Abstract
Bakgrunn
Tidligere studier har vist at mindre differensiert T-celler er ideelle for adoptiv overføring av T-celleterapi (ACT), og at fibronektin CH296 (FN-CH296) sammen med anti-CD3 resulterte i dyrkede celler som inneholder større mengder av mindre differensierte T-celler. I denne fasen kliniske utprøvningen, vi bygge videre på disse tidligere resultater ved å vurdere sikkerhet og effekt av FN-CH296 stimulert T celleterapi hos pasienter med avansert kreft.
Metoder
Pasientene gjennomgikk fibronektin CH296 stimulert T-celle behandling opp til seks ganger annenhver uke og sikkerhet og antitumor aktivitet av ACT ble vurdert. For å bestemme immunforsvar, fullblod cytokin nivåer og antall perifere regulatoriske T-celler ble analysert før ACT og under oppfølging.
Resultater
Overført cellene inneholdt en rekke mindre differensiert T-celler i stor grad er representert ved CD27 + CD45RA + eller CD28 + CD45RA + celle, som utgjorde ca. 65% og 70% av den totale, henholdsvis. Ingen ACT relaterte alvorlige eller uventede toksisitet ble observert. Svarprosenten blant pasientene var 22,2% og sykdomskontroll rente var 66,7%.
Konklusjoner
Resultatene oppnådd i denne fasen jeg prøveresultatene tyder på at FN-CH296 stimulert T celleterapi var veldig godt tolerert med en grad av effekt som er ganske lovende. Vi anta også at å utvide T-celle hjelp CH296 er en metode som kan brukes på andre T- celle-baserte terapier
Trial Registrering
Umin UMIN000001835
Citation. Ishikawa T, Kokura S, Enoki T, Sakamoto N, Okayama T, Ideno M, et al. (2014) Fase I Clinical Trial of fibronektin CH296-stimulerte T cellen terapi hos pasienter med avansert kreft. PLoS ONE 9 (1): e83786. doi: 10,1371 /journal.pone.0083786
Editor: William C. S. Cho, Queen Elizabeth Hospital, Hong Kong
mottatt: 14 juli 2013; Godkjent: 05.11.2013; Publisert: 31 januar 2014
Copyright: © 2014 Ishikawa et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble delvis støttet av JSP KAKENHI Grant Antall 23590891. de bevilgende myndighet hadde noen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet. Ingen ekstra ekstern finansiering mottatt for denne studien
Konkurrerende interesser:. Takeshi Ishikawa, Satoshi Kokura, Tetsuya Okayama, og Toshikazu Yoshikawa har en tilknytning til en donasjon finansiert avdeling fra TAKARA BIO Inc. Dette endrer ikke forfatterne «tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer.
Innledning
Adoptiv T-celle-overføring (ACT) er i dag en av de få immunterapi som kan indusere objektive kliniske respons i en betydelig antall pasienter med metastatisk solide tumorer [1]. De iboende egenskapene til ACT befolkningen, spesielt dens tilstand av differensiering, er sagt å være avgjørende for å lykkes med ACT-baserte tilnærminger [2] – [5]. Mindre differensierte T-celler har en høyere proliferativ potensial og er mindre utsatt for apoptose enn mer differensierte celler. Mindre differensierte T-celler uttrykker reseptorer som for eksempel IL-7-reseptor α-kjede (IL-7Rα), derfor disse cellene har potensial til å spre seg og bli fullstendig aktivert i respons til homeostatiske cytokiner slik som IL-7 [6]. Resultater fra tidligere kliniske studier demonstrert en signifikant korrelasjon mellom tumorregresjon og prosentandelen av vedvarende ACT overførte celler i perifert blod [3], [7]. Disse funnene tyder på at utholdenhet og proliferativ potensialet overførte T-celler spiller en rolle i klinisk respons og at mindre differensiert T-celler er ideelle for ACT overføring terapi. Ved hjelp av en standard rask ekspansjon protokoll, blir T-celler for ACT vanligvis utvidet med en høy dose av IL-2 og CD3-spesifikke antistoff i ca 2 uker. T-celler som bruker denne protokollen indusere progressive T celledifferensiering mot en sen effektor tilstand. Imidlertid, selv om IL-2 er vesentlig for utholdenhet og vekst av T-celle det har også uønskede egenskaper, slik som dens evne til å fremme den terminale differensiering av T-celler [8]. Som et resultat av de for tiden anvendte fremgangsmåte fører til fenotypiske og funksjonelle endringer av T-celler som gjør dem mindre optimale for formidling av antitumorresponser in vivo. I lys av dette, å utvikle nye metoder for å oppnå mindre differensierte T-celler er viktig for å forbedre dagens T-celle-baserte terapier, slik at pasientene kan utvikle en langvarig positiv immunrespons.
