Abstract
Vi undersøkte
MET
mRNA uttrykk status ved hjelp av RNA in situ hybridisering (ISH) teknikk i grunnskolen og metastatiske lesjoner av 535 kirurgisk resected gastrisk karsinom (GC) tilfeller. Vi sammenlignet resultatene med de av immunhistokjemi og sølv in situ hybridisering, og undersøkte sammenhengen med clinicopathologic egenskaper og prognose. Blant 535 primær GCer, 391 (73,1%) ble scoret 0, 87 (16,3%) ble scoret 1, 38 (7,1%) ble scoret 2, 12 (2,2%) ble scoret 3 og 7 (1,3%) ble scoret fire av RNA ISH. Høy
MET
mRNA uttrykk (poengsum ≥3) var assosiert med lymfeknutemetastase (
P
= 0,014), fjernmetastaser (
P
= 0,001), og høyere TNM stadium (
P
0,001).
MET
mRNA uttrykk ble korrelert med protein uttrykk (r = 0,398;
P
0,001) og genkopitallet (r = 0,345;
P
. 001). Pasientene som viser høy
MET
mRNA i primær eller metastatiske lesjoner hadde kortere total overlevelse enn de som viser lav-
MET
mRNA (primære svulster,
P
= 0,002; metastatiske lymfeknuter,
P
0,001). Pasientene som viser positiv konvertering av
MET
mRNA status i metastatisk lymfeknute hadde kortere total overlevelse enn de uten konvertering (
P
= 0,011). Multivariat analyse viste at høy
MET
mRNA uttrykk i metastatisk lymfeknute var en uavhengig prognostisk faktor for total overlevelse (
P
= 0,007). Derfor antyder denne studien at
MET
mRNA uttrykk vurderes av RNA ISH kan være nyttig som en potensiell markør for å identifisere
MET
onkogen-avhengige GC
Citation. Choi J Lee HE, Kim MA, Jang BG, Lee HS, Kim WH (2014) Analyse av
MET
mRNA uttrykk i Gastric kreft ved hjelp av RNA in situ hybridisering analyse: Den kliniske implikasjonen og sammenligning med Immunohistochemistry og Silver in Situ hybridisering. PLoS ONE 9 (11): e111658. doi: 10,1371 /journal.pone.0111658
Redaktør: Svetlana Pack, CCR, National Cancer Institute, NIH, USA
mottatt: 11 mars 2014; Godkjent: 06.10.2014; Publisert: 03.11.2014
Copyright: © 2014 Choi et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av National Research Foundation of Korea (NRF) A3 Foresight sight~~POS=HEADCOMP-programmet (https://www.nrf.re.kr). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
i løpet av det siste tiåret, reseptortyrosinkinasehemming (RTK) trasé har vist seg å være attraktive narkotika mål for kreftbehandling [1], og MET veien er en av disse lovende mål.
MET
er et proto-onkogen ligger på 7q31 locus og koder en RTK for hepatocytter vekstfaktor (HGF) [2], [3]. Den tette regulering av HGF /MET bane som er observert i utvikling og regenerering er tapt i kreft, og slik deregulering skjer gjennom flere mekanismer [1]. Avvikende MET-aktivering spiller viktige roller i kreftcelleoverlevelse, vekst, angiogenese, metastase og i forskjellige krefttyper, inkludert lunge, bryst, nyre, mage-tarmkanalen og maligniteter [4]. Men selv om pasienten stratifisering i henhold til MET uttrykk eller aktivitet er viktig for terapeutisk suksess, har ikke blitt etablert metoder for å vurdere nivået på MET uttrykk eller aktivitet [4].
