-catenin membran (E-cad
– /β-cat M
-) uttrykk, D: Alcam cytoplasma positive og E-cadherin membran tap (E-cad
– /Alcam C
+).
Immunhistokjemisk Analyse av β-catenin Expression i Normal tannvev, høyt blodtrykk, dysplasi og OSCC
β -catenin var hovedsakelig tilstede i membranen til epitelceller i 27/30 (90%) av histologisk normale orale vev; av og til cytoplasma /atom farging ble også observert (tabell 1, figur 1G). Betydelig tap av β-catenin membran-ekspresjon ble observert i hyperplasi [20/56, 36%, p = 0,01; OR = 5.0, 95% CI = 1,3 til 18,6, (figur 1 H)] sammenlignet med normale orale vev (3/30, 10%), og i dysplasi i forhold til hyperplasi [14/20, 70%, (fig 1I), p = 0,008; OR = 4,2, 95% C.I. = 01.04 til 12.06]. Betydelig økning i cytoplasmisk /nukleær akkumulering av β-catenin ble observert i dysplasia i forhold til hyperplasi (p = 0,046; OR = 3,1, 95% Cl = 1,0 til 9,5) (tabell 1). Chi-Square trendanalyse viste signifikant tap av β-catenin membran uttrykk og økning i cytoplasma /atom akkumulering i vev fra ulike stadier av kreft i munnhulen (normal, høyt blodtrykk, dysplasi og invasiv kreft; p
trend 0,001 og p
trend = 0.003 henholdsvis).
Tap av β-catenin membranøs ekspresjon ble observert i 65 av 105 (62%) OSCCs (figur 1 J, tabell 1) og er forbundet med sen klinisk stadium (p = 0,001, OR = 7,4, 95% KI = 3,1 til 18,1), økt tumorbelastning (p = 0,001, OR = 4,1, 95% KI = 01.08 til 09.04) og nodal metastase (p = 0,003, OR = 3,7, 95% KI = 01.06 til 08.09). I OSCCs 28 av 105 (27%) tilfellene viste cytoplasmisk /nukleær akkumulering av β-catenin og var forbundet med sen klinisk stadium (p = 0,014, OR = 3,6, 95% CI = 01/02 til 10/06) og tumorbelastning (p = 0,025 ELLER = 2,8, 95% KI = 01.01 til 07.02).
Association of Tap av membranous β-catenin Expression med sykdom Utfall
Tap av membran β-catenin immunopositivity var assosiert med redusert sykdom free-overlevelse (median DFS = 15 måneder) sammenlignet med pasienter med β-catenin membran positive tumorer (median DFS = 78 måneder) [p 0,001; HR = 7,8; 95% KI = 2,7 til 22,3] (figur 2B).
Sammenhengen mellom E-cadherin og β-catenin i munnsår og OSCCs
signifikant sammenheng ble observert mellom tap av membran E-cadherin og β-catenin uttrykk i OLS (p = 0,001, OR = 16,7, 95% KI = 5,3 til 52,7, tabell 2) og OSCCs (p = 0,001, OR = 8,8, 95% KI = 3,6 til 21,7, tabell 2). Tap av membran E-cadherin og β-catenin når det tas som en fenotype (E-cad
– /β-cat M
-) korrelerte signifikant med avansert tumorstadium (p = 0,004, OR = 3,2, 95% KI = 01.04 til 07.01), nodal metastase (p = 0,005, OR = 3,1, 95% KI = 01.04 til 06.09) og sen klinisk stadium (p 0,001, OR = 5,5, 95% KI = 2,2 til 13,4). Chi-Square trendanalyse viste signifikant tap av membran E-cadherin og β-catenin (E-cad
– /β-cat M
-) i ulike stadier av oral karsinogenese (normal, hyperplasi, dysplasi og invasiv kreft ; p
trend = 0,008). Videre tap av E-cad
– /β-cat M
– immunopositivity var signifikant assosiert med redusert sykdomsfri overlevelse [median DFS = 14 måneder sammenlignet med p-catenin og E-cadherin membran positive tumorer med median sykdomsfri overlevelse på 71 måneder. (p 0,001; HR = 4,7; 95% CI = 02.01 til 10.01)] (figur 2C)
Sammenhengen mellom E-cadherin, β-catenin og Alcam Expression i munnsår
for å utforske betydningen av Alcam i biologisk utvikling av invasiv kreft og metastasering, er det viktig å finne sin sammenheng med forstyrrelser i uttrykket av adherens junction komponenter. Assosiasjoner mellom protein uttrykk for E-cadherin, β-catenin og Alcam ble bestemt (tabell 2) som Alcam proteinekspresjon hadde også blitt analysert i samme kohort av pasienter i en tidligere studie [17]. Tap av β-catenin membranøs ekspresjon ble funnet å være signifikant assosiert med samlet (p = 0,018; OR = 3,3, 95% CI = 1/2 til 8/8, tabell 2) og cytoplasmiske (p = 0,008; OR = 3,6, 95% CI = 01.04 til 09.03, tabell 2) Alcam uttrykk.