Det er blitt rapportert at fibronektin (FN), en viktig ekstracellulær matriks protein, fungerer ikke bare som et adhesjonsmolekyl, men også som et signal induser via binding til integriner uttrykt på T-celler [9], [10]. FN virker sammen med anti-CD3 for å indusere T-celle-proliferasjon, som er antatt å være avhengig av integrin meget sent antigen-4-aktivering (VLA-4) /CS1 interaksjoner [11], [12]. Rekombinant human fibronektin fragment (FN-CH296, RetroNectin) har blitt mye brukt for retroviral genterapi for å forsterke genoverføring effektivitet. FN-CH296 ble også rapportert å være i stand til å stimulere perifere blod-T-cellevekst in vitro når de anvendes sammen med anti-CD3 og IL-2. Anti-CD3 /IL-2 /FN-CH296-stimulerte T-celler som inneholdt en større mengde av mindre differensierte T-celler og in vivo persistens av disse cellene var betydelig høyere enn celler stimulert ved andre fremgangsmåter [13]. Disse observasjonene førte oss til å søke FN-CH296-mediert stimulering til mindre differensierte fenotype T-celler til å generere «fit T-celler» [2], [14] som er ideelle for ACT. På denne måten, vi gikk videre for å vurdere sikkerhet og effekt av FN-CH296-stimulerte T celleterapi hos pasienter med avansert kreft.
Metoder
Protokollen for denne rettssaken og støtte TREND sjekklisten er tilgjengelig som tilleggsinformasjon; se Sjekkliste S1 og protokoll S1.
Studiedesign
Den kliniske protokollen ble godkjent av etisk komité av Kyoto Prefectural University of Medicine og ble gjennomført i samsvar med Helsinkideklarasjonen og etiske retningslinjer for klinisk forskning (Helsedepartementet, Arbeids- og velferdsdirektoratet, Japan). Det primære målet for denne fasen jeg kliniske studien var å vurdere sikkerhet og negativ-event profiler av FN-CH296-stimulerte T celleterapi hos pasienter med avansert kreft. Vår sekundært mål var å vurdere antitumor aktivitet av ACT terapi. Denne studien ble gjennomført som en standard 3 + 3 fase I design som undersøkte dosebegrensende toksisitet (DLTs) som forekommer i løpet av en 28-dagers periode etter andre infusjon av dyrkede lymfocytter. DLT ble definert som grad ≥3 for eventuelle bivirkninger relatert til infusjon av dyrkede celler. Vi brukte en akselerert titrering utforming for å vurdere sikkerheten av antallet av adoptive lymfocytter ved 1 x 10
9 (gruppe 1), 3 x 10
9 (gruppe 2), og 9 x 10
9 ( kohort 3) per person. Hvis ingen DLTs ble observert i det første kullet av pasienter, ble en annen kohort av 3 pasienter behandlet ved neste høyere dose. Hvis DLT ble observert i minst en pasient, ble kullet utvidet til 6 pasienter. Hvis ≥2 DLTs ble registrert i den innledende eller utvidet årsklasse, ble ingen ytterligere doseøkninger utføres og den maksimalt tolererte dose (MTD) ble ansett å ha blitt overskredet. Det var ingen intra-pasient doseøkning i denne studien.
Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle pasienter. Denne studien er registrert i Umin Clinical Trials Regi med identifikatoren UMIN000001835
Pasienter
Pasienter tatt i denne studien oppfylte følgende kriterier:. Histologisk eller cytologisk bekreftet spiserørskreft, magekreft, tykktarms kreft, kreft i bukspyttkjertelen, galleveier kreft eller ikke-liten lungecancer; restsykdom etter standard behandling med ingen andre kurativt behandlingstilbud tilgjengelig; ingen planer om å motta kjemoterapi annet enn muntlige fluorouracil forløpere, strålebehandling eller biologiske responsmodifiserende; mellom 20 til 80 år; en Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) funksjonsstatus på 2 eller mindre; en forventet levetid på minst tre måneder; minst fire uker siden det forrige kjemoterapi eller strålebehandling; . Og tilstrekkelig hematologisk, lever-, nyre- og hjertefunksjon
utelukkelse Kriteriene var som følger: tilstedeværelse av ukontrollert infeksjon; en historie med autoimmun sykdom eller alvorlig overfølsomhet, tilstedeværelse av alvorlige komplikasjoner som ustabil angina eller hjerteinfarkt innen seks måneder etter kreft utbruddet, interstitiell lungebetennelse eller lungefibrose med radiologiske funn, tilstedeværelse av merkede ascites eller pleuravæske, tarmslyng, aktiv annen malignitet , alvorlig mental svekkelse, graviditet eller amming, og en medisinsk historie med alvorlige overfølsomhetsreaksjoner.
Utarbeidelse av FN-CH296-stimulerte T-celler
perifert blod (50-70 ml) ble tatt fra kreftpasienter. Perifere mononukleære blodceller (PBMC) ble separert ved hjelp av Ficoll-Paque PREMIUM (GE Healthcare, Tokyo, Japan). Deretter 3-8 × 10
7 celler ble resuspendert i kulturmedium i et CultiLife215 bag (Takara Bio, Otsu, Japan) som var forhånds belagt med både anti-CD3 og FN-CH296 (RetroNectin®, Takara Bio), som er et rekombinant fragment av human fibronektin. Celler ble dyrket i et serumfritt medium, GT-T551 (Takara Bio), som ble supplert med 0,6 til 1,2% varmeinaktivert autologt plasma og 200 U /ml rekombinant IL-2 (Proleukin; NovartisPharma, Nürnberg, Tyskland) . På dag 4 ble cellene overført til en CultiLife Eva pose (Takara Bio), og GT-T551 medium som var supplert med 0,6 til 1,2% varmeinaktivert autologt plasma og 200 U /ml IL-2 ble tilsatt. På dag 7, ble GT-T551 medium inneholdende 200 U /ml IL-2 tilsatt. På dag 10 ble cellene høstet og resuspendert i 50-90 ml kryopreservert oppløsning bestående av CP-en (Kyokutou Seiyaku, Tokyo, Japan), RPMI1640 (KOHJIN BIO, Sakado, Japan) og humant serumalbumin (Albuminar; CSL Behring, PA, USA) for å lage den endelige celle produktet. For å oppnå den bestemt antall adoptive lymfocytter, pasientene i kullene 1 og 2 trengte en engangs-lymfocytt kultur, og pasientene i kullet 3 trengte tre lymfocytt-kulturer. . Dyrkede lymfocytter ble frosset og lagret ved -80 ° C til tidspunktet for trans
Før infusjonen pasienter, celleprodukter ble vurdert for $ \\ raster (80%) = «RG1» $ levedyktighet ved trypan blå eksklusjon analyse $ \\ raster (80%) = «RG2» $ for sterilitet ved Bact /ALERT (bioMérieux, Durham, NC, USA) mikrobiologisk deteksjonssystem, og $ \\ raster (80%) = «RG3» $ endotoksin av en kinetisk turbidimetrisk LAL-analysen. Begge sterilitet og endotoksin tester ble leid inn for å FALCO Biosystems (Kyoto, Japan). Videre ble det fenotypiske markører for en liten aliquot av sluttprodukter undersøkt etter fryse-tining. Dermed er disse markørene ansett å være nesten lik de av de infusert cellene.