For gastrisk karsinom (GC), avvik MET-aktivering har vært antatt å være relatert til et gen dosering effekt [5], og
MET
genamplifikasjon (GA) eller protein overekspresjon har vært forbundet med aggressive tumor karakteristika og /eller kliniske resultatet dårligere [6] – [14]. Videre
MET
-amplified eller -overexpressed GC viste respons på behandling med flere hemmere av HGF /MET signalveien i prekliniske studier [15] og fase I kliniske studier [12], [16]. Derfor har MET hemming potensial som en vellykket terapeutisk strategi følgende human epidermal vekstfaktor-reseptor-2 (HER2) -targeted terapi i avansert GC. Imidlertid har tidligere studier brukt ulike metoder for å identifisere MET-positive GC og har vist avvik i utbredelsen av MET overekspresjon eller forsterkning: MET overekspresjon varierte 18% til 73,7% i studier med immunhistokjemi (IHC) [7] – [9], [13], [14], [17],
MET
genkopitallet (GCN) forsterkning varierte 10% til 21,2% i studier ved bruk av kvantitativ sanntids-polymerase kjedereaksjon (qPCR) [10], [ ,,,0],11], og
MET
GA varierte 2% til 3,9% i studier med fluorescens in situ hybridisering (FISH) [12], [18] eller sølv in situ hybridisering (SISH) [13]. Av disse fremgangsmåtene blir IHC mye brukt i klinisk praksis, og det mest sannsynlige screening metode for påvisning av MET-positive GC. Imidlertid er videre leting fortsatt behov for å finne en prediktiv biomarkør eller analysemetodikk for MET hemming terapi.
I denne studien, utførte vi en RNA in situ hybridisering (ISH) assay bruker sammenkoblede DNA oligonukleotid sonder og forforsterker-forsterker label prober for visualisering [19]. Denne metoden bruker formalinfikserte, parafininnstøpte (FFPE) vev og tillater single-molekyl visualisering under en lyse-feltet mikroskop. I vår forrige undersøkelse, viste vi at
HER2
mRNA uttrykk evalueres av RNA ISH var godt korrelert med protein overekspresjon og GA evaluert av IHC og FISH med 211 GC tilfeller [20]. Dessuten viste vi sammenhengen mellom
MET
GCN og protein uttrykk i en tidligere studie [13]. Her har vi evaluert
MET
mRNA uttrykk ved hjelp av RNA ISH metode, og sammenlignet resultatene med de av IHC og SISH i en stor serie av GC. I tillegg clinicopathologic parametere og kliniske utfall av GC pasienter i henhold til
MET
mRNA uttrykk status ble evaluert.
Materialer og metoder
Pasient og vevsprøver
Vi har samlet arkiv vevsprøver av GC pasienter som fortløpende gikk gastrektomi ved Seoul National University Hospital, Seoul, Korea, fra januar 2004 til desember 2005. Endelig 535 prøver av primær GC og 199 prøver av synkron regional metastatisk lymfeknute (LN) fra 535 pasienter som var tilgjengelig for denne studien. De clinicopathologic kjennetegn ved pasientene ble undersøkt ved å gjennomgå medisinske diagrammer og patologiske poster (tabell 1). TNM stadium ble klassifisert i henhold til ordningen med det amerikanske Joint Committee on Cancer Staging Manual, 7
th utgaven. Kliniske resultater ble fulgt opp fra datoen for operasjonen til døden eller 60 måneder.
Alle vevsprøver ble fiksert i 10% bufret formalin i 24-48 timer og deretter innstøpt i parafin. Kjerne vev (2 mm i diameter) ble tatt ved hjelp av en trephine apparat (Superbiochips Laboratories, Seoul, Korea). For de primære GCer, ble invasjonen foran hver primærtumor valgt. Metastatisk LNS ble utsatt til vevet matrise men sakene med micrometastasis ble ekskludert. Totalt 22 tissue microarray blokker som inneholdt opptil 60 kjerner ble konstruert.
Etisk uttalelse
Alle menneskelige prøvene ble oppnådd i løpet av terapeutisk kirurgi. Deltakerne fikk ikke gi skriftlig samtykke til å delta i denne studien. Den retrospektiv studie ble utført ved hjelp av prøvene i løpet av hyllene etter patologisk diagnose, og alle prøvene ble anonymisert før studien. Vår IRB (Seoul National University Hospital) godkjent denne retrospektive studien under forutsetning av anonymiserings (Annonse: H-1006-035-320).
