Abstract
Nyere studier har funnet at TIPE2 var involvert i kreftutvikling. Men lite er kjent om TIPE2 i lungekreft. Vår studie tar sikte på å avklare hvilken rolle TIPE2 i lunge kreftutvikling. Vi undersøkte ekspresjon av TIPE2 i lunge squamous kreft (LSC), småcellet lungekreft og lunge adenokarsinom (ADC) vev og funnet at TIPE2 ekspresjon ble tapt i småcellet lungekreft, sammenlignet med tilstøtende ikke-tumorvev. Overekspresjon av TIPE2 betydelig hemmet veksten av lungekreft celle H446
in vitro Hotell og selv undertrykte tumordannelse
in vivo
. Flowcytometri analyse fant TIPE2 overekspresjon fremmet apoptose av H446. I TIPE2 over-uttrykk celler, caspase-3, caspase-9, og Bax var signifikant oppregulert mens BCL-2 ble nedregulert. Dessuten var sammenfallende resultater er vist ved immunhistokjemi i tumorer fra nakne mus. TIPE2 hemmet fosforylering av Akt, mens fremme fosforyleringen av P38, men hadde ingen virkning på IκBα og ERK-reaksjonsveien. Tatt sammen, TIPE2 fremmet lungekreft celle apoptose ved å påvirke apoptose-relaterte molekyler caspase-3, caspase-9, Bcl-2 og Bax, muligens via regulerings P38 og Akt veier, noe som indikerer at TIPE2 kan være en ny markør for lungekreft diagnose og terapi
Citation. Liu QQ, Zhang FF, Wang F, Qiu JH, Luo CH, Zhu GY, et al. (2015) TIPE2 Hemmer Lung Cancer Vekst tillegge Fremme av apoptose ved å regulere Noen apoptotisk Molekyler Expression. PLoS ONE 10 (5): e0126176. doi: 10,1371 /journal.pone.0126176
Academic Redaktør: Jin Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center Research Institute, UNITED STATES
mottatt: 19 desember 2014; Godkjent: 30 mars 2015; Publisert: 06.05.2015
Copyright: © 2015 Liu et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er innenfor papir
Finansiering:. Finansieringen ble gitt av National Natural Science fond i Kina (81101764) https://www.nsfc.gov.cn/, Foundation of Fujian-provinsen i Kina Natural Science ( 2011J05099) https://www.fjkjt.gov.cn/. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Lungekreft er en av de vanligste kreftformene i verden og fortsetter å være den ledende årsak til kreft-relaterte dødelighet [1]. Det er ca 1000.000 nye lungekreft tilfeller og mer enn 800.000 estimerte dødsfall hvert år i verden [2]. Til tross for nylige fremskritt i diagnostiske og terapeutiske teknikker, er det 5-års overlevelse rate av lungekreftpasienter fortsatt mindre enn 15% [3]. Derfor er det et presserende behov for å avsløre den molekylære mekanismen for lungekreft og finne nye kandidat biomarkører med potensial klinisk verdi, noe som vil lette utviklingen av mer effektive terapeutiske mål og behandlingsstrategier.
Tumor nekrose faktor (TNF ) -alpha-indusert protein 8-lignende 2 (TNFAIP8L2), også kjent som TIPE2, er medlem av TNFAIP8 familie og en nylig beskrevet negativ regulator av både medfødte og adaptive immunitet [4]. Det forhindrer hyper-respons og opprettholder immun homeostase via undertrykke TLR og TCR funksjon, og dens mangel på mus fører til multi-organ betennelse [4]. Videre, i pasienter med kroniske inflammatoriske sykdommer så som systemisk lupus erythematosus og hepatitt, TIPE2 uttrykket er også nedregulert og omvendt korrelerer med sykdomsprogresjon [5,6]. Men forskjellig fra murine TIPE2, som fortrinnsvis uttrykkes i hematopoetiske celler, human TIPE2 er også uttrykt i en rekke ikke-hematopoietiske celletyper [4,7,8].