Whole Blood Cytokine Assays
Immunfunksjon ble testet ved anvendelse av venøst blod oppnådd fra pasienter før administrering av dem med dyrkede celler (baseline) og under oppfølging som skjedde 4 uker etter 2
nd og sjette dyrket celle infusjon (fig. 1). Fremgangsmåter for kvantifisering av IFN-α produksjon i humant fullblod, er blitt beskrevet tidligere [15]. I korthet heparinisert perifert blod ble dyrket med Sendai-virus (500 HA /ml) i løpet av 8 timer etter at blodprøven ble tatt. Blodet-virus-blandingen ble inkubert ved 37 ° C i 20 timer, og IFN-α-aktivitet i supernatantene ble kvantifisert ved hjelp av en bioanalyse. Andre cytokiner ble kvantifisert i henhold til fremgangsmåter som er beskrevet tidligere [16], [17]. Heparinisert fullblod ble fortynnet fire ganger med Eagles minimale essensielle medium (Nissui Pharmaceutical Co. Ltd., Tokyo, Japan) og stimulert med fytohemagglutinin-P (PHA-P, 25 ug /ml, Wako Pure Chemical Ind., Osaka, Japan ). Prøvene ble inkubert ved 37 ° C i 48 timer, hvoretter supernatantene ble høstet ved sentrifugering ved 800 x
g
i 10 minutter, og deretter lagret ved -80 ° C inntil de var nødvendig for analysen. Cytokin nivåer i prøvene ble målt med en Bio-Plex multiplex cytokin array system (; Bio-Rad Laboratories, CA, USA) i henhold til produsentens instruksjoner. Den Multiplex Th1 /Th2 kulesett (Bio-Rad Laboratories) måles de følgende cytokiner: IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12 (p70), IL-13, tumornekrosefaktor (TNF ) -α, IFN-γ, og granulocytt-monocytt-kolonistimulerende faktor (GM-CSF). Datainnsamling og analyse ble utført med Bio-Plex Manager Software, versjon 5.0. Ettersom nivået av cytokiner uten PHA-P-stimulering var ekstremt lav (data ikke vist), vi bare bedømmes de med PHA-P-stimulering i denne studien.
Forsøkspersonene fikk CH296-stimulert T-celle-terapi på dag 1 og 15. Vi gjennomførte sikkerhetsvurderinger for de første 6 ukene av behandlingen. Pasienter som ønsket å fortsette behandlingen mottatt inntil 4 ytterligere behandlinger hver 2. uke. For å teste immunforsvar, ble venøs blod hentet fra fagene før behandlingsstart (baseline) og under oppfølging en som skjedde i 4 uker (2 behandlinger) og etter 6 dyrkede celle administrasjoner.
flowcytometrisk analyse
cellene ble farget med FITC-, fysoerytrin (PE) -, phycoerythrin-TexasRed (ECD) – eller phycoerythrin-Cyanin (PC5) konjugert mAb spesifikt for CD3, CD4, CD8, CD27 , CD45RA, CD56, HLA-DR (Beckman Coulter, Marseille, Frankrike), CD28, NKG2D (eBioscience, CA, USA) og CCR7 (R 0,05
Sammenligningen ble gjort i form av celleoverflatemarkører (dvs. CD27 + CD45RA +, CD28 + CD45RA +, CCR7 + CD45RA +)
Toxicity
er rapportert i denne studien bivirkninger er vist i tabell 3. En pasient som ble administrert S-1, erfarne grad 3 nøytropeni ble imidlertid denne episoden ansett å være relatert til S-1 og ikke å handle. Klasse to eller lavere nivå hematologiske toksisitet ble observert hovedsakelig hos pasienter administrert med S-en, og disse hematologisk toksisitet var for det meste forbigående. Ikke-hematologiske hendelser, inkludert tretthet og anoreksi ble observert, men disse var alle mildt. Ingen ACT relaterte alvorlige eller uventede toksisitet ble observert. Dermed ble det ikke DLT observert i denne fase I-studie.