Blant de hyperplasias analysert (n = 56) i denne studien, tap av membran E-cadherin ble funnet å være signifikant assosiert med tap av β-catenin uttrykk (p OR = 4,5, 95% C.I. = 1,2 til 16,0). Tap av membran E-cadherin og β-catenin tatt sammen som en fenotype (E-cad
– /β-catM
-) korrelerte signifikant med generelle Alcam immunopositivity i hyperplasia. Blant dysplasiene analysert (n = 20), tap av β-catenin membran uttrykk ble funnet å være signifikant assosiert med Alcam cytoplasma immunopositivity (p = 0,05; OR = 9,0, 95% KI = 1,0-100)
Sammenhengen mellom E-cadherin, β-catenin og Alcam Expression i OSCC
foreninger blant Alcam, E-cadherin og β-catenin uttrykk ble bestemt i OSCC (tabell 2). Tap av E-cadherin membranøs ekspresjon ble funnet å være signifikant assosiert med cytoplasmatisk Alcam uttrykket (p = 0,038, OR = 2,2, 95% C.I. = 1,0-5,0). Tap av β-catenin membran uttrykk signifikant korrelert med generelle Alcam uttrykk (p = 0,001; OR = 3,9, 95% KI = 1,7 til 9,0), og cytoplasmatiske Alcam immunopositivity (p = 0,002; OR = 3,7, 95% KI = 1,6- 8,7). Tap av membran E-cadherin og β-catenin når det tas som en fenotype (E-cad
– /β-cat M
-). Korrelerte signifikant med generelle og cytoplasmatiske Alcam immunopositivity i OSCC (tabell 2)
uavhengige prediktorer for overgang fra Normal til OL og Cancerous Phenotype
for å bestemme de uavhengige prediktorer for overgang fra normal til OL, ble logistisk regresjonsanalyse utført på en trinnvis måte. Av disse variablene er de parametre som fremkom betydelig i univariable og multivariate analyser er oppsummert i tabell 3. Alcam cytoplasmatisk ekspresjon (p = 0,024; OR = 11,6; 95% CI = 1,4 til 98,2) fremkom å være den mest betydningsfulle fenotypen for overgang av normal munnslimhinnen til OL. Tap av membran β-catenin uttrykk dukket opp som den mest signifikant prediktor for overgang fra hyperplastisk til dysplastiske lesjoner (p = 0,01, OR = 4.2, 95% CI = 01.03 til 12.06). Multivariate logistisk regresjonsanalyse viste at tap av membran E-cadherin uttrykk er den mest betydningsfulle fenotype for overgang fra OL til OSCC (p = 0,02; OR = 2,0; 95% CI = 01.01 til 03.07)
klinisk utfallet av pasientenes
uavhengige prediktorer for kliniske parametre, tumorbyrde, lymfeknuteaffeksjon og klinisk stadium av OSCC.
for å bestemme de uavhengige prediktorer for kliniske parametre, tumorbyrde, lymfeknuteaffeksjon og klinisk trinn ble logistisk regresjonsanalyse utført på en trinnvis måte for E-cadherin, β-catenin og Alcam enkeltvis, eller i kombinasjon, i 105 OSCCs (tabell 3). β-catenin membran tap (p = 0,001, OR = 4,2; 95% CI = 01.08 til 10.02) og β-catenin atom /cytoplasma akkumulering (p = 0,027, OR = 3,1; 95% CI = 1/1 til 8/3) var den mest signifikant prediktor for økt tumorbelastning. β-catenin membran tap (p = 0,003, OR = 3,8; 95% CI = 01.06 til 09.03) og total Alcam uttrykk /β-catenin atom /cytoplasma akkumulering (p = 0,025, OR = 3,4, 95% KI = 01.02 til 09.07 ) var de mest signifikante prediktorer for nodal metastasering. Kombinert markører, Alcam uttrykk /β-catenin atom /cytoplasma akkumulering (p = 0,006, OR = 9,9, 95% KI = 1,9 til 51,5) og β-catenin membran tap (p 0,001, OR = 8,7; 95% KI = 3,3 -22,8) var de mest signifikante prediktorer for sent klinisk stadium (tabell 3).
Association of endringer i E-cadherin, β-catenin og Alcam uttrykk med sykdom utfall.
signifikant sammenheng ble observert mellom redusert sykdomsfri overlevelse og tumorstadium [p = 0,03; Hazard Ratio (HR) = 2,5; 95% CI = 01.01 til 05.06].
For mulig additiv prognostisk kapasitet Kaplan-Meier overlevelsesanalyse og Cox proporsjonal risikomodell ble brukt til å analysere ulike kombinasjoner av potensielle biomarkører for å vurdere sammenslutning av endringer i ulike biomarkører med klinisk utfall . Selv om flere kombinasjoner ble funnet å være signifikant (tabell 3), den viktigste fenotype som dukket opp som negativ prognosticator var: økt cytoplasmisk Alcam uttrykk + tap av membran E-cadherin; Alcam C
+ /E-cad
– (p 0,001; HR = 4,8; 95% CI = 2.2 til 9.9, figur 2D). (Tabell 3)
Basert på våre data,