Humant TIPE2 andeler ca. 53% identitet og 78% likhet aminosyresekvens med TNFAIP8, og omtrent 94% homolog med muse-TIPE2 [4]. Innledende studier viste at andre medlemmer av tipe familie som TNFAIP8 og TIPE1 spille roller i kreftutvikling i de fleste humane kreftformer [9-11]. Den høyoppløselige krystallstruktur av TIPE2 viser at den inneholder en stor hydrofobt sentralt hulrom, som synes å være en DED-lignende domene er forskjellig fra caspase-8 eller cFLIP [12]. Murine TIPE2 hemmer MAPKs og NFkB signalveier som fremmer Fas-indusert apoptose [4]. I tillegg er overekspresjon av TIPE2 i mus resulterer i celledød og signifikant inhiberer Ras-indusert tumorigenesis [13]. Imidlertid er TIPE2 ikke påvisbart eller dårlig uttrykt i de fleste humane carcinom cellelinjer [7]. Disse resultatene tyder på at i tillegg til betennelse, TIPE2 kan også være involvert i kreftutvikling.
Økende studier har vært fokusert på TIPE2 og kreft hos mennesker de siste årene. TIPE2 undertrykker TLR4-mediert utvikling av tykktarmskreft ved å hemme caspase-8 aktivitet [14], mens uttrykket er positivt korrelert med TNM staging i nyrecellekreft (RCC) pasienter [15]. Nylig er TIPE2 viste seg å være en endogen hemmer av Rac1 i leveren der den undertrykte invasjon og metastasering av leverkreft (HCC) [16]. Men rollen som TIPE2 i lungekreft er uklart. I foreliggende undersøkelse, gir vi bevis for det første vise at TIPE2 undertrykker veksten og fremmer apoptose av lungekreft gjennom regulering av Bcl-2 /Bax balanse og deretter fører til aktivering av kaspase-3 og kaspase-9 muligens via påvirker P38 og Akt pathway .
Materialer og metoder
Etikk uttalelse
studiet ble godkjent av Institutional forskningsetiske komiteer av The First Affiliated Hospital of Xiamen University, og skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle pasienter. Alle prøvene ble håndtert og anonymisert i henhold til de etiske og juridiske standarder. Alle dyr prosedyrer i denne studien ble godkjent av forsøk med dyr Ethics Committee of Xiamen University.
Vevsprøver
De parafininnstøpte lungekreftprøver ble brukt til immunhistokjemisk analyse. De parafininnstøpte lungekreft prøvene besto av 25 lunge plateepitel kreft prøver, 20 lunge adenokarsinom prøver, 15 små lungekreft prøver og 30 tilstøtende ikke-tumor lunge prøver. Alle pasientene rekruttert i denne studien fikk verken får kjemoterapi eller strålebehandling før operasjonen.
Cell kultur, plasmid konstruksjon og transfeksjon
Den menneskelige NCI-H446 cellelinjer ble kjøpt fra den kinesiske Academy of Medical Sciences (Shanghai, Kina). Den H446 celle ble dyrket i RPMI 1640 medium (Gibco) supplementert med 10% FBS (HyClone), 100 enheter /ml penicillin og 100 enheter /ml streptomycin. Celler ble opprettholdt i en fuktet atmosfære med 5% CO
2 ved 37 ° C. Full-lengde human TIPE2 gen ble generert fra cDNA-klonen ved PCR og deretter klonet inn i pRK5-vektoren ved standard molekylærbiologiske metoder og verifisert ved sekvensering. Transfeksjon av tumorceller med vektoren ble utført ved anvendelse av Fugene HD transfeksjon-reagens (Promega) ifølge produsentens protokoll. For å generere stabile transfekterte cellelinjer, ble transfekterte celler valgt i RPMI 1640 medium inneholdende 500 ug /ml G418 i to uker for å isolere de dannede koloniene for videre ekspansjon. Ved slutten av transfeksjon, ble TIPE2 ekspresjon verifisert ved Western blotting.