RNA ISH
For in situ deteksjon av
MET
mRNA, den RNAscope FFPE 2,0 analysesett (Advanced Cell Diagnostics, Hayward, CA, USA) ble brukt i henhold til produsentens instruksjoner. Kort sagt ble 2 til 3 mikrometer tykk FFPE vevssnitt deparaffinized, oppvarmet, behandlet med protease, og hybridisert med probe ved 40 ° C i 2 timer (referansesekvensen, NM_001127500; proberegionen, 1236-2257). Etter vasking og forsterkning, 3, var 3′-diaminobenzidin tilsatt for påvisning av target RNA. Kjerner ble kontra med hematoksylin. Positiv farging ble angitt med brune punctate prikker i kjernen og /eller cytoplasma.
MET
mRNA uttrykk nivåer ble kategorisert i 5 karakterer i henhold til produsentens scoring retningslinje: 0 poeng, ingen flekker eller en prikk per celle; scorer 1, 1-3 punkter per celle (synlig på 20-40 x); score 2, 4-10 punkter per celle og ingen eller svært få punkt klynger (synlig på 20-40 x); scorer tre, 10 punkter per celle og 10% positive celler har punkt klynger (synlige på 20 ×); scorer 4, 10 punkter per celle og 10% positive celler har punkt klynger (synlige på 20 ×) (figur 1). Probene for
UBC plakater (ubikvitin C) og
dapB plakater (et bakterielt gen) ble anvendt som den positive og negative kontroll, respektivt. Prøvene ble vurdert tilstrekkelig når de
UBC
mRNA signalene var lett synlig under et 10x objektiv og
dapB
signalet var ikke synlig.
(A-C) en negativ tilfellet viser
MET
RNA ISH scorer 0: (A)
MET
mRNA, (B)
UBC
mRNA, og (C)
dapB
mRNA . (D-F) en positiv sak som viser MET RNA ISH vurdering 4: (D)
MET
mRNA, (E)
UBC
mRNA, og (F)
dapB
mRNA (original forstørrelse: × 400).
IHC og SISH
Immunhistokjemisk farging for MET ble utført med anti-totale MET (SP44) kanin monoklonale primære antistoffer (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, USA). En automatisk immunostainer (BenchMark XT, Ventana Medical Systems) ble brukt i henhold til produsentens instruksjoner. MET farging ble scoret med HercepTest scorings retningslinjer for GC (DAKO, Glostrup, Danmark): 0 poeng, ingen membran flekker eller membranfarging i 10% av tumorceller; vurdering 1, svak /knapt merkbar delvis membranfarging i 10% av tumorceller; ballen 2, svak til moderat farging av hele membranen i 10% av tumorceller; scorer tre sterk farging av hele membranen i . 10% av tumorceller (figur 2)
(A) IHC scorer ett, (B) IHC scorer to, (C) IHC scorer tre, og (D) genamplifisering (opprinnelig forstørrelse: × 400).
Dual-farge SISH analysen ble utført med INFORMERE MET DNA-probe og informere kromosom 7 probe (Ventana Medical Systems) på en Ventana BenchMark XT følgende produsentens protokoller. Signaler ble oppregnet i 40 kreft kjerner per kjerne, og
MET
genet status ble klassifisert i 6 grupper ved hjelp av Universitetet i Colorado Cancer Center kriteriene for epidermal vekstfaktor reseptor genet [21] (figur 2).
Statistisk analyse
χ
2 test eller Fishers eksakte test ble brukt for å teste sammenhengen mellom MET status og clinicopathologic faktorer. Studentenes
t
-test ble brukt for å sammenligne hjelp av kontinuerlige variabler. Den Spearman korrelasjon test ble brukt for å vurdere forholdet mellom RNA ISH resultater og IHC eller SISH resultater. Kaplan-Meier metoden ble brukt til å beregne total overlevelse (OS), og OS forskjeller mellom grupper med ulik MET status ble sammenlignet ved hjelp av log-rank test. Multivariat overlevelsesanalyse ble utført ved hjelp av Cox ratio modell. Dataanalyse ble utført ved hjelp av SPSS versjon 20.0 (SPSS, Chicago, IL, USA), og resultatene ble betraktet som signifikant når
P
. 0,05
Resultater
1.