klinisk utfall
En pasient (nr.4) oppnådde komplett respons (CR). CR pasienten led av lymfeknute tilbakefall etter en endetarmskreft operasjon og hun ble behandlet med mFOLFOX6 som første linje kjemoterapi. Deretter ble hun behandlet med kapecitabin som andrelinje kjemoterapi, men intrapelvic lymfeknutemetastase ble oppdaget av FDG-PET. Pasienten mottok deretter ACT terapi i kombinasjon med S-1. Tre måneder etter 6 infusjon av dyrkede T-celler, lesjonen helt forsvunnet. Pasient no.8 opplevd partiell respons (PR). Han hadde ildfast gallegang kreft, og ble behandlet med GEM som første linje kjemoterapi etterfulgt av GEM /S-1 som 2
nd kjemoterapi. Imidlertid 17 måneder etter start kjemoterapi, størrelsen av den primære tumor økt og ble påvist metastaser i halsvirvelen. Han gjennomgikk ACT terapi kombinert med S-1. To måneder etter 6 infusjoner av ACT, størrelsen på den primære svulst i leveren hans redusert med 35% og metastatiske lesjoner i nakkevirvel helt forsvunnet av FDG-PET.
Av de 9 pasientene, en (11,1% ) viste CR, en (11,1%) hadde PR, 4 (44,4%) hadde stabil sykdom (SD), og 3 (33,3%) hadde progressiv sykdom (PD) (tabell 4). Svarprosenten var 22,2% (95% konfidensintervall (KI) 2.8 60.0%?) Og sykdomskontrollrate (DCR; CR + PR + SD) var 66,7% (95% KI 29,9 til 92,5%)
immune Monitoring
For å bestemme immunresponser hos pasienter som får romanen ACT, fullblod cytokin analyser og perifer treg analyse, noe som kan være nyttig i immunovervåking [18] – [20], var gjort ved hjelp av venøst blod oppnådd fra pasienter. Det var ingen merkbar forandring i fullblod cytokinnivåer (figur 4A.) Hos pasienter etter at de ble infusert med dyrkede celler; imidlertid var det en nedgang i IL-4, IL-5 og IL-13 etter behandlingen. Nivåene av IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-12 og GM-CSF i kohort 3 økte etter behandlingen; Spesielt er nivåene av IFN-γ, IL-12 og GM-CSF økt et multiplum av 10 eller flere ganger. Neste, vi evaluert i fullblod cytokin nivåer etter objektiv tumorrespons. Nivåene av IFN-γ, IL-2, IL-12 og GM-CSF hos pasienter med PR /CR øket mer enn to ganger etter behandlingen, mens de nivåene hos pasienter med SD eller PD redusert eller endret seg ikke signifikant etter behandling ( fig. 4B).
Mean cytokin nivåer i fag i hver årsklasse (A) og nivåer for de ulike tumorrespons (B) er vist.
Som for Tregs, både antall og andel av disse cellene i perifert blod viste ingen signifikant endring etter behandling da de ble vurdert etter kohort eller tumorrespons (fig. 4A, B).