Immunhistokjemi (IHC)
parafininnstøpte prøver (4 um) ble anvendt for analyse som standard immunohistokjemisk teknikk. I korthet seksjoner ble inkubert med anti-TIPE2 antistoff (Abnova) over natten ved 4 ° C. Sekundær farging ble utført med HRP-konjugert sekundært antistoff ved hjelp av en Max Vision kit. Immunoreaktivitets ble visualisert ved hjelp av en DAB peroxydasesubstrat kit (Maixin Co, Fuzhou, Kina) og kontra med hematoksylin. I negative kontroller ble det primære antistoff erstattet med PBS. All IHC farging ble uavhengig evaluert av to erfarne patologer i et forsøk på å gi en enighet om fargemønstre etter en scoring metode, som beskrevet tidligere [17,18]. Minst 10 kraftige felt, valgt tilfeldig, og 1000 celler ble telt for hver prøve. Hvert tilfelle ble bedømt i henhold til intensiteten og areal av farging. Intensiteten av farging ble gradert på følgende skalaer: 0, ingen farging; 1+, mild flekker; 2+, moderat farging; 3+, intens farging. Arealet av fargingen ble bedømt som følger: 0 = ingen farging av cellene i noen mikroskopiske felt; 1+, 30% av vev farget positive; 2+, 30-60% farget positive; 3+, 60% farget positive. En kombinert farging poengsum (intensitet + forlengelse) på mellom 0 og 3 ble ansett for å være lav uttrykk, mens en score mellom 4 og 6 ble ansett for å være høyt uttrykk.
Western blotting
Celler ble høstet og lysert i lyseringsbuffer med proteinase inhibitor cocktail (Roche) og PMSF (Sigma). Deretter 30 ug lysater fra hver prøve ble separert ved 10% SDS-PAGE og overført til PVDF-membraner. Membranene ble blokkert med 5% ikke-fettmelk og probet over natten ved 4 ° C med følgende primære antistoffer: anti-TIPE2 (fortynning 1: 800; Abnova), anti-caspase-3-p17 (fortynning 1: 400; i Santa Cruz), anti-caspase-9 (fortynning 1: 400; Santa Cruz), anti-Bcl-2 (fortynning 1: 200; Santa Cruz), anti-Bax (fortynning 1: 1000; Santa Cruz), anti -ERK (fortynning 1: 1000; CST), anti-fosfo-ERK (fortynning 1: 1000; R CST), anti-fosfo-P38 (fortynning, 1: 1000, CST), anti-Akt (fortynning 1: 1000; CST), anti-fosfo-Akt (fortynning 1: 1000; CST), anti-IκBα (fortynning 1: 1000; CST), anti- fosfo-IκBα (fortynning 1: 1000; CST), og anti-β-aktin-antistoff (fortynning 1: 4000; Abcam), deretter fulgt av pepperrot-peroksidase-konjugert sekundært antistoff (anti kanin eller mus-IgG, 1: 5000; Santa Cruz) i 1 time ved romtemperatur. Etter vasking ble blotter utviklet ved hjelp av ECL deteksjonsreagensen (GE Healthcare) og kvantifisert ved densitometri hjelp Imagequant bildeanalysesystem (Storm Optical Scanner). Alle forsøkene ble utført tre ganger uavhengig av hverandre minst.
kolonidannelse assay
Cellene ble sådd ut i seks-brønns plater ved en tetthet på 500 celler per brønn, og erstattet medium hver 3. dag . To uker senere ble cellene vasket med PBS og fiksert med metanol i 15 minutter, deretter farget med krystallfiolett. Kolonier som besto av mer enn 50 celler ble tellet og beregnet som en prosentandel av den for kontrollgruppen. Eksperimentet ble gjennomført tre ganger uavhengig av hverandre minst.
MTT-analysen
Cellelevedyktigheten ble påvist ved MTT-analyse. En total på 3000 celler per brønn ble sådd ut i 96-brønners plater med tre triplikate brønner. Etter inkubering i 24 timer ble 10 pl MTT (500 mg /ml; Sigma-Aldrich) ble tilsatt til mediet og dyrket i ytterligere 4 timer. Deretter ble mediet ble fjernet og 150 ul dimetylsulfoksid (Sigma-Aldrich) ble tilsatt for å oppløse formasjons produkt. Til slutt ble absorbansen for hver brønn målt ved en bølgelengde på 490 nm. Hver analysen ble gjentatt tre ganger minst.
flowcytometrisk analyse
Effekten av TIPE2 på celle apoptose ble bestemt av FITC Annexin V farging, etterfulgt av flowcytometrisk analyse. Cellene ble vasket to ganger med kald PBS og resuspendert i 1 x bindingsbuffer (BD Biosciences) ved en konsentrasjon på 1 x 10
6 celler /ml. 100 ul av løsningen ble overført til en 5 ml kultur rør, deretter 5 pl FITC Annexin V (BD Biosciences) og 10 ul PI (BD Biosciences) ble tilsatt i røret. Etter dette ble cellene forsiktig blandet og inkubert i 15 minutter ved romtemperatur i mørke. Til slutt ble 1 ml PBS tilsatt til hvert rør og prøvene ble analysert ved hjelp av strømningscytometrisk innen 1 time. Alle forsøk ble gjentatt tre ganger.