MET
mRNA status vurderes av RNA ISH
Av 535 primære svulster, 391 (73,1%), 87 (16,3%), 38 (7,1%), 12 (2,2%) og 7 ( 1,3%) viste en RNA ISH ballen 0, 1, 2, 3, og 4, henholdsvis. Når vi sammenlignet resultatene av RNA ISH med clinicopathologic data inkludert overlevelse, og analysert resultatene av RNA ISH med IHC og SISH data, grupper av stillingen 3 og 4 viste forskjellige funksjoner. Derfor har vi sett på scoren 3 og 4 som høy-
MET
mRNA-gruppen, og totalt 19 tilfeller (3,5%) tilhørte høy-
MET
mRNA.
Høy –
MET
mRNA var assosiert med høyere alder (
P
= 0,002), større tumorstørrelse (
P
= 0,006), LN metastase (
P
= 0,014), lymfatisk invasjon (
P
0,001), økt antall metastatiske lymfeknuter (
P
0,001), fjernmetastaser (
P
= 0,001), og høyere TNM stadium (
P
0,001) sammenlignet med lav-
MET
mRNA (tabell 2). Men høy
MET
mRNA viste ingen sammenheng med kjønn, tumor beliggenhet, Lauren klassifisering, og invasjon dybde (tabell 2).
Av 199 synkrone metastatisk LNS, 119 (59,8%), 45 (22,6%), 22 (11,1%), 4 (2,0%) og 9 (4,5%) viste en RNA ISH ballen 0, 1, 2, 3, og 4, henholdsvis. Derfor 13 tilfeller (6,5%) var høy
MET
mRNA. Blant 199 par av primære og metastatiske lesjoner, 186 (93,5%) viste konkordant
MET
mRNA status og 13 (6,5%) ikke gjorde det. Av disse 13 uharmoniske tilfellene ble negativ konvertering funnet i 50% (7/14) av høy-
MET
mRNA primære svulster, og positiv konverteringen ble funnet i 3,2% (6/185) av lav-
MET
mRNA primære svulster (Tabell 3).
2. MET protein og GCN status vurderes av IHC og SISH
Ved hjelp av IHC, 236 (44,1%), 171 (32%), 113 (21,1%) og 15 (2,8%) primære svulster ble scoret 0, 1, 2 og 3, respektivt. IHC scorer tre viste tydelige clinicopathologic funksjoner, og dette møtte overekspresjon gruppen var signifikant assosiert med høyere alder (
P
= 0,005), større tumorstørrelse (
P
= 0,009), invasjon dybde (
P
= 0,05), LN metastase (
P
= 0,018), lymfatisk invasjon (
P
= 0,026), økt antall metastatiske lymfeknuter (
P
0,001), fjernmetastaser (
P
= 0,007), og høyere TNM stadium (
P
= 0,001). Imidlertid gjorde MET overekspresjon ikke viser noen sammenheng med kjønn, tumor plassering, og Lauren klassifisering (tabell S1).
Av 199 synkrone metastatisk LNS, 46 (23,1%), 92 (46,2%), 46 (23,1 %) og 15 (7,5%) viste IHC ballen 0, 1, 2 og 3, respektivt. Blant 199 par av primære og metastatiske lesjoner, 187 (94,0%) viste konkordant MET protein status og 12 (6,0%) ikke gjorde det. Av disse 12 uharmoniske tilfellene ble negativ konvertering funnet i 36,4% (4/11) av primære svulster med MET overekspresjon, og positiv konverteringen ble funnet i 4,3% (8/188) av primære svulster uten MET overekspresjon.
Bruke SISH,
MET
GA ble observert hos 2,6% (14/535) av primære svulster.
MET
GA viste signifikant sammenheng med større tumorstørrelse (
P
= 0,038), lymfatisk invasjon (
P
= 0,009), økt antall metastatiske lymfeknuter (
P
0,001), fjernmetastaser (
P
= 0,005), og høyere TNM stadium (
P
= 0,002). Men
MET
GA viste ingen sammenheng med kjønn, tumor beliggenhet, Lauren klassifisering, invasjon dybde og LN metastase (tabell S2).