Diskusjoner
resultatene presenteres i denne studien tyder på at FN-CH296-stimulert T-celle terapi ble godt tolerert i vår pasientprøve. Ingen signifikant ACT relatert grad 3 eller 4 bivirkninger forekom hos enhver pasient og ACT produsert tumorregresjon hos 2 pasienter: CR i en pasient med kreft i endetarmen og PR i en annen med gallegang kreft. Svarprosenten var 22,2% og DCR var 66,7%. Til tross for størrelsen av prøven, disse resultatene er lovende.
Resultatene av tidligere mus studier og kliniske forsøk viste at mindre differensierte T-celler kan være den optimale populasjon for ACT-basert immunterapi på grunn av deres in vivo persistens høy proliferativ potensial, mottakelighet for homeostatiske og samtidig stimulerende signaler, deres homing til sekundære lymfevev og deres evne til å utskille IL-2 [2] – [5]. I tillegg til dette, Yu et al. har rapportert at FN-CH296 handle med anti-CD3 indusere T-celledeling. Disse tyder dvs FN-CH296 /anti-CD3 stimulering kan være en effektiv måte å generere et stort antall mindre differensierte T-celler egnet for ACT resulterer i høyere og lengre utholdenhet in vivo [13].
CD45RA , CD27, CD28, og CCR7 er kjent for å være sterkt uttrykt i mindre differensierte T-celler. Basert på kliniske virusinfeksjon studier, har en lineær modell av T-celle differensiering blitt foreslått, hvor CD27 + CD28 + CD45RA + naive celler utvikle seg gjennom en CD27 + CD28 + CD45RA- tidlig antigen-erfarne fenotype og deretter fortsetter til en CD27 + CD28-CD45RA- /+ mellomliggende fenotype og til slutt til CD27-CD28-CD45RA +/- sent antigen-erfarne fenotype. Denne lineære bevegelse fører til en økning i cytotoksisk potensial og en reduksjon i celleformering [21]. CD27 og CD28 er samtidig stimulerende molekyler som fungerer i samspill med T-celle reseptor (TCR) for å støtte T-celle ekspansjon [22]. Det har blitt foreslått at CD28-uttrykkende T-celler utskiller IL-2 og induserer antiapoptotic molekyler [23]. I nyere tid har rollen CD28 uttrykk i ACT-baserte kliniske studier fått tettere oppfølging og mer detaljerte undersøkelser blir gjort. Analyse av vedvarende og ikke-vedvarende TIL kloner indikere preferensiell overlevelse av clonotypes som uttrykker høye nivåer av CD28, impliserer en overlevelsesfordel for overførte T-celler med CD28 + mindre differensierte fenotype [4], [5]. CD27 kan også forsterke TCR-indusert T-celleformering, og er nødvendig for dannelse og vedlikehold av minne-T-celler in vivo [24]. Det er bevis på at frekvensen av T-celler som uttrykker CD27 økes gradvis etter ACT, og kan være assosiert med langvarig opprettholdelse av et stabilt antall tumor-spesifikke T-celler i pasienter som responderte [25]. I denne fasen jeg klinisk studie frekvensene av både CD27 + CD45RA + og CD28 + CD45RA + celler økt betydelig etter kultur og sin befolkning i overførte cellene var omtrent 60%. På den annen side, har hyppigheten av CCR7 + CD45RA + celler, som ble også uttrykt i mindre differensierte T-celler, ikke endres etter at kulturen av ukjente grunner. Forholdene mellom de mindre differensierte fenotype T-celler (dvs. CD27 + CD45 +, CD28 + CD45RA +, og CCR7 + CD45RA + celler) i overførte celler varierte sterkt for hver enkelt pasient. En sterk positiv korrelasjon ble funnet mellom prosenter av CD27 + CD45RA + (ρ = 0,717, p = 0,037), CD28 + CD45RA + (ρ = 0,717, p = 0,037), CCR7 + CD45RA + (ρ = 0,733, p = 0,031) celler i overførte celler og de i PBMC (før kulturen). Det er nødvendig å forbedre eller finne nye metoder som effektivt kan generere et stort antall mindre differensierte T-celler, selv i tilfeller der det er få mindre differensiert T-celler. I samsvar med tidligere rapporter [13], fant vi at stimulering med FN-CH296 /anti-CD3 fortrinnsvis utvidet CD8 + celler i denne studien. Det er generelt antatt at de fremherskende tumorici-dal effektor mekanisme er den cytotoksiske drepende effekt av CD8
+ -T-celler, men til tross for den forskning gjort hittil, virkningen av fortrinns proliferasjon av CD8 T-celler for cancer immunoterapi fortsatt behov for mye lenger undersøkelse.