In vivo
tumorigenesis analysen
Seks uker gamle BALB /c nakne mus ble kjøpt fra Chinese Academy of Science (Shanghai, Kina) og opprettholdt i patogenfrie forhold. 5 x 10
6 H446-celler transfektert med TIPE2 overuttrykkende vektor (TIPE2 gruppe) i 100 ul PBS ble injisert subkutant i høyre flanke, mens kontroll-vektor (kontrollgruppe) inn i venstre flanke av de nakne mus, 10 nakne mus var anvendt i dette eksperimentet. Tumorstørrelse ble målt hver to dager og tumorvolumet ble beregnet i henhold til følgende formel: lengde x bredde x bredde x 0,5. Om seks uker senere ble alle musene avlivet ved halshugging, og svulstene ble fjernet, veid, og fiksert i formalin for nærmere analyse.
Statistisk analyse
Alle statistiske analyser ble gjennomført ut ved hjelp av SPSS 13.0 programvare. Den χ
2 test ble benyttet for analyse av TIPE2 uttrykk mellom lungekreft subtyper og tilstøtende ikke-tumorvev. Studentens t-test ble anvendt for sammenligning mellom forskjellige grupper. Forskjellene i tumorvekst og vekt mellom to grupper av nakne mus ble evaluert ved gjentatt tiltak for analyse av varians.
P
0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Resultater
TIPE2 uttrykk ble nedregulert eller tapt i lunge plateepitel kreft og småcellet lungekreft vev
Nyere studier allerede avdekket at TIPE2 uttrykk var signifikant korrelert med noen kreftformer som RCC og HCC [15]. Imidlertid TIPE2 uttrykksmønster i lungekreft er uklart så langt. For å vurdere forholdet mellom TIPE2 uttrykk og lungekreft vev, vi har oppdaget uttrykket status for TIPE2 i vanlige histologiske typer lungekreft vev ved immunhistokjemi, inkludert 25 lunge adenokarsinom vev, 20 lunge plateepitel karsinom vev, 15 småcellet lungekreft vev og 30 tilstøtende ikke-svulst lunge vev. Som vist i (fig 1A og 1B), i ikke-tumor lungevev, ble TIPE2 sterk farging observert i lunge epitel-alveolare celler og bronkiale celler. Og i bronkial epithelials med plateepitel metaplasi, TIPE2 hadde fortsatt sterk farging (fig 1C). I lungekreft vev, TIPE2 viste sterk farging i primær lunge adenokarsinom og lymfeknutemetastase vev (figur 1D, 1E og 1F), men viste meget svak farging i lunge skvamøse kreft, og til og med nesten ingen farging i de fleste av småcellet lungekreft (Fig 1G, 1H og 1I). Interessant, (Fig 1 H) viste meget svak TIPE2 uttrykk i reirene til lunge plateepitel kreftceller (røde piler) og sterk farging av TIPE2 i de tilstøtende bronkial epithelials samtidig. I kreft stroma lunge, ble ingen flekk av TIPE2 funnet i fibroblaster celler, men sterk farging ble funnet i inflammatoriske celler så som plasmocytes og macrophagocytes. I positive kreftceller, ble TIPE2 flekker hovedsakelig finnes i cytoplasma, men sjelden i kjernekraft. Statistisk analyse (tabell 1) viste TIPE2 ekspresjon ble betydelig nedregulert i lunge skvamøse kreft og småcellet lungekreft vev sammenlignet med den ikke-tumor lungevev, mens ingen forskjell mellom lunge adenokarsinom og ikke-tumor lungevev. Resultatene viste at TIPE2 ble nedregulert i enkelte histologiske undergrupper av lungekreft, som oppfordret oss til ytterligere å undersøke den spesifikke rolle og underliggende mekanisme TIPE2 i lungekreft utvikling.