3. Korrelasjon av MET status evaluert av RNA ISH, IHC og SISH
Sammenhengen mellom
MET
mRNA og protein status vurderes av RNA ISH og IHC er presentert i tabell 4. I 535 primære svulster, der var en positiv korrelasjon mellom
MET
mRNA og protein uttrykk (r = 0,398,
P
0,001). Alle 7 tilfeller med RNA ISH poengsum 4 viste MET protein overekspresjon. Blant 12 tilfeller med RNA ISH scorer 3, 5 tilfeller (41,7%) viste IHC poengsum 3. tilfeller med RNA ISH scorer to utstilt variable IHC score. Sakene med RNA ISH scorer 0 eller 1 ikke viser MET protein overekspresjon unntatt ett tilfelle. Blant 10 tilfeller viser avvik (dvs. positive i RNA ISH og negativ i IHC eller vice versa), 8 viste IHC scorer to eller RNA ISH scorer 2. I 199 metastatisk LNS, det var en god positiv korrelasjon mellom
MET
mRNA og protein uttrykk (r = 0,462,
P
0,001). (tabell S3)
I tillegg var det en positiv korrelasjon mellom
MET
mRNA uttrykk og
MET
GCN (r = 0,345;
P
0,001) (tabell 4). Blant de 7 tilfeller med RNA ISH scorer 4, 6 (85,7%) viste
MET
GA og bare ett tilfelle viste HP (14,3%). De 12 tilfellene med RNA ISH poengsum 3 viste GA (50%) eller polysomy (50%) av SISH. Sakene med RNA ISH poengsum 2 viste flere SISH mønstre inkludert GA (5,3%). Ingen av tilfellene med RNA ISH scorer 0 eller 1 viste GA.
Tabell 5 oppsummerer resultatene av RNA ISH, IHC og SISH av primær GC. Blant de 535 sakene, 513 tilfeller (95,9%) var negativ med både RNA ISH og IHC, og bare 22 tilfeller (4,1%) viste positive resultater av enten RNA ISH eller IHC. Disse 22 tilfeller utstilt
MET
GA (54,5%) eller polysomy (45,5%) av SISH og disomy eller trisomi ble aldri observert. I form av SISH blant de 14 tilfellene viser GA, 11 tilfeller (78,6%) viste høy uttrykk for både mRNA og protein. Blant de 58 tilfellene viser HP, men bare 7 tilfeller (12,1%) viste høy uttrykk for enten mRNA eller protein. Blant de 111 sakene som viser LP, kun tre tilfeller (2,7%) viste høy mRNA uttrykk. Alle 352 tilfeller viser disomy eller trisomi utstilt negative resultater av både RNA ISH og IHC.
4. Prognostiske implikasjoner av MET status i grunnskolen og metastatiske lesjoner
Høy-
MET
mRNA i primære svulster eller metastatisk LNS var signifikant assosiert med dårlig OS (primære svulster,
P
= 0,002, 3A, metastatisk LNS,
P
0,001, figur 3D). I den primære svulster med lav-
MET
mRNA, pasienter med positiv konvertering viste verre OS enn de uten konvertering (
P
= 0,011, figur 3F). I den primære svulster med høy
MET
mRNA, pasienter med negativ konvertering viste bedre OS enn de uten konvertering, men det var ingen statistisk signifikans (
P
= 0,137, Figur 3F ).