Tidligere undersøkelser har vist at IFN-γ spiller en viktig rolle i cancer immunoterapi og IFN-γ ekspresjon av T-celler er ansett å være sterkt korrelert med terapeutisk suksess. Vi har også vist at analysen av helblod IFN-y-nivåer var en effektiv metode for å evaluere klinisk respons på kreftimmunterapier [19] [20]. I denne studien ble fullblod IFN-y-nivåer i kullet 3 økes opp til 10 eller flere ganger etter 6 infusjoner av dyrkede celler. Fullblod IFN-y-nivåer i PR eller CR tilfeller øket mer enn to ganger, mens de i PD eller SD tilfeller så ingen signifikant økning etter behandlingen. Funnene i vår tidligere studie [20] at økningen i fullblod IFN-γ nivåer etter ACT ble uavhengig relatert til total overlevelse hos kreftpasienter understreker relevansen av resultatene oppnådd i denne studien.
Selv om ingen signifikant korrelasjon mellom antall infundert mindre differensierte T-celler og fullblod IFN-γ nivåer ble ikke bekreftet sannsynligvis på grunn av små prøvestørrelser, anta at vi mindre differensierte T-celler kan bidra til økning av IFN-y-nivåer. Fremtidige studier er nødvendig for å utforske virkningen av antall CD27 + CD45RA +, CD28 + CD45 + og CCR7 + CD45RA + -celler på fullblod IFN-γ nivåer.
I tillegg til IFN-γ andre Th1 cytokinnivåer slike som IL-2, IL-12 og TNF-α også forhøyet hos pasienter i kohort 3, og i pasienter med PR /CR, mens Th2 cytokin-nivåer, for eksempel IL-4, IL-5 og IL-13 ble redusert etter behandling. Dessuten økte fullblod GM-CSF nivå hos pasienter i kohort 3 og hos pasienter som opplevde PR /CR. Det ble tidligere rapportert at celle-mediert immunitet er fortrinnsvis aktivert av Th1-cytokiner, mens Th2-cytokiner undertrykker cellemediert immunitet [26]. GM-CSF er en pleiotropisk cytokin som stimulerer dendrittiske celler (DCS) og fremmer opptaket av tumorantigener ved DC fører til T-celle kryss-priming og aktiverende immunsystemet mot spesifikke antigener [27], [28]. Følgelig, basert på resultatene fra den immun-overvåking gjort i denne studien, er vi tilbøyelig til å tro at fibronektin CH296-stimulert T-celle-terapi kan utøve anti-tumor-effekter ved aktivering av cellemediert immunitet. Selv om vi nylig vist at ACT har potensial til å redusere antall Tregs [29], i analysen gjort i denne studien, ble antall perifere tregs ikke endres vesentlig etter behandlingen.
Respons til immunbaserte behandlinger varierer mellom tumortyper. Mens melanom og nyrecellekreft er klassisk anses å være immunogene, de epiteliale maligniteter ikke er immunogene og reagerer dårlig på immunterapi. I vårt utvalg, alle ni pasienter hadde epiteliale maligniteter som gastrointestinale kreft og lungekreft som er tradisjonelt ansett som ildfast til immunterapi. Det bør bemerkes at objektiv respons ble observert i pasienter med rektal kreft og gallegang kreft. Det er fortsatt uklart om denne romanen ACT har terapeutisk potensiale for flere krefttyper.