Representative bilder av TIPE2 uttrykk i alveolar epitel (A), bronkiale epitel (B), bronkial epitelial med skvamøs metaplasi (C), lunge AdC (D, E), positiv lymfeknute fra lunge AdC (F), lunge squamous kreft (G, H) og småcellet kreft (i).
TIPE2 hemmet veksten og fremmet apoptose av lungekreft celle
in vitro
for å undersøke potensialet biologisk funksjon TIPE2 i lungekreft, undersøkte vi effekten av TIPE2 på cellevekst av lungekreft H446 celle ved MTT-analyse, og kolonidannelsesbestemmelsen, og apoptose ved strømningscytometrisk. Å opp-regulere TIPE2 uttrykk i H446, TIPE2 over-uttrykke vektor ble konstruert og transfektert stabilt i H446 celler. Western blotting validert TIPE2 uttrykk i H446 celler utransfekterte (H446 /Null), kontroll vektor-transfektert (H446 /Control) og TIPE2 over-uttrykke vektor transfektert (H446 /TIPE2). Som vist i (figur 2A), H446 /Null og H446 /kontroll viste nesten ingen TIPE2 uttrykk, mens H446 /TIPE2 viste høyt nivå av TIPE2 uttrykk. MTT analysen (figur 2B) og kolonidannelse analysen (figur 2C) analyse viste reduksjon av celle levedyktighet og færre kolonier observert i H446 /TIPE2 henholdsvis sammenlignet med H446 /Kontroll og H446 /null celler, som indikert TIPE2 kan hemme kreft celle vekst lunge . Kreft cellevekst påvirkes av to hovedfaktorer, inkludert spredning og apoptose. Det ble rapportert at murine TIPE2 kunne fremme Fas-indusert apoptose [4]. Har TIPE2 potensielle rolle i apoptose av lungekreft? Derfor søkte vi flowcytometrisk å avdekke effekten av TIPE2 på apoptose av H446. Som vist i (figur 2D), den tidlige apoptose frekvensen av H446 /TIPE2, H446 /kontroll og H446 /Null var 21,08%, 9,21% og 9,15%, respektivt, som viste overuttrykkende TIPE2 kunne gi en betydelig økning i apoptose hastighet. Disse resultatene antydet TIPE2 effektivt kan undertrykke vekst og fremme apoptose av H446 celler
in vitro
.
(A), TIPE2 over-uttrykk i H446 transfektert med TIPE2 plasmid. (B), redusert Celleviabilitet etter TIPE2 over-uttrykk. (C), H446 /TIPE2 hadde færre kolonidannelse i forhold til vektoren. (D), TIPE2 oppregulering økte apoptotiske hastigheten betydelig. * Indikert
P
0,05.
TIPE2 regulert BCL-2 /Bax balanse, forbedret spaltes caspase-3 og caspase-9 nivåer
Resultatene ovennevnte viste TIPE2 kunne fremme apoptose av H446 celler. Da var vi videre interessert i den underliggende mekanisme av det. Det har vært velkjent at Bcl-2 /Bax balanse spiller en viktig rolle i celle apoptose [19], så vi undersøkt effekten av TIPE2 uttrykket i Bcl-2 /Bax balanse. Som vist i figur 3, over-uttrykker TIPE2 kan øke ekspresjonen Bax mens senke Bcl-2-ekspresjon, noe som antydet at funksjonen av TIPE2 på celle apoptose kan være assosiert med Bcl-2 /Bax balanse. Videre har det blitt demonstrert at caspase spiller en kritisk rolle i å utføre den endelige bane av apoptose [20]. Vi videre undersøkt om TIPE2 ville påvirket aktivering av apoptotiske molekylære caspases som caspase-3 og caspase-9. Derfor, vi har oppdaget uttrykk for kløyvde caspase-3 og caspase-9 i H446 /Null, H446 /kontroll og H446 /TIPE2. Som vist i figur 3, TIPE2 forbedret spaltede kaspase-3 og kaspase-9 ekspresjonsnivåer, som antydet TIPE2 kunne fremme aktivering av kaspase-3 og Capase-9.
(A), Western blot-analyse av Bcl-2, Bax, Caspase-3 og Caspase-9-ekspresjon i H446, vektor, TIPE2. (B), Histogram av de relative ekspresjonsnivå av de ovennevnte apoptose-relaterte molekyler.