i 535 primær GC, (A) høy-
MET
mRNA ble assosiert med dårlig OS i forhold til lav-
MET
mRNA (
P
= 0,002), (B) MET overekspresjon var assosiert med dårlig OS sammenlignet med ingen overekspresjon (
P
= 0,001), og (C)
MET
genamplifisering var assosiert med dårlig OS sammenlignet med ingen forsterkning (
P
= 0,005). I 199 metastatisk lymfeknuter, (D) høy-
MET
mRNA ble assosiert med dårlig OS i forhold til lav-
MET
mRNA (
P
0,001), og (E) MET overekspresjon var assosiert med dårlig OS sammenlignet med ingen overekspresjon (
P
= 0,024). (F) I 199 matchede primære svulster og metastatisk LNS, concordantly positive og positive konverterings grupper ble assosiert med dårlig OS i forhold til concordantly negativ gruppe (concordantly negativ vs. negativ konvertering,
P
= 0,640; concordantly negative vs . positiv konvertering,
P
= 0,011; concordantly negativ vs. concordantly positiv,
P
0,001; concordantly positiv vs negativ konvertering,
P
=. 137, concordantly positive vs. positiv konvertering,
P
= 0,382;. negativ konvertering vs. positiv konvertering,
P
= 0,260)
MET overekspresjon i primære svulster eller metastatisk LNS var signifikant assosiert med dårlig OS (primære svulster,
P
= 0,001, figur 3B, metastatisk LNS,
P
= 0,024, Figur 3E). I den primære svulster uten MET overekspresjon, positiv konvertering trend mot prediksjon av dårlig OS, men det var ingen statistisk signifikans (
P
= 0,393). I den primære svulster med MET overekspresjon, negativ konvertering viste en trend med bedre OS enn ingen konvertering, men det nådde ikke statistisk signifikans (
P
= 0,132). I tillegg
MET
GA i primære svulster ble også signifikant assosiert med dårlig OS (
P
= 0,005, Figur 3C).
I multivariat analyse, høy-
MET
mRNA i metastatisk LNS var en uavhengig negativ prognostisk faktor for OS, etter justering for alder ( 60 y vs. ≥60 y), Lauren klassifisering (intestinal typen vs. diffuse eller blandet type), og TNM trinn (I-II mot III til IV). Hazard ratio var 2,27 (
P
= 0,007) (Tabell 6). Men MET overekspresjon i metastatisk LNS var ikke statistisk signifikant prognostisk faktor ved multivariat analyse, selv om hazard ratio var 1,76 (
P
= 0,067). I tillegg
MET
GA, høy-
MET
mRNA eller protein overekspresjon i primærtumor var ikke statistisk signifikant prognostisk faktor ved multivariat analyse (data ikke vist).
Diskusjoner
i denne studien, viste vi at høy
MET
mRNA uttrykk var signifikant forbundet med negative clinicopathologic funksjoner og dårlig prognose i en stor serie av GC pasienter som bruker RNA ISH metode. I tillegg ble RNA ISH resultater godt korrelert med de av SISH og IHC. De tidligere studier evaluere
MET
mRNA-nivåer i GC brukte Northern blot-analyse [8], [22] eller revers transkripsjon-polymerasekjedereaksjon (RT-PCR) [8], [14], [23] – [25]. Men de fleste av studiene hadde små utvalgsstørrelser, og bare et fåtall av dem etterforsket sine kliniske implikasjoner [22], [24] eller utført sammenligning med DNA eller protein status [14], [25]: Kuniyasu et al. først studert MET mRNA uttrykk ved hjelp av Northern-blot analyse, og de rapporterte at uttrykk for 6,0-kb avskrift var nært korrelert med tumorstadium og LN metastase [22]. Amemiya et al. rapportert at Stage IV GC pasienter med levermetastaser viste høyere MET uttrykk på både mRNA og protein nivå enn stadium IV GC pasienter uten levermetastaser ved hjelp av RT-PCR og IHC [24].
Nylig rapporterte vi at høye nivåer av
HER2
mRNA ble godt korrelert med protein overekspresjon og GA ved å sammenligne resultatene fra fire forskjellige in situ-baserte metoder (RNA ISH, IHC, FISH, og SISH) i 211 GC tilfeller [20]. Likeledes, i denne studien for MET-status, er resultatene av RNA ISH viste ganske god korrelasjon med de av IHC og SISH. Disse resultatene støtter at RNA ISH kan være en pålitelig analyse for FFPE- vevsprøver, men ytterligere validering studier er nødvendig.
Vi viste at
MET
GA, høy
MET
mRNA og protein overekspresjon evaluert av SISH, RNA ISH og IHC var svært konkordant, og høy MET status på DNA, mRNA og protein var signifikant assosiert med dårlig prognose. Disse funnene støtter at MET overekspresjon skyldes i hovedsak økt
MET
GCN og denne mekanismen bidrar til aggressiv atferd
MET
onkogen-avhengige GC. Likevel, det var noen tilfeller viser inkonsekvens mellom
MET
GCN, mRNA og proteinnivåer. Vi spekulerer i at tekniske problemer (f.eks, sensitivitet og spesifisitet av sonden eller antistoff, og dårlig mRNA kvalitet av FFPE- vev) og intratumoral heterogenitet av MET status kan være de viktigste årsakene til dette avviket. Men kan noen biologiske mekanismer også være relatert til dette avviket. For eksempel, MET overekspresjon uten GA kan skje gjennom transkripsjonen aktivering via HGF avhengig auto /paracrine sløyfer eller andre signalveier [23], [26]. Tvert imot,
MET
GA kan ikke øke genproduktet. Asaoka et al. rapportert at noen GC cellelinjer husing
MET
GA uttrykte protein som samme nivå som andre cellelinjer uten GA, men deres tyrosin rester på kinase domene var mer fosforylert [27]. Mekanismene for MET aktivering og rollen til HGF i GC fortsatt ikke klarlagt.
Det er vel kjent at
MET
spiller en rolle i metastatisk progresjon av kreft. Flere studier har vist at
MET
GA eller overekspresjon var assosiert med LN metastase [7], [13], [22] eller fjernmetastaser [13], i GC pasienter. I tillegg ble det vist at administrasjonen av MET hemmer redusert peritoneal formidling av GC i en xenograft modell [23]. Videre Di Renzo et al. fant at kreftcellene som frakter
MET
aktiverende mutasjoner ble valgt under metastatisk spredning av hode og nakke plateepitelkarsinom ved å sammenligne gensekvensen mellom primærtumor og metastatisk lymfeknute [28]. Imidlertid har direkte sammenligning av MET status mellom primærtumor og metastaser ikke utført i en stor serie av GC. Når vi sammenlignet MET uttrykket status mellom 199 matchede primære svulster og metastatiske LNS, og den totale samstemmighet var 93,5% og 94% av RNA ISH og IHC, henholdsvis. Disse resultatene tyder på at MET uttrykk status for GC er relativt konstant i løpet av metastaser til regionale LNS. Men positive konvertering av
MET
mRNA status var signifikant assosiert med dårlig prognose ved univariat og multivariat analyse. Derfor er disse resultatene tyder på at evalueringen av MET status i metastatiske lesjoner kan være viktig for å forutsi prognose og for å identifisere ytterligere kandidater til MET-rettet behandling.
In situ-basert RNA-analyse har flere fordeler i forhold til den «slipe og bind «analyse som RT-PCR [19] og gjelder for både klinisk praksis og retrospektiv forskning. Videre er RNA ISH gunstigere enn IHC når det ikke er noen egnet antistoff eller når målmolekylet er utskilt protein. I forhold til
MET
, kan denne fordelen være nyttig fordi HGF-produserende celler kan visualiseres i et vev delen ved hjelp av HGF sonde. Imidlertid sårbar mRNA stabilitet under vev behandling og høyere kostnad enn for IHC er ulempene med RNA ISH metode. Vi håper at ytterligere tekniske forbedringer vil løse disse begrensningene.
I denne retrospektive studien,
MET
mRNA status evaluert av RNA ISH er godt korrelert med protein og GCN vurdert av IHC og SISH henholdsvis og
MET
GA er svært konkordant med høy ekspresjon av enten mRNA eller protein. I overlevelsesanalyse, høy uttrykk for
MET
mRNA i grunnskolen eller metastatiske lesjoner, og positive konvertering av
MET
mRNA status er signifikant assosiert med dårlig prognose. I tillegg
MET
mRNA status på metastatisk LNS er en uavhengig prognostisk faktor ved multivariat analyse. Våre funn tyder på at
MET
mRNA kan være et alternativ markør for å identifisere
MET
onkogen-avhengige GC.
Hjelpemiddel Informasjon
Tabell S1.
doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s001 plakater (docx)
Tabell S2.
doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s002 plakater (docx)
tabell S3.
doi:. 10,1371 /journal.pone.0111658.s003 plakater (docx)
Takk
Vi er veldig takknemlige for Ms Hyun Ju Park for henne teknisk support