TIPE2 økt aktivering av p38 MAPK-reaksjonsveien, mens inhibering av aktivering av Akt
Vi utforsket effekten av TIPE2 på flere signalveier ved å analysere sentrale signalmolekyler involvert. Vi fant ut at P38 og Akt vei, men ikke ERK sti og NF-kB vei, var mål for TIPE2 handling. Ekspresjon i høyt nivå av fosforylert MAPK p38 ble påvist i H446-celler overuttrykkende TIPE2, mens forholdsvis lavt nivå-ekspresjon i null-og kontrollcellene (figur 4), noe som indikerte at TIPE2 kan aktivere P38 MAPK-reaksjonsveien. Nivået av fosforylert Akt ble signifikant redusert i H446-celler overuttrykkende TIPE2 i forhold til null og kontrollcellene (fig 4). I tillegg har vi også undersøkt uttrykk for andre signalmolekyler som fosfor-ERK, fosfor-MEK, og fosfor-IκBα i H446 /Null, H446 /kontroll og H446 /TIPE2, blant annet liten eller ingen forskjell ble observert (fig 4 ). Samlet utgjør disse data indikerte at TIPE2 kunne regulere P38 og Akt sti, der TIPE2 var en positiv regulator av P38 veien mens negativ regulator av Akt veien.
(A), Western blot analyse av noen vanlige signalmolekyler uttrykk i H446, vektor, TIPE2. (B), Histogram av de relative uttrykk nivåer av de nevnte signalmolekyler.
TIPE2 åpenbart hemmet tumordannelse
in vivo
Den ovennevnte resultatene viste TIPE2 kan effektivt undertrykke vekst og fremme apoptose av H446 celler
in vitro
. Deretter undersøkte vi effekten på tumorigenesis
in vivo
. H446-celler transfektert med kontroll vektor eller TIPE2-uttrykkende vektor ble injisert subkutant i nakne mus for å initiere tumordannelse. Fra kurven av tumorvekst (figur 5B), ble tumorvolumet av TIPE2-uttrykk grupper signifikant redusert sammenlignet med vektor-grupper. Om seks uker senere ble alle grupper av nakne mus avlivet og svulstene var isolert og vektet (Fig 5A). Den totale midlere tumorstørrelse på TIPE2-uttrykk gruppene var signifikant mindre enn den for koblingsgrupper, som var konsistent med tumorvektene (figur 5C). Alle disse resultatene viste at overekspresjon av TIPE2 kunne hemme subkutan tumorvekst
in vivo
åpenbart. Som nevnt ovenfor, over-uttrykk for TIPE2 hadde store virkninger på uttrykk for noen apoptotic molekyler i H446 celler
in vitro
, slik som BCL-2, Bax, caspase-3 og caspase-9. I så fall er det nødvendig å klargjøre virkningen av TIPE2 på disse molekyler ekspresjon i tumorene fra nakne mus
in vivo
. Tumorene fra nakne mus ble isolert, fiksert, forankret og gjort i seksjoner, som så ble farget med immunohistochemistrical analyse. Resultatene viste overekspresjon av TIPE2 mens en øket ekspresjon av Bax, kaspase-3 og kaspase-9 og en redusert ekspresjon av Bcl-2 i TIPE2-overekspresjon tumorer (figur 6), som var lik resultatene
in vitro
. Vi har også oppdaget uttrykk for Ki-67, en spredning markør, i ovennevnte svulster. Ingen endring på Ki-67 uttrykk ble oppdaget uavhengig av TIPE2 over-uttrykk (Fig 6), der vi spekulert i at TIPE2 hemmer tumorvekst i hovedsak å tillegge sin funksjon av å fremme apoptose av H446 celler, men ikke via påvirker spredning.
(A), et representativt bilde av de isolerte svulster. (B), Subkutan tumor vekstkurven i nakne mus injisert med H446 /vektor og H446 /TIPE2. (C), De gjennomsnittlige tumorvekter av vektor og TIPE2 gruppe. * Indikert
P
0.05.
Magification, 200 ×.
Diskusjoner
TIPE2 tilhører Tipe (TNFAIP8) familie, som er en nylig identifisert gruppe proteiner inkludert fire medlemmer, TNFAIP8, TIPE1, TIPE2 og TIPE3 [4]. TNFAIP8 er assosiert med forbedret celleoverlevelse og inhibering av apoptose [21]. Knocking ned uttrykket av TNFAIP8 i tumorceller kan redusere sine tumorigenicity [22]. Alle disse bevisene støtter at tipe er et onkogen, og det kan ha sammenheng med celleoverlevelse og ondartede vekstrelaterte signalveier [11]. Høyt nivå av TIPE1 mRNA påvises i de fleste humane carcinom cellelinjer, noe som antyder at den kan spille en rolle i karsinogenese [11]. I motsetning TNFAIP8 og TIPE1 ble TIPE2 hovedsakelig funnet spilt en viktig rolle i immunforsvaret. Som rapportert, TIPE2 var en roman genet som opprettholder immun homeostase og negativt regulerer medfødt og adaptiv immunitet [4]. Men informasjon om TIPE2 i menneskelig kreft er begrenset.
Noen få studier om forholdet mellom TIPE2 med kreft allerede bekreftet TIPE2 hadde noen funksjon i kreftutvikling. I nyere forskning, ble TIPE2 tenkt som en tumor suppressor i leverkreft [16]. Imidlertid er forholdet mellom TIPE2 og lungekreft ukjent hittil. I vår studien, viste vi staten TIPE2 uttrykk i lungekreft. Vi fant at TIPE2 uttrykk ble nedregulert i lunge plateepitel karsinom og selv nesten mistet i småcellet lungekreft. Men i lunge adenokarsinom, ble TIPE2 sterkt uttrykk funnet, men ingen forskjell mellom ikke-tumor lungevev og lunge adenokarsinom ble analysert. Resultatene viste TIPE2 uttrykk mønstre kan være forskjellig mellom ulike histologiske subtyper av lungekreft, som foreslo TIPE2 kan spille noen forskjellige biologiske roller i ulike histologiske typer lungekreft. For å finne ut TIPE2 uttrykk i alle typer lungekreft, increaseing antall lungekreft prøver i fremtiden studien kan være nødvendig.
Videre denne studien foreløpig tolket den biologiske funksjonen til TIPE2 i lungekreft. Over-uttrykke TIPE2 fremmet apoptose av H446 celler
in vitro Hotell og hemmet tumorvekst
in vivo
. På molekylært nivå, TIPE2 regulert BCL-2 /Bax balanse og aktivert caspase-3 og caspase-9.
i å se inn i bestemte signalmolekyler muligens regulert av TIPE2 Interessert, vi så skjermet uttrykk for noen vanlige signalmolekyler etter TIPE2 over-uttrykk. Ekspresjon i høyt nivå av fosforylert MAPK P38 ble detektert etter TIPE2 opp-regulering. Nylige studier har antydet en nøkkelrolle for p38 MAPK ved formidling av reaksjonsveier som fører til apoptose og vekstinhibitoriske signaler [23,24]. I tillegg utløser P38 MAPK aktiveringen av caspase-3, 9 og er også nødvendig for fosforyleringen av apoptose-relaterte proteiner, inkludert Bax, Bim og Bcl-2 i OA-behandlede kreftceller [25]. Kombinert med disse resultatene, spekulerer vi at TIPE2 fremmer lungekreft celle apoptose gjennom aktivering av P38 MAPK, som utløser over uttrykk for caspase-3 og caspase-9. I tillegg fant vi også at TIPE2 redusert fosforylert nivå Akt. Som rapportert, er det Akt pathway en sentral signaltransduksjonsbane som regulerer mange kritiske aspekter av kreft fysiologi, inkludert celleproliferasjon, cellemorfologi, migrasjon og apoptose [26]. I mellomtiden er noen apoptose-relaterte molekyler, slik som Bcl-2, Bax, caspase-3 og kaspase-9 påvirkes tydelig av TIPE2. Så, våre resultater gir mye bevis for at TIPE2 fremmer lungekreft apoptose. Interessant, fant vi Ki-67 uttrykk hadde ingen endring etter TIPE2 over-uttrykk, som indikerte at TIPE2 hemmet kreft vekst lungetillegge fremme celle apoptose.
Til sammen TIPE2 fungerer som en tumor suppressor å fremme lunge kreftcelle apoptose. Derfor kan tvinges uttrykk for menneskelig TIPE2 være en ny strategi for behandling av lungekreft.
